张阳1宋革2
1.解放军四五八医院广东广州510602；2.广东省计划生育科学技术研究所生殖医学中心
【摘要】目的探讨脐带间充质干细胞联合番茄红素的抗衰老作用。方法50只ICR小鼠分为对照组、模型组、脐带间充质干细胞组、番茄红素组以及联合治疗组，每组10只。除对照组外均建立亚急性衰老小鼠模型，并给予相应药物干预8周。8周后处死小鼠，检查血清中丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）与谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力。结果造模后，对照组MDA水平上升、SOD、GSH-Px活力降低，经过药物干预，MDA水平下降，SOD、GSH-Px活力升高。其中，联合治疗组MDA水平为（6.30±0.44）nmol/ml，明显低于脐带间充质干细胞组、番茄红素组以及模型组，SOD、GSH-Px活力分别为（73.5±9.7）U/ml、（281.3±37.7）U/L，明显高于脐带间充质干细胞组、番茄红素组以及模型组，差异均有显著性（P＜0.05）。结论脐带间充质干细胞联合番茄红素具有较强的抗衰老能力，联合治疗抗衰老能力优于单独治疗。
【关键词】脐带间充质干细胞；番茄红素；抗衰老
【中图分类号】R436.412【文献标识码】A【文章编号】1276-7808（2015）-06-517-01
衰老（Agingorsenescence）属于正常的自然、生理现象，关于衰老的机制，目前亦有较多的假说，大多数假说均立足于衰老发生的自由基机制。已有研究发现，脐带间充质干细胞以及番茄红素均有一定的抗衰老能力[1-2]。但是，对于脐带间充质干细胞联合番茄红素的抗衰老作用如何，是否优于单独使用脐带间充质干细胞或番茄红素，目前相关研究尚较少。本研究就脐带间充质干细胞联合番茄红素在亚急性衰老模型小鼠中的抗衰老作用进行了分组观察，现报告如下。
1材料和方法
1.1实验动物：研究纳入8周龄ICR小鼠共50只，均为SPF级，雌雄各半。所有小鼠均适应性饲养1周，然后随机分为对照组、模型组、脐带间充质干细胞组、番茄红素组以及联合治疗组，每组10只，雌雄各5只。
1.2造模方法：除对照组外，其余小组小鼠均每天背部注射5%D-半乳糖，剂量500mg/kg，连续8周。对照组则给予相同剂量的生理盐水背部注射。
1.3给药方法：在造模的同时，每日给予番茄红素以及联合治疗组番茄红素灌胃。番茄红素灌胃前使用葵花籽油溶解，灌胃剂量根据人的等效剂量（0.5mg/kg）给药5.5mg/kg。对照组、模型组以及脐带间充质干细胞组则给予同等剂量的葵花籽油灌胃。
1.4脐带间充质干细胞输注：在造模后的第1周末，脐带间充质干细胞组与联合治疗组给予经CM-Dil标记的第2~4代人脐带间充质干细胞悬液0.2ml尾静脉注射，细胞浓度为1×1010/L。然后每2周注射一次。其余小组大鼠给予同等剂量的细胞培养液注射。
1.5观察指标：8周后处死所有小鼠，摘取眼球取血，并置于1.5mlEP管中。离心机3000转离心15min得到上层血清后置于-80℃冰箱中保存待用。分别检测血清中丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）与谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力。
1.6统计学方法：采用SPSS17.0统计学软件包进行统计数据的处理以及分析，计量资料用x±s表示，组间计量资料比较采用两样本t检验，以P＜0.05为差异说明存在统计学意义。
2结果
2.1各组小鼠干预后SOD以及GSH-Px活力比较：造模后，小鼠SOD以及GSH-Px活力均明显下降。经过干预，用药组SOD以及GSH-Px活力均明显高于模型组。治疗组间比较，联合治疗组SOD以及GSH-Px活力明显高于脐带间充质干细胞组及番茄红素组，差异有显著性（P＜0.05），见表1。
注：与模型组比较：*P＜0.05；与干细胞组比较，#P＜0.05；与番茄红素组比较，&P＜0.05.
2.2各组小鼠干预后MDA水平比较：造模后，小鼠MDA水平均明显升高。经过干预，用药组MDA水平均明显低于模型组。治疗组间比较，联合治疗组MDA水平明显低于脐带间充质干细胞组及番茄红素组，差异有显著性（P＜0.05），见表2。
注：与模型组比较：*P＜0.05；与干细胞组比较，#P＜0.05；与番茄红素组比较，&P＜0.05.
3讨论
目前研究显示，SOD属于机体内清除自由基的重要抗氧化酶，其活性随着年龄的增长出现逐渐的下降，导致不饱和脂肪酸氧化生成过氧化物，使得蛋白质与酶受到破坏，加速衰老[3]。所以，SOD在机体内的活力能够客观反映出机体清除氧自由基的能力。GSH-Px在机体内广泛存在，属于一种含硒抗氧化物酶。研究表明，其能够催化GSH对氢化氧化物的还原反应，从而清理细胞内有害的过氧化代谢产物，以起到保护细胞代谢的作用。其活力的高低目前被认为可以反映细胞衰老的状况[4]。MDA在机体内水平受到年龄的影响，随着年龄的增长，MDA水平升高，使得组织以及细胞中的自由基代谢平衡失调，经一系列反应，最终破坏细胞膜的结构，造成细胞无法正常维持代谢从而发生死亡。因此，MDA水平亦能够作为作为评价衰老的一个重要指标[5]。本研究就脐带间充质干细胞与番茄红素亚对急性衰老小鼠抗衰老的影响进行了分组实验。经过造模，我们发现小鼠SOD、GSH-Px活力下降，而MDA水平升高，说明5%D-半乳糖能够导致小鼠衰老的发生。通过药物干预，我们发现脐带间充质干细胞、番茄红素以及联合用药组小鼠SOD、GSH-Px活力较模型组升高（P＜0.05），而MDA水平较模型组明显下降（P＜0.05）。说明无论是脐带间充质干细胞、番茄红素，还是两者联合使用，均具有一定的抗衰老作用。而将3个干预组之间的数据进行比较，我们发现联合用药组小鼠SOD、GSH-Px活力明显高于脐带间充质干细胞以及番茄红素（P＜0.05），而MDA水平明显低于脐带间充质干细胞以及番茄红素（P＜0.05），说明联合用药相比较单独用药，抗衰老效果更好。
综上所述，脐带间充质干细胞联合番茄红素具有较强的抗衰老能力，联合治疗抗衰老能力优于单独治疗。
参考文献：
[1]刘佳,王意忠,崔晓兰等.人脐带间充质干细胞联合番茄红素对衰老小鼠免疫功能的影响[J].中国组织工程研究,2014,18(14):2206-2212.
[2]马建慧,郑兴征,陈虹等.番茄红素对D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用[J].中国老年学杂志,2010,30(21):3142-3143.
[3]王琳琳,崔晓兰,时瀚等.人脐带间充质干细胞联合番茄红素延缓比格犬的自然衰老[J].中国组织工程研究,2014,(45):7239-7245.
[4]王志红,陈为民,曲双等.骨髓间充质干细胞对衰老模型大鼠肺损伤的修复作用[J].中国组织工程研究,2014,(28):4504-4509.
[5]施剑明,邬亚华,耿书国等.间充质干细胞增殖、衰老及分化：Wnt信号通路经典与非经典的调控作用[J].中国组织工程研究,2014,(41):6719-6724.