导读:本文包含了过表达转基因烟草论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:番茄SlJA2基因,高温,SA,气孔
过表达转基因烟草论文文献综述
刘中明[1]（2017）在《过表达SlJA2通过水杨酸途径降低转基因烟草的高温抗性》一文中研究指出随着全球变暖日益加剧的影响,高温胁迫已经成为限制植物分布和产量的重要因素。高温胁迫影响植物的一系列生理和生化反应,包括气孔关闭,水分散失,光合作用的抑制,活性氧积累,增加膜脂质过氧化程度,蛋白质降解和酶活性丧失,最终导致严重的细胞损伤,甚至细胞死亡。番茄是喜温蔬菜,但不耐高温,夏秋季局部地区出现的异常高温严重抑制番茄的生长发育,如何缓解高温胁迫已成为当务之急。因此,探讨番茄耐高温机理及其分子机制,具有重要的理论意义和实践价值。NAC转录因子是植物特有的也是最大的转录因子家族之一,在调控植物生长发育及响应逆境胁迫和激素应答中均发挥重要作用。通过生物信息学对番茄基因组进行分析,从番茄中分离得到约102个NAC转录因子,但其中大部分的功能尚未得到研究。本研究从番茄基因组中分离得到了一个NAC转录因子(Sl JA2),并以过表达Sl JA2的转基因烟草为材料,观察了高温胁迫下植株的生长状况,研究了Sl JA2对烟草高温抗性的影响。主要研究结果如下:(1)根据NCBI已知的Sl JA2基因序列(注册号:NM_001247043)利用DNAMAN 6.0设计特异引物,以番茄c DNA为模板,利用PCR反应获得该基因的全长c DNA。Sl JA2基因全长1567bp,开放阅读框1050bp,编码349个氨基酸。(2)在烟草中瞬时表达p1300-Sl JA2-GFP融合蛋白产物,并利用激光共聚焦显微镜进行观察,发现绿色荧光只存在于细胞核中,说明Sl JA2定位于细胞核;利用酵母双杂交系统检测Sl JA2的转录激活活性,发现其C端具有转录激活活性,是转录激活区,说明Sl JA2可能作为转录因子行使功能。(3)通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)对Sl JA2在番茄中的表达模式进行分析,发现该基因表达受4°C、42°C、ABA、SA、PEG和MV等多种胁迫和激素处理的诱导表达;组织特异性表达分析和GUS组织化学分析结果表明Sl JA2基因在叶及茎中表达量最高。(4)构建p BI121-Sl JA2真核表达载体,利用农杆菌介导的叶盘法转化烟草,获得过表达Sl JA2的转基因烟草,利用PCR、q RT-PCR筛选得到转基因烟草,并选取OE-5、OE-7和OE-18叁个转基因株系进行后续实验。(5)室温条件下,野生型烟草与转基因烟草生长状况没有明显差别。高温胁迫后,野生型烟草和转基因烟草的生长都受到抑制,但是转基因植株要比野生型烟草萎蔫的更加严重;转基因烟草具有更低的种子萌发率及鲜重、较高的气孔开度和水分散失率,导致更严重的萎蔫。高温胁迫下转基因烟草水杨酸的含量下降,水杨酸合成基因下调而降解基因上调;转基因烟草脱落酸的含量上调,脱落酸合成相关基因表达量上调。外源施加水杨酸和脱落酸都能延迟和缓解转基因烟草高温胁迫下的萎蔫。(6)高温胁迫后,烟草植株的Pn、Fv/Fm和D1蛋白的水平降低,并且转基因植株降低的幅度要比野生型烟草的大;同时烟草植株叶绿素含量降低,并且转基因烟草的叶绿素含量更低。(7)高温胁迫下,烟草的H_2O_2和O_2~(·-)的含量明显增加,转基因烟草H_2O_2和O2·-的积累高于野生型烟草,烟草植株抗氧化酶如过氧化氢酶(CAT)以及抗坏血酸过氧化物酶(APX)的活性都降低,但是与转基因植株相比,野生型烟草植株维持相对较高的抗氧化酶活性。同时,对抗氧化酶合成相关基因(Nt CAT、Nt APX)的表达量进行检测显示,转基因植物中的抗氧化酶基因的表达量低于野生型植株。高温胁迫下转基因烟草的MDA含量和REL水平明显高于野生型,说明其细胞膜受伤害程度较重;高温胁迫下,转基因烟草中高温响应基因和脯氨酸合成基因等胁迫响应相关基因上调程度明显低于野生型。同时,转基因烟草中脯氨酸、可溶性糖等渗透调节物质含量增加,但增加量明显低于野生型。(本文来源于《山东农业大学》期刊2017-05-10）
王国东,陈朝银,李金晶,普丽梅,关瑞攀[2]（2016）在《漾濞大泡核桃JsWRKY1过表达增强转基因烟草对胶孢炭疽菌的抗性》一文中研究指出为进一步研究JsWRKY1的生物学功能,构建JsWRKY1的植物超表达载体并转入烟草中过表达。再生的JsWRKY1转基因烟草与野生型烟草在表型上无明显差异。JsWRKY1过表达上调了转基因烟草体内几个防卫相关基因MnSOD、Cu/Zn SOD、CN、NADPH oxidase和PR1的转录水平。与野生型烟草相比,JsWRKY1转基因烟草体内的超氧化物歧化酶、过氧化物酶和抗坏血酸过氧化物酶活性在正常生长以及胶孢炭疽菌接种后均显着增强。平板抑菌试验结果显示,JsWRKY1转基因烟草叶片总蛋白对病原真菌葡萄座腔菌、串珠状赤霉菌、胶孢炭疽菌和尖孢镰刀菌的菌丝生长具有不同程度的抑制作用。此外,用胶孢炭疽菌接种烟草叶片,转基因烟草对胶孢炭疽菌的抗性明显增强。显然,JsWRKY1是漾濞大泡核桃中正调控病害防卫反应的转录因子。(本文来源于《华北农学报》期刊2016年03期）
刘宇[3]（2016）在《过表达苹果α-法尼烯合酶基因烟草早衰机制研究》一文中研究指出烟草是一年生或有限多年生草本植物,是重要的经济作物。因其腺体丰富,具有大量的绿色组织,使其成为萜类代谢工程研究的理想模式植物。α-法尼烯是一种挥发性倍半萜烯,α-法尼烯合酶是催化α-法尼烯合成的最终限速酶。到目前为止,对苹果α-法尼烯的研究主要集中在α-法尼烯及其氧化产物-共轭叁烯醇类物质(Conjugated Trienols,CTols)与苹果虎皮病发生的关系。在植物中过表达苹果α-法尼烯合酶基因是否影响其他萜类物质的合成及植物生物学特性的研究相对较少。本研究以过表达苹果α-法尼烯合酶基因烟草的T3代植株为实验材料,通过转录组分析代谢通路和代谢物,解释转基因烟草早衰的原因和机制。主要结果如下:(1)植物萜类的合成与释放具有组织器官特异性。Md AFS基因在转基因烟草的茎中表达量最低,根和叶片次之,花中表达量最高,是茎的3.6倍。GC/MS分析烟草萜类组分发现,在根、茎、叶、花中均未检测到目的产物法尼烯的释放,但施用钾离子处理后,烟草花中检测出法尼烯。(2)机械损伤,茉莉酸甲酯(Me JA),赤霉素(GA),水杨酸(SA),乙烯利(ETH),4°C,42°C,聚乙二醇-6000(PEG-6000)和H2O2处理明显诱导了青香蕉苹果苗Md AFS基因的表达,其中,4°C处理后Md AFS基因的表达一直稳定在较高水平;伤害处理表现出先升高后下降的规律;Me JA,GA,SA,ETH,PEG-6000,H2O2和42°C高温处理表现出某一时间点爆发式上调的特点,42°C处理效果最明显上调大约170倍。在实验条件下青香蕉苹果苗Md AFS基因的表达具有节律性,在照光1h后出现最大表达量。(3)目前,烟草(NC89)还没有可利用的全基因组数据库。利用De nove组装的方法进行烟草叶片和顶芽的转录组分析,共获得了249185条unigenes。叶片差异表达分析发现,抗氧化活性分类有26个下调转录本包括APX和CAT,类胡萝卜素代谢34个下调转录本,质体醌代谢14个下调转录本,抗坏血酸盐代谢10个下调转录本和氮代谢62个下调转录本。(4)与野生型相比,转基因植株有较多的活性氧积累,转基因植株抗氧化防御系统下降,表现为抗氧化酶(APX,CAT和SOD)活性显着下降,抗氧化物质(类胡萝卜素,多酚和类黄酮)含量显着下降,并且对光合电子传递链阻断剂敌草隆(DCMU)处理更加敏感。(5)在转基因植株中茉莉酸(JA),水杨酸(SA)和乙烯(ET)含量显着下降,乙烯释放速率降低;油菜素内脂(BR)含量显着增加,细胞分裂素(CTK)含量没有明显变化。(6)光合作用是萜类合成的还原力和原料来源,转基因植株净光合速率下降,光合作用产物淀粉和可溶性糖含量显着下降。对光合作用、光合蛋白和碳固定信号通路分析分别发现了87,127和195个下调转录本,没有上调转录本。(7)植物萜类的合成与释放具有时间特异性(不同发育时期),MdAFS基因随着烟草发育进程表达量不断增加,盛花期达到最高点。不同发育时期,萜类合成途径关键基因与Md AFS基因相关性分析表明,Md AFS基因与HMGR基因正相关,其他基因(DXS、DXR、IDI、FPPS和GPPS)负相关。(8)转基因株系HMGR1、HMGR2和HMGS基因上调表达,HMGR专一性抑制剂洛伐他汀(MEV)处理也表明转基因植株有较高的HMGR转录水平。转基因株系萜类合成途径其它关键基因(DXS、DXR、IDI、FPPS和GPPS)下调表达,同时,对DXR专一性抑制剂膦胺霉素(FOS)处理不敏感。(9)转基因株系叶片中,单萜(柠檬烯和芳樟醇)的释放对MeJA的诱导作用不敏感;转基因株系叶绿素和四萜(类胡萝卜素)含量显着下降,Fv/Fm值显着下降。q RT-PCR分析发现转基因株系叶绿素合酶基因下调表达,而叶绿素酶上调表达。添加萜类合成的原料丙酮酸能够将转基因株系的叶绿素含量恢复到野生型水平,合成减少是导致叶绿素含量下降的原因。(本文来源于《山东农业大学》期刊2016-05-10）
代欣,张秀丽,胡举伟,孙广玉[4]（2016）在《过表达和抑制表达2-Cys Prx基因烟草的生长、生理特性和叶片光合功能对模拟酸雨的响应》一文中研究指出为揭示2-Cys Peroxiredoxins(2-Cys Prx)基因在烟草龙江911抗逆中的功能,以过表达2-Cys Prx基因烟草、抑制表达2-Cys Prx基因烟草和非转基因烟草幼苗为试材,研究了不同pH值的模拟酸雨对其生长指标、叶片生理生化特性和叶片光合生理的影响。结果表明:与对照相比,pH值4.0的模拟酸雨对3种基因型烟草的株高、叶面积、比叶重无明显影响,pH值2.5的模拟酸雨处理下,与对照相比,过表达2-Cys Prx基因烟草幼苗的株高无明显变化,抑制表达2-Cys Prx基因烟草和非转基因烟草幼苗的株高显着降低;随着模拟酸雨pH值降低,3种基因型烟草叶片的硝酸还原酶(NR)活性、可溶性蛋白含量、SOD和APX活性、净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr)、实际光化学效率(ФPSⅡ)、光化学猝灭系数(qP)、光系统Ⅱ潜在光化学效率(Fv/Fo)和细胞膜稳定指数逐渐下降,非光化学猝灭系数(qN)和H_2O_2含量逐渐增加,但在相同pH值的模拟酸雨处理下,过表达2-Cys Prx基因烟草各项生理指标均优于抑制表达2-Cys Prx基因烟草和非转基因烟草幼苗。由此可知,增强2-Cys Prx基因在烟草中的表达可能提高烟草在模拟酸雨处理下的硝态氮利用能力,并在模拟酸雨处理造成APX活性下降时,清除叶绿体中的H_2O_2,使光合电子传递链保持稳定,增强烟草叶片的光合能力。(本文来源于《华北农学报》期刊2016年02期）
翟红红,孟志刚,张锐,孙国清,孟钊红[5]（2015）在《过表达AtNEK6转基因烟草的耐旱耐盐性研究》一文中研究指出NEK6基因编码一种丝/苏氨酸蛋白激酶,具有调控植物细胞周期蛋白基因表达和乙烯信号转导的功能,与植物抵抗逆境胁迫相关。将拟南芥At NEK6基因导入烟草,利用甘露醇和Na Cl模拟干旱和盐胁迫环境对T2代转基因烟草进行研究。结果表明,在无胁迫处理条件下,转基因烟草根长、侧根数和鲜重显着高于野生型;在干旱和盐胁迫条件下,转基因烟草根长、侧根数和鲜重均极显着高于野生型,表现出较强的耐旱耐盐性;胁迫处理的转基因烟草叶片叶绿素荧光参数值(Fv/Fm)、SOD和CAT活性以及Pro含量极显着高于野生型,MDA含量极显着低于野生型,进一步证明了At NEK6基因能够促进烟草的生长和提高转基因烟草对于干旱与盐碱的抵抗能力。(本文来源于《中国农业科技导报》期刊2015年06期）
胡举伟,张会慧,孙广玉[6]（2015）在《过表达和抑制表达2–Cys Prx基因烟草的生长特性和叶片光合功能》一文中研究指出以过表达和抑制表达2–Cys Prx基因烟草(龙江911)为材料,测定和分析其生长特性和光化学活性。结果表明:过表达2–Cys Prx基因烟草的株高、根长、生物量显着高于非转基因烟草和抑制表达2–Cys Prx基因烟草;抑制表达2–Cys Prx基因烟草的PSⅡ反应中心电子传递速率(ETR)显着低于过表达2–Cys Prx基因烟草,过表达2–Cys Prx基因烟草的荧光曲线与Fm所围成的面积(Area)、2 ms时有活性反应中心的开放程度(Ψo)、吸收光能用于QA–以后电子传递的量子产额(φEo)、单位反应中心吸收光能用于电子传递的能量(ETo/RC)高于非转基因烟草,非光化学猝灭的最大量子产额(φDo)、单位反应中心耗散掉的能量(DIo/RC)低于非转基因烟草,而抑制表达转2–Cys Prx基因烟草呈现相反趋势。说明过表达2–Cys Prx基因烟草叶片吸收的光能更倾向于分配到光化学反应,以无效形式耗散的能量比例降低,这有利于为碳同化反应提供充足的同化力,以维持较高碳同化速率;抑制表达2–Cys Prx基因烟草叶片吸收的光能用于光化学反应的比例相对降低。(本文来源于《湖南农业大学学报(自然科学版)》期刊2015年05期）
宣宁,柳絮,张华,陈高,刘国霞[7]（2015）在《玉米锌指蛋白基因ZmAN14过表达转基因烟草对非生物胁迫的响应》一文中研究指出【目的】Zm AN14是玉米A20/AN1型锌指蛋白基因家族成员,该家族在水稻中广泛参与非生物胁迫应答。通过分析玉米旱21(H21)及转Zm AN14烟草在非生物胁迫下的表达情况,为玉米Zm AN14及其家族的功能和分子机制的全面解析提供新信息。【方法】通过对Zm AN14进行序列分析,发现其属于玉米A20/AN1型锌指蛋白基因家族。以玉米自交系H21为研究材料,在叁叶期时对其进行非生物胁迫和ABA诱导处理,0、1、3、6、12和24 h时取整株样品,同时在玉米不同生长期取根、茎、叶、胚芽鞘、雌蕊、雄蕊、花丝、苞叶等不同组织样品,利用实时荧光定量PCR方法对Zm AN14的组织表达谱和非生物胁迫及ABA诱导的表达谱进行分析,并结合启动子区顺式作用元件分布情况进行对比分析。将Zm AN14编码序列克隆至GFP表达载体p MDC85,利用亚细胞定位技术验证Zm AN14在胞内的定位情况。将Zm AN14克隆至GAL4 DNA结合结构域载体,并转化酵母,将其涂布在缺陷培养基上观察酵母生长情况,分析其有无转录激活活性。将Zm AN14编码区与植物表达载体p1300-221连接构建超表达载体,并将其转入烟草,选择Zm AN14 m RNA表达量高的T2纯合体株系进行盐、干旱胁迫和ABA诱导,观察其对非生物胁迫的应答。【结果】序列分析表明,Zm AN14开放阅读框(ORF)为516 bp,编码一个171个氨基酸的蛋白,预测分子量为18.3 k D,等电点是8.28。Zm AN14具有A20和AN1结构域,属于玉米A20/AN1型锌指蛋白基因家族。实时定量荧光PCR结果表明Zm AN14在叶中大量表达,受Na Cl、干旱胁迫和ABA诱导上调。Zm AN14与GFP融合蛋白定位于细胞质和细胞核中,定位结果与ZNF216和Zm AN13类似,而Zm AN14本身并没有核定位信号,暗示Zm AN14与其他蛋白结合进入细胞核中发挥其生物学功能。Zm AN14在酵母中表达时不能在酵母缺陷培养基(SD/-Leu-His medium)上生长,因此,未发现其具有转录激活活性。将Zm AN14在烟草中过表达会增加烟草苗期对盐和干旱的抗性。【结论】Zm AN14属于玉米A20/AN1型锌指蛋白基因家族。Zm AN14主要在叶中表达,受非生物胁迫和ABA诱导,在烟草中过表达可以提高烟草苗期对盐和干旱的抗性。Zm AN14可能通过与其他蛋白的互作行使功能。相比较于其他的A20/AN1型锌指蛋白,在转基因烟草中,Zm AN14也参与非生物胁迫应答。Zm AN14与Zm AN13具有高同源性,但在盐和干旱胁迫时,二者却具有向反方向调控的功能。(本文来源于《中国农业科学》期刊2015年05期）
郭利娜,张锐,孙国清,孟志刚,周焘[8]（2013）在《cyFBPase基因过表达提高转基因烟草的抗旱性》一文中研究指出渗透调节是植物应答干旱胁迫的主要方式,蔗糖是植物细胞中重要的可溶性糖,是主要的细胞渗透调节物质。细胞质果糖-1,6-二磷酸酶(cyFBPase)是植物蔗糖合成途径的关键酶之一,其活性可直接影响细胞蔗糖浓度。将甘蓝型油菜的cyFBPase基因转入烟草,在转基阳性植株中cyFBPase基因的表达量和酶活性均大幅度提高,两个转基因株系的基因表达量和酶活性分别为野生型对照的3.76倍、4.03倍和1.53倍、1.58倍,与之相对应,叶片蔗糖含量也显着增加,两株系叶片平均蔗糖含量达到野生型对照的1.59倍。在干旱条件下,转基因烟草植株表现出较好的耐受性,其蔗糖含量以及蔗糖在根、叶器官中的分配发生显着变化:处理20 d后的转基因植株叶、根中的蔗糖含量分别是处理1 d的植株的2.49倍和9.41倍,是对应条件下的野生型植株的1.78倍和2.71倍。说明过表达cyFBPase基因提高了转基因植株的蔗糖合成能力,同时促进了蔗糖向根部运输,提高了转基因植株对干旱的耐受性。(本文来源于《生物技术通报》期刊2013年11期）
李海燕,李小双,杨红兰,张道远[9]（2013）在《EsDREB基因过表达提高转基因烟草抗逆性》一文中研究指出通过农杆菌介导法将准噶尔无叶豆(Eremosparton songoricum)EsDREB基因导入烟草植株中。通过RT-PCR检测,获得转基因植株。以转EsDREB基因T2代烟草为材料,研究了干、盐、冷、热以及干+盐、干+热等混合胁迫对转基因烟草种子萌发、幼苗的生长的影响。结果显示,转EsDREB基因显着提高了烟草种子在盐(150Mm NaCl)、干+盐(100mM山梨醇+75mM NaCl)、热(42℃)叁种胁迫下的萌发率。对两月大幼苗胁迫前、胁迫后以及恢复后表型分析显示:胁迫前转基因植物和野生型表型无明显差异,胁迫后野生型较转基因株系叶片萎蔫、枯死现象更明显,其中干旱胁迫(10%PEG)和冷胁迫(4℃)对植株生长影响最大。恢复18天后,野生型植株都呈死亡状态,转基因株系长势依次呈热>干>盐>冷胁迫。说明转EsDREB基因烟草对热胁迫的抵抗能力最强,其次是抗干旱胁迫的能力。致死试验表明,两月大转基因幼苗在干、热、冷、干+盐、盐等胁迫下的存活率均为野生型的2～3倍。以上结果说明,DREB基因参与了植物体内多种抗逆反应的响应。过表达EsDREB基因能够提高转基因烟草对干、盐、冷、热等多种胁迫的抗逆能力,其中提高抗热和抗干旱的能力最显着。(本文来源于《生态文明建设中的植物学：现在与未来——中国植物学会第十五届会员代表大会暨八十周年学术年会论文集——第3分会场：植物分子生物学与基因组学》期刊2013-10-13）
成妮妮[10]（2013）在《α-法尼烯合酶过表达对转基因烟草生长发育的影响及其基因启动子的克隆与功能分析》一文中研究指出近年来，在分离和鉴定挥发性萜类合成酶基因及其表达调控和功能特性方面取得了很大的进展，萜类代谢工程已经引起了人们的广泛重视。但是直到现在只对少数几种酶进行了重点研究。α-法尼烯合酶是倍半萜α-法尼烯合成途径中的最终酶。到目前为止，对α-法尼烯及α-法尼烯合酶的研究主要集中于其表达调节与α-法尼烯和虎皮病发生的关系及机制探讨上，关于在植物中过表达α-法尼烯合酶是否影响其它萜类物质的产生及植物生物学特性的研究还未见报道。本研究以已经获得的过表达α-法尼烯合酶的转基因烟草（NC89）T3代纯合体为实验材料，对转基因与野生型植株不同的生长特性及其分子机理进行了研究。利用TAIL-PCR法克隆了该基因的启动子序列，并对其功能进行了初步分析。为研究倍半萜代谢工程对植物生长特性的影响及α-法尼烯合酶基因的表达调控因素提供实验依据。研究结果和主要结论如下：（1）α-AFS过表达影响了转基因烟草的生长特性和激素含量将转基因烟草T3代纯合体与野生型烟草同时播种，同样条件培养后发现，在生长期的前30天，二者无明显差异，但到45天以后，转基因植株生长速率逐渐快于野生型，到60天差异明显，主要表现为株高明显增高，茎节间距离加大，茎变细，叶片数增加，最后出现花蕾和开花时间早于野生型植株50多天。对相同温室条件下相同发育时期的烟草，选取4叶（无差异），8叶、12叶、14~15叶（刚出现花蕾）、16~17叶（开花）五个时期，分别利用ELISA法测其GAs、ABA和IAA含量，发现在发育中前期，转基因和野生型植株激素差异不显着，但到花蕾期和开花期，二者差异显着，前者GAs、ABA和IAA含量分别比后者高102.28%，109.50%，257.37%（花蕾期）和115.75%，223.53%和289.64%（开花期），说明α-AFS基因过表达改变了激素水平，进而影响了转基因植株的株高、开花时间等生长发育特性。（2）α-AFS过表达影响了转基因烟草MVA和MEP途径中关键酶及开花分子标记基因的表达对MVA途径的NtHMGR2和NtFPS及MEP途径的NtDXS和NtDXR主要关键酶基因进行qPCR定量分析表明，过表达α-AFS使NtHMGR2表达量从幼苗到开花期逐渐增高，而NtFPS的表达量是先升后降的趋势，在发育中期达到最高，直到最后又低于野生型。NtDXS表达量在4叶和8叶期高于野生型，后来低于野生型并一直呈下降趋势，NtDXR表达量在4叶期略高于野生型，其它时期都比野生型低。GAs是MEP途径的下游产物，对GAs合成途径相关酶基因表达进行qPCR分析表明，NtGA20ox1在叶片中表达随着生长发育逐渐上升，12叶期时，在叁个转基因株系中的表达量已超过野生型植株，相对表达量是野生型的4.87倍，2.40倍和2.46倍，花蕾期和开花期虽有下降但也高于野生型植株。NtGA20ox2表达量在4叶、8叶和12叶期表达量比野生型总体略高，但是到花蕾期和开花期，总体表达量上升较大，尤其是T3-3和T3-5两个株系远高于野生型。NtGA2ox1、NtGA2ox2、NtGA2ox3和NtGA2ox5在幼苗期表达最高，此后呈下降趋势。利用半定量PCR对烟草中开花分子标记基因检测表明，转基因烟草中NtMADS4的表达时期明显早于野生型，NtMADS11表达在转基因植株T3-1、T3-5中表达早于野生型，而T3-3与野生型差异不大。（3）α-AFS过表达影响转基因烟草植株其它萜类、生物碱、类固醇等物质的合成利用GC-MS对固相微萃取顶空收集的烟草挥发物和正己烷提取的物质进行分析表明，转基因和野生型烟草均未检出α-法尼烯，但是转基因植株中检测到另一种倍半萜β-石竹烯的含量是野生型的6倍，转基因植株中还有少量的β-石竹烯氧化产物和穿心莲内酯，而野生型烟草植株未检出。在转基因植株中还发现一种新的二萜物质香紫苏醇。HPLC分析表明，转基因烟草植株中保留时间约10min处物质含量高于野生型，但具体是何种物质还有待于进一步分析。干叶中生物碱含量检测发现，转基因植株的生物碱含量高于野生型植株，而总类固醇含量低于野生型。（4）α-AFS过表达改变了转基因烟草的抗胁迫能力对转基因烟草进行离体自然衰老、MV、NaCl、45C胁迫处理发现，转基因植株叶圆片抗衰老能力高于野生型叶片，但对MV胁迫比野生型敏感。NaCl处理中，种子萌发差异不大，但在100mM NaCl处理中转基因烟草幼苗抗胁迫能力高于野生型幼苗，但到了浓度NaCl达150mM后，二者差异不明显。高温处理转基因植株的净光合速率受影响程度比野生型大，但二者Fv/Fm变化趋势比较相近。转基因植株的相对电导率和伤害度明显低于野生型植株。（5）克隆了α-AFS基因启动子并进行功能分析利用TAIL-PCR方法从青香蕉苹果中克隆了α-AFS基因启动子序列，在线分析表明，该序列具有许多明显的TATA框和CAAT框，同时还具有与激素相关的元件，在ATG下游分别有一个参与热胁迫反应的HSE元件和厌氧诱导的ARE元件等重要顺式作用元件。将启动子分段克隆与GUS报告基因构建融合表达载体转化烟草，转基因烟草GUS活性分析表明，该启动子能够使GUS基因表达，且表达活性因片段长度不同而有差异。利用GA、ABA、SA、MeJA、乙烯利（ethephon）和45C热激处理后对GUS酶活性进行检测表明GA、MeJA、乙烯利处理增强了启动子活性，而SA和ABA处理反之。热激处理对含有HSE的片段2-1较明显，但对其它片段不明显。(本文来源于《山东农业大学》期刊2013-05-10）
过表达转基因烟草论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为进一步研究JsWRKY1的生物学功能,构建JsWRKY1的植物超表达载体并转入烟草中过表达。再生的JsWRKY1转基因烟草与野生型烟草在表型上无明显差异。JsWRKY1过表达上调了转基因烟草体内几个防卫相关基因MnSOD、Cu/Zn SOD、CN、NADPH oxidase和PR1的转录水平。与野生型烟草相比,JsWRKY1转基因烟草体内的超氧化物歧化酶、过氧化物酶和抗坏血酸过氧化物酶活性在正常生长以及胶孢炭疽菌接种后均显着增强。平板抑菌试验结果显示,JsWRKY1转基因烟草叶片总蛋白对病原真菌葡萄座腔菌、串珠状赤霉菌、胶孢炭疽菌和尖孢镰刀菌的菌丝生长具有不同程度的抑制作用。此外,用胶孢炭疽菌接种烟草叶片,转基因烟草对胶孢炭疽菌的抗性明显增强。显然,JsWRKY1是漾濞大泡核桃中正调控病害防卫反应的转录因子。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
过表达转基因烟草论文参考文献
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