导读:本文包含了神经内肽酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:阿尔茨海默病,神经内肽酶,启动子,人参皂苷Rb1
神经内肽酶论文文献综述
孙高英[1]（2013）在《人参皂苷Rb1对神经内肽酶基因启动子活性的影响》一文中研究指出阿尔茨海默症(Alzheimer's disease, AD)是一种原发进行性神经元退行性疾病,是老年性痴呆症最常见类型。研究显示β淀粉样前体蛋白酶解产生的β-淀粉样肽(p-amyloid peptide, Aβ)寡聚体是导致神经元凋亡损伤,进而导致AD病理发展的主要毒性物质之一。神经内肽酶(neprilysin, NEP)为Ⅱ型膜结合型锌依赖肽链内切酶,是脑内降解Aβ的关键酶之一。在正常情况下,NEP参与脑内低浓度Aβ的维持。在病理情况下,NEP表达水平降低,Aβ合成与清除失衡,脑内Aβ聚集。因此NEP表达水平的降低与AD的发生和发展密切相关。人参皂苷Rb1是从人参中提取的活性单体物质,是人参作用于神经系统的主要成分之一,对神经细胞有保护作用。我们先前的研究显示Rb1可以明显上调人神经母细胞瘤细胞NEP表达水平和活性。为进一步阐明Rb1促进NEP表达的机制,本研究构建了一系列NEP启动子缺失体-荧光素酶报告基因质粒,用Rb1处理其转染的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,探查了NEP基因5'上游启动子区域中与Rb1影响NEP启动子活性有关的位点。实验方法1.用限制性内切酶MluⅠ和XhoⅠ对NEP基因启动子-荧光素酶报告基因质粒pGL3-nep2.4进行酶切,对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定,并用通用引物RVprimer3和GLprimer2对其进行序列分析；2.用pGL3-nep2.4质粒转染SH-SY5Y细胞,并用Rb1对转染细胞进行处理,检测转染细胞的双荧光素酶活性；3.用Erase-a-base System试剂盒对pGL3-nep2.4质粒插入片段进行5'端缺失突变,构建一系列NEP基因启动子缺失体-荧光素酶报告基因质粒,并进行XhoI及BamHⅠ双酶切鉴定和DNA测序分析；将缺失体质粒分别转染SH-SY5Y细胞,检测其双荧光素酶活性；4.大量挑取NEP启动子-894bp～-534bp及-247bp～-82bp片段对应突变体库转化平板上的阳性克隆,并进行XhoⅠ及BamHⅠ双酶切鉴定和DNA测序分析；用筛选获得的前述特定范围内缺失体转染SH-SY5Y细胞,检测其双荧光素酶活性；5.用Rb1处理-894bp～-857bp、-559bp～-534bp、-223bp～-179bp及-100bp～-82bp对应的8个缺失体转染的SH-SY5Y细胞,检测其双荧光素酶活性。实验结果1.酶切后电泳及DNA测序结果显示pGL3-nep2.4质粒的DNA片段插入方向及序列正确；2.荧光素酶活性检测显示,转染的SH-SY5Y细胞荧光素酶活性是转染pGL3-basic的13.1倍(P＜0.01)；Rb1处理可使转染pGL3-nep2.4质粒SH-SY5Y细胞荧光素酶活性增加,其是未处理的2.9倍(P＜0.01)；3.酶切鉴定及序列分析结果显示,NEP启动子大范围缺失体系列插入方向及序列正确；4.特定范围缺失体系列转染细胞荧光素酶活性检测显示,NEP基因上游启动区-894bp～-857bp (Region Ⅰ)及-100bp～-82bp (Region Ⅳ)片段缺失后,启动子活性分别是缺失前的29%(P＜0.01)和25%(P＜0.01),-559bp～-534bp (Region Ⅱ)及-223bp～-179bp (Region Ⅲ)片段缺失后,启动子活性分别是缺失前的5.12(P＜0.01)及1.81倍(P＜0.01)。5.Rb1处理后,双荧光素酶活性检测显示,Region Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ缺失前后缺失体体质粒转染细胞荧光素酶活性均与未处理的无明显差异(P>0.05),RegionⅣ缺失后质粒pGL3-226转染细胞荧光素酶活性也与未处理的无明显差异(P＞0.05),而Region Ⅳ缺失前缺失体质粒pGL3-244转染细胞荧光素酶活性则是未处理的1.61倍(P＜0.01)。结论1. pGL3-nep2.4质粒中2.4kb DNA插入片段具有较强启动子活性,且Rb1能明显增加其启动子活性；2.成功构建了NEP启动子大范围缺失体系列及2个特定范围缺失体系列；3.NEP基因2.4kb DNA片段有2个正调控区(Region Ⅰ和Region Ⅳ)和2个负调控区(Region Ⅱ和Region Ⅲ), Rb1通过Region Ⅳ发挥正调控作用。(本文来源于《山东大学》期刊2013-05-08）
方淑环,荣翠平,于旭华,侯雪芹,陈云波[2]（2013）在《EGCG上调神经内肽酶表达抑制Aβ神经毒性作用的研究》一文中研究指出目的:通过观察EGCG对M146L细胞(双转APP/PS1基因的CHO细胞)存活率与相关蛋白NEP、Aβ42等的变化情况,探讨EGCG通过NEP调节Aβ42从而发挥神经保护作用的可能机制。方法:MTT法检测EGCG分别作用于CHO细胞和M146L细胞后对细胞存活率的影响。ELISA法检测EGCG对M146L细胞Aβ42分泌量的变化情况。Western blot法检测EGCG对M146L细胞NEP、Aβ42、APP和PS1等蛋白的变化情况。结果:EGCG促进M146L细胞的增殖,但对CHO细胞增殖无明显的促进作用。EGCG显着减少M146L细胞内Aβ42的表达,但胞外Aβ42的分泌量有增加的趋势。进一步研究发现EGCG上调M146L细胞NEP表达,同时下调APP和PS1的表达。结论:EGCG可能通过上调NEP表达从而抑制Aβ神经毒性作用,发挥神经保护作用,因此在AD的治疗上可能有进一步发展的潜能。(本文来源于《2013年全国老年性痴呆与相关疾病学术会议论文汇编》期刊2013-04-19）
周石仙,王利宏,郑良荣,朱建华,胡申江[3]（2011）在《降钙素基因相关肽通过神经内激肽酶途径改善缺血再灌注小鼠心脏功能》一文中研究指出目的观察降钙素基因相关肽(CGRP)通过神经内激肽酶途径改善缺血再灌注小鼠心脏功能。方法将50只ICR雄性小鼠随机分为缺血再灌注(IR)组,IR+CGRP(10～7 mol/L)组,IR+CGRP+CGRP8-37(一种CGRP受体拮抗剂,10～6mol/L)组,IR+CGRP+RP67580[一种神经激肽-1(NK1)受体拮抗剂,10～6 mol/L],IR+CGRP+Thiorphan[一种神经内(本文来源于《第十叁次全国心血管病学术会议论文集》期刊2011-06-23）
杨玲玲[4]（2009）在《人参皂苷Rb1及Rg3上调神经内肽酶表达抑制β-淀粉样肽神经毒性作用的研究》一文中研究指出阿尔茨海默症是一种原发性神经元退行性疾病,是老年人群痴呆的最重要类型。阿尔茨海默症患者的典型病理表现为:脑内神经细胞间老年斑形成,神经细胞内神经纤维缠结,选择性神经元或突触丢失。阿尔茨海默症发病机制至今不清,但绝大多数研究者认同阿尔茨海默症是一种由于基因缺陷直接或间接改变淀粉样蛋白前体表达或蛋白酶解过程从而影响β-淀粉样肽聚集稳定性的病理综合征。β-淀粉样肽,为39～43个氨基酸组成的一组多肽,是老年斑的主要成分,也是阿尔茨海默症的主要致病物质,由淀粉样蛋白前体经β-、γ-分泌酶次序降解产生,可被某些肽酶降解清除。正常情况下,β-淀粉样肽的产生和清除处于平衡状态,但某些致病因素可致平衡失调,导致β-淀粉样肽累积并逐渐形成不溶性纤维丝,从而引发连串的复杂反应,包括钙离子稳态失调,氧自由基生成增加,tau蛋白磷酸化,递质变化,突触丢失,神经胶质增生和炎症反应等,最终出现神经元功能失调,死亡,斑块形成,神经原纤维缠结等病理现象。因而,抑制β-淀粉样肽生成、促进β-淀粉样肽清除、降低β-淀粉样肽毒性和促进神经元损伤后的修复等可作为阿尔茨海默症药物研究的重要靶标。近年来研究表明,神经内肽酶是脑内催化β-淀粉样肽降解的关键酶,是调节大脑β-淀粉样肽水平的重要因素。因此,本课题以神经内肽酶为靶点,对十余种已有研究表明对神经系统损伤有一定改善作用的天然药物进行研究;并构建高表达瑞典突变型淀粉样肽前体蛋白的神经母细胞瘤细胞作为阿尔茨海默症细胞模型,在细胞水平检测药物对β-淀粉样肽的降解作用及神经保护作用;克隆神经内肽酶基因启动子区域,初步探讨药物调节神经内肽酶活性的分子机制。第一部分筛选能够提高神经内肽酶活性的药物【研究目的】获得能够提高神经内肽酶活性的天然药物。【研究方法】(1) MTT试验检测各天然药物对神经母细胞瘤细胞SK-N-SH细胞存活率的影响,确定药物的最佳浓度及作用时间。(2)肽酶实验检测各天然药物对细胞神经内肽酶活性的影响。(3)肽酶实验分别检测不同浓度及不同时间情况下人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg3对神经内肽酶活性的影响。【结果】(1)药物浓度梯度实验结果表明:茶多酚10mg/L;维生素E 25mg/L;槲皮素5μmol/L;芦丁20mg/L;大黄素2mg/L;白藜芦醇5μmol/L;姜黄素5μmol/L;葛根素100μmol/L;石杉碱甲5μmol/L;人参皂苷Rg120μmol/L;人参皂苷Rb1 50μmol/L;人参皂苷Rg3 50μmol/L;人参皂苷Re 50μmol/L;远志皂苷元50μmol/L;知母皂苷A3 1mg/L对细胞存活无明显影响或影响较小。药物时间梯度实验结果表明,有效作用时间为48～72h。(2)茶多酚、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg3能够明显提高神经内肽酶活性,分别为未处理细胞的(117±2.8)%、(131±4.0)%、(121±1.6)%倍。(3) 20μmol/L人参皂苷Rb1即能有效提高神经内肽酶活性,为未处理组的(120±7.9)%;药物浓度达到100μmol/L时作用最强,为(131±2.3)%。选用50μmol/L人参皂苷Rb1进行时间梯度试验,结果显示药物作用72h效果最佳,为(126±3.5)%。(4) 25μmol/L人参皂苷Rg3即能有效提高神经内肽酶活性(117±4.5)%,药物浓度达到100μmol/L时作用最强,为(140±8.5)%。选用50μmol/L人参皂苷Rg3进行时间梯度检测,结果显示药物作用72h效果最佳,为(129±1.3)%。【结论】确定了各天然药物的最佳浓度及作用时间。茶多酚、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg3能够提高神经内肽酶活性。人参皂苷Rb1对神经内肽酶活性的影响呈一定浓度梯度和时间梯度关系,100μmol/L时作用最强,最佳作用时间为72h。人参皂苷Rg3对神经内肽酶活性的影响亦呈一定浓度梯度和时间梯度关系,100μmol/L时作用最强,最佳作用时间为72h。第二部分表达瑞典突变型APP695的SK-N-SH细胞的制备与鉴定以及人参皂苷Rb1和Rg3的神经保护作用的研究【研究目的】构建含瑞典突变型淀粉样蛋白前体sweAPP695基因的表达载体;建立表达sweAPP695蛋白的SK-N-SH细胞株;检测APP695蛋白表达变化、β-淀粉样肽分泌能力及生物学性状变化;检测人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg3的神经保护作用。【研究方法】(1)构建含sweAPP695基因的表达质粒(pcDNA3.1-sweAPP695),酶切鉴定并测序。(2)以脂质体Lipofectamine~(TM)2000介导重组质粒pcDNA3.1-sweAPP695转染神经母细胞瘤细胞SK-N-SH,利用G418进行筛选,3-4周后,挑取单克隆、消化接种后继续培养建株,以Western Blot及酶联免疫吸附试验鉴定。(3)分别抽提SK-N-SH细胞及转染后细胞蛋白,Western Blot检测细胞sweAPP695蛋白表达情况。(4)分别收集SK-N-SH细胞及转染后细胞的上清液,酶联免疫吸附试验检测细胞分泌Aβ_(40)和Aβ_(42)情况。(5)将通过鉴定能够稳定表达sweAPP695蛋白的细胞株命名为sweAPP-SK细胞,作为阿尔茨海默症模型细胞进行实验。观察细胞形态学改变,利用MTT试验测定细胞生长增殖能力,绘制细胞生长曲线。(6)利用活性氧探针H_2DCFD标记SK-N-SH细胞及sweAPP-SK细胞,流式细胞术检测,分析转染sweAPP695后细胞内活性氧水平变化。(7)利用钙离子探针Fluo-3AM ester标记SK-N-SH细胞及sweAPP-SK细胞,流式细胞术检测,分析转染sweAPP695后细胞内钙离子水平变化。(8)分别收集SK-N-SH细胞及sweAPP-SK细胞,流式细胞术检测,分析转染sweAPP695后细胞凋亡情况。(9)分别以50μmol/L人参皂苷Rb1和50μmol/L人参皂苷Rg3处理sweAPP-SK细胞72h,收集细胞的上清液,酶联免疫吸附试验检测细胞外Aβ_(40)和Aβ_(42),分析药物作用。(10)分别以50μmol/L人参皂苷Rb1和50μmol/L人参皂苷Rg3处理sweAPP-SK细胞72h,活性氧探针标记细胞,流式细胞术检测,分析药物对细胞内活性氧水平的影响。(11)分别以50μmol/L人参皂苷Rb1和50μmol/L人参皂苷Rg3处理sweAPP-SK细胞72h,钙离子探针标记细胞,流式细胞术检测,分析药物对细胞内钙离子水平的影响。(12)以20μmol/L外源Aβ_(25-35)作用SK-N-SH细胞48h,建立细胞凋亡模型;并分别以50μmol/L人参皂苷Rb1和50μmol/L人参皂苷Rg3处理细胞72h;收集细胞,流式细胞术进行检测,分析药物对于细胞凋亡的影响。(13)以20μmol/L外源Aβ_(25-35)作用于细胞建立细胞凋亡模型;并分别以50μmol/L人参皂苷Rb1和50μmol/L人参皂苷Rg3处理细胞72h;抽提细胞总蛋白,Western Blot检测药物对于细胞促凋亡蛋白Bax及抑凋亡蛋白Bcl-2表达的影响。【结果】(1)经限制性内切酶酶切鉴定,sweAPP695基因片段大小符合,插入方向正确;DNA测序显示序列正确。(2) Western Blot结果显示:筛选到的模型细胞高水平表达sweAPP695蛋白。(3)酶联免疫吸附试验结果显示:筛选到的模型细胞上清液中Aβ_(40)及Aβ_(42)浓度明显升高,分别为转染前的7.26和3.27倍(P＜0.05)。(4)将经过鉴定的细胞命名为sweAPP-SK细胞,并作为阿尔茨海默症模型细胞用于后续药物作用分析实验。(5) sweAPP-SK细胞较正常SK-N-SH细胞体积变大,生长变缓。(6)活性氧探针标记后流式细胞术检测结果显示:sweAPP-SK细胞内氧自由基水平升高,为正常SK-N-SH细胞的2.48倍。(7)钙离子探针标记后流式细胞术检测结果显示:sweAPP-SK细胞内钙离子水平升高,为正常SK-N-SH细胞的2.76倍。(8)流式细胞术凋亡检测结果显示sweAPP-SK细胞虽生长变缓,但没有显着的细胞凋亡发生。(9)酶联免疫吸附试验结果显示:经50μmol/L人参皂苷Rb1作用72h后,sweAPP-SK细胞培养基中Aβ_(40)和Aβ_(42)水平明显降低,为未处理细胞组的(74±1.61)%和(99±3.31)%;经人参皂苷Rg3作用72h后,细胞培养基中Aβ_(40)和Aβ_(42)水平亦明显降低,为未处理细胞组的(83±5.31)%和(76±6.74)%。(10)活性氧检测结果显示:经50μmol/L人参皂苷Rb1作用72h后,sweAPP-SK细胞内活性氧水平明显降低,荧光强度由437.67降至282.70;经50μmol/L人参皂苷Rg3作用72h后,sweAPP-SK细胞内活性氧水平明显降低,荧光强度由437.67降至271.19。(11)钙离子检测结果显示:经50μmol/L人参皂苷Rb1作用72h后,sweAPP-SK细胞内钙离子浓度明显降低,荧光强度由109.85降至64.35;经50μmol/L人参皂苷Rg3作用72h后,sweAPP-SK细胞内钙离子浓度明显降低,荧光强度由109.85降至71.85。(12)细胞凋亡检测结果显示:20μmol/L外源Aβ_(25-35)作用细胞48h,细胞出现明显凋亡,凋亡率为13.4%,经50μmol/L人参皂苷Rb1作用72h后,细胞凋亡率降至0.40%;经50μmol/L人参皂苷Rg3作用72h后,细胞凋亡率降至0.36%。(13) Western Blot检测结果显示:人参皂苷Rb1与人参皂苷Rg3均能抑制细胞内促凋亡蛋白Bax的基因表达,从而抑制细胞凋亡发生。但对bcl-2基因表达无明显影响。【结论】成功构建了含sweAPP695基因的表达质粒(pcDNA3.1-sweAPP695);并筛选出能够高表达sweAPP695蛋白的阿尔茨海默症模型细胞sweAPP-SK,此细胞能够高水平分泌Aβ_(40)和Aβ_(42)致使细胞内活性氧水平及钙离子水平升高,但其毒性不致引起明显的细胞凋亡。人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg3均能有效降低细胞外Aβ_(40)和Aβ_(42)浓度;人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg3均能有效降低细胞内活性氧水平;人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg3均能有效降低细胞内钙离子水平;人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg3能通过抑制促凋亡蛋白Bax的基因表达从而抑制细胞发生凋亡。第叁部分工作人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg3升高神经内肽酶活性机制的研究【研究目的】研究人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg3升高神经内肽酶活性的机制。【研究方法】(1)分别以人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg3处理细胞,抽提细胞蛋白,WesternBlot技术从蛋白水平检测人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg3对细胞神经内肽酶基因表达的影响。(2)分别以人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg3处理细胞,抽提细胞RNA,逆转录PCR从mRNA水平检测人参皂苷Rb1对细胞神经内肽酶基因表达的影响;实时定量PCR从mRNA水平检测人参皂苷Rg3对细胞神经内肽酶基因表达的影响。(3)克隆人神经内肽酶neprilysin基因5'上游区域2.9Kb启动子片段(-2268-+708),构建2.9Kb启动子-荧光素酶报道基因质粒(pGL3-nep2.9Kb),利用脂质体将pGL3-nep2.9Kb质粒和内参照质粒pRL-TK共转染SK-N-SH细胞,荧光素酶报道基因分析检测启动子活性。(4)将pGL3-nep2.9Kb进行酶切改造,去除转录起始点下游+144-+708片段,获得pGL3-nep2.4Kb质粒。利用脂质体将pGL3-nep2.4Kb质粒和内参照质粒pRL-TK共转染SK-N-SH细胞,荧光素酶报道基因分析检测启动子活性。(5)pGL3-nep2.4Kb质粒和内参照质粒pRL-TK共转染SK-N-SH细胞后分别用50μmol/L人参皂苷Rb1和50μmol/L人参皂苷Rg3处理细胞48h,进行荧光素酶报道基因分析试验,检测药物对启动子活性的影响。【结果】(1) Western Blot结果显示:经人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg3作用后,细胞内神经内肽酶表达量明显增高,呈剂量依赖。(2)逆转录PCR结果显示:经人参皂苷Rb1作用后,细胞内neprilysin基因转录增高,呈剂量依赖。(3)实时定量PCR结果显示:经人参皂苷Rg3作用后,细胞内neprilysin基因转录增高。25μmol/LRg3作用细胞72h可使细胞内neprilysin基因表达升至1.88±0.26倍,而50μmol/LRg3作用细胞48h可使细胞内neprilysin基因表达升至2.93±0.55倍(P＜0.05)。(4)经限制性内切酶酶切鉴定,克隆的2.9kb启动子片段大小符合,插入方向正确;DNA测序结果正确。荧光素酶报道基因分析结果显示:2.9Kb启动子片段无明显启动子活性。(5) DNA测序结果表明:经SmaI与XhoI酶切改造的2.4Kb启动子片段序列正确。荧光素酶报道基因分析结果显示:2.4Kb启动子片段具有启动子活性,其启动子活性为pGL3-basic活性的10倍。(6)荧光素酶报道基因分析结果显示:人参皂苷Rb1可增强启动子活性,为未处理组启动子活性的1.46倍;人参皂苷Rg3亦可增强启动子活性,为未处理组启动子活性的1.40倍。【结论】人参皂苷对neprilysin基因表达的影响发生在转录水平。克隆的2.9Kb片段位于neprilysin基因-2268bp至+708bp区域;改造后的2.4Kb片段位于neprilysin基因-2268bp至+144bp区域。2.9Kb启动子片段无明显启动活性;2.4Kb启动子片段在神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞中显示有明显的启动子活性。人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg3能提高启动子活性从而促进neprilysin基因表达,进而提高酶活性。后续工作中将研究药物对启动子活性调节的具体机制。(本文来源于《山东大学》期刊2009-04-15）
杨玲玲,张静,崔云燕,胡晓燕,孔峰[5]（2009）在《以神经内肽酶为靶点筛选治疗阿尔茨海默症天然药物的实验研究》一文中研究指出目的筛选具有提高神经内肽酶(NEP)活性从而降低神经细胞β-淀粉样肽(Aβ)水平的药物,为临床治疗阿尔茨海默症(AD)提供实验依据。方法以脂质体LipofectamineTM2000介导瑞典突变型淀粉样肽前体蛋白(sweAPP)表达质粒pcDNA3.1-sweAPP转染神经母细胞瘤细胞SK-N-SH,G418筛选获得稳定表达细胞株作为AD模型细胞,采用蛋白印迹技术检测sweAPP表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养基中A4β0和A4β2含量变化,进而以MTT法检测各天然药物对SK-N-SH细胞增殖能力的影响,确定药物的有效浓度及最佳作用时间,以NEP肽酶实验检测药物对NEP酶活性影响,ELISA法检测药物对Aβ水平的影响。结果Western Blot结果显示,转染后SK-N-SH细胞高表达sweAPP蛋白;ELISA结果显示,转染后的SK-N-SH细胞分泌A4β0、A4β2明显升高,分别为转染前的7.26和3.27倍(P<0.05)。NEP肽酶实验检测结果显示,茶多酚、人参皂苷Rb1、Rg3能够明显提高NEP酶活性,分别为(117±2.8)%(、131±4.0)%和(121±1.6)%。ELISA结果显示,经茶多酚、人参皂苷Rb1、Rg3作用后,细胞培养基中A4β0和Aβ42水平明显降低,分别为对照组的(82±0.78)%和(85±2.21)%(、74±1.61)%和(99±3.31)%、(83±5.31)%和(76±6.74)%。结论成功构建AD模型细胞;茶多酚、人参皂苷Rb1、Rg3可提高NEP酶活性,从而有效降低Aβ的水平;本研究为茶多酚、人参皂苷Rb1、Rg3在临床上的应用以及分子机制研究提供了试验数据。(本文来源于《山东大学学报(医学版)》期刊2009年01期）
金庆平,赖月琴[6]（2003）在《神经内肽酶抑制剂消旋卡多曲(Racecadotril)的合成工艺研究》一文中研究指出目的合成神经内肽酶抑制剂消旋卡多曲。方法以氯苄为起始原料,经六步反应合成消旋卡多曲。结果每步反应均经改进,总收率为60%。所得产品经元素分析,IR,~1HNMR,~(13)CNMR光谱数据与文献报道一致。结论本工艺路线方法简单,原料易得,适合工业化生产。(本文来源于《中国现代应用药学》期刊2003年S1期）
神经内肽酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:通过观察EGCG对M146L细胞(双转APP/PS1基因的CHO细胞)存活率与相关蛋白NEP、Aβ42等的变化情况,探讨EGCG通过NEP调节Aβ42从而发挥神经保护作用的可能机制。方法:MTT法检测EGCG分别作用于CHO细胞和M146L细胞后对细胞存活率的影响。ELISA法检测EGCG对M146L细胞Aβ42分泌量的变化情况。Western blot法检测EGCG对M146L细胞NEP、Aβ42、APP和PS1等蛋白的变化情况。结果:EGCG促进M146L细胞的增殖,但对CHO细胞增殖无明显的促进作用。EGCG显着减少M146L细胞内Aβ42的表达,但胞外Aβ42的分泌量有增加的趋势。进一步研究发现EGCG上调M146L细胞NEP表达,同时下调APP和PS1的表达。结论:EGCG可能通过上调NEP表达从而抑制Aβ神经毒性作用,发挥神经保护作用,因此在AD的治疗上可能有进一步发展的潜能。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
神经内肽酶论文参考文献
[1].孙高英.人参皂苷Rb1对神经内肽酶基因启动子活性的影响[D].山东大学.2013
[2].方淑环,荣翠平,于旭华,侯雪芹,陈云波.EGCG上调神经内肽酶表达抑制Aβ神经毒性作用的研究[C].2013年全国老年性痴呆与相关疾病学术会议论文汇编.2013
[3].周石仙,王利宏,郑良荣,朱建华,胡申江.降钙素基因相关肽通过神经内激肽酶途径改善缺血再灌注小鼠心脏功能[C].第十叁次全国心血管病学术会议论文集.2011
[4].杨玲玲.人参皂苷Rb1及Rg3上调神经内肽酶表达抑制β-淀粉样肽神经毒性作用的研究[D].山东大学.2009
[5].杨玲玲,张静,崔云燕,胡晓燕,孔峰.以神经内肽酶为靶点筛选治疗阿尔茨海默症天然药物的实验研究[J].山东大学学报(医学版).2009
[6].金庆平,赖月琴.神经内肽酶抑制剂消旋卡多曲(Racecadotril)的合成工艺研究[J].中国现代应用药学.2003