本文主要研究内容
作者张涵,王学敏,刘希强,马琳,温红雨,王赞（2019）在《紫花苜蓿MsGAI的克隆、表达及遗传转化》一文中研究指出：【目的】DELLA蛋白属于GRAS家族,是赤霉素信号转导途径中重要的转录因子,负向调节GA转导途径。克隆获得紫花苜蓿GAI,分析其基因生物信息学特征并预测蛋白结构域。明确紫花苜蓿GAI组织表达特征及不同处理下的表达模式,构建该基因超表达载体并转入紫花苜蓿,以探究DELLA蛋白基因在紫花苜蓿赤霉素(GA)信号转导途径及胁迫条件下的作用机理。【方法】利用同源克隆的方法,从紫花苜蓿中克隆得到MsGAI。利用生物信息学方法分析该基因的序列特征,使用MEGA7.0对MsGAI蛋白序列及同源序列进行多序列比对,构建同源物种间的系统发育树。利用实时荧光定量PCR检测紫花苜蓿各组织GAI表达量以及在PEG、NaCl、GA、ABA和黑暗处理下,GAI的表达变化。同时对转基因GAI株系表达水平进行分析,选择表达量高、中、低株系(L5、L8、L11)分别进行PEG和NaCl处理,分析GAI的表达变化。以pBI121为基础载体,采用双酶切-连接的方法构建植物超表达载体35S:MsGAI-gus。将重组载体转入农杆菌GV3101菌株中,以紫花苜蓿叶片为外植体,采用农杆菌介导的愈伤组织转化法转化紫花苜蓿,经PCR检测和GUS组织化学染色,得到转基因阳性苗。【结果】该基因序列包含有一个1 818 bp的开放阅读框,编码605个氨基酸。生物信息学分析结果显示,MsGAI蛋白具有GRAS家族的典型结构域和保守区,其中包含N端保守结构域DELLA和TVHYNP,C端保守结构域SAW。多序列比对及系统进化树分析表明,该序列与其他物种的DELLA蛋白序列相似度均高达80%以上,将其命名为MsGAI。该基因与蒺藜苜蓿GAI亲缘关系最近,其次与鹰嘴豆、红三叶等双子叶豆科植物亲缘关系较近,与大麦等单子叶植物较远。实时荧光定量PCR分析表明,MsGAI在紫花苜蓿各组织中均有表达,根中的表达量最高。经PEG、NaCl、GA以及ABA处理后,均有明显响应;黑暗处理显著抑制MsGAI的表达。转基因株系经PEG、NaCl处理后,GAI表达量均上调。对构建完善的35S:MsGAI-gus植物超表达载体进行双酶切检测,琼脂糖凝胶电泳显示,条带大小与预期一致。对转基因植株进行GUS组织染色验证,结果表明,阳性植株呈现蓝色,对照组为白色。对超表达载体携带的MsGAI和GUS序列进行PCR检测均呈阳性。【结论】紫花苜蓿DELLA蛋白基因的克隆和超表达载体构建成功,MsGAI对逆境胁迫有响应。
Abstract
【mu de 】DELLAdan bai shu yu GRASjia zu ,shi chi mei su xin hao zhuai dao tu jing zhong chong yao de zhuai lu yin zi ,fu xiang diao jie GAzhuai dao tu jing 。ke long huo de zi hua mu xu GAI,fen xi ji ji yin sheng wu xin xi xue te zheng bing yu ce dan bai jie gou yu 。ming que zi hua mu xu GAIzu zhi biao da te zheng ji bu tong chu li xia de biao da mo shi ,gou jian gai ji yin chao biao da zai ti bing zhuai ru zi hua mu xu ,yi tan jiu DELLAdan bai ji yin zai zi hua mu xu chi mei su (GA)xin hao zhuai dao tu jing ji xie pai tiao jian xia de zuo yong ji li 。【fang fa 】li yong tong yuan ke long de fang fa ,cong zi hua mu xu zhong ke long de dao MsGAI。li yong sheng wu xin xi xue fang fa fen xi gai ji yin de xu lie te zheng ,shi yong MEGA7.0dui MsGAIdan bai xu lie ji tong yuan xu lie jin hang duo xu lie bi dui ,gou jian tong yuan wu chong jian de ji tong fa yo shu 。li yong shi shi ying guang ding liang PCRjian ce zi hua mu xu ge zu zhi GAIbiao da liang yi ji zai PEG、NaCl、GA、ABAhe hei an chu li xia ,GAIde biao da bian hua 。tong shi dui zhuai ji yin GAIzhu ji biao da shui ping jin hang fen xi ,shua ze biao da liang gao 、zhong 、di zhu ji (L5、L8、L11)fen bie jin hang PEGhe NaClchu li ,fen xi GAIde biao da bian hua 。yi pBI121wei ji chu zai ti ,cai yong shuang mei qie -lian jie de fang fa gou jian zhi wu chao biao da zai ti 35S:MsGAI-gus。jiang chong zu zai ti zhuai ru nong gan jun GV3101jun zhu zhong ,yi zi hua mu xu xie pian wei wai zhi ti ,cai yong nong gan jun jie dao de yu shang zu zhi zhuai hua fa zhuai hua zi hua mu xu ,jing PCRjian ce he GUSzu zhi hua xue ran se ,de dao zhuai ji yin yang xing miao 。【jie guo 】gai ji yin xu lie bao han you yi ge 1 818 bpde kai fang yue dou kuang ,bian ma 605ge an ji suan 。sheng wu xin xi xue fen xi jie guo xian shi ,MsGAIdan bai ju you GRASjia zu de dian xing jie gou yu he bao shou ou ,ji zhong bao han Nduan bao shou jie gou yu DELLAhe TVHYNP,Cduan bao shou jie gou yu SAW。duo xu lie bi dui ji ji tong jin hua shu fen xi biao ming ,gai xu lie yu ji ta wu chong de DELLAdan bai xu lie xiang shi du jun gao da 80%yi shang ,jiang ji ming ming wei MsGAI。gai ji yin yu ji li mu xu GAIqin yuan guan ji zui jin ,ji ci yu ying zui dou 、gong san xie deng shuang zi xie dou ke zhi wu qin yuan guan ji jiao jin ,yu da mai deng chan zi xie zhi wu jiao yuan 。shi shi ying guang ding liang PCRfen xi biao ming ,MsGAIzai zi hua mu xu ge zu zhi zhong jun you biao da ,gen zhong de biao da liang zui gao 。jing PEG、NaCl、GAyi ji ABAchu li hou ,jun you ming xian xiang ying ;hei an chu li xian zhe yi zhi MsGAIde biao da 。zhuai ji yin zhu ji jing PEG、NaClchu li hou ,GAIbiao da liang jun shang diao 。dui gou jian wan shan de 35S:MsGAI-guszhi wu chao biao da zai ti jin hang shuang mei qie jian ce ,qiong zhi tang ning jiao dian yong xian shi ,tiao dai da xiao yu yu ji yi zhi 。dui zhuai ji yin zhi zhu jin hang GUSzu zhi ran se yan zheng ,jie guo biao ming ,yang xing zhi zhu cheng xian lan se ,dui zhao zu wei bai se 。dui chao biao da zai ti xie dai de MsGAIhe GUSxu lie jin hang PCRjian ce jun cheng yang xing 。【jie lun 】zi hua mu xu DELLAdan bai ji yin de ke long he chao biao da zai ti gou jian cheng gong ,MsGAIdui ni jing xie pai you xiang ying 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学的张涵,王学敏,刘希强,马琳,温红雨,王赞，发表于刊物中国农业科学2019年02期论文，是一篇关于紫花苜蓿论文,蛋白论文,赤霉素论文,表达分析论文,同源克隆论文,遗传转化论文,中国农业科学2019年02期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学2019年02期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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