湖南省妇幼保健院湖南长沙410008
摘要：目的：对比载杆玻璃化冷冻法与程序冷冻法对人早期胚胎冷冻复苏的效果。方法：收集并整理人早期胚胎冷冻复苏的相关资料，根据冷冻法的不同把他们分成研究组A和研究组B，研究组A采用载杆玻璃化冷冻法，研究组B采用程序冷冻法，周期数依次为122、64个。对比两组胚胎复苏的相关指标。结果：研究组A的胚胎复苏率、胚胎完整率依次为97.1%、94.5%，研究组B依次为75.1%、70.8%，研究组A都比研究组B高；研究组A的胚胎丢失率的1.5%，研究组B是3.8%，研究组A比研究组B低，对比差异都较大（P＜0.05）。研究组A的胚胎植入率、临床妊娠率分别是29.1%、59.8%，研究组B分别是18.0%、37.1%，研究组A都比研究组B高，对比差异较大（P＜0.05）。结论：载杆玻璃化冷冻法对人早期胚胎冷冻复苏的效果优于程序冷冻法，可明显提升胚胎植入率与妊娠率，更值得推广。
关键词：载杆玻璃化冷冻法；程序冷冻法；人早期胚胎；冷冻复苏
胚胎冷冻法是辅助生殖技术的一大进步，载杆玻璃化冷冻法与程序冷冻法是现在应用最多的两种冷冻法【1】。本研究为了进一步对比这两种胚胎冷冻法对人早期胚胎冷冻复苏的效果，收集并整理了2016年1月到12月的人早期胚胎冷冻复苏的相关资料进行回顾性分析，见下述总结汇报。
1资料与方法
1.1一般资料收集并整理人早期胚胎冷冻复苏的相关资料，均为I~III级胚胎，冷冻186个周期。病患年龄25~47岁，平均（30.6±5.1）岁；不孕时间1~8年，平均（5.3±3.2）年。根据冷冻法的不同人早期胚胎分成研究组A和研究组B，研究组A的周期数为122个，研究组B的周期数为64个。比较研究组A和研究组B病患的基本数据，差异不大（P>0.05）。
1.2方法
1.2.1胚胎冷冻研究组A采用载杆玻璃化冷冻法：适温时把胚胎放进含20mg/ml人血清白蛋白的HTF-Fepes溶液里，平衡1分钟后取出，放进含7.5%乙二醇、7.5%二甲基亚砜、20mg/ml人血清白蛋白的HTF-Fepes溶液里，平衡5分钟取出，放进含15%乙二醇、15%二甲基亚砜、1mol/L蔗糖、20mg/ml人血清白蛋白的HTF-Fepes溶液里。取出后，1min内快速把胚胎放进冷冻载杆上，一个载杆可放置1~3个胚胎。添加液氮，把冷冻载杆套子套于液氮上，冷汗完成后把冷冻载杆放到液氮罐里储存起来。研究组B采用程序冷冻法：适温时把胚胎放进含1.5mol/L丙二醇、12mg/ml人血清白蛋白的HTF-Fepes溶液里，平衡10分钟取出，放进含1.5mol/L丙二醇、0.1mol/L蔗糖、12mg/ml人血清白蛋白的HTF-Fepes溶液里，30s后吸入麦管，每管1~3个胚胎，将麦管置于程序冷冻仪上，在2℃/min的速度下让温度降为-7℃，在0.3℃/min的速度下让温度再降为-30℃，最后在10℃/min的速度下让温度降为-120℃，拿出麦管，放到液氮罐里储存起来。
1.2.2胚胎复苏与移植运用自然周期或激素替代法准备子宫内膜。自然周期在月经第12d行超声检查卵泡发育情况，破裂或黄素化后肌注黄体酮。激素替代法在月经第3d给予戊酸雌二醇2mg.d，B超检查子宫内膜，适度加大戊酸雌二醇用量，最高不可超过8mg/d。子宫内膜厚度超过8mm且是三线征，戊酸雌二醇超过100pg/ml时肌注黄体酮，3d后复苏胚胎【2】。选用质量较佳的胚胎，于复苏后3h内移植，于腹部B超辅助下降其移植于距宫底约1.5cm处，2周后检测尿绒毛膜促性腺激素，阳性者2周后行超声检查，有孕囊则提示临床妊娠【3】。
1.3观察指标（1）对比两组胚胎复苏的相关指标，包括胚胎复苏率、胚胎完整率、胚胎丢失率。（2）对比两组胚胎移植的相关指标，包括周期取消率、胚胎植入率、临床妊娠率、流产率。
1.4数据统计选用SPSS19.0系统计算数据，计数数据用%表示，进行X2校验，P＜0.05说明差异较大。
2结果
2.1胚胎复苏的相关指标比较研究组A的胚胎复苏率、胚胎完整率分别是97.1%、94.5%，研究组B分别是75.1%、70.8%，研究组A都比研究组B高；研究组A的胚胎丢失率的1.5%，研究组B是3.8%，研究组A比研究组B低，对比差异都较大（P＜0.05）。详见表1。
表1研究组A与研究组B的胚胎复苏相关指标比较[n（%）]
注：与研究组B比较，*P＜0.05。
3讨论
程序冷冻法是最传统的方法，可促进细胞脱水，但也会因为细胞中冰晶的产生而导致胚胎受损，且该方法的操作步骤较多，所需仪器较贵【4】。载杆玻璃化冷冻法是近几年新兴起的一种胚胎冷冻法，具有操作简单、冷冻快速等优势，操作期间无冰晶产生，在一定程度上弥补了程序冷冻法的不足【15。
本研究从胚胎复苏效果与胚胎移植效果两方面入手，分析载杆玻璃化冷冻法对人早期胚胎冷冻的影响，结果显示，研究组A的胚胎复苏率、胚胎完整率、胚胎植入率以及临床妊娠率都比研究组B高，且研究组A的胚胎丢失率比研究组B低，因此认为，研究组A的胚胎复苏效果与胚胎移植效果都优于研究组B，提示载杆玻璃化冷冻法对人早期胚胎冷冻的影响优于程序冷冻法。
综上所述，载杆玻璃化冷冻法对人早期胚胎冷冻复苏的效果优于程序冷冻法，可明显提升胚胎植入率与妊娠率，更值得推广。
参考文献：
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[3]姬萌霞.以细胞筛为载体的玻璃化冷冻和慢速程序化冷冻保存人卵巢组织的效果比较[D].北京协和医学院中国医学科学院；北京协和医学院；中国医学科学院；清华大学医学部，2016.
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