导读:本文包含了猪羧肽酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:重组猪羧肽酶B,酶学性质,稳定性
猪羧肽酶论文文献综述
吴珊,李素霞[1]（2012）在《重组猪羧肽酶B的酶学性质及稳定性研究》一文中研究指出目的研究重组猪羧肽酶B的酶学性质及稳定性。方法测定其酶学动力学参数Km和Vmax,最适pH和最适温度;研究不同pH和不同温度条件下酶的稳定性,以及金属离子和EDTA对酶的活性与稳定性的影响。结果重组猪羧肽酶B的Km为0.27 mmol/L,Vmax为222.22μmol/min,最适pH为7.65,最适催化温度为25℃;pH在5.0~9.0范围内,温度在4~30℃稳定性良好,Cu2+和EDTA抑制酶活性,Co2+促进酶活性。结论重组猪羧肽酶B的酶学性质与报道的提取猪羧肽酶B的性质基本相同,pH5.0~9.0范围内稳定,在4~30℃时稳定性好。(本文来源于《食品与药品》期刊2012年05期）
赵莹[2]（2009）在《猪羧肽酶A1酶原的基因克隆及其在毕赤酵母中的表达》一文中研究指出羧肽酶A(EC 3.4.16)是一类水解蛋白和多肽底物C端芳香族氨基酸或脂肪族氨基酸残基的消化酶,其添加能改善幼龄动物因消化酶分泌不足而引起的消化问题,因此在养殖业中具有较高的应用价值。然而目前商品羧肽酶A主要由猪胰腺提取、纯化而来,因此要在动物饲料中经济地应用这种酶还面临着相当大的挑战。通过分子生物学方法克隆猪胰腺羧肽酶A1酶原(proCPA1)基因,构建高效表达载体表达proCPA1并且分离纯化目标蛋白,利用基因工程手段大量制备CPA1蛋白具有重要的研究意义和广阔的市场前景。毕赤酵母表达系统具有易于高密度发酵、表达基因稳定整合于宿主基因组、表达产物能有效分泌并适当糖基化、培养方便经济等特点,经过近十年发展,已成为较完善的外源基因表达系统。在此我们克隆了猪胰腺proCPA1基因并构建了proCPA1的毕赤酵母表达系统,通过甲醇诱导成功表达获得proCPA1蛋白,为下一步大量制备CPA1蛋白提供基础,研究结果如下:以猪新鲜胰腺为实验材料,用TRIzol法提取胰腺总RNA,采用RT-PCR技术扩增出proCPA1基因的cDNA序列,将其克隆到pMD18-T载体,经测序分析克隆的基因与猪胰腺羧肽酶A1酶原基因序列一致;将proCPA1基因定向克隆到表达载体pPICZαA上,构建了重组表达质粒pPICZαA-proCPA1;重组质粒经PmeⅠ酶线性化后电穿孔法转化毕赤酵母X-33细胞;采用实时荧光定量RT-PCR筛选高RNA表达的阳性转化子用于进一步重组蛋白诱导表达;筛选的阳性转化子于BMGY摇瓶培养后于BMMY用甲醇进行诱导,表达产物经His-Tag Ni亲和层析纯化,得到纯化的蛋白,经SDS-PAGE,考马斯亮蓝染色分析显示纯化蛋白分子量约为47kDa,与目标蛋白预期分子量大小一致;进一步经肽质量指纹图谱(PMF)以及Western blot分析证实,表达、纯化的蛋白就是重组猪胰腺羧肽酶A1酶原蛋白。本研究采用毕赤酵母表达系统成功表达了重组猪胰腺proCPA1,为下一步优化诱导表达条件,大量生产应用该蛋白奠定了基础。(本文来源于《四川农业大学》期刊2009-06-01）
猪羧肽酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
羧肽酶A(EC 3.4.16)是一类水解蛋白和多肽底物C端芳香族氨基酸或脂肪族氨基酸残基的消化酶,其添加能改善幼龄动物因消化酶分泌不足而引起的消化问题,因此在养殖业中具有较高的应用价值。然而目前商品羧肽酶A主要由猪胰腺提取、纯化而来,因此要在动物饲料中经济地应用这种酶还面临着相当大的挑战。通过分子生物学方法克隆猪胰腺羧肽酶A1酶原(proCPA1)基因,构建高效表达载体表达proCPA1并且分离纯化目标蛋白,利用基因工程手段大量制备CPA1蛋白具有重要的研究意义和广阔的市场前景。毕赤酵母表达系统具有易于高密度发酵、表达基因稳定整合于宿主基因组、表达产物能有效分泌并适当糖基化、培养方便经济等特点,经过近十年发展,已成为较完善的外源基因表达系统。在此我们克隆了猪胰腺proCPA1基因并构建了proCPA1的毕赤酵母表达系统,通过甲醇诱导成功表达获得proCPA1蛋白,为下一步大量制备CPA1蛋白提供基础,研究结果如下:以猪新鲜胰腺为实验材料,用TRIzol法提取胰腺总RNA,采用RT-PCR技术扩增出proCPA1基因的cDNA序列,将其克隆到pMD18-T载体,经测序分析克隆的基因与猪胰腺羧肽酶A1酶原基因序列一致;将proCPA1基因定向克隆到表达载体pPICZαA上,构建了重组表达质粒pPICZαA-proCPA1;重组质粒经PmeⅠ酶线性化后电穿孔法转化毕赤酵母X-33细胞;采用实时荧光定量RT-PCR筛选高RNA表达的阳性转化子用于进一步重组蛋白诱导表达;筛选的阳性转化子于BMGY摇瓶培养后于BMMY用甲醇进行诱导,表达产物经His-Tag Ni亲和层析纯化,得到纯化的蛋白,经SDS-PAGE,考马斯亮蓝染色分析显示纯化蛋白分子量约为47kDa,与目标蛋白预期分子量大小一致;进一步经肽质量指纹图谱(PMF)以及Western blot分析证实,表达、纯化的蛋白就是重组猪胰腺羧肽酶A1酶原蛋白。本研究采用毕赤酵母表达系统成功表达了重组猪胰腺proCPA1,为下一步优化诱导表达条件,大量生产应用该蛋白奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
猪羧肽酶论文参考文献
[1].吴珊,李素霞.重组猪羧肽酶B的酶学性质及稳定性研究[J].食品与药品.2012
[2].赵莹.猪羧肽酶A1酶原的基因克隆及其在毕赤酵母中的表达[D].四川农业大学.2009