去跨膜区表达论文-韩元,许强,杨学财,李有全,郭鹏飞

去跨膜区表达论文-韩元,许强,杨学财,李有全,郭鹏飞

导读:本文包含了去跨膜区表达论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献,主要关键词:吕氏泰勒虫,TlSP基因,跨膜区,原核表达

去跨膜区表达论文文献综述

韩元,许强,杨学财,李有全,郭鹏飞[1](2017)在《吕氏泰勒虫TlSP无跨膜区重组蛋白的表达及反应原性分析》一文中研究指出提取吕氏泰勒虫裂殖子的总RNA,采用RT-PCR方法扩增其表面蛋白TlSP(Theileria luwenshuni surface protein)基因的cDNA片段,结合生物信息学方法,对TlSP蛋白抗原表位和跨膜区进行预测,设计表达引物,分别扩增得到TlSP全长及逐一去除跨膜区的4个片段,并将其分别克隆至pET-30a原核表达载体,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)p Lys S感受态细胞进行诱导表达,并对融合蛋白的反应原性进行分析。结果表明,TlSP融合蛋白的N端具有较好的抗原性,而在C端存在3个跨膜区:185~207 aa、228~250 aa和255~277 aa;SDS-PAGE结果表明,只有去除全部跨膜区的重组载体可成功表达。Western-blot分析表明,TlSP融合蛋白能与吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫、绵羊泰勒虫及环形泰勒虫阳性血清发生反应,而与巴贝斯虫、羊无浆体阳性血清无交叉反应。本研究为今后TlSP候选亚单位疫苗的研究奠定了基础。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2017年12期)

陈蓉,李辉,施振旦[2](2016)在《犬瘦素受体胞外近跨膜区重组融合蛋白的原核表达与纯化》一文中研究指出随着人们生活水平的提高,肥胖成为了一个难以应付的健康问题。这一问题甚至也发生于犬、猫等宠物。营养过剩和缺乏运动是导致宠物肥胖的主要原因。肥胖可缩短犬、猫的寿命,且更容易继发某些疾病,如骨骼和关节疾病、呼吸困难、充血性心力衰竭、糖尿病、高血压高血脂症等~([1])。目前,宠物减肥的方法主要有饮食控制、增强运动、药物治疗~([2])和外科手术~([3])。其中,前两种方法需要较长周期,不能短期内发挥效果。瘦素(Leptin)一直以来被认为是抑制肥胖的主要物质。它是由脂肪组织分泌的一种蛋白质类激素,由OB基因编(本文来源于《江苏农业学报》期刊2016年03期)

马帅,韩艳辉,洪炀,曹晓丹,韩倩[3](2015)在《日本血吸虫四跨膜孤儿受体(TOR)克隆及其第一个膜外区表达》一文中研究指出血吸虫在宿主体内的发育和长期寄生生活与其逃避宿主免疫攻击的能力是密切相关的。分离鉴定和免疫逃避相关的虫体分子,研究其功能对了解血吸虫免疫逃避机理及疫苗研究有重要帮助。研究表明TOR蛋白是一种表面抗原受体,可以结合补体C2a,推测其可以通过抑制补体激活途径,而在免疫逃避过程中起重要作用。为研究日本血吸虫TOR(sjTOR)受体的特性和功能,利用PCR扩增到sjTOR基因并进行了生物信息学分析,结果表明SjTOR的ORF长度为1245 bps,编码414个氨基酸,比对分析显示与曼氏血吸虫TOR(SmTOR)、埃及血吸虫TOR(ShTOR)相似性分别为77.0%、和72.0%。序列分析显示,sjTOR不含信号肽,具有5个N糖基化位点;跨膜结构预测表明,sjTOR包含四个跨膜结构域。根据sjTOR第一个膜外区(SjTOR-ed1,AA 47-168)序列设计合成引物,构建含SjTOR第一个膜外区(sjTOR-ed1)基因的重组表达质粒pET-28a-sjTOR-ed1,在BL21(DE3)大肠杆菌中诱导表达,并用His-binging亲和层析纯化获得重组蛋白rsjTOR-ed1,分子量约为14 kDa。Western blot分析显示rsjTOR-ed1能被日本血吸虫阳性小鼠血清识别,用重组蛋白rsjTOR-ed1免疫小鼠,能够诱导产生较高水平的特异性IgG抗体。结果表明重组蛋白rsjTOR-ed1具有良好的免疫原性。结果为开展研究日本血吸虫TOR受体的功能及评估其作为抗血吸虫疫苗候选分子提供了基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十叁次学术研讨会论文集》期刊2015-07-25)

柴茂,许晨旭,管萌,刘开春,陈素娟[4](2014)在《H5N1亚型禽流感病毒缺失跨膜区M2基因的原核表达及其单克隆抗体的制备》一文中研究指出为制备针对H5N1亚型禽流感病毒(AIV)M2蛋白的单克隆抗体,将H5N1亚型AIV缺失跨膜区的M2基因(sM2)克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,通过IPTG诱导表达,获得可溶性的36ku sM2融合蛋白。以100μg纯化的sM2融合蛋白免疫8周龄BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。以sM2融合蛋白作为包被抗原,通过ELISA方法检测,将M2融合蛋白抗原检测阳性、GST抗原检测阴性的杂交瘤细胞进行克隆筛选,获得4株单克隆抗体,分别被命名为1A9、2D4、3E6和4E7,亚类分别为IgG2b、IgG1、IgG2a、IgG2a。间接免疫荧光试验显示,单克隆抗体与不同clade的H5亚型AIV感染的MDCK细胞均产生特异性荧光反应,可用于H5亚型AIV的检测。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2014年02期)

严孝金,李锋,秦立廷,李倩倩,韩翠晓[5](2011)在《传染性法氏囊病病毒VP5蛋白跨膜区的敲除及可溶性原核表达研究》一文中研究指出[目的]构建敲除传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP5蛋白跨膜区序列的原核表达载体,并进行目的蛋白的表达、分离和纯化。[方法]利用PCR技术分别扩增IBDVVP5基因的胞外片段和胞内片段,然后将2个片段及pET-28b(+)同时相接,即载体-胞内片段-胞外片段-载体,构建了敲除跨膜区基因片段的VP5重组表达质粒pET-VP5-FC及改进后的pET-VP5-SC。将表达质粒转化BL21(DE3),IPTG诱导后经Ni亲和层析及凝胶过滤层析纯化重组蛋白。[结果]得到可溶性表达的IBDVVP5。[结论]为进一步研究VP5蛋白的结构与功能奠定了基础。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2011年17期)

严孝金,李锋,秦立廷,李倩倩,韩翠晓[6](2011)在《传染性法氏囊病病毒VP5蛋白跨膜区的敲除及可溶性原核表达研究(英文)》一文中研究指出[目的]构建敲除传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP5蛋白跨膜区序列的原核表达载体,并进行目的蛋白的表达、分离和纯化。[方法]利用PCR技术分别扩增IBDVVP5基因的胞外片段和胞内片段,然后将2个片段及pET-28b(+)同时相接,即载体-胞内片段-胞外片段-载体,构建了敲除跨膜区基因片段的VP5重组表达质粒pET-VP5-FC及改进后的pET-VP5-SC。将表达质粒转化BL21(DE3),IPTG诱导后经Ni亲和层析及凝胶过滤层析纯化重组蛋白。[结果]得到可溶性表达的IBDVVP5。[结论]为进一步研究VP5蛋白的结构与功能奠定了良好的基础,另外为本文的研究方法对其它跨膜蛋白的可溶性表达及进一步研究也有一定的借鉴意义。(本文来源于《Agricultural Science & Technology》期刊2011年04期)

孙润红,于祥泉,陶烨,杨洋,吴云锋[7](2010)在《小麦蓝矮植原体免疫膜蛋白(Imp)的跨膜区影响其在大肠杆菌中的表达》一文中研究指出根据跨膜区预测结果,设计ImpF1/ImpR1和ImpF2/ImpR2两对特异性引物。以ImpF1/ImpR1,ImpF1/ImpR2,Imp-F2/ImpR1和ImpF2/ImpR2共4个组合经PCR扩增得到4个目标片段,即:免疫膜蛋白Imp基因的全长(Imp-B);切除C-端跨膜区的Imp基因的基因序列(Imp-N);切除N-端跨膜区的Imp基因的基因序列(Imp-C);切除N-和C-端跨膜区的Imp基因的基因序列(Imp-S)。经酶切连接到原核表达载体Pmal-c2x,并转入E.coliBL21(DE3)PlysS菌株中。SDS-PAGE电泳验证,只有切除N-、C-端跨膜区的Imp基因的基因序列(Imp-S)得到大量表达,结果表明:小麦蓝矮植原体免疫膜蛋白的跨膜区影响其在大肠杆菌中的表达。根据跨膜区预测结果,设计ImpF1/ImpR1和ImpF2/ImpR2两对特异性引物。以ImpF1/ImpR1,ImpF1/ImpR2,Imp-F2/ImpR1和ImpF2/ImpR2共4个组合经PCR扩增得到4个目标片段,即:免疫膜蛋白Imp基因的全长(Imp-B);切除C-端跨膜区的Imp基因的基因序列(Imp-N);切除N-端跨膜区的Imp基因的基因序列(Imp-C);切除N-和C-端跨膜区的Imp基因的基因序列(Imp-S)。经酶切连接到原核表达载体Pmal-c2x,并转入E.coliBL21(DE3)PlysS菌株中。SDS-PAGE电泳验证,只有切除N-、C-端跨膜区的Imp基因的基因序列(Imp-S)得到大量表达,结果表明:小麦蓝矮植原体免疫膜蛋白的跨膜区影响其在大肠杆菌中的表达。(本文来源于《植物病理学报》期刊2010年06期)

沈爱梅,程安春,汪铭书,朱德康,罗启慧[8](2010)在《鸭肠炎病毒UL45基因去跨膜区蛋白原核表达及抗体制备》一文中研究指出鸭病毒性肠炎(DVE)又称鸭瘟(DP),是水禽(鸭、鹅和天鹅)的一种急性、热性、传染性的脓毒性疾病。典型症状为脉管损伤,组织出血,消化道和淋巴器官损伤。全世界的养鸭区因DVE(本文来源于《第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(下册)》期刊2010-08-01)

沈爱梅[9](2010)在《鸭肠炎病毒UL45基因去跨膜区原核表达、抗体制备、转录时相及编码蛋白特性研究》一文中研究指出论文对新鉴定鸭肠炎病毒UL45基因(Gen Bank登录号EU195107)进行了生物信息学分析,原核表达并制备了UL45基因去跨膜区(UL45基因的295-675bp,命名为UL45Δ)蛋白的多克隆抗体,利用该抗体对UL45部分生物学特性进行了研究,主要内容可归纳如下:1.DEV UL45基因的分子特性分析DEV UL45基因大小为675bp,编码224aa,等电点为6.51。UL45蛋白没有信号肽,有一个较大的跨膜区,阈值为0.5时共有13个潜在的磷酸化位点,包括色氨酸(Serine)8个,苏氨酸(Threonine)4个,酪氨酸(Tyrosine)1个。推测可能的B细胞表面抗原位于13~17,20~28,40~47,51~56,157~161和202~206位氨基酸,主要的T细胞表面抗原位于68~73,130~133和157~160位氨基酸。序列比对分析表明DEV CHv UL45与禽疱疹病毒氨基酸同源性较其他疱疹病毒高。密码子偏嗜性分析表明UL45基因偏嗜性不强,异源表达量较低,最适合于大肠杆菌表达系统。2.DEV UL45去跨膜区的原核表达及多克隆抗体的制备成功构建了UL45全基因和去跨膜区的重组原核表达质粒(pET-32-UL45和pET-32-UL45Δ),并将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)PlysS菌中。IPTG诱导结果表明UL45全基因不能有效表达,去跨膜区的UL45Δ基因高效表达,得到大小约为33kDa的可溶蛋白,与预期蛋白大小一致。优化的最佳表达条件为0.2mmol/L IPTG,30℃诱导4h。重组蛋白纯化后用于制备兔抗UL45Δ抗体,琼脂糖扩散试验表明其效价为1:32,免疫印迹结果表明抗体能特异性的识别UL45Δ蛋白,并且证明UL45基因是DEV基因组的组成部分。3.DEV UL45基因转录特性研究本研究用荧光定量PCR方法对DEV感染宿主细胞后病毒UL45基因mRNA表达水平的变化进行了动态分析。结果表明,感染后0-18h,UL45基因处于低转录水平,24h后转录产物量迅速增加,到42h达到高峰后有所下降,并一直持续到感染后72h。推测DEV UL45基因属于晚期基因。4.UL45基因编码蛋白属性分析利用超速离心机得到纯化的DEV,并用去垢剂NP-40萃取纯化病毒,破碎病毒结构,得到上清(囊膜蛋白和极少数皮层蛋白)和沉淀(大多数皮层蛋白和衣壳蛋白)。通过对纯化病毒和得到的上清、沉淀进行免疫印迹分析,结果表明UL45蛋白存在于纯化病毒和上清中。推测UL45蛋白是病毒的囊膜蛋白。(本文来源于《四川农业大学》期刊2010-06-01)

王明翠,任晓峰,李广兴[10](2010)在《缺失信号肽和跨膜区的PRRSV GP5融合蛋白基因的表达》一文中研究指出通过分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HH08株GP5基因序列,设计了2对引物,经PCR扩增,获得不含信号肽和跨膜功能区的GP5基因片段,长度分别为121 bp和248 bp。应用酶切位点相连构建融合基因技术,将2段基因亚克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,获得重组表达质粒pET-GP5。将重组质粒转入大肠杆菌,经IPTG诱导后获得高效表达。免疫印迹试验证实,表达的融合蛋白能与特异性血清抗体反应,表明表达的PRRSV GP5蛋白具有良好的生物学活性。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2010年04期)

去跨膜区表达论文开题报告

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

随着人们生活水平的提高,肥胖成为了一个难以应付的健康问题。这一问题甚至也发生于犬、猫等宠物。营养过剩和缺乏运动是导致宠物肥胖的主要原因。肥胖可缩短犬、猫的寿命,且更容易继发某些疾病,如骨骼和关节疾病、呼吸困难、充血性心力衰竭、糖尿病、高血压高血脂症等~([1])。目前,宠物减肥的方法主要有饮食控制、增强运动、药物治疗~([2])和外科手术~([3])。其中,前两种方法需要较长周期,不能短期内发挥效果。瘦素(Leptin)一直以来被认为是抑制肥胖的主要物质。它是由脂肪组织分泌的一种蛋白质类激素,由OB基因编

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

去跨膜区表达论文参考文献

[1].韩元,许强,杨学财,李有全,郭鹏飞.吕氏泰勒虫TlSP无跨膜区重组蛋白的表达及反应原性分析[J].中国兽医科学.2017

[2].陈蓉,李辉,施振旦.犬瘦素受体胞外近跨膜区重组融合蛋白的原核表达与纯化[J].江苏农业学报.2016

[3].马帅,韩艳辉,洪炀,曹晓丹,韩倩.日本血吸虫四跨膜孤儿受体(TOR)克隆及其第一个膜外区表达[C].中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十叁次学术研讨会论文集.2015

[4].柴茂,许晨旭,管萌,刘开春,陈素娟.H5N1亚型禽流感病毒缺失跨膜区M2基因的原核表达及其单克隆抗体的制备[J].中国兽医科学.2014

[5].严孝金,李锋,秦立廷,李倩倩,韩翠晓.传染性法氏囊病病毒VP5蛋白跨膜区的敲除及可溶性原核表达研究[J].安徽农业科学.2011

[6].严孝金,李锋,秦立廷,李倩倩,韩翠晓.传染性法氏囊病病毒VP5蛋白跨膜区的敲除及可溶性原核表达研究(英文)[J].AgriculturalScience&Technology.2011

[7].孙润红,于祥泉,陶烨,杨洋,吴云锋.小麦蓝矮植原体免疫膜蛋白(Imp)的跨膜区影响其在大肠杆菌中的表达[J].植物病理学报.2010

[8].沈爱梅,程安春,汪铭书,朱德康,罗启慧.鸭肠炎病毒UL45基因去跨膜区蛋白原核表达及抗体制备[C].第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(下册).2010

[9].沈爱梅.鸭肠炎病毒UL45基因去跨膜区原核表达、抗体制备、转录时相及编码蛋白特性研究[D].四川农业大学.2010

[10].王明翠,任晓峰,李广兴.缺失信号肽和跨膜区的PRRSVGP5融合蛋白基因的表达[J].中国兽医科学.2010

标签:;  ;  ;  ;  

去跨膜区表达论文-韩元,许强,杨学财,李有全,郭鹏飞
下载Doc文档

猜你喜欢