岳宝森张艳（西安市中医医院陕西西安710001）
【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）27-0119-03
【摘要】目的优选藿香正气口服液的纯化工艺。方法以沉淀量、橙皮苷含量作为评价指标，通过多项分组试验，对药液絮凝时的最佳浓度、温度、壳聚糖用量和pH值等进行比较分析，筛选出最佳的壳聚糖絮凝工艺。结果将煎提液浓缩至1:2.5（药材:提取液）的体积，加入相当于原药材0.12％（W/W）的壳聚糖，30℃保温，调节pH5.5比较适宜。结论新工艺稳定可行。
【关键词】藿香正气口服液纯化工艺均匀设计壳聚糖
StudyonPurifyingProcessofHuoxiangZhengqiOralLiquidwithChitosanflocculantionMethod
【Abstract】Objective:TooptimizethepreparationprocedurefortheHuoxiangZhengqiOralLiquid.Methods:theprecipitationweight,thecontentsofferulicacidservedasinspectiontarget,westudiedtemprarureoffloccatingliquid,pH,concentrationofextractionsolutionandtheratioofaddedchitosanResults:Theoptimalpurifingprocessare:concentrationofextractionsolution1:2.5(material:solution),pH5.5,ratioofchitosanadded0.12%,and30℃.Conclusion:Thepreparationisstable.
【Keywords】HuoxiangZhengqiOralLiquidpurifyingprocessUniformdesignchitosan
藿香正气口服液系采用水提醇沉法生产的口服液体制剂。由于该制剂不含酒精，近年来较藿香正气水有更广泛的应用前景。但水提纯沉法具有工时长、能耗大、多糖损失多等缺点[1]。本研究采用壳聚糖絮凝法对该工艺进行改进，为生产提供科学依据。
1仪器与材料
2690型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；DiamonsilC18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）；PHS-3C型精密pH计（上海精密仪器雷磁仪器厂）；FA1104型0.1mg微量分析天平(上海天平仪器厂)；橙皮苷对照品（购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号110721-200512）；壳聚糖（由上海源聚生物科技有限公司生产，批号091130）；甲醇（色谱纯）；其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1含量测定
2.1.1色谱条件
色谱柱：DiamonsilC18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)；流动相为甲醇-醋酸-水(35:4:61)；检测波长为283nm；柱温为室温；流速0.8min/ml；进样量为5μL；理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2000。
2.1.2最大吸收波长的确定
我们参考中国药典2010年版一部陈皮药材含量测定项下橙皮苷的最大吸收波长283nm进行研究。
2.1.3对照品溶液的制备
精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成1ml含橙皮苷1.02mg的溶液作为对照品储备溶液。
2.1.4供试品溶液的制备
精密量取藿香正气口服液10ml，加石油醚60ml萃取，弃去石油醚层，水溶液用水浴蒸干，加甲醇溶解并定溶于10ml的容量瓶即得。
2.1.5线性关系的考察
精密量取对照品储备溶液（1.02mg/ml）0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6mlL、2.0ml，分别置5个2ml的量瓶中，依次用甲醇稀释至刻度，摇匀，依次进样5μL。按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值（Y）为纵坐标，进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。计算，得回归方程为：Y＝74972×-48253，r＝0.9993，线性范围为1.02～5.10μg。
2.1.6干扰性试验
按生产工艺制备缺陈皮的阴性对照样品，同法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样5μL，结果在橙皮苷的色谱峰相应的位置无其它色谱峰被检出，表明处方中其它药材中的成分对橙皮苷的测定不会产生干扰，见图1、2、3。
图1橙皮苷对照品溶液HPLC图谱图2藿香正气口服液样品溶液HPLC图谱
图3缺藿香的阴性样品溶液HPLC图谱
2.1.7精密度试验
取对照品溶液，按上述色谱条件测定，连续进样6次，测定峰面积积分值，计算RSD为1.15%。
2.1.8稳定性试验
取供试品溶液，按上述色谱条件，分别在0，2，4，6和8h进样，测定峰面积积分值，计算RSD为1.05%，测定结果表明，供试品溶液在8小时内稳定。
2.1.9重复性实验
取批号为20090601的样品，共6份，按照供试品溶液制备项下的方法制备供试品溶液，分别精密取5μL进样，在上述色谱条件下测定橙皮苷含量，记录峰面积积分值，计算RSD为1.73%。
2.1.10加样回收率试验
取批号为20090601的样品适量，共5份，分别加入橙皮苷对照品适量，照供试品溶液的制备的方法制成供试品溶液，在上述色谱条件及测定方法测定橙皮苷含量。计算平均回收率为99.4%，RSD为0.8%。
2.2沉淀量的测定
每次实验，精密称定（准确到0.01g）空试管的重量，按照各项实验要求，加入相当于原药材10g的提取液，加入一定量的壳聚糖溶液，药液在一定的温度下水浴保温搅拌一定时间，5℃冷藏24小时，离心10min，分离上清液，精密称定沉淀的净重量。以此观察药液的絮凝效果，沉淀量越高说明絮凝效果越好。
2.3制备工艺的选择
2.3.1原制备工艺
取处方药材用多功能提取器加水煎煮两次，加水量分别为10倍和8倍量，时间分别为1.5h、1h，收集挥发油另器保存备用，合并提取液,过滤，滤液浓缩至相对密度约为1.20（50℃），加入乙醇沉淀，静置24h，过滤，回收乙醇。加入白糖加热使溶解，加入挥发油，搅拌均匀，用蒸馏水调至全量，灌封，用流通蒸汽灭菌即得。
2.3.2新制备工艺
2.3.2.1按照处方比例取药材总量1kg，如上法煎煮两次。合并煎液，滤过，滤液浓缩至10L备用。
2.3.2.2壳聚糖澄清剂的配制称取1.0g壳聚糖置150ml烧杯中，用1%冰醋酸100ml，配成10g/L的壳聚糖胶体溶液作为澄清剂[2]。
2.3.2.3均匀实验设计根据文献资料和预实验结果并结合实际生产的效率[3]，选用对实验影响较为显著的药液浓度比例(相当于原药材2.5～5倍)、壳聚糖加入量(0.1～0.20%)、絮凝液温度(30～80℃)、絮凝液pH值(范围3.0～5.0)4个因素作为研究对象，以沉淀量和橙皮苷转移率为指标，选用均匀设计U6*(64)表进行试验。结果见表1、2、3。
橙皮苷含量×体积
橙皮苷转移率(%)=×100%
药材总含量
表1均匀设计因素及水平
表2均匀设计U6*(64)试验
表3回归分析结果
从表3可以看出，壳聚糖加入量对沉淀量的影响较大；而壳聚糖加入量和絮凝液PH值对橙皮苷转移率的影响较大，但考虑到橙皮苷的含量，选用壳聚糖加入量为0.12%，絮凝液pH值为5.5。药液浓缩比例和絮凝温度对两个选用指标的影响不大，结合生产实际，选用药液浓缩比例为2.5倍，絮凝温度为30℃。
3结果与验证
综合以上实验分析，得出藿香正气口服液的最佳制备工艺为：将提取液浓缩至比例为2.5:1(ml:g)时，放置至温度降至30℃，加入总药材量的0.12%壳聚糖的1%醋酸溶液，调pH值至5.5，搅拌，5℃冷藏24h，离心，滤过，滤液浓缩至规定量。
并按照上述新工艺连续制备3批样品，按原酒精纯化工艺制备1批样品，共4批样品。分别测定其沉淀量、橙皮苷含量。结果显示：新工艺沉淀量较原工艺略有减少，橙皮苷含量两种工艺结果差异较小；新工艺3批试验结果之间差异较小，与均匀设计试验最优值比较也较为接近。综合分析，新工艺具有可行性。
4讨论
采用水提醇沉的中药口服液，经常有澄明度不好的现象，主要原因是大分子的蛋白类、鞣质、色素等杂质未完全除去，经长期絮凝而引起沉淀[4]。壳聚糖絮凝法不仅可去除去大分子杂质，而且通常能更多的保留小分子有效成分[5]，这样既提高了中药口服液的澄明度，又保证了疗效。因此，壳聚糖絮凝法的研究和推广，将会给中药口服液带来更广阔的前景。
参考文献
[1]商常发,李庆林,何领.壳聚糖絮凝法在澄清中药水提液中的应用[J].中国中医药科,2006,13(5):365.
[2]夏新华,谭红胜.蒲公英水提液絮凝澄清工艺研究[J].中国中药杂志,2006,31(19):1633.
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[4]郑琴,徐德生,冯怡.改善中药口服液澄明度的思路[J].中成药[J].2006,28(10):1502.
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