导读:本文包含了纯化抗原论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:水疱性口炎病毒,中和试验,抗原纯化,多克隆抗体
纯化抗原论文文献综述
胡涛,金郁,汪学龙,李群[1]（2019）在《水疱性口炎病毒纯化抗原制备多克隆抗体的检测结果分析》一文中研究指出目的水疱性口炎病毒纯化抗原制备兔抗VSV多克隆抗体,免疫学方法检测其结果分析比较。方法纯化的抗原制备兔抗VSV多克隆抗体,采用双向琼脂扩散试验,间接ELISA方法和中和试验测定效价。结果兔抗VSV多克隆抗体最高效价双向琼脂扩散试验为1∶32,间接ELISA法为1∶640,中和试验为1∶256。结论试验结果分析比较表明,建立纯化抗原制备的兔抗VS多克隆抗体,中和试验特异性好、敏感性高,可做为VSV的血清学检测和流行抗学调查抗供技术保障。(本文来源于《热带病与寄生虫学》期刊2019年01期）
于凯[2]（2017）在《水貂阿留申病毒VP2重组蛋白与天然纯化抗原对比分析》一文中研究指出水貂阿留申病(Aleutian mink disease,AMD)是由阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)引起的一种慢性进行性传染病,是阻碍毛皮发展的叁大传染病之一,AMD发病率约75%,直接死亡率可达30%。每年给水貂养殖业造成的经济损失难以估量。由于该病特殊的致病机理,目前还没有针对预防AMD的可靠药物,唯一的控制措施就是筛选并扑杀AMD阳性水貂。对流免疫电泳(CIEP)是公认检测AMD的金标准,其原理是抗原抗体在电场的作用下相向运动,两者相遇之后会形成一条清晰的白色沉淀线。形成沉淀线的为阳性,反之则为阴性。而抗原在检测AMD中具有重要的作用,其结果的准确性、反应的灵敏性主要由抗原的质量决定,因此抗原的研究和制备对AMD的检测工作有着重要的意义。本实验目的是筛选出一种成本低廉、操作便捷的抗原制备方法,为AMD的检测和AMD胶体金试纸条的制备提供基础。主要试验结果如下:通过对AMDV-G株的VP2基因序列进行原核表达,预计条带扩增大小为1944bp,从而构建原核表达质粒PMAL-c4x-VP2a,通过SDS-PAGE结果显示其分子量大小与文献报道一致;通过Western blot结果显示,该蛋白可以与AMD阳性血清特异性结合;对表达的蛋白进行直链淀粉树脂亲和层析纯化,从而得到麦芽糖结合融合蛋白,最终1 L的培养物可以得到80 mg的重组蛋白;根据GenBank发表的AMDV-G株全基因组序列,利用生物学软件对VP2基因主要抗原表位进行序列分析,设计并合成一对特异性引物,预计条带扩增大小为710 bp,与载体pEASY-Blunt Zero连接后,通过PCR、双酶切及序列测定,将鉴定正确的重组阳性质粒与原核表达载体PMAL-p5x连接,进而构建PMAL-p5x-VP2b原核表达质粒,通过SDS-PAGE显示其分子量大小为23 kDa;Western blot结果表明,该蛋白可以与AMD阳性血清特异性的结合;对表达的蛋白进行渗透休克法快速分离纯化,1 L的培养物最终可以得到120 mg的重组蛋白;利用Bac-to-bac表达系统对AMDV-G株的VP2全基因进行真核表达,将VP2基因与转移载体pFast BacHT-B连接,并转化到DH10Bac感受态细胞,通过与DH10Bac中的穿梭载体Bacmid发生转座,挑取白斑进行大量培养后提取转座子Bacmid-VP2,通过PCR鉴定后将正确的转座子Bacmid-VP2转染到生长至对数期的sf9细胞中,27℃培养箱培养72 h,收获部分病变的细胞并避光保存,同时对发生病变的细胞进行免疫荧光实验,结果显示,荧光信号强;通过病毒空斑实验对病毒筛选纯化;对表达的蛋白通过镍柱纯化后,1 L的细胞培养液可以获得100 mg的重组蛋白;对传统的AMDV抗原采用超滤管浓缩法进行纯化,其抗原纯度得到提高,将血清稀释至16倍后依旧可以检出,提高了检测的敏感性;利用生物学软件分析,原核表达系统中,PMAL-c4x-VP2a表达的目的蛋白占总蛋白的49.55%,而PMAL-p5x-VP2b表达的蛋白占总蛋白的71.07%;将叁种重组蛋白抗原与AMDV抗原对临床上240个血清样本进行CIEP检测,通过对比,纯化的AMDV抗原其检测敏感性、特异性最好。而重组蛋白中,检出率最高的为真核表达的蛋白,与AMDV抗原相对比,其符合率达91.2%;而原核表达的两种蛋白,短片段表达的蛋白其敏感性及表达量都高于长片段所表达的蛋白,两者之间的符合率为85.3%;而短片段表达的蛋白与AMDV抗原的检出符合率达87.2%。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2017-06-01）
崔小兰[3]（2016）在《鸡新城疫活疫苗（La Sota株）浓缩法纯化抗原生产工艺的建立》一文中研究指出鸡新城疫(Newcastle Disease;ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起禽类的一种重要的急性败血性传染病,对养禽业的发展造成严重影响,属于家禽重大疫病之一。疫苗的免疫接种能有效预防和控制鸡新城疫的发生与流行,减少鸡群因疫病感染造成的损失。常用于免疫接种的鸡新城疫疫苗有活疫苗和灭活疫苗两大类,活疫苗包括Ⅰ系,Ⅱ系(B1株)、Ⅲ系(F系)、Ⅳ系(La Sota株)和克隆-30等,其中新城疫Ⅳ系活疫苗(La Sota株)是我国最常用的优良低毒力疫苗,长期的应用效果表明La Sota株的免疫效果良好,能够保护鸡免受NDV的感染。在鸡新城疫活疫苗生产过程中,传统的生产工艺是将毒种接种SPF鸡胚,收取尿囊液,按照一定比例进行混合配苗,然后利用冻干技术制成疫苗。这种疫苗在临床使用过程中,可能出现肿头、停食、停水、局部炎症、休克甚至死亡的不良反应,同时也会造成生产性能降低,免疫功能下降,易于发病,对其它疫苗应答下降。鸡只免疫接种产生不良反应是由多种因素造成,这些因素包括内毒素、外毒素、热源、异体蛋白、蛋源、血清、革兰阴性菌和环境。其中,内毒素是导致疫苗接种鸡只出现免疫不良反应的主要因素之一。因此,在鸡新城疫活疫苗(La Sota株)生产过程中,可以通过优化鸡新城疫活疫苗(La Sota株)中间产品生产工艺,减少和避免疫苗内毒素污染,达到提升疫苗的品质,提高疫苗的安全性和有效性的目的。本研究是在当前鸡新城疫活疫苗(La Sota株)成熟的生产工艺基础上,根据新城疫病毒特点来开展试验。试验设计A、B、C和D共四组,其中A、B和C组采用浓缩纯化生产工艺连续进行叁批次生产,D组仍采用目前抗原直接配苗进行生产,作为对照组。抗原生产按一定比例作适当稀释毒种,接种SPF鸡胚尿囊腔0.1mL/胚,接种后密封针孔,置36.5℃继续孵化,弃去72h内死亡的鸡胚,收获96h的鸡胚液,测定其血凝价及EID50,检验合格后一部分抗原利用颇尔超滤浓缩系统进行浓缩,浓缩后留取样品备测血凝价及毒价,分别标识为试验A组、B组和C组。另一部分抗原直接按规程规定的效价进行配苗,标识为对照D组;按规程规定的效价进行配苗,连续进行叁批次生产,对四组产品进行生产和常规检测,包括内毒素检验、无菌检验、病毒含量测定、安全检验和免疫攻毒试验,通过比较来建立鸡新城疫活疫苗浓缩纯化生产工艺。结果表明:试验A组、B组和C组鸡新城疫活疫苗(La Sota株)10/10安全检测合格,内毒素含量不超过20EU/mL,病毒含量大于106.0EID50,且批次间差异不超过0.1个滴度;对照D组鸡新城疫活疫苗(La Sota株)7/10安全检测合格,内毒素含量超过50 EU/mL,病毒含量大于106.0EID50。通过检测结果比较,表明鸡新城疫活疫苗(La Sota株)浓缩纯化生产工艺建立的必要性,控制原辅料质量,此浓缩纯化生产工艺,不但能有效富集并调控病毒液含量,增加疫苗单位有效成分,降低疫苗使用量,而且同时能除去部分生物源性杂质成分,减少中间产品病毒液内毒素污染,减少批次间的差异,有效降低免疫接种不良反应,从而提升产品质量水平。本次试验确立了鸡新城疫活疫苗(La Sota株)浓缩纯化生产工艺,并有望在未来生产中得到全面推广应用。(本文来源于《华南农业大学》期刊2016-06-01）
唐浩,张飞伟,刘晓凤,胡慧琼,杨国友[4]（2016）在《无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量检测方法的建立及验证》一文中研究指出目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量,并对该方法进行验证及初步应用。方法 HPLC条件:Agilent SB 300 C18色谱柱(规格:4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:纯化水与甲醇的体积比为20﹕80;检测波长:225 nm;色谱柱温:30℃;流速:0.8 ml/min;进样量:10μl。对方法的系统适应性、专属性、线性、准确性、精密性、耐用性及定量限进行验证,并用建立的方法检测6批无细胞百日咳纯化抗原中的Triton X-100残留量。结果该方法检测6份10μg/ml Triton X-100的理论塔板数在1 550~1 580之间,Triton X-100峰面积和保留时间的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为2.59%和0.04%;12μg/ml的Triton X-100溶液和无细胞百日咳纯化抗原样品中,Triton X-100能与其他物质完全分离;在2~30μg/ml范围内,Triton X-100浓度与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.999 01);该方法检测不同浓度Triton X-100样品的加标回收率均在98%~102%之间,RSD均不超过2%;同一实验人员在不同工作日和不同检测人员在同一工作日用该方法检测供试品中Triton X-100含量的RSD均小于4%;改变流动相的甲醇比例和柱温后,6次检测值的RSD分别为0.95%和0.51%;定量限可达0.5μg/ml。该方法检测6批无细胞百日咳纯化抗原中的Triton X-100残留量均较低。结论建立的HPLC法系统适应性、专属性、线性、准确性、精密性、耐用性良好,可用于无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量的定量检测。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2016年01期）
丁献红[5]（2009）在《禽流感病毒抗原纯化方法的建立及纯化抗原对鸡体免疫效果研究》一文中研究指出为了适应大生产的要求,本试验建立了以抗原毒株的克隆化、抗原预处理、低速离心除杂、高速离心除杂、浓缩、层析纯化为主的禽流感抗原纯化方法,有效降低抗原中的杂质含量和杂蛋白含量。用纯化抗原制备疫苗常规抗原与纯化抗原按既定试验方法进行乳化配制疫苗,纯化疫苗与常规疫苗比较物理外观性状基本相同,但通过颗粒度检测纯化疫苗颗粒度更为细小,更有利于鸡体吸收。抗体产生的要高,而且维持的时间要长,常规苗20周左右已经不再产生抗体,纯化抗原制成的疫苗在29周时还维持在一个较高水平,疫苗的效力检验检验显示:疫苗的效力检验检验显示:叁组疫苗接种后在第10、14、21、40天各组抗体几何平均滴度水平依次为常规疫苗组:9.01Log2 ;抗原b剂量纯化疫苗组:8.92 Log2 ;抗原c剂量纯化疫苗组:10.42 Log2。叁组疫苗SPF鸡胸部肌肉注射1ml疫苗后第6天,叁组疫苗接种鸡接种部位均有肉眼可见的不同程度疫苗未完全吸收现象,纯化疫苗1、2组局部有红肿,沿注射方向出现散在出血点。第25天剖检,纯化疫苗1、2组疫苗基本吸收,肌肉组织恢复较好,常规疫苗组疫苗没有被完全吸收,注射部位及其周围局部略有黄色粘稠状液体,有少量出血点。对照组第9天剖检,注射部位有轻微充血和出血,但不明显,抗原完全吸收,肌肉未见异常。(本文来源于《河南农业大学》期刊2009-03-01）
马辉[6]（2008）在《结核杆菌嵌合蛋白Ag856A2的原核表达、纯化、抗原性分析及其单克隆抗体的制备》一文中研究指出目的构建结核杆菌嵌合蛋白Ag856A2的原核表达载体,进行原核表达、纯化和抗原性分析,制备该蛋白的单克隆抗体,并鉴定单抗的重要性质。方法以DNA疫苗HG856A为模板,经PCR扩增获得ag856a2基因,克隆至pET28a质粒得到原核表达质粒pET856A2;用该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导目的基因表达,通过SDS-PAGE鉴定其表达形式;用Ni2+柱亲和层析纯化嵌合蛋白Ag856A2;分别用Ag85A及ESAT-6的小鼠抗血清对纯化的蛋白Ag856A2进行Western Blotting分析其抗原性。用DNA疫苗HG856A和纯化的嵌合蛋白Ag856A2免疫BALB/C小鼠,取脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0融合,通过HAT培养基选择性培养,间接ELISA法筛选阳性克隆,用有限稀释法将阳性克隆单克隆化,再用间接ELISA法筛选、鉴定,最终建立稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株;分别用间接ELISA法鉴定单克隆抗体的亚类、效价及所识别的抗原,用Western Blotting分析识别蛋白ESAT-6的单克隆抗体的特异性。结果成功构建了重组质粒pET856A2,嵌合蛋白Ag856A2以包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的35%;经Ni2+柱亲和纯化的样品SDS-PAGE分析纯度在90%以上,Ag85A及ESAT-6抗血清均可与其发生特异性反应。融合后经筛选、克隆化得到6株抗Ag856A2的杂交瘤细胞,经鉴定有五株可同时与蛋白Ag856A2、Ag85A反应,为IgG1亚类;一株可同时与蛋白Ag856A2、ESAT-6反应,为IgG2b亚类,其培养上清与蛋白ESAT-6反应效价为6400,与蛋白Ag856A2反应效价为12800;该株单克隆抗体经Western Blotting鉴定可与蛋白Ag856A2、ESAT-6发生特异性反应。结论以包涵体形式表达的嵌合蛋白Ag856A2具有Ag85A及ESAT-6的抗原性;以其DNA疫苗和纯化蛋白免疫小鼠后,初步建立起一株分泌抗蛋白ESAT-6单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本研究为进一步研究该嵌合蛋白在结核病亚单位疫苗中的应用打下了基础,为抗蛋白ESAT-6单克隆抗体在结核病早期诊断上的应用奠定了基础。(本文来源于《苏州大学》期刊2008-05-01）
杨子江[7]（2007）在《一种新型的腮腺炎纯化抗原实验型疫苗的研究》一文中研究指出腮腺炎病毒(Mumps virus，以下简称MV)为RNA病毒，属副黏病毒科。成熟病毒颗粒内的基因组为一不分节段的单股负链RNA。MV仅一个血清型。腮腺炎病毒已被确定是一种可以引起多种器官感染的病原，在其形成对腮腺感染的同时，它常常可以引起神经系统感染、生殖腺体感染以及肝、肾、心脏、关节等多器官的感染。而这些感染，尽管其发病率相应较腮腺炎本身为低，但其所导致的病理后果较腮腺炎要严重得多，如睾丸炎、脑膜炎等。自上世纪60年代以来腮腺炎减毒活疫苗在世界范围内的广泛使用，这一曾经大面积流行的疾病至今已得到了控制，发病率大大降低。从上世纪90年代以后，该病重新在曾经有过良好计划免疫措施的发达国家，如英国、美国、加拿大重新出现，其发病率逐年上升并呈持续发展的趋势。近期以来，甚至出现了局部爆发的情况。有关该病逐渐增多的流行病学报道使人们发现，这一疾病正以一种我们还未完全认识的方式在卷土重来，而这其中，我们曾经成功使用过的腮腺炎减毒活疫苗则日益显示出了它的许多不足之处。尽管腮腺炎减毒活疫苗在使用后大大降低了发病人数，但是类似于野毒株感染所引起的一些并发症也以相当的频率不断出现。其中最常见的就是免疫接种后产生的无菌性脑膜炎，另外还有腮腺炎、颌下脑水肿，发热、局部反应及过敏性反应等，其中已为人们所公认肯定的是无菌性脑膜炎和腮腺炎。因此，在这样的情况下，我们有理由重新审视这一疾病在当前的流行特点，结合当前对MV的分子生物学研究，在可能的范围内进一步探索我们这一现有疫苗在理论和技术上可供改进的基础和空间。对腮腺炎病毒的分子生物学分析已经明确，腮腺炎病毒颗粒中具有主要抗原作用的蛋白成分是其外膜上突起状的血凝素神经氨酸酶——HN蛋白，因为其是在病毒感染过程中结合受体以介导病毒进入细胞的关键结构蛋白，针对其的中和抗体即是针对病毒的中和抗体。而其它的病毒结构蛋白相对来说，在诱导特异性抗病毒免疫方面，均不如HN蛋白重要。因此，我们的纯化抗原研制工作主要集中于这个蛋白。本研究课题就是利用裂解灭活的浓缩的腮腺炎病毒，通过分子筛层析过柱的方法，收集分离的蛋白峰，通过血凝实验、SDS-PAGE电泳、Lowry法测蛋白含量、蛋白N端测序、Western-blot、HPLC测蛋白纯度等，分离纯化并鉴定出HN蛋白组分。我们拿此蛋白组份添加佐剂制备抗原实验性疫苗。该实验性疫苗在一次免疫实验小鼠后，即可100％地诱导其抗体阳转。本实验制备的纯化的腮腺炎包膜糖蛋白-HN，为下一步进行免疫学及安全性实验打下了良好的基础。(本文来源于《昆明医学院》期刊2007-05-01）
张国强,李晓谦,赵铠[8]（2007）在《S79株腮腺炎病毒制备纯化抗原用于诊断试剂的研究》一文中研究指出以S79株腮腺炎病毒制备纯抗原,用于制备检测腮腺炎抗体(IgG)的ELISA试剂盒。将腮腺炎病毒S79株培养液用中空纤维超滤器进行浓缩,经PEG沉淀后,采用蔗糖密度梯度离心法纯化抗原;以纯化的S79株腮腺炎病毒为包被抗原,制备成ELISA腮腺炎病毒抗体(IgG)诊断试剂,并与SIGMA同类产品进行比较。结果显示,经纯化的S79株抗原的比活力为412.9HAU/mg,杂蛋白清除率为99.5%。应用纯化的S79株腮腺炎病毒抗原制备的ELISA试剂,与SIGMA试剂比较,敏感度为94.4%,特异度为91.7%,一致性为93.3%。结论,以纯化的S79株腮腺炎病毒为包被抗原,可用于大批量ELISA腮腺炎抗体诊断试剂盒的制备。(本文来源于《微生物学免疫学进展》期刊2007年01期）
闫成兰,李小峰,胡学芳,国华,吕志清[9]（2006）在《RA33/36纯化抗原检测抗体在类风湿关节炎的应用》一文中研究指出目的探讨RA33/36抗体对类风湿关节炎(RA)的临床价值。方法以纯化的RA33/36为抗原,用免疫印迹法检测RA498例、其他风湿性疾病患者514例、正常对照50名,比较RA33/36抗体在各组人群中的阳性率,并评价其与RA患者临床和实验室指标间的关系、早期诊断及联合诊断价值。结果RA33/36抗体在RA中的灵敏度为32.93%,特异性为88.52%,在RA早期病例中阳性率为32.03%,在72例类风湿因子(RF)阴性的RA患者中有21例阳性(29.17%)。RA33/36抗体与抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体联合检测,特异度为98.46%。RA33/36抗体阳性组和阴性组的关节肿胀数、疼痛关节数、功能分级、X线分期及其他临床指标差异无统计学意义,RF、抗核周因子(APF)、抗角蛋白抗体(AKA)、抗Sa抗体及抗CCP抗体阳性率两组差异均无统计学意义。结论RA33/36抗体对RA有较好的灵敏度和特异度,且有早期诊断价值,并对RF有补充诊断价值,与抗CCP抗体联合诊断可提高诊断的特异性,可广泛应用于RA的临床诊断。(本文来源于《中国药物与临床》期刊2006年03期）
安黎云,白云,李玮[10]（2005）在《应用纯化抗原检测唾液 尿液和血清抗幽门螺杆菌抗体的比较》一文中研究指出目的寻求敏感性高、特异性强的幽门螺杆菌(helicobacterpylori,H.pylori)抗原和简便、可靠的检测H.pylori抗体的方法,用于诊断H.pylori感染。方法以多株H.pylori超声上清、重组H.pylori热休克蛋白A亚单位(rHspA)纯品和重组H.pylori热休克蛋白尿素酶B亚单位(rUreB)纯品混合物为抗原,采用ELISA方法对96例患者的唾液、尿液和血清同时进行检测。结果使用rHspA和rUreB混合纯品进行检测,特异性和敏感性明显优于H.pylori超声上清。诊断H.pylori感染的优劣顺序为:血清IgG、尿液IgG、唾液IgG、血清IgA、唾液IgA。结论混合基因工程纯化抗原进行H.pylori感染的检测,具有良好的临床应用前景。(本文来源于《河北医药》期刊2005年04期）
纯化抗原论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
水貂阿留申病(Aleutian mink disease,AMD)是由阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)引起的一种慢性进行性传染病,是阻碍毛皮发展的叁大传染病之一,AMD发病率约75%,直接死亡率可达30%。每年给水貂养殖业造成的经济损失难以估量。由于该病特殊的致病机理,目前还没有针对预防AMD的可靠药物,唯一的控制措施就是筛选并扑杀AMD阳性水貂。对流免疫电泳(CIEP)是公认检测AMD的金标准,其原理是抗原抗体在电场的作用下相向运动,两者相遇之后会形成一条清晰的白色沉淀线。形成沉淀线的为阳性,反之则为阴性。而抗原在检测AMD中具有重要的作用,其结果的准确性、反应的灵敏性主要由抗原的质量决定,因此抗原的研究和制备对AMD的检测工作有着重要的意义。本实验目的是筛选出一种成本低廉、操作便捷的抗原制备方法,为AMD的检测和AMD胶体金试纸条的制备提供基础。主要试验结果如下:通过对AMDV-G株的VP2基因序列进行原核表达,预计条带扩增大小为1944bp,从而构建原核表达质粒PMAL-c4x-VP2a,通过SDS-PAGE结果显示其分子量大小与文献报道一致;通过Western blot结果显示,该蛋白可以与AMD阳性血清特异性结合;对表达的蛋白进行直链淀粉树脂亲和层析纯化,从而得到麦芽糖结合融合蛋白,最终1 L的培养物可以得到80 mg的重组蛋白;根据GenBank发表的AMDV-G株全基因组序列,利用生物学软件对VP2基因主要抗原表位进行序列分析,设计并合成一对特异性引物,预计条带扩增大小为710 bp,与载体pEASY-Blunt Zero连接后,通过PCR、双酶切及序列测定,将鉴定正确的重组阳性质粒与原核表达载体PMAL-p5x连接,进而构建PMAL-p5x-VP2b原核表达质粒,通过SDS-PAGE显示其分子量大小为23 kDa;Western blot结果表明,该蛋白可以与AMD阳性血清特异性的结合;对表达的蛋白进行渗透休克法快速分离纯化,1 L的培养物最终可以得到120 mg的重组蛋白;利用Bac-to-bac表达系统对AMDV-G株的VP2全基因进行真核表达,将VP2基因与转移载体pFast BacHT-B连接,并转化到DH10Bac感受态细胞,通过与DH10Bac中的穿梭载体Bacmid发生转座,挑取白斑进行大量培养后提取转座子Bacmid-VP2,通过PCR鉴定后将正确的转座子Bacmid-VP2转染到生长至对数期的sf9细胞中,27℃培养箱培养72 h,收获部分病变的细胞并避光保存,同时对发生病变的细胞进行免疫荧光实验,结果显示,荧光信号强;通过病毒空斑实验对病毒筛选纯化;对表达的蛋白通过镍柱纯化后,1 L的细胞培养液可以获得100 mg的重组蛋白;对传统的AMDV抗原采用超滤管浓缩法进行纯化,其抗原纯度得到提高,将血清稀释至16倍后依旧可以检出,提高了检测的敏感性;利用生物学软件分析,原核表达系统中,PMAL-c4x-VP2a表达的目的蛋白占总蛋白的49.55%,而PMAL-p5x-VP2b表达的蛋白占总蛋白的71.07%;将叁种重组蛋白抗原与AMDV抗原对临床上240个血清样本进行CIEP检测,通过对比,纯化的AMDV抗原其检测敏感性、特异性最好。而重组蛋白中,检出率最高的为真核表达的蛋白,与AMDV抗原相对比,其符合率达91.2%;而原核表达的两种蛋白,短片段表达的蛋白其敏感性及表达量都高于长片段所表达的蛋白,两者之间的符合率为85.3%;而短片段表达的蛋白与AMDV抗原的检出符合率达87.2%。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
纯化抗原论文参考文献
[1].胡涛,金郁,汪学龙,李群.水疱性口炎病毒纯化抗原制备多克隆抗体的检测结果分析[J].热带病与寄生虫学.2019
[2].于凯.水貂阿留申病毒VP2重组蛋白与天然纯化抗原对比分析[D].吉林农业大学.2017
[3].崔小兰.鸡新城疫活疫苗（LaSota株）浓缩法纯化抗原生产工艺的建立[D].华南农业大学.2016
[4].唐浩,张飞伟,刘晓凤,胡慧琼,杨国友.无细胞百日咳纯化抗原中TritonX-100残留量检测方法的建立及验证[J].中国生物制品学杂志.2016
[5].丁献红.禽流感病毒抗原纯化方法的建立及纯化抗原对鸡体免疫效果研究[D].河南农业大学.2009
[6].马辉.结核杆菌嵌合蛋白Ag856A2的原核表达、纯化、抗原性分析及其单克隆抗体的制备[D].苏州大学.2008
[7].杨子江.一种新型的腮腺炎纯化抗原实验型疫苗的研究[D].昆明医学院.2007
[8].张国强,李晓谦,赵铠.S79株腮腺炎病毒制备纯化抗原用于诊断试剂的研究[J].微生物学免疫学进展.2007
[9].闫成兰,李小峰,胡学芳,国华,吕志清.RA33/36纯化抗原检测抗体在类风湿关节炎的应用[J].中国药物与临床.2006
[10].安黎云,白云,李玮.应用纯化抗原检测唾液尿液和血清抗幽门螺杆菌抗体的比较[J].河北医药.2005