导读:本文包含了抗弓形虫抗体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:弓形虫,抗体,ELISA,多种动物
抗弓形虫抗体论文文献综述
黄炳炽,林仰孝,刘芳,王健青,周珊珊[1]（2019）在《应用ELISA方法检测多种动物弓形虫抗体》一文中研究指出为了解东莞市多种动物弓形虫感染的情况,采用ELISA方法对采自东莞市生猪屠宰场的猪血清3238份和饲养的犬血清299份、猫血清33份进行抗体检测,结果为猪血清弓形虫抗体阳性98份,抗体阳性率为3.03%,犬血清抗体阳性25份,抗体阳性率8.36%,猫血清抗体阳性4份,抗体阳性率12.12%。结果表明猪、犬和猫都存在不同程度的弓形虫感染,其中猫的感染率最高,其次为犬,弓形虫病防治需要采取综合防控措施。(本文来源于《畜牧兽医科技信息》期刊2019年07期）
闫爱霞,邹洋,黄敏君,李晶晶,李威[2]（2019）在《刚地弓形虫TgPRF的原核表达、多克隆抗体制备与应用》一文中研究指出目的原核表达弓形虫TgPRF蛋白,制备多克隆抗体并评价其作为内参抗体的可行性。方法以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增TgPRF编码基因,克隆至pGEX-4T-1载体,转化至大肠埃希氏菌(Escherichia coli)BL21。经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况。利用GST标签亲和层析法纯化重组蛋白。以纯化后蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗TgPRF多克隆抗体。收集弓形虫RH株速殖子,以制备的多克隆抗体为一抗,Western blotting检测抗体特异性及效价。收集ATc调控下不同时间点的弓形虫iKO-Ty-TgAPH虫株速殖子进行Western blotting,以抗Ty和抗TgPRF抗体为一抗,检测TgAPH和TgPRF表达量的变化。结果 SDS-PAGE显示:TgPRF在诱导4 h后表达量趋于饱和,相对分子量为52 ku,且呈可溶性表达。弓形虫RH株速殖子总蛋白进行的Western blotting显示:抗TgPRF多克隆抗体可识别内源性的TgPRF,且该多克隆抗体稀释至1∶10 000时仍可见明显条带;iKO-TyTgAPH虫株速殖子总蛋白进行的Western blotting显示:TgAPH的表达量随ATc作用时间的增加呈递减趋势,而TgPRF表达量基本维持恒定。结论本实验制备的抗TgPRF多克隆抗体特异性和效价良好,可作为衡量弓形虫特定蛋白表达量的内参抗体,也可直接检测内源性TgPRF的表达。(本文来源于《中国热带医学》期刊2019年07期）
张玉娟,刘苗,刘培,刘娟,任琪琪[3]（2019）在《应用弓形虫截短型SAG1纳米金免疫传感器检测弓形虫抗体的研究》一文中研究指出目的克隆表达弓形虫主要表面抗原1截短型片段(tSAG1),建立tSAG1纳米金免疫传感器,用于检测弓形虫抗体。方法 PCR扩增tSAG1基因片段并克隆至pMD18-T载体,测序鉴定后亚克隆至表达载体pET-28a(+),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达tSAG1,金属螯合层析法进行纯化,Western blot分析其免疫活性;采用种子生长法制备金纳米棒,偶联tSAG1,构建纳米金免疫传感器,用于检测人血清弓形虫抗体,计算其敏感度、特异度、阳性及阴性预测值和诊断效率。结果构建了重组表达质粒pET-28a (+)-tSAG1,表达纯化获得具有反应原性的tSAG1,其相对分子质量约为30×10~3。用制备的tSAG1纳米金免疫传感器检测人血清弓形虫抗体的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及诊断效率分别为80.9%、90.0%、90.2%、80.6%和85.2%。结论基于重组tSAG1的纳米金免疫传感器可用于弓形虫抗体的检测。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2019年06期）
郑龙光,冯刚[4]（2019）在《武隆山羊弓形虫病感染性抗体检测与分析》一文中研究指出为明确山羊弓形虫病在武隆地区的流行情况,通过颈静脉采血,分离血清样本,利用ELISA抗体检测法,对武隆地区多个乡镇的养殖场进行弓形虫感染性抗体的抽样检测与分析。结果表明,武隆地区存在山羊弓形虫病阳性病例,平均阳性检出率为48%;3种养殖模式中分散养殖模式的检出率最高(60%),专业羊场养殖模式检出率最低(38%);板角山羊、渝东黑山羊和波尔山羊的阳性检出率无明显差异;山羊的不同生长阶段中青年羊的阳性检出率高达56.7%。通过检测与分析,明确了山羊弓形虫病在武隆的流行趋势,也为该病的防控提供了理论依据。(本文来源于《畜禽业》期刊2019年06期）
赵正虎,钱胜南,万静宜,唐子茹,沈双[5]（2019）在《刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶多克隆抗体的制备及鉴定分析》一文中研究指出目的研制刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶(TPI)兔多克隆抗体(多抗)并分析其诊断价值。方法在大肠埃希菌BL21重组表达菌表达TPI,镍柱亲和层析法纯化后与弗氏佐剂等体积混合,颈背部多点注射免疫新西兰大白兔(TPI 200μg/次,共3次)。末次免疫后2周收集兔血清, Protein A亲和层析纯化多抗。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析多抗纯度, ELISA分析多抗效价,蛋白质印迹(Western blotting)及ELISA分析多抗识别弓形虫排泄分泌抗原及纯化TPI的效果。利用多抗偶联磁珠,富集11份弓形虫感染小鼠和11份健康小鼠血清后, Dot-blot分析多抗的诊断价值,并与弓形虫循环抗原ELISA试剂盒的检测结果作比较。结果表达并纯化获得条带单一的TPI蛋白。SDS-PAGE分析结果显示,免疫兔血清经Protein A亲和纯化后获得的多抗,重链与轻链清晰可见。第3次免疫后兔血清抗体效价可达1∶280 000以上;纯化后的多抗纯度高,效价可达1∶100 000以上; Western blotting分析结果显示,纯化的多抗能识别弓形虫排泄分泌抗原中的TPI及纯化的TPI,在相对分子质量(Mr) 28 000处均出现一特异性条带; ELISA分析结果显示,纯化的多抗能结合纯化的TPI,其A450值与TPI蛋白的包被浓度呈正相关。Dot-blot结果显示, 11份感染鼠血清中10份鉴定为阳性, 1份阴性; 11份健康小鼠血清中10份鉴定为阴性, 1份假阳性。弓形虫循环抗原ELISA试剂盒检测结果显示, 11份感染小鼠血清中6份鉴定为阳性, 5份阴性; 11份健康小鼠血清均鉴定为阴性。Dot-blot与ELISA试剂盒检测结果差异无统计学意义(P> 0.05)。结论制备并纯化了弓形虫TPI多抗,该多抗具有潜在诊断价值,可用于开发免疫诊断试剂以检测弓形虫感染。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2019年03期）
杨瑞,熊乙丁,郭珊珊,廖业,夏嫱[6]（2019）在《前纤维蛋白多克隆抗体对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响》一文中研究指出目的制备抗刚地弓形虫前纤维蛋白(Tg PRF)的多克隆抗体,初步研究其对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响。方法提取刚地弓形虫RH株RNA、扩增Tg PRF基因,并构建pET-30a (+)-Tg PRF重组质粒,将其转化至大肠埃希菌BL21 (DE3)感受态细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定蛋白表达情况。目的蛋白经AKTA系统进行亲和层析纯化和超滤浓缩后进行蛋白质印迹分析(Western blotting)。将2 mg纯化的重组蛋白Tg PRF与等体积弗氏完全佐剂混合乳化后,背部皮下多点注射免疫新西兰兔2只,首次免疫后每隔2周,用1 mg纯化的重组蛋白Tg PRF与等体积弗氏不完全佐剂加强免疫3次,末次免疫后10 d心脏采血。免疫后血清进行Western blotting鉴定及ELISA抗体效价检测。将胚胎成纤维细胞接种于96孔板中(4×10~3个细胞/孔),并加入10~4个刚地弓形虫速殖子(RH-GFP)。设空白对照组(A组),抗体干预组(B1、 B2和B3组),阴性血清组(C组)。B1、 B2和B3组分别加入1∶20、 1∶80、 1∶200稀释的抗Tg PRF兔血清100μl; C组加入1∶20稀释的免疫前兔血清100μl,每组均设3个复孔。培养72 h后荧光显微镜观察,通过Image pro 6.0软件分析虫体增殖情况。采用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果 PCR扩增Tg PRF基因片段为510 bp, pET-30a (+)-Tg PRF经测序与目的序列完全一致。经IPTG诱导表达,Tg PRF蛋白相对分子质量(M_r)约为25 000,且高表达条带主要存在于上清中。Tg PRF蛋白经纯化浓缩后浓度为4 mg/ml, Western blotting分析显示,在M_r25 000处出现特异性条带。经细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测,抗Tg PRF血清对胚胎成纤维细胞未见毒性损伤。ELISA检测抗Tg PRF血清抗体效价> 1∶10~5;各实验组细胞于感染24 h时,A组(0.62±0.23)及C组(0.74±0.25)相对虫体数量高于B1组(0.35±0.16)(P <0.05),但与B2和B3组间差异无统计学意义(P> 0.05), B1～B3组虫体增殖抑制率分别为43.5%、 11.4%、 3.6%。感染48 h时,A组(3.61±0.66)与C组(3.38±0.78)相对虫体数量明显高于B1～B3组(P <0.01),而B1组(1.09±0.58)与B2组(1.92±0.73)低于B3组(2.47±0.84)(P <0.05), B1～B3组虫体增殖抑制率分别增高至69.9%、 46.9%、 31.7%;感染72 h时,A组(19.90±3.92)与C组(20.61±4.07)相对虫体数量高于B1组(5.58±2.43)与B2组(8.06±2.66)(P <0.01), B3组(16.02±6.46)明显升高。B1～B3组抑制率分别为72.0%、 59.5%、 19.5%。结论弓形虫Tg PRF蛋白能有效刺激新西兰兔产生抗体,且Tg PRF兔血清抗体在体外能有效抑制弓形虫速殖子在小鼠胚胎成纤维细胞中的增殖并呈现明显的量效关系,但并不能完全消除虫体。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2019年04期）
范菽卫,胡益飞,虞成超[7]（2019）在《热灭活对弓形虫IgM抗体检测影响的临床研究》一文中研究指出目的评估56℃30 min热灭活对弓形虫IgM抗体磁微粒全自动化学发光检测的影响。方法将63例孕妇的惰性分离胶和促凝剂抗凝的血浆分为3组:(1)弓形虫IgM抗体阳性标本;(2)在弓形虫IgM抗体弱阳性(灰区)标本;(3)弓形虫IgM抗体阴性标本,对全部标本56℃30 min热灭活,并用磁微粒全自动化学发光测定仪对热灭活样本前后弓形虫IgM抗体进行定量检测分析。结果弓形虫IgM抗体阳性标本定量结果显着降低,弱阳性(灰区)标本结果显着降低并变为阴性,阴性标本检测值显着降低但仍为阴性结果。结论 56℃30 min热灭活显着降低弓形虫IgM抗体样品磁微粒全自动化学发光检测结果,在弓形虫IgM抗体日常检测过程中应避免样本的56℃30 min热灭活处理过程。(本文来源于《中国卫生检验杂志》期刊2019年10期）
熊乙丁[8]（2019）在《弓形虫profilin蛋白的原核表达及其抗体对弓形虫增殖影响》一文中研究指出目的:1.建立刚地弓形虫profilin(TgPRF)蛋白的原核表达体系。2.制备兔抗TgPRF多克隆抗体,同时检测其对细胞及速殖子毒性。3.利用小鼠胚胎纤维细胞(BALB/C-3T3)建立弓形虫速殖(RH-green fluorescent protein,RH-GFP)子体外增殖模型,评价TgPRF抗体对弓形虫速殖子体外增殖的抑制作用以及对感染细胞生长及凋亡的影响,为TgPRF疫苗的保护性研究提供理论支撑和实验数据。方法:小鼠腹腔传代获取弓形虫RH株速殖子,提取弓形虫速殖子总RNA并反转录为cDNA,以其为模板通过特异引物进行PCR扩增TgPRF基因。PCR产物及pET-30a(+)载体经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后进行连接,构建pET-30a(+)-TgPRF重组质粒。将pET-30a(+)-TgPRF转化E.coli XL10-GOLD感受态细胞,筛选阳性菌落经PCR及测序鉴定,选取测序正确的质粒转化E.coli BL21-(DE3)表达菌,经IPTG诱导并将表达产物进行SDS-PAGE及Western blotting分析,利用Ni-NTA亲和层析和阴离子柱纯化蛋白后联合佐剂免疫新西兰兔制备多克隆抗体。建立体外小鼠胚胎纤维细胞(BALB/C3T3)与弓形虫速殖子(RH-GFP)共培养体系,荧光显微镜观察TgPRF抗体(去补体)对正常细胞及速殖子的杀伤作用。体外检测TgPRF抗体对弓形虫速殖子(RH-GFP)在BALB/C 3T3中增殖的影响,设置模型组A:感染8×10~3弓形虫速殖子;干预组C:分为C1~C4组,分别加入终浓度为1:40、1:80、1:160、1:320的TgPRF抗血清,各组均感染8×10~3弓形虫速殖子;阴性对照组D:感染8×10~3弓形虫速殖子以及免疫前兔血清(终浓度1:40)。各组均设3复孔,于37℃,5%CO_2培养箱孵育96h,每间隔12 h拍照观察,通过image pro 6.0软件统计荧光面积分析计算虫体增殖比及抑制率。进一步利用实时动态活细胞成像仪监测TgPRF抗体干预对弓形虫(RH)感染后细胞生长及凋亡的影响,同上设置模型组A’以及干预组C1’、C2’和C3’组,添加正常对照组(N)及1:40 TgPRF抗体对照组(B),各组均设4个复孔,每孔定容200μl。结果:1.提取弓形虫速殖子总RNA,凝胶电泳显示叁条完整条带,PCR扩增产物长度为510 bp。重组质粒经特异性引物和通用引物PCR鉴定后送公司测序,结果显示pET-30a(+)-TgPRF重组质粒构建成功。小量表达超声破碎后经SDS-PAGE检测,显示目的蛋白主要在超声菌液的上清中表达,为可溶性表达,大小约为26 kDa,与预期大小相符。2.优化表达条件后发现其最佳IPTG诱导浓度为0.2 mM,最佳诱导时间为10 h,最佳诱导温度为37℃。收集大量该重组蛋白经Ni-NTA亲和层析和阴离子柱纯化,发现经37.5 mM咪唑洗脱后再经0.2 M氯化钠洗脱,能得到纯度99.5%以上的TgPRF重组蛋白。3.纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂乳化后免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,ELISA法测定抗体效价>10~6,Western blotting结果显示TgPRF抗血清能特异性识别相应抗原。4.体外实验证明去补体的TgPRF抗血清对细胞及弓形虫均无直接杀伤作用。体外干预实验显示,A组和D组无显着性差异(P=0.382),与C组差异显着(P<0.05)。各实验组在48 h前虫体增殖相对缓慢,之后开始快速增殖。感染48 h时A组增殖比为1.091±0.137,显着高于C1-C3组(P<0.05),与C4组间无统计学意义(P=0.107);至感染60 h时各组虫体继续增殖,C1~C4组均表现出较高的虫体增殖抑制效果,C1~C4组的抑制率分别为78.13%、69.01%、64.75%、50.92%。72 h时A组虫体增殖比(8.05±0.27)显着高于C1~4组(P<0.05),但各干预组抑制率基本保持稳定;感染84 h时A组虫体增值比激增至20.539±1.414,显着高于C1-C4组(P≤0.01),其中C4组虫体增殖比为9.546±1.143,高于其C1-3组(P<0.05),C1~C3组间虫体增殖比无统计学意义(P>0.05)。5.实时动态监测显示正常对照组(N)与C1~’间细胞融合度无统计学差异(P=0.696),显着高于C2’、C3’组,而A’组细胞融合度显着低于其他各组(P<0.05)。至实验结束时,N组细胞铺满整个视野,A组细胞增殖严重抑制,而C1~’组仅有小部分缺失,C2~’和C3~’组细胞间隙明显并伴有不同程度的局部缺失。在干预组细胞生长状态改善、虫体减少的情况下,其凋亡与感染对照组并无明显差异(P>0.05),其中感染对照组凋亡散布于整个视野,而各干预组凋亡多集中在速殖子增殖区域。结论:1.成功构建pET-30a(+)-TgPRF原核表达体系并高表达可溶性的TgPRF重组蛋白。2.经Ni-NTA亲和层析和阴离子柱纯化获得高纯度TgPRF蛋白并成功制备出兔抗TgPRF抗体。3.体外实验显示弓形虫TgPRF抗体呈剂量依赖性抑制弓形虫速殖子在BALB/C-3T3内的增殖,其机制可能与诱导感染细胞的凋亡密切相关。(本文来源于《遵义医科大学》期刊2019-05-01）
刘丽娅,王光雷,蒋晓梅,苗书魁,汪萍[9]（2019）在《新疆部分地区绵羊弓形虫抗体监测与分析》一文中研究指出为查明新疆北疆部分地区绵羊弓形虫感染情况,在伊犁、阿勒泰和昌吉地区4个专业养殖场和7户散养户共采集12批次403份绵羊血清样品,采用间接ELISA和IHA方法进行弓形虫抗体监测。结果表明,403份样品中共检出14份阳性样品,阳性率为3. 5%;伊犁、阿勒泰和昌吉地区阳性率分别为(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2019年04期）
李朝,李娟,李维芬,王研,常华[10]（2019）在《昆明滇池越冬红嘴鸥血清弓形虫抗体调查及风险因素分析》一文中研究指出为获悉昆明滇池越冬红嘴鸥弓形虫血清抗体阳性情况,于2017年12月～2018年3月采集186份红嘴鸥血清样本,采用间接血凝试验(IHA)的方法,对血清样本进行弓形虫抗体检测,并采用χ~2检验对结果进行统计分析和评估风险因子(OR)。结果显示:弓形虫抗体阳性率为11.29%(21/186);时间、性别、体重和抗体滴度变量间阳性率无显着差异(P>0.05);年龄变量阳性率存在显着差异(P<0.05),亚成鸟阳性率为55.56%(5/9);年龄为感染弓形虫的主要风险因素(OR=12.81)。结果表明:昆明滇池越冬红嘴鸥存在弓形虫感染,年龄为主要感染风险内因。研究为红嘴鸥的弓形虫病防控提供了流行病学数据。(本文来源于《中国家禽》期刊2019年05期）
抗弓形虫抗体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的原核表达弓形虫TgPRF蛋白,制备多克隆抗体并评价其作为内参抗体的可行性。方法以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增TgPRF编码基因,克隆至pGEX-4T-1载体,转化至大肠埃希氏菌(Escherichia coli)BL21。经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况。利用GST标签亲和层析法纯化重组蛋白。以纯化后蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗TgPRF多克隆抗体。收集弓形虫RH株速殖子,以制备的多克隆抗体为一抗,Western blotting检测抗体特异性及效价。收集ATc调控下不同时间点的弓形虫iKO-Ty-TgAPH虫株速殖子进行Western blotting,以抗Ty和抗TgPRF抗体为一抗,检测TgAPH和TgPRF表达量的变化。结果 SDS-PAGE显示:TgPRF在诱导4 h后表达量趋于饱和,相对分子量为52 ku,且呈可溶性表达。弓形虫RH株速殖子总蛋白进行的Western blotting显示:抗TgPRF多克隆抗体可识别内源性的TgPRF,且该多克隆抗体稀释至1∶10 000时仍可见明显条带;iKO-TyTgAPH虫株速殖子总蛋白进行的Western blotting显示:TgAPH的表达量随ATc作用时间的增加呈递减趋势,而TgPRF表达量基本维持恒定。结论本实验制备的抗TgPRF多克隆抗体特异性和效价良好,可作为衡量弓形虫特定蛋白表达量的内参抗体,也可直接检测内源性TgPRF的表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗弓形虫抗体论文参考文献
[1].黄炳炽,林仰孝,刘芳,王健青,周珊珊.应用ELISA方法检测多种动物弓形虫抗体[J].畜牧兽医科技信息.2019
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[5].赵正虎,钱胜南,万静宜,唐子茹,沈双.刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶多克隆抗体的制备及鉴定分析[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志.2019
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