导读:本文包含了纯化精原干细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:红鳍东方鲀,精原干细胞,Percoll,免疫荧光
纯化精原干细胞论文文献综述
任玉芹,周勤,孙朝徽,宋立民,于清海[1]（2019）在《红鳍东方鲀精原干细胞鉴定、分离及纯化》一文中研究指出为获得高比例精原干细胞,开展了不同月龄红鳍东方鲀精原干细胞分离纯化研究。采用组合酶消化法制备不同月龄的精巢单细胞悬液,通过形态学观察和生殖细胞特异基因vasa免疫荧光鉴别精原干细胞,Percoll不连续梯度(10%、30%和50%)纯化精原干细胞。结果显示:14月龄雄鱼精巢生殖细胞主要为A型精原细胞,精原干细胞占比极显着性地高于22月龄(P<0.05)。纯化后精原干细胞主要分布在10%—30%Percoll梯度带中, 14月龄雄鱼生殖细胞主要分布在此层,且纯化后精原干细胞占比远高于纯化前以及22月龄纯化前后。结果表明, 14月龄更适用组合酶消化分离,并通过Percoll梯度离心法获得高比例的红鳍东方鲀精原干细胞。(本文来源于《水生生物学报》期刊2019年04期）
张晓娜[2]（2019）在《小鼠精原干细胞分离、纯化与去分化研究》一文中研究指出精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是哺乳动物体内唯一可以将遗传信息传递给下一代、功能单一的干细胞,体外分离培养SSCs为探索其生物学特性及其增殖、分化与去分化机制奠定了基础。SSCs在特定的体外培养条件下,即使无外源基因操作也可以重编程形成多能干细胞。多能干细胞不仅具有自我复制的能力,而且具有形成多种组织和细胞的能力,具有很大的潜在应用前景。诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)虽然在体内外可分化形成叁胚层,但由于外源基因的插入使其应用受到制约。因此,SSCs更适用于人类临床及动物分子育种应用。本研究分为两部分,第一部分实验以小鼠作为动物模型,分离、纯化并体外培养小鼠精原干细胞(mouse spermatogonial stem cells,m SSCs)。采用机械分离法、两步酶消化法结合连续差速贴壁法成功分离、纯化得到来源于Oct4/GFP×CD1杂交品系F1代小鼠睾丸的mSSCs,并对体外培养的mSSCs进行鉴定分析。当细胞稳定生长时,通过观察细胞形态、碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色、RT-PCR和RT-qPCR检测结果初步鉴定体外分离和培养的细胞满足mSSCs的标准,为第二部分实验提供实验材料。第二部分实验主要集中于用小分子化合物诱导mSSCs去分化形成多能干细胞。获得的细胞克隆能稳定生长时,在基因表达水平进行鉴定分析,比如Oct4、Sox2、Nanog和Rex1。细胞形态、GFP表达、碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色、RT-PCR和RT-qPCR检测结果初步鉴定,mSSCs可以通过小分子化合物诱导液向多能性方向转化,并形成具有多能干细胞特性的细胞。本研究既丰富了制备多能干细胞的方法,也为今后深入研究mSSCs重编程为多能干细胞的机制提供了基础实验材料,同时也为研究男性不育症提供了新的途径。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2019-06-03）
谢静静,姚晓磊,宋瑞高,吕小康,张瑞鑫[3]（2016）在《绵羊精原干细胞的分离纯化与鉴定》一文中研究指出旨在探究一种简便高效的绵羊精原干细胞(SSCs)分离纯化方法,为后续研究SSCs奠定基础。本实验采用两步酶消化法对4月龄的绵羊睾丸进行消化处理,获得单细胞悬液。将睾丸细胞接种于0.2%的明胶预处理培养皿中,根据各细胞贴壁能力和速度的不同将SSCs纯化,并在纯化后用SSCs特异标记分子PLZF进行免疫荧光鉴定。结果表明,经免疫荧光染色得出存在PLZF阳性信号。这说明采用两步酶消化和差异贴壁法可以得到纯度较高的SSCs。(本文来源于《黑龙江动物繁殖》期刊2016年04期）
陈鑫苹,许邦发,罗奋华,张培,周红桃[4]（2015）在《食蟹猴精原干细胞分离纯化及鉴定》一文中研究指出目的掌握食蟹猴精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外培养生长特性,建立食蟹猴精原干细胞分离、纯化、培养及初步鉴定的方法。方法经手术获取2岁14天食蟹雄猴单侧睾丸,采用叁步酶消化法分离获得单细胞悬液和差异贴壁法富集精原干细胞。将细胞培养于经丝裂酶素C处理的STO细胞层上,使用添加神经胶质细胞源性的神经营养因子(GDNF)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)、GDNF家族受体α(GFRa1)叁种重要生长因子的无血清培养液体外培养,20d后采用CDH1标记分子免疫荧光染色和RT-PCR对培养的食蟹猴细胞进行SSCs初步鉴定。结果通过差异贴壁法分离纯化富集的SSCs,接种到丝裂霉素C处理的STO饲养层细胞上,第2天开始分裂增殖。用含有生长因子的培养基培养2 d细胞形成小集落,5 d后细胞集落明显。培养20 d后,SSCs呈葡萄串状细胞簇,符合SSCs的形态特征,这些细胞经CDH1标记分子免疫荧光染色和RT-PCR均呈阳性表达。结论本研究成功建立食蟹猴精原干细胞的分离纯化及鉴定体系。基于STO饲养细胞的添加GDNF、b FGF和GFRa1叁种生长因子的无血清培养体系可用于食蟹猴精原干细胞培养,CDH1可作为食蟹猴精原干细胞鉴定的标志物。(本文来源于《中华临床实验室管理电子杂志》期刊2015年04期）
张卫艺,洪洁赟,吕妍,扶晓波,郭秋平[5]（2015）在《犊牛精原干细胞的分离纯化与鉴定》一文中研究指出本研究旨在建立较为成熟的犊牛SSCs体外培养体系,为后续以SSCs为实验材料的相关研究奠定基础。如何富集得到大量高纯度的SSCs是研究中要解决的首要问题,也是建立SSCs体外诱导分化培养体系和SSCs后续研究的基础保障。通过借鉴较为成熟的小鼠SSCs培养体系,采用反复多次的差异贴壁法对精原细胞进行纯化,并且创新地将DMEM-高糖和DMEM-F12结合使用,有效地将支持细胞和SSCs分离并获得支持细胞饲养层细胞;再结合碱性磷酸酶(AKP)显色反应和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对培养获得的目的细胞进行鉴定,综合2种鉴定结果表明,培养获得的细胞即为目的细胞SSCs。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2015年17期）
陈鑫苹,许邦发,罗奋华,张培,周红桃[6]（2015）在《食蟹猴精原干细胞分离纯化及鉴定》一文中研究指出目的:为了掌握食蟹猴(Macaca fascicularis)精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外培养生长特性,建立其食蟹猴精原干细胞(MSSCs)分离纯化培养及初步鉴定方法。方法:经手术获取2岁又14天食蟹雄猴单侧睾丸,采用叁步酶消化法分离获得单细胞悬液和差异贴壁法富集原干细胞。将细胞培养于经丝裂酶素处理的STO细胞上,使用添加GDNF,bFGF,GFRa1叁个重要生长因子的无血清培养液在体外培养超过20天后,采用CDH1标记分子免疫荧光染色和RT-PCR对培养的食蟹猴细胞进行SSCs初步鉴定。结果:通过差速贴壁法分离纯化富集的SSCs,经接种到丝裂霉素C处理的STO饲养层细胞上的第二天开始分裂增殖。用含有生长因子的培养基培养2天细胞形成小集落,5天后细胞集落明显。培养20天后,SSCs呈葡萄串状细胞簇,符合SSCs的形态特征,这些细胞经CDH1标记分子免疫荧光染色和RT-PCR均呈阳性表达。结论:本研究成功建立食蟹猴精原干细胞的分离纯化及鉴定体系。基于STO饲养细胞的添加GDNF,bFGF,GFRa1叁种生长因子的无血清培养体系可用于食蟹猴精原干细胞培养,CDH1可作为食蟹猴精原干细胞鉴定的标志物。(本文来源于《遗传多样性：前沿与挑战——中国的遗传学研究（2013-2015）——2015中国遗传学会大会论文摘要汇编》期刊2015-08-14）
陈鑫苹,许邦发,罗奋华,张培,周红桃[7]（2015）在《食蟹猴精原干细胞分离纯化及初步鉴定》一文中研究指出目的为了掌握食蟹猴(Macaca fascicularis)精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外培养生长特性,建立其食蟹猴精原干细胞(MSSCs)分离纯化培养及初步鉴定方法。方法经手术获取2岁又14天食蟹雄猴单侧睾丸,采用叁步酶消化法分离获得单细胞悬液和差异贴壁法富集精原干细胞。将细胞培养于经丝裂酶素处理的STO细胞上,使用添加GDNF,b FGF,GFRa1叁个重要生长因子的无血清培养液在体外培养超过20天后,应用CDH1标记分子免疫荧光染色和RT-PCR对培养的食蟹猴细胞进行SSCs初步鉴定。结果通过差速贴壁法分离纯化富集的SSCs,经接种到丝裂霉素C处理的STO饲养层细胞上的第二天开始分裂增殖。用含有生长因子的培养基培养2天细胞形成小集落,5天后细胞集落明显。培养20天后,SSCs呈葡萄串状细胞簇,符合SSCs的形态特征,这些细胞经CDH1标记分子免疫荧光染色和RT-PCR均呈阳性表达。结论该研究成功建立了食蟹猴SSCs的分离纯化培养方法,通过形态学观察鉴定所培养细胞集落形态与SSCs形态相似,免疫荧光染色和RT-PCR鉴定CDH1是食蟹猴SSCs的标记分子。(本文来源于《第七届生命科学联合学术大会论文汇编》期刊2015-06-15）
袁德禄[8]（2015）在《影响山羊精原干细胞分离纯化和体外培养的因素研究》一文中研究指出精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSCs)是雄性动物生殖细胞中唯一的干细胞,在体外长期培养一直是国际性的难题和研究的热点。目前已经建立了小鼠、大鼠和仓鼠叁个物种的精原干细胞体外长期培养体系,但在其它物种、特别是家畜尚未获得理想的培养体系。本课题通过检测分离山羊SSCs的纯度来确定最适的实验动物年龄;利用丝裂霉素-C和胰蛋白酶先后共同处理叁种细胞(MEF、STO、Hela)后,检测细胞增殖能力的稳定性来筛选出最佳的饲养层制备条件;分别采用不同浓度的血清及叁种外源添加物(即枸杞多糖、维生素C、细胞分裂素)体外培养SSCs,检测SSCs克隆数量及其增殖能力,最终确定山羊SSCs体外培养的最佳方案。具体研究内容和结果如下:1.山羊年龄对SSCs分离纯化效果的影响分别取2-5月龄的波尔山羊睾丸,以CDH1、UCHL1和THY1作为鉴定山羊SSCs的表面表型标记,通过检测不同月龄山羊睾丸中不同分子标记的定位、m RNA和蛋白表达量,结果显示在2、5月龄睾丸中均有CDH1和UCHL1的定位表达;CDH1m RNA和蛋白表达量随着月龄增加而下降,其中2月龄表达量最高;而THY1和UCHL1的表达量先上升后下降,在3月龄达到最高值。此结果表明2-3月龄是分离纯化山羊SSCs的最优年龄。2.丝裂霉素-C处理时间和胰蛋白酶对饲养层制备效果的影响取小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)、鼠胚成纤维细胞系(STO)和子宫颈癌细胞(Hela)叁种细胞作为饲养层。其中MEF分成6大组,分别用10μg/m L丝裂霉素-C处理不同时间(0h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h)后,各组再分成2小组,其中一组用0.25%胰蛋白酶消化作为处理组,另一组不做处理作为非处理组,并在不同培养时间下检测增殖能力,以增殖能力稳定性和组间差异显着性作为评定依据。STO和Hela处理方法同MEF。结果显示,非处理组增殖能力稳定,而处理组增殖能力不稳定,这表明处理组不利于制备饲养层细胞;在非处理组中,丝裂霉素-C处理MEF细胞1.5h、STO细胞2.5h、Hela细胞2.5h时,细胞增殖能力比较稳定,并与对照组差异显着(P<0.05)。此结果表明不经过胰蛋白酶消化处理的方法最好,并且10μg/m L丝裂霉素-C处理MEF细胞1.5h,STO细胞2.5h,Hela细胞2.5h是最优选择。3.血清浓度对山羊SSCs体外培养效果的影响在添加不同浓度血清(0%、1%、2.5%、5%)的培养体系中培养山羊SSCs,以SSCs克隆数及其增殖能力作为评定依据。结果显示,在培养第3d时,5%血清组克隆数显着高于其它组(P<0.05),但克隆数随着时间的增加而大幅度减少,增殖能力明显下降;在第6d和第10d时,2.5%血清组显着促进SSCs的增殖,并且克隆数显着高于其它组(P<0.05),增殖速度最快。此结果表明5%血清浓度不利于SSCs体外长期培养,而2.5%血清浓度是体外培养体系的最优选择。4.枸杞多糖浓度对山羊SSCs体外培养效果的影响在添加不同浓度枸杞多糖(LBP)(0μg/m L、50μg/m L、100μg/m L、200μg/m L、300μg/m L)的培养体系中培养山羊SSCs,以SSCs克隆数及其增殖能力作为评定依据。结果显示,200μg/m L和300μg/m L LBP组克隆数一直显着低于对照组(P<0.05),并且100μg/m L、200μg/m L和300μg/m L LBP组克隆数随着培养时间的增加而减少;在培养第6d和第10d时,50μg/m L LBP组SSCs克隆数最多,增殖速度最快。此结果表明高浓度LBP抑制SSCs增殖,添加50μg/m L LBP是SSCs体外培养的最优选择。5.维生素C浓度对山羊SSCs体外培养效果的影响在添加不同浓度维生素C(VC)(0μg/m L、10μg/m L、20μg/m L、30μg/m L、40μg/m L)的培养体系中培养山羊SSCs,以SSCs克隆数及其增殖能力作为评定依据。结果显示,随着时间的增加,各组克隆数均是先上升后下降;在第6d和第10d时,克隆数随着浓度的升高而增加,且各组之间差异显着(P<0.05),但40μg/m L VC组在第7-10d的增殖能力显着低于其它组(P<0.05);在培养第8-10d时,30μg/m L VC组增殖能力基本保持不变,但其它组均下降,并且30μg/m L VC组克隆数显着高于其它低浓度组(P<0.05)。此结果表明40μg/m L VC不利于SSCs体外长期培养,添加30μg/m L VC是SSCs体外培养的最优选择。6.细胞分裂素浓度对山羊SSCs体外培养效果的影响在添加不同浓度细胞分裂素(6-BA)(0ng/m L、25ng/m L、50ng/m L、75ng/m L、100ng/m L、125ng/m L)的培养体系中培养山羊SSCs,以SSCs克隆数及其增殖能力作为评定依据。结果显示,在培养第6d和第10d时,100ng/m L 6-BA组克隆数显着高于其它组(P<0.05),但所有试验组增殖能力均低于对照组,这表明6-BA不适于SSCs长期体外培养。此结果表明添加100ng/m L 6-BA是SSCs短期体外培养的最优选择。综上所述,本试验中体外培养山羊SSCs的最佳条件是,选取2-3月龄的山羊分离睾丸精原干细胞,同时利用无胰蛋白酶消化处理的MEF饲养层细胞和2.5%浓度的血清可以显着提高SSCs的增殖能力。此外,分别添加50μg/m L LBP或30μg/m L VC或100ng/m L 6-BA均能有效地促进体外培养山羊SSCs的增殖,并且添加30μg/m L VC培养的促进效果最为显着。(本文来源于《华中农业大学》期刊2015-06-01）
王永彬,刘凤美,张军令,李艳华,靳淑敏[9]（2014）在《小鼠精原干细胞的分离纯化及初步鉴定》一文中研究指出用两步酶消化法对昆明白小鼠睾丸精原细胞及精原干细胞进行了体外分离、纯化和初步鉴定。经两步酶消化所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为97.03%、2.97%和2.95%;平均每个睾丸可获得4.53×105个细胞。Percoll不连续密度梯度离心初步纯化后得到4个细胞带,精原细胞主要分布在40%~50%Percoll梯度间,得到的精原细胞密度为3.20×106个/mL。因此,采用两步酶消化,结合Percoll不连续密度梯度离心法分离的昆明白小鼠精原细胞能满足体外培养的需要,还可以作为精原干细胞移植的研究材料。(本文来源于《黑龙江动物繁殖》期刊2014年04期）
贺亚南,陈晓丽,任晓霞,郝海生,秦彤[10]（2014）在《免疫磁珠纯化小鼠精原干细胞的研究》一文中研究指出精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)富集纯化是利用SSCs进行基因修饰新方法等研究的前提基础。采用免疫磁珠分选法,使用干细胞抗体CD90.2进行小鼠SSCs的纯化富集,并采用流式细胞分析法和定量PCR验证了磁珠分选效率。流式细胞分析结果:免疫磁珠分选后SSCs纯度为50.11%。荧光定量PCR检测结果:磁珠分选后支持细胞特异表达基因GATA4显着下调(6倍)、SSCs表达基因GFRα-1上调(6.5倍)、生殖干细胞特异表达基因OCT4极显着上调(5.9倍),3个基因相对表达量的变化说明,免疫磁珠分选效率为6倍。流式细胞分析法所产生的偏差可能是受到了未解离磁珠及SSCs本身转基因荧光的影响。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2014年07期）
纯化精原干细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是哺乳动物体内唯一可以将遗传信息传递给下一代、功能单一的干细胞,体外分离培养SSCs为探索其生物学特性及其增殖、分化与去分化机制奠定了基础。SSCs在特定的体外培养条件下,即使无外源基因操作也可以重编程形成多能干细胞。多能干细胞不仅具有自我复制的能力,而且具有形成多种组织和细胞的能力,具有很大的潜在应用前景。诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)虽然在体内外可分化形成叁胚层,但由于外源基因的插入使其应用受到制约。因此,SSCs更适用于人类临床及动物分子育种应用。本研究分为两部分,第一部分实验以小鼠作为动物模型,分离、纯化并体外培养小鼠精原干细胞(mouse spermatogonial stem cells,m SSCs)。采用机械分离法、两步酶消化法结合连续差速贴壁法成功分离、纯化得到来源于Oct4/GFP×CD1杂交品系F1代小鼠睾丸的mSSCs,并对体外培养的mSSCs进行鉴定分析。当细胞稳定生长时,通过观察细胞形态、碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色、RT-PCR和RT-qPCR检测结果初步鉴定体外分离和培养的细胞满足mSSCs的标准,为第二部分实验提供实验材料。第二部分实验主要集中于用小分子化合物诱导mSSCs去分化形成多能干细胞。获得的细胞克隆能稳定生长时,在基因表达水平进行鉴定分析,比如Oct4、Sox2、Nanog和Rex1。细胞形态、GFP表达、碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色、RT-PCR和RT-qPCR检测结果初步鉴定,mSSCs可以通过小分子化合物诱导液向多能性方向转化,并形成具有多能干细胞特性的细胞。本研究既丰富了制备多能干细胞的方法,也为今后深入研究mSSCs重编程为多能干细胞的机制提供了基础实验材料,同时也为研究男性不育症提供了新的途径。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
纯化精原干细胞论文参考文献
[1].任玉芹,周勤,孙朝徽,宋立民,于清海.红鳍东方鲀精原干细胞鉴定、分离及纯化[J].水生生物学报.2019
[2].张晓娜.小鼠精原干细胞分离、纯化与去分化研究[D].内蒙古大学.2019
[3].谢静静,姚晓磊,宋瑞高,吕小康,张瑞鑫.绵羊精原干细胞的分离纯化与鉴定[J].黑龙江动物繁殖.2016
[4].陈鑫苹,许邦发,罗奋华,张培,周红桃.食蟹猴精原干细胞分离纯化及鉴定[J].中华临床实验室管理电子杂志.2015
[5].张卫艺,洪洁赟,吕妍,扶晓波,郭秋平.犊牛精原干细胞的分离纯化与鉴定[J].中国畜牧杂志.2015
[6].陈鑫苹,许邦发,罗奋华,张培,周红桃.食蟹猴精原干细胞分离纯化及鉴定[C].遗传多样性：前沿与挑战——中国的遗传学研究（2013-2015）——2015中国遗传学会大会论文摘要汇编.2015
[7].陈鑫苹,许邦发,罗奋华,张培,周红桃.食蟹猴精原干细胞分离纯化及初步鉴定[C].第七届生命科学联合学术大会论文汇编.2015
[8].袁德禄.影响山羊精原干细胞分离纯化和体外培养的因素研究[D].华中农业大学.2015
[9].王永彬,刘凤美,张军令,李艳华,靳淑敏.小鼠精原干细胞的分离纯化及初步鉴定[J].黑龙江动物繁殖.2014
[10].贺亚南,陈晓丽,任晓霞,郝海生,秦彤.免疫磁珠纯化小鼠精原干细胞的研究[J].中国生物工程杂志.2014