导读:本文包含了抗原制备论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:B族黄曲霉毒素,抗原合成设计,多克隆抗体,特性分析
抗原制备论文文献综述
张海棠,王晓斐,职爱民,王亚楠,王自良[1]（2019）在《B族黄曲霉毒素抗原合成设计及特异性、广谱性抗体制备与特性分析》一文中研究指出为制备B族黄曲霉毒素(BGAFs)特异性强、广谱性好的抗体,本研究根据黄曲霉毒素B_1(AFB_1)的分子结构和活性位点,采用肟化活泼酯法(OAE)、氨甲基化法(MOA)、混合酸酐法(MA)、半缩醛法(SA)、环氧化物法(EP)和烯醇醚衍生物法(EED)6种方法合成BGAFs人工抗原AFB_1-BSA,并通过UV和SDS-PAGE进行鉴定;采用AFB_1-BSA免疫新西兰白兔制备多克隆抗体(AFB_1 pAb),间接ELISA检测AFB_1 pAb效价,间接竞争ELISA(icELISA)分析其敏感性,交叉反应试验(CR)分析其特异性和广谱性。结果表明,AFB_1-BSA合成成功,在BGAFs抗原合成的6种方法中OAE效果最好,AFB_1与BSA的分子结合比为8.46∶1;AFB_1 pAb的间接ELISA效价为1∶(1.28×10~4),IC_(50)为10.32μg·L~(-1),与AFB_2、AFG_1、AFG_2、AFM_1、AFM_2的CR分别为75.21%、44.13%、14.72%、16.36%、1.44%。本研究制备出了高效价、敏感、特异、广谱的AFB_1 pAb,为BGAFs免疫检测方法的建立奠定了物质和技术基础。(本文来源于《核农学报》期刊2019年12期）
宋炎博,赵贵山,汝晓飞,侯珂,林梦舟[2]（2019）在《吲哚美辛人工抗原及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出为了建立吲哚美辛(indomethacin,IDM)残留的免疫学检测方法,采用碳二亚胺法将载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)分别与IDM偶联,人工合成免疫原(IDM-BSA)和包被原(IDM-OVA)。通过紫外分光光度法、SDS-PAGE、ELISA等方法鉴定人工抗原的合成效果;将IDM-BSA免疫小鼠,利用iELISA和icELISA来测定抗体血清效价。结果显示:IDM能与BSA和OVA成功偶联,通过免疫小鼠获得高效价的多克隆抗体,效价可达1∶6.4×10~4,半数抑制率为27.23 ng/mL。本研究结果为建立动物源性食品中IDM残留的免疫学检测方法奠定基础。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年10期）
黄雪冰,杨培洁,邓汝森,杨博,刘文俊[3]（2019）在《诺如病毒P-partical-GnIH抗原制备及抗原性初步检测》一文中研究指出为探索调控家鹅繁殖性能的技术,本研究通过设计合成鹅促性腺激素抑制激素(gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH)序列片段,酶切后连接到诺如病毒(Nov)P基因重组pEGX-4T-1载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取阳性菌重组质粒,并通过测序和酶切进行验证。将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,利用IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE及Western blotting检测重组蛋白表达。进一步在不同IPTG浓度及诱导时间条件下进行原核表达,确定最佳诱导条件,在最佳条件下的诱导菌液经过离心收集菌体,并超声波破碎离心后对重组蛋白可溶性进行分析。利用xTractor Buffer和Glutathione Superflow树脂对重组蛋白进行纯化,并使用自制的抗GnIH鹅血清及抗鹅二抗通过Western blotting检测重组蛋白。结果显示,重组质粒Nov P-partical-GnIH经双酶切鉴定获得大小约为96 bp的目的基因条带,进一步测序结果证明重组质粒构建成功。诱导表达的重组蛋白分子质量约为64 ku,与预期大小一致,且在37℃、1.0 mmol/L IPTG、诱导2 h条件下表达量最高;菌体超声破碎后经SDS-PAGE检测,重组蛋白主要表达在沉淀中。重组蛋白与GST单抗及抗GnIH阳性血清均能反应,表明此重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。本研究通过对Nov P-partical-GnIH蛋白原核表达及纯化成功获得了大量纯度较高的重组蛋白,将有助于进一步建立家鹅的繁殖性能免疫调控方法,为提高繁殖性能及调控繁殖机制的研究奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年09期）
王蕾,霍景瑞,张国安,贾力,田毅[4]（2019）在《基于纳米抗体CDR3区抗原表位展示的β-HCG抗体制备及鉴定》一文中研究指出目的通过纳米抗体CDR3区展示β-HCG C端表位的方式,验证纳米抗体在抗原表位展示中的作用。方法采用基因合成的方法,将β-HCG C端表位(氨基序列151～165)插入到纳米抗体CDR3区,酶切、连接原核表达载体pET24a,IPTG诱导表达。将His标签填料纯化得到的高纯度目的蛋白免疫新西兰大耳白兔,经5次免疫后,间接ELISA检测效价,抗原偶联纯化介质进行免疫多抗纯化,Western blot进行多抗特异性检测。结果成功构建原核表达重组载体,并获得高表达菌株,IPTG诱导后,目的蛋白主要以包涵体的形式存在,亲和层析获得纯度大于98%的目的蛋白,包涵体经复性后免疫,效价可达1∶512 000,Western blot特异性检测显示免疫多抗能够特异性结合β-HCG。结论纳米抗体CDR3区β-HCG抗原C端表位展示的方法,可用于抗β-HCG抗体的制备,并为今后纳米抗体表位展示相关研究奠定基础。(本文来源于《天津医药》期刊2019年08期）
司艳芳,岳锋,李鹏,郭东光,朱艳平[5]（2019）在《西马特罗完全抗原的合成和多克隆抗体的制备》一文中研究指出西马特罗(Cimaterol,CIM)也叫做喜马特洛,塞曼特罗。属于β-受体激动剂的一种,临床上可以治疗支气管炎等疾病,但过量服用会引起人体中毒。西马特罗属于苯胺型β-受体激动剂中的一种。极性中等,k Pa值在9.5左右,多为白色晶体结构[1]。通常能溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇等溶剂。不同的PH值也会影响其溶解状态。目前国内外一些无良养殖场将其添加在猪饲料中,以增加猪肉蛋白质量,减少脂肪量。研究目的:鉴于免疫学检测技术的特点,ELISA现在被作为初步筛选一些药物残留的检测方法。利用ELISA检测时,抗体质量的好坏与否对检测结果至关重要,然而得到特异性高的抗体又取决于高质量的免疫原。针对我国的食品安全问题,迫切的需要一种快捷简便的药残检测体系,为食品检测体系的健全提供支持。材料方法:影响人工抗原免疫原性的主要因素包括载体蛋白的性质、半抗原的分子空间结构、间隔臂的长度和分子结合比等[2]。对于带有氨基的半抗原与载体蛋白的偶联一般采用重氮化法、戊二醛和EDC法,有研究证实,重氮化法适用于芳香胺而GA法适合于脂肪胺的报道[3]。本研究根据CIM的结构综合各种方法的利弊之后采用重氮化法进行完全抗原的合成。用UV、SDS-PAGE、MALDI-TOF-MS叁种方法同时鉴定。用偶联成功的西马特罗-牛血清白蛋白(CIM-BSA)完全抗原,抗原50ug/只,与佐剂等体积乳化至"油包水"的状态,然后通过采用背部皮下多点注射的方法注射入兔子体内。先后进行叁次免疫,每次免疫间隔14-16天。在第叁次免疫后的第10天左右进行耳缘静脉采血。采用ELISA的方法对兔子血清效价进行检测。用包被液稀释偶联成功的西马特罗-鸡卵清白蛋白(CIM-OVA)至5ug/ml,加入至相应的酶标板,100ul/孔,4度包被过夜,次日用PBST洗板叁次并排干,用5%脱脂奶粉封闭2h以上。相同的方法洗板,排干后将取得的血清倍比稀释加入对应的孔,37℃条件下静置孵育0.5h后相同的方法洗板,排干后加入1:5000的羊抗兔-Ig G(HRP),最后加入TMB显色液,每孔100ul,用2MH2So4溶液终止显色反应,放在酶标仪中读数,以OD450约为1.00对应孔的血清的最大稀释倍数作为判断多抗血清效价的依据。结果:成功合成了完全抗原并采用叁种方法验证,免疫动物后获得了效价为1:204800的血清。说明此次成功的制备了完全抗原并达到了良好的免疫效果。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
曹金博,胡骁飞,王耀,李燕虹,曹夕丹[6]（2019）在《土霉素完全抗原的制备及ELISA检测方法的建立》一文中研究指出为制备土霉素(Oxytetracycline,OTC)完全抗原,获得免疫学特性良好的土霉素鼠源多抗血清并建立OTC免疫学检测方法,采用重氮化法在OTC分子上引入羧基,进而利用改进碳二亚胺法将其与载体蛋白偶联制备完全抗原,通过红外扫描、紫外扫描和凝胶电泳鉴定其偶联效果,然后将完全抗原免疫BLAB/c小鼠获得多抗血清(pAb)并对其免疫学特性进行鉴定,通过优化条件建立OTC间接竞争ELISA检测方法。结果表明,偶联效果良好,免疫的4只小鼠多抗血清效价均达到1∶12 800;4只小鼠多抗血清均有抑制效果,其中2号小鼠产生的多抗血清效果最佳,基于该多抗血清建立的OTC间接竞争ELISA检测方法半数抑制浓度(IC_(50))为32.92ng/mL,检测限(LOD)为1.3ng/mL,牛奶样品中添加回收率在84.70%～87.45%,与金霉素、四环素的交叉反应率分别为5.27%,4.10%,与其他竞争物交叉反应率<0.4%。该试验成功合成了OTC完全抗原,获得了免疫学特性良好的OTC多抗血清,并建立了OTC免疫学检测方法。(本文来源于《食品与机械》期刊2019年09期）
郭彦,陈月红,何雷,李沛,李江凡[7]（2019）在《表达鼠疫菌F1抗原的重组芽孢的制备及口服免疫效果观察》一文中研究指出目的利用枯草杆菌芽孢展示外源蛋白的呈递技术,研究表面展示鼠疫菌保守抗原F1蛋白的重组芽孢,分析评价重组芽孢的免疫原性。方法将枯草杆菌CotB基因构建到pDG1664质粒,再将鼠疫菌保守序列F1蛋白编码基因连接到CotB基因的下游,构建成重组质粒。然后将外源基因CotB-F1同源重组整合到PY-79枯草杆菌基因组中。经PCR、Western Blot方法鉴定重组芽孢中鼠疫F1蛋白的表达。用上述重组芽孢以无佐剂口服方式免疫小鼠。采用ELISA方法检测重组芽孢免疫小鼠的免疫效果。结果本研究制备出表面表达CotB-F1融合蛋白的重组枯草杆菌芽孢。用重组芽孢和野生型芽孢口服免疫BALB/c小鼠。实验结果表明,重组芽孢免疫组产生了针对鼠疫F1抗原的特异性抗体。重组芽孢免疫小鼠能产生有效的免疫应答。结论本研究制备出表面展示鼠疫F1蛋白的枯草杆菌芽孢,建立了枯草杆菌芽孢呈递技术方法,为发展口服鼠疫疫苗奠定了基础。(本文来源于《中国人兽共患病学报》期刊2019年09期）
卢井才,宋月爽,刘大维,闫慧,孙世洋[8]（2019）在《戊型肝炎病毒ORF2抗原的制备及其免疫原性评价》一文中研究指出目的制备戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)ORF2抗原,并对其免疫原性进行分析。方法通过基因合成获得HEV ORF2目的基因,构建重组杆状病毒,并在sf9昆虫细胞中优化表达;采用超声、硫酸铵沉淀及层析纯化HEV ORF2蛋白,免疫小鼠分析其免疫原性。结果制备的重组杆状病毒滴度为1×108 PFU/m L;重组蛋白表达条件MOI为1,收获时间为5 d时,表达量最高为20 mg/L;通过纯化获得HEV ORF2蛋白纯度> 95%;其疫苗组血清特异性抗体效价与PBS对照组比较差异有统计学意义(P <0. 05)。结论成功表达并纯化了HEV ORF2蛋白,该纯化方法可获得纯度较高的目的蛋白,且制备的HEV ORF2蛋白具有很好的免疫原性,可用于制备和开发预防性疫苗。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年06期）
吴秀萍[9]（2019）在《双峰驼IgA特异性抗原表位筛选与抗体制备》一文中研究指出黏膜免疫在维持机体局部免疫稳态中发挥关键作用,其中免疫球蛋白A(Immunoglobulin A,IgA)是黏膜免疫应答的主效应分子。本文拟通过分子生物学、免疫组织化学、统计学等方法制备高效特异的抗双峰驼IgA抗体,旨在为深入探讨双峰驼IgA在机体中的相关免疫学功能提供依据与材料支持,进而为揭示双峰驼黏膜免疫机制奠定基础。本文首先对双峰驼IgA的生物信息进行了分析。通过DNAMAN、BepiPred 2.0等软件对双峰驼IgA重链恒定区(IgA-H)进行一级结构的差异性分析、B细胞抗原表位预测,结合筛选出一段具有代表性的基因序列(F-IgA-H),并使用ProtParam对IgA-H和F-IgA-H的理化性质进行分析。之后分别构建了二者的原核表达质粒pET-28a-IgA-H和pET-28a-F-IgA-H,诱导其在BL21中表达,并优化培养条件,SDS-PAGE和Western Blot验证其表达结果。之后再用纯化的重组蛋白分别制备兔抗双峰驼IgA-H多克隆抗体(PAb-H)与兔抗双峰驼F-IgA-H多克隆抗体(PAb-F),ELISA和Western Blot检测抗体效价和特异性。最后以SABC免疫组化方法验证生物信息学筛选结果,image-Pro Plus计算3种抗体(PAb-H、PAb-F、本实验室保存兔抗双峰驼IgA多克隆抗体(PAb-N))在各年龄组双峰驼腭扁桃体中IgA~+细胞密度,并使用SPSS21.0单因素方差分析其差异性。结果表明:(1)通过生物信息学分析筛选出典型的双峰驼IgA片段F-IgA-H。(2)本研究分别成功构建了含有IgA-H与F-IgA-H基因的原核表达质粒,并获得重组蛋白。重组蛋白IgA-H主要以包涵体形式表达,大小约为39 KD,最佳诱导表达条件为IPTG 0.1 mmol/L、诱导时间6 h;重组蛋白F-IgA-H在上清中表达,大小约为20 KD,最佳诱导表达条件为IPTG 0.15 mmol/L、诱导时间4 h。(3)ELISA结果显示,PAb-F的效价(1:64000)高于PAb-H(1:32000),Western Blot证实制备的两种多抗都能特异性识别重组蛋白。(4)SABC结果显示,PAb-F的工作浓度(1:900)高于PAb-H(1:400);各年龄组的左、右腭扁桃体的IgA~+细胞密度差异不显着(P>0.05);幼年组腭扁桃体的IgA~+细胞分布密度显示,PAb-F与PAb-H差异显着(P<0.05),与PAb-N差异不显着(P>0.05);青年组腭扁桃体的IgA~+细胞分布密度显示,PAb-F、PAb-H、PAb-N叁者之间差异显着(P<0.05);壮年组腭扁桃体的IgA~+细胞分布密度显示,PAb-F与PAb-H、PAb-N差异显着(P<0.05)。通过生物信息学对双峰驼IgA特异性抗原表位的分析而筛选出的片段F-IgA-H制备的PAb-F,其效价和免疫组化工作浓度都高于PAb-H与PAb-N,免疫组化验证差异性分析也显示PAb-F更为高效特异,与生物信息学分析筛选结果一致,可以为揭示双峰驼黏膜免疫机制奠定基础。(本文来源于《甘肃农业大学》期刊2019-06-10）
李海生[10]（2019）在《超滤系统制备鸡传染性支气管炎病毒HI抗原及其初步应用》一文中研究指出鸡传染性支气管炎病毒(IBV)血凝抑制(HI)试验具有简便、快速的特点,适用于鸡传染性支气管炎(IB)的快速诊断。目前,我国尚无质量可靠的商品化IBV HI抗原,只能从国外购买价格昂贵的进口抗原。据多项研究表明可以将IBV浓缩后,用PLCI处理得到血凝抗原(HA),浓缩方法多以差速离心法为主,但是超速离心机价格昂贵,不利于大众化生产。本研究拟通过IBV超滤系统和差速离心法制备HI抗原,并筛选合适的PLCI或魏氏梭菌浓度来处理抗原,以期得到合适的制备方法,使其可以在普通实验室制备,为更广泛地应用于临床打下基础。首先通过比较100kd、300kd孔径超滤管浓缩抗原,用PLCI或魏氏梭菌进行血凝处理,并与差速离心法制备的IBV HI抗原和荷兰GD抗原比较,以选出最适的IBV HI处理方法,并将其冻干保存;再通过超滤系统制备中试IBV HI抗原,与荷兰GD抗原比较,分析其特异性、灵敏性和符合率;最后通过超滤系统制备IBV HI抗原,与IDEXX-IBV试剂盒进行同批临床血清样品检测,并比较符合率。结果显示,IBV经100kd、300kd浓缩抗原和差速法浓缩抗原,加入1mL/mL PLCI+魏氏梭菌混合液、3U/mL PLCI处理的抗原,其HA效价均为1:512;经1‰甲醛灭活,冻干后保存,保存期4℃为8个月,-20℃为12个月;中试3批经100kd膜包浓缩和1批经300kd中空纤维柱浓缩100倍的IBV,经血凝性处理,灵敏性、特异性与荷兰GD公司生产的商品抗原无差异,其符合率为96%;其与IDEXX-IBV试剂盒进行同批临床血清样品检测,符合率达95.3%。综上可见,超滤系统浓缩制备HI抗原方法简单、灵敏性高、特异性强,与荷兰GD抗原和IDEXX-IBV试剂盒检测结果符合率高,适合鸡场监测和IB疫苗免疫效果检测。(本文来源于《北京农学院》期刊2019-06-01）
抗原制备论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了建立吲哚美辛(indomethacin,IDM)残留的免疫学检测方法,采用碳二亚胺法将载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)分别与IDM偶联,人工合成免疫原(IDM-BSA)和包被原(IDM-OVA)。通过紫外分光光度法、SDS-PAGE、ELISA等方法鉴定人工抗原的合成效果;将IDM-BSA免疫小鼠,利用iELISA和icELISA来测定抗体血清效价。结果显示:IDM能与BSA和OVA成功偶联,通过免疫小鼠获得高效价的多克隆抗体,效价可达1∶6.4×10~4,半数抑制率为27.23 ng/mL。本研究结果为建立动物源性食品中IDM残留的免疫学检测方法奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗原制备论文参考文献
[1].张海棠,王晓斐,职爱民,王亚楠,王自良.B族黄曲霉毒素抗原合成设计及特异性、广谱性抗体制备与特性分析[J].核农学报.2019
[2].宋炎博,赵贵山,汝晓飞,侯珂,林梦舟.吲哚美辛人工抗原及其多克隆抗体的制备[J].畜牧与兽医.2019
[3].黄雪冰,杨培洁,邓汝森,杨博,刘文俊.诺如病毒P-partical-GnIH抗原制备及抗原性初步检测[J].中国畜牧兽医.2019
[4].王蕾,霍景瑞,张国安,贾力,田毅.基于纳米抗体CDR3区抗原表位展示的β-HCG抗体制备及鉴定[J].天津医药.2019
[5].司艳芳,岳锋,李鹏,郭东光,朱艳平.西马特罗完全抗原的合成和多克隆抗体的制备[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集.2019
[6].曹金博,胡骁飞,王耀,李燕虹,曹夕丹.土霉素完全抗原的制备及ELISA检测方法的建立[J].食品与机械.2019
[7].郭彦,陈月红,何雷,李沛,李江凡.表达鼠疫菌F1抗原的重组芽孢的制备及口服免疫效果观察[J].中国人兽共患病学报.2019
[8].卢井才,宋月爽,刘大维,闫慧,孙世洋.戊型肝炎病毒ORF2抗原的制备及其免疫原性评价[J].中国生物制品学杂志.2019
[9].吴秀萍.双峰驼IgA特异性抗原表位筛选与抗体制备[D].甘肃农业大学.2019
[10].李海生.超滤系统制备鸡传染性支气管炎病毒HI抗原及其初步应用[D].北京农学院.2019