导读:本文包含了大鼠胚胎干细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:miR-592,Cep135,胚胎干细胞,自我更新
大鼠胚胎干细胞论文文献综述
白振东,李培昕,张宁彦,程健,张敬[1]（2019）在《miR-592靶向Cep135调控小鼠胚胎干细胞自我更新及分化》一文中研究指出目的探讨miR-592在小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,m ESCs)自我更新及分化过程中的作用。方法通过转染试剂将miR-592表达质粒转入m ESCs,以过表达miR-592。利用qRT-PCR及Western印迹法分析miR-592对m ESCs分化的影响。利用Target Scan数据库预测miR-592作用的靶基因,并通过双荧光素酶报告实验验证靶基因。利用Western印迹法探究miR-592及其靶基因对m ESCs自我更新的影响。结果 qRT-PCR及Western印迹法实验结果表明miR-592促进mESCs向外胚层方向分化。生物信息学分析及双荧光素酶报告实验的结果表明Cep135是miR-592作用的靶基因,而Western印迹法实验发现Cep135能够促进m ESCs的自我更新。结论 miR-592通过靶向下调Cep135的表达,以抑制m ESCs的自我更新,进而促使m ESCs向外胚层方向分化。(本文来源于《同济大学学报(医学版)》期刊2019年05期）
刘高科,何建荣,阮艳,张俊磊,王嘉丽[2]（2019）在《Dax1剪接体在小鼠胚胎干细胞多能性维持中的作用研究》一文中研究指出可变剪接体是真核细胞调节基因表达和产生蛋白质组多样性的重要方式。孤核受体Dax1是维持小鼠胚胎干细胞(mESC)自我更新和多能性稳态的关键转录抑制因子。但是,mESC中Dax1的剪接体的表达形式和功能均不清楚。我们利用cDNA末端快速扩增法,以mESC及其分化细胞中的cDNA为模板,对Dax1剪接体的表达谱进行分析,发现Dax1在mESC中存在至少6个可以正常编(本文来源于《中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编》期刊2019-08-18）
王雪樾,王加琪,张俊磊,王嘉丽,田衍平[3]（2019）在《YAP剪接体在小鼠胚胎干细胞中的发现及作用研究》一文中研究指出YAP/Hippo信号通路在细胞凋亡、器官形成及发育等重要细胞生物学过程中发挥着重要的作用。目前发现YAP在人体细胞中存在着不同剪接方式,但在小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)中是否存在剪接体尚不明确。本研究首先通过Race实验,发现自我更新状态下的mESC中YAP存在2种剪接体(YAP1,YAP2);进一步利用Crispr-Cas9基因编辑技术敲除(本文来源于《中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编》期刊2019-08-18）
丁玲,苏敏[4]（2019）在《PAX6过表达对小鼠胚胎干细胞(mESCs)向角膜缘干细胞(LSCs)样细胞的诱导分化研究》一文中研究指出角膜的损伤常常会伴随着LSCs的缺乏,目前LSCs的获得多来源于原代组织培养,往往因供体的匮乏导致研究和应用两方面都受到了限制。研究表明PAX6基因在眼球形态发生中发挥重要的调节作用,参与了LSCs的形成。因此,本研究拟通过将PAX6基因转入mESCs后结合微环境诱导法将其向LSCs方向分化,以期为细胞移植治疗角膜疾病提供充足的(本文来源于《中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编》期刊2019-08-18）
丁玲,高杰,李红,胡蓉,苏敏[5]（2019）在《配对盒基因6/小鼠胚胎干细胞细胞系的建立及干细胞生物学特性分析》一文中研究指出目的建立配对盒基因6(Pax6)/小鼠胚胎干细胞(m ESCs)细胞系并鉴定其干细胞生物学特性。方法体外培养m ESCs,将重组载体p EF1α-Pax6-IRES-AcGFP和空载体p EF1α-IRES-AcGFP分别用脂质体法转染m ESCs,经G418梯度及荧光蛋白双筛选后,使用细胞免疫荧光染色、免疫印迹法及RT-PCR技术检测Pax6的表达情况,流式细胞术检测Pax6/m ESCs阳性细胞的比例。将获得正确的细胞系分别采用细胞免疫荧光染色对其干细胞标志物阶段特异性胚胎抗原1(SSEA1)、八聚体结合转录因子4(OCT4)进行检测,碱性磷酸酶(AP)染色法对其多能性进行检测,流式细胞术检测增殖指数Ki67。将Pax6/m ESCs进行肾背囊下移植,移植物行HE染色观察其分化能力。结果 Pax6成功在m ESCs内表达,经G418筛选后,获得Pax6/m ESCs细胞系,流式结果显示,Pax6阳性率为90%,免疫荧光显示,干细胞标志物SSEA1、OCT4表达阳性且AP染色阳性,并且在体内移植后能向3个胚层分化。结论 Pax6成功在m ESCs内表达,经G418筛选后,获得细胞系Pax6/m ESCs并维持良好的干细胞特性。(本文来源于《解剖学报》期刊2019年04期）
张鹏,杨红兰,刘含,周艳华,杨燕[6]（2019）在《甲基结合蛋白1对小鼠胚胎干细胞增殖及克隆形态的影响》一文中研究指出目的:研究甲基结合蛋白1(Mbd1)对小鼠胚胎干细胞克隆形态及增殖的影响。方法:设计针对Mbd1转录起始位点的gRNA,将表达有gRNA和Cas9蛋白的质粒使用脂质体转染方法转入小鼠胚胎干细胞(J1);使用抗生素将未转染成功的细胞杀死后,细胞继续培养7 d,挑取单克隆细胞,采用PCR法筛选敲除Mbd1的纯合子细胞,观察Mbd1缺失对小鼠胚胎干细胞克隆形态的影响;使用细胞计数法检验Mbd1对胚胎干细胞增殖的影响。结果:通过Cripsr/Cas9成功获得敲除Mbd1的胚胎干细胞,Mbd1缺失后的小鼠胚胎干细胞丧失了常规小鼠胚胎干细胞的3D克隆形态,细胞呈现单层扁平克隆;Mbd1缺失后小鼠胚胎干细胞增殖速率变慢。结论:Mbd1通过影响小鼠胚胎干细胞克隆形态和增殖而影响胚胎干细胞的多能性。(本文来源于《贵州医科大学学报》期刊2019年06期）
孟庆丽[7]（2019）在《Activin A和BMP4单独添加对小鼠胚胎干细胞多能性的影响》一文中研究指出自从1981年首次由小鼠囊胚建立胚胎干细胞系(Embryonic Stem Cells,ESCs)以来,人们不断的探索其体外培养条件,试图用化学成分明确的培养基来替代原始的饲养层上皮细胞和胎牛血清的培养基。经过近30年的努力,研究者发现Mek1/2和GSK3b通路的抑制剂(PD和CH:2i)和白血病抑制因子(LIF)的共同使用,可以成功获得一种化学成分明确的培养基(2i/LIF)使小鼠ESCs维持类似囊胚内细胞团(Inner Cell Mess,ICM)的na?ve多能性状态。然而在2017年《Nature》发表的两篇论文指出,用2i/LIF长期培养小鼠ESCs会使它产生不可逆的表观遗传改变和基因组不稳定性,主要原因是Mek1/2的抑制剂PD对小鼠ESCs的多能性发育有阻滞作用。本实验首先将2i/LIF培养液中的PD分别替换为Activin A和BMP4,对2i/LIF-ESCs进行体外培养,诱导得到的细胞系依次命名为ACL-ESCs和BCL-ESCs。其次,研究ACL-ESCs和BCL-ESC的干细胞特征,基因表达模式和体内发育潜能等,具体实验结果如下:(1)在形态学特征上ACL-ESCs和BCL-ESCs与2i/LIF-ESCs细胞形态基本相同;由△PE-Oct4激活表达的绿色荧光蛋白(GOF/GFP)一直存在,说明在ACL-ESCs和BCL-ESCs培养体系中,Oct4远端启动子依然处于被激活的状态;碱性磷酸酶染色结果显示ACL-ESCs和BCL-ESCs均呈较强碱性磷酸酶活性。但是ACL-ESCs和BCL-ESCs的细胞增殖速度与2i/LIF-ESCs存在一定差异。(2)在ACL-ESCs和BCL-ESCs中Oct4、Sox2和Klf4等多能性相关基因的表达均与2i/LIF-ESCs无显着差异;而与2i/LIF-ESCs相比,BCL-ESCs细胞的DNA甲基化相关基因Dnmt3b和Dnmt3l和中胚层相关基因Hand1,Evx1,Eomes和T的表达量均显着提高。更值得注意的是Myc的表达量与对照组细胞相比较,诱导后得到的两种细胞系中均显着上调。(3)从RNA测序结果可以看出,在2i/LIF-ESCs中高表达的基因与骨骼系统发育、脊椎动物胚胎发育和感觉器官发育等相关;在ACL-ESCs中高表达的基因与有机羟基化合物代谢过程,无机分子实体跨膜转运蛋白活性及无机离子稳态调控等代谢过程相关;在BCL-ESCs中高表达的基因主要与组织形态发生,生殖结构发育以及胚胎形态发生等有关。说明ACL-ESCs和BCL-ESCs具有独特的基因表达模式。(4)体内发育潜能检测结果显示,在受精后第10天(E10.5)的小鼠嵌合胚胎中ACL-ESCs和BCL-ESCs单个细胞均可贡献到胚胎及部分胚外组织中;而2i/LIF-ESCs不能贡献到胚胎外组织。表明本实验获得的两种细胞系的体内发育潜能比对照组更高。综上所述,本实验结果表明,用Activin A或BMP4替代2i/LIF培养液中的PD可使小鼠ESCs维持干细胞特征,并分别具有独特的基因表达模式,对小鼠ESCs的多能性具有一定的扩展潜能。我们推测这个培养系统对研究早期胚胎发育和小鼠胚胎干细胞的研究提供了新的途径。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2019-06-05）
杨志青[8]（2019）在《Activin A和BMP4对小鼠胚胎干细胞发育潜能的影响》一文中研究指出自从上世纪八十年代初,研究人员利用含有饲养层细胞和血清的培养体系,由小鼠受精后3.5天囊胚(E3.5)的内细胞团获得胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)后,在接下来的近四十年中,已经有多种能够维持自我更新并且表达不同表观遗传特征与转录组图谱的mESCs被陆续发现。本文利用本实验室化学成分明确的ABC/L培养体系(Activin A、BMP4、CHIR99021和mLif)对2i/Lif(2i:PD0325901和CHIR99021,Lif:mLif)培养体系来源的mESCs进行诱导,即用Activin A和BMP4替代PD0325901,得到了ABC/L-ESCs,对其进行进一步的分析与鉴定,探讨其多能性、转录组特征及发育潜能等。具体实验结果如下:1.克隆形态与碱性磷酸酶染色结果显示,ABC/L-ESCs与2i/L-ESCs在形态上并无明显差异,都呈叁维穹顶式圆锥形克隆,且碱性磷酸酶染色结果也无差异,都呈阳性。2.核型分析结果显示,ABC/L-ESCs染色体数目正常的比例显着高于2i/L-ESCs。3.免疫荧光染色结果显示:ABC/L-ESCs与2i/L-ESCs都表达Oct4、Sox2及Nanog等多能干细胞特异性蛋白,且并无明显差异。4.RNA-seq分析结果显示:ABC/L-ESCs与2i/L-ESCs相比有989个差异表达基因,其中有362个基因表达上调,这些基因与培养在血清(serum)与Lif中的ESCs,即S/L-ESCs相似,上调基因主要与MAPK信号串联、发育、SMAD蛋白信号转导、DNA结合位点的调控以及与配子发生相关的DNA甲基化有关;同时,结果也表明ABC/L-ESCs的生物学特性接近于体内胚胎E4.5-E5.5之间。5.甲基化结果显示,ABC/L-ESCs甲基化水平显着高于2i/L-ESCs,接近于S/L-ESCs。同时对甲基转移酶基因Dnmt3a,Dnmt3b以及相关辅因子Dnmt3l的mRNA表达量进行检测,以探讨ABC/L-ESCs的高甲基化水平的机理,结果显示这叁个基因在ABC/L-ESCs中的表达量显着高于2i/L-ESCs;此外,与DNA甲基化调控相关基因Prdm14和Nanog在ABC/L-ESCs中的表达显着低于2i/L-ESCs。6.嵌合体实验结果显示,单个ABC/L-ESCs或2i/L-ESCs注入到小鼠8细胞胚胎中时,其嵌合能力明显高于S/L-ESCs。收集E10.5嵌合胚胎后发现,对照组2i/L-ESCs只能贡献到胎儿部分,并不能贡献到胚外组织;而单个S/L-ESCs细胞不能贡献嵌合体发育,只有注入15-20个细胞时,其嵌合发育能力与2i/L-ESCs相似;相比之下,实验组ABC/L-ESCs的嵌合发育能力显着高于两个对照组,即单个细胞即能贡献到胎儿组织,也能贡献到部分胎盘及卵黄囊,并且随着在ABC/L培养体系中培养时间的延长,嵌合体贡献能力也在逐渐增强。收集E12.5的生殖嵴发现,ABC/L-ESCs所携带的GOF/GFP~+细胞可贡献到生殖嵴部分。7.四倍体补偿实验结果显示:ABC/L-ESCs通过四倍体补偿技术可以得到健康成活的小鼠。综上所述,本实验得到了一种可以在化学成分高度明确的培养体系中长期稳定传代的新型胚胎干细胞系ABC/L-ESCs。ABC/L-ESCs不仅有着与2i/L-ESCs相似的形态与自我更新能力,同时有着独特的转录组特征以及较高的DNA甲基化水平,并维持着稳定的基因组特征。在发育潜能上,ABC/L-ESCs有着更高的发育潜能,可以贡献到胎儿,PGCs以及部分胚外组织。关于ABC/L培养体系对ESCs的分子调控机制,我们将在接下来的研究中做进一步探究。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2019-06-05）
田俊良[9]（2019）在《靶向修饰H19/IGF2的CTCF结合位点DNA甲基化对小鼠胚胎干细胞及早期胚胎发育的影响》一文中研究指出基因组印记(Genomic Imprinting)是控制印记基因(imprinted genes)表达的表观遗传调节机制,通过选择性地沉默父本或母本来源的一个等位基因,参与调节哺乳动物生长和发育,并与家族遗传病有关。人的印记基因H19和Igf2连锁位于染色体11p15.5区,由一套增强子调节基因表达,受H19/Igf2基因间的差异甲基化区域DMR(Differentially Methylated Region)控制,DMR区域的甲基化影响CTCF(CCCTC-binding factor)的结合控制H19和Igf2差异性表达,但目前对CTCF结合区域DNA甲基化的调节还有待认识。本研究利用CRISPR/dCas9介导的DNMT3A或TET特异修饰CTCF结合位点DNA甲基化状态,研究其对印记基因的表达、胚胎干细胞的细胞全能性和早期胚胎发育的影响。本研究首先利用CRISPR/dCas9技术,针对H19/Igf2的CTCF的四个结合位点,设计了8种gRNA,构建pgRNA-humanized-Igf2载体,同时与CRISPR/dCas9-Dnmt3a和CRISPR/dCas9-Tet载体组合共转染小鼠胎儿成纤维细胞(MEFs)后,显示针对CTCF第叁个位点的gRNA对Igf2的表达的影响最明显。亚硫酸氢盐测序结果表明,该gRNA引导的CRISPR/dCas9-Dnmt3a可提高靶位点甲基化,提高MEFs中Igf2的表达,CCK8检测显示MEFs细胞的增殖速度加快,细胞周期检测显示MEFs细胞周期缩短;该gRNA引导的CRISPR/dCas9-Tet可降低靶位点甲基化,降低MEFs中Igf2的表达,MEFs细胞增殖速度减慢,细胞周期延长。本研究还检测了以上两种修饰载体共转后对检测对Igf2相关基因的影响,结果表明,Igf1r、Irs1、Akt1、Mapk1基因的表达与Igf2的表达正相关。当将该gRNA与CRISPR/dCas9-Dnmt3a共转小鼠胚胎干细胞后,靶位点甲基化程度明显提高,Igf2基因表达升高,细胞多能相关基因Nanog、Oct4的表达无影响。为研究靶向修饰CTCF结合位点甲基化对小鼠早期胚胎发育的影响,对受精卵进行胞浆注射。结果表明,针对第叁个CTCF结合位点的gRNA引导的CRISPR/dCas9-Dnmt3a可显着提高Igf2的表达,小鼠胚胎2细胞和4细胞的发育率提高,小鼠胚胎的发育速度有所加快。注射后,从合子期到囊胚期胚胎,Igf1、Igf2r的表达下降,Igf1r、Akt1、Mapk1、Irs1、Rps6、mTOR的表达升高。综上所述,CRISPR/dCas9方法介导的DNMT3A或TET可以对H19/Igf2基因座CTCF结合位点进行DNA甲基化修饰,并影响Igf2基因的表达,同时影响Igf2相关基因的表达,但对小鼠胚胎干细胞多能型基因的表达无影响;原核注射CRISPR/dCas9-Dnmt3a可显着提高Igf2的表达,并提高胚胎发育率和发育速度。本研究为进一步探讨印记基因的调节机制奠定了基础。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2019-06-01）
纪贤严,高建一,叶开,张磊,曹江素[10]（2019）在《人胚胎干细胞源神经球条件培养液对大鼠施万细胞增殖和迁移的影响》一文中研究指出目的:探讨人胚胎干细胞源神经球条件培养液(human embryonic stem cell-derived neurospheres conditioned medium,h ESCN-CM)对施万细胞增殖和迁移的影响及其潜在的机制。方法:取3～5 d SD大鼠双侧坐骨神经,分离纯化施万细胞,用免疫荧光染色法进行鉴定。分别用0%、50%和100%h ESCN-CM刺激施万细胞,CCK-8实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,实时荧光定量PCR检测Nt3、Vegf、Ngf、Bfgf、Igf-1等mRNA的表达。结果:免疫荧光染色结果显示,施万细胞S100特异性表达可达99%。CCK-8实验显示,与0%h ESCN-CM相比,50%h ESCN-CM刺激后施万细胞增殖明显增强,100%h ESCN-CM刺激后施万细胞增殖明显降低(P均<0. 05)。划痕实验显示,刺激6 h,与0%h ESCN-CM刺激后施万细胞相比,50%和100%h ESCN-CM刺激后施万细胞迁移明显增强(P <0. 05);刺激12 h,50%h ESCN-CM刺激后施万细胞迁移明显增强(P <0. 01),100%h ESCN-CM差异无统计学意义。荧光定量PCR结果显示,与0%h ESCN-CM相比,50%h ESCN-CM刺激后施万细胞Nt3、Vegf、Ngf、Bfgf等mRNA表达明显增加(P <0. 05)。结论:h ESCN-CM可能通过上调Nt3、Vegf、Ngf、Bfgf等mRNA表达促进施万细胞增殖和迁移。(本文来源于《江苏大学学报(医学版)》期刊2019年03期）
大鼠胚胎干细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
可变剪接体是真核细胞调节基因表达和产生蛋白质组多样性的重要方式。孤核受体Dax1是维持小鼠胚胎干细胞(mESC)自我更新和多能性稳态的关键转录抑制因子。但是,mESC中Dax1的剪接体的表达形式和功能均不清楚。我们利用cDNA末端快速扩增法,以mESC及其分化细胞中的cDNA为模板,对Dax1剪接体的表达谱进行分析,发现Dax1在mESC中存在至少6个可以正常编
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
大鼠胚胎干细胞论文参考文献
[1].白振东,李培昕,张宁彦,程健,张敬.miR-592靶向Cep135调控小鼠胚胎干细胞自我更新及分化[J].同济大学学报(医学版).2019
[2].刘高科,何建荣,阮艳,张俊磊,王嘉丽.Dax1剪接体在小鼠胚胎干细胞多能性维持中的作用研究[C].中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编.2019
[3].王雪樾,王加琪,张俊磊,王嘉丽,田衍平.YAP剪接体在小鼠胚胎干细胞中的发现及作用研究[C].中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编.2019
[4].丁玲,苏敏.PAX6过表达对小鼠胚胎干细胞(mESCs)向角膜缘干细胞(LSCs)样细胞的诱导分化研究[C].中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编.2019
[5].丁玲,高杰,李红,胡蓉,苏敏.配对盒基因6/小鼠胚胎干细胞细胞系的建立及干细胞生物学特性分析[J].解剖学报.2019
[6].张鹏,杨红兰,刘含,周艳华,杨燕.甲基结合蛋白1对小鼠胚胎干细胞增殖及克隆形态的影响[J].贵州医科大学学报.2019
[7].孟庆丽.ActivinA和BMP4单独添加对小鼠胚胎干细胞多能性的影响[D].内蒙古大学.2019
[8].杨志青.ActivinA和BMP4对小鼠胚胎干细胞发育潜能的影响[D].内蒙古大学.2019
[9].田俊良.靶向修饰H19/IGF2的CTCF结合位点DNA甲基化对小鼠胚胎干细胞及早期胚胎发育的影响[D].内蒙古大学.2019
[10].纪贤严,高建一,叶开,张磊,曹江素.人胚胎干细胞源神经球条件培养液对大鼠施万细胞增殖和迁移的影响[J].江苏大学学报(医学版).2019