导读:本文包含了炭疽毒素保护性抗原论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:炭疽杆菌,保护性抗原,单克隆抗体,中和抗体
炭疽毒素保护性抗原论文文献综述
吕洪臻,唐小军,熊四平,徐鑫,郑峰[1]（2013）在《抗炭疽毒素保护性抗原单克隆抗体的制备及功能分析》一文中研究指出目的:原核表达炭疽杆菌保护性抗原PA10蛋白,制备单克隆抗体,并进行功能分析。方法:人工合成炭疽杆菌保护性抗原PA10编码基因并克隆入pUC57载体,酶切鉴定后,将PA10编码基因插入原核表达载体pColdⅡ中,测序验证正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG和低温条件下诱导蛋白表达,SDS-PAGE验证产物;用HiTrap IMAC HP柱纯化重组蛋白,Western blot进一步验证。以纯化获得PA10重组蛋白为抗原,常规程序免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,并检测所制备抗体的中和活性。结果:获得的PA10重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,最终获得了4株特异性的单克隆抗体(分别命名为2G8、5A8、7B3、9C9)。经体外炭疽毒素保护试验证实,其中1株单抗(7B3)具有较强的中和活性,其保护率可高达96%。结论:本文成功构建并表达炭疽杆菌保护性抗原PA10,制备了具有中和活性的抗PA单克隆抗体,为构建人源化的抗PA中和抗体奠定基础,从而有望用于炭疽病的治疗。(本文来源于《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊2013年11期）
张军,赵剑,董大勇,宋小红,徐俊杰[2]（2008）在《炭疽保护性抗原与炭疽毒素受体结合特征分析》一文中研究指出目的:建立检测炭疽毒素保护性抗原(PA)与靶细胞受体(ATR)结合能力的Binding-ELISA方法,并对两者结合特征进行分析。方法:以ELISA实验为基础,建立PA与ATR结合的体外模型,并对实验中的反应条件进行优化。采用Binding-ELISA方法,通过测定不同包被蛋白、不同二价阳离子条件下的D450以及相对饱和度等参数,分析PA与两种ATR的结合特征。结果与结论:以重组PA作为包被抗原时灵敏度更高,包被浓度为2μg/ml;二价阳离子浓度为5 mmol/L。两种受体与PA的亲和力不同,其中CMG2与PA的结合能力更强;并且两者与PA结合时离子依赖特征不同,PA与TEM8的结合能力在Mn2+存在时最强,PA与CMG2的结合能力在Ca2+存在时最强。这一结果与国外报道相符,进一步说明Binding-ELISA方法用于定性分析炭疽毒素与其受体结合能力的可行性,为评价以抑制PA与ATR结合为靶点的毒素抑制剂提供了有效的手段。(本文来源于《军事医学科学院院刊》期刊2008年05期）
张军[3]（2008）在《炭疽毒素保护性抗原中和性表位的研究》一文中研究指出本研究拟利用炭疽毒素保护性抗原(PA)的中和性单克隆抗体,结合毒素的结构和功能研究,确定PA的主要中和性表位,分析中和性表位与毒素作用分子机理的关系,观察这些表位在疫苗免疫过程中的意义。研究中用rPA免疫BALB/c小鼠,进行杂交瘤细胞融合和筛选,获得了9株具有中和活性的单克隆抗体。利用PA不同结构域重组蛋白进行western blot以及竞争抑制ELISA实验,发现这9株中和性单抗分别识别PA3个结构域的5个不同中和表位区,其中3株中和活性强于抗PA多抗的单抗均识别PA结构域2。结果表明PA具有多个中和表位,分别位于其不同结构域,其中结构域2、4包含主要中和表位。虽然无法与国外获得的单抗的中和活性进行直接比较,但与抗PA多抗的比较结果表明本研究获得的针对结构域2的单抗5E12、2A8、5E1具有较强的中和活性,不仅强于抗PA多抗,也强于其他中和性单抗,并且能够保护Fisher344大鼠免受毒素的攻击,这再次提示结构域2包含PA的重要中和性表位。首先对结合于PA结构域2同一个表位区并且中和活性比较高的叁株单抗5E1、2A8和5E12使用NEB公司的线性12肽库和环7肽库进行了筛选,结果得到了一致性的序列“SFFD”,这与PA中312-315位氨基酸完全一致。这段序列位于PA结构域2的2β_2-2β_3 loop之中,并且是胰凝乳蛋白酶的识别位点。针对这一特性设计了蛋白酶切实验,蛋白酶切保护实验,并且构建了“SFFD”缺失的突变体。进一步证实了“SFFD”是这3株单抗识别的关键氨基酸位点。在动物免疫试验中,以筛选到的特异性的噬菌体克隆作为抗原,结果发现,在小鼠体内能产生针对PA的抗体,进一步证明该表位的特异性。但获得的抗体未显示明显的毒素中和活性,分析可能于表位序列较短,免疫原性差有关。以上的研究结果显示PA结构域2的2β_2-2β_3 loop中存在一个主要的中和性表位。在毒素作用的过程中,PA domain2的主要功能是形成跨膜孔道,为LF和EF进入胞质提供途径。在由prepore到pore的转变过程中,PA domain2的2β_2-2β_3 loop起着重要的作用,它从单体中的无序结构变成一个跨膜的β折叠结构。在PA七聚体形成过程中,2β_2-2β_3 loop伸到单体结构外,与邻近单体的domain2和4相互作用,这种作用可能对七聚体的稳定性有着一定的作用。利用软件Accelrys Discovery Stdio分析,单抗5E1识别的表位“SFFD”正好位于2β_2-2β_3 loop的中间位置,通过分析与表位序列相距7A的邻近PA单体的氨基酸位点发现,邻近PA单体的410、414、496、498、633、637、668、670、672、673位氨基酸与该表位可能存在着相互作用,这包含了与2β_2-2β_3 loop邻近的氨基酸,这一结果也证明2β_2-2β_3 loop在毒素作用过程中起的作用,可能全部或大部分由312-315位氨基酸来完成。同时单抗5E1能够抑制SDS-resistant七聚体的形成也证明这一中和性表位,在PA由prepore到pore的转变过程中起着重要的作用。很多研究表明rPA为基础的新型疫苗能够激起保护性免疫。本研究利用rPA疫苗作为免疫原,免疫动物。观察在疫苗免疫状态下,该中和性表位激发机体免疫应答,诱导PA特异性抗体、表位特异性抗体及中和性抗体产生的变化特点及规律。结果显示,在两种动物模型中,抗PA特异性抗体与中和性抗体的滴度变化趋势基本一致,不同的是在豚鼠模型中中和性抗体滴度在加强免疫后才开始升高。对于表位特异性抗体,在小鼠模型中,出现的时间晚,升高的速度慢。而在豚鼠模型中,它的变化趋势与抗PA特异性抗体基本一致,出现早,升高快,与中和性抗体滴度的变化也一致。同样对单抗4D10也利用噬菌体随机肽库对其表位进行筛选,结果获得一致序列“NETNI”,这段序列与PA结构域3的570-574位“NATNI”基本一致。同时采取了表达PA截断突变体,分别与单抗结合的方法,确定556-579位氨基酸间包含4D10结合的位点,这与肽库筛选的结果吻合。根据肽库筛选的结果构建缺失突变体PAdelNATNI,PAdelTNI,PAdelI,结果发现其中只有PAdelI能够与4D10呈微弱结合。进一步验证“NATNI”是这株单抗识别的关键氨基酸位点。本研究中并没有发现这株单抗在毒素作用过程中具体干涉的步骤,但是单抗协同实验的结果表明它能够增强其他单抗的中和活性。利用软件Accelrys Discovery Stdio对该表位在PA prepore晶体结构中的位置进行分析。结果显示,与表位序列相距7A的氨基酸均位于自身单体结构中,主要分布在548-581位氨基酸之间。说明该表位较独立与其他结构域无明显关系。虽然并没有找到有效的方法验证这种协同作用的原因,但是单抗协同实验的结果说明4D10所识别的表位在毒素作用过程中确实有着一定的意义。针对PA结构域4的单抗选择中和活性较高的4B2进行了噬菌体随机肽库筛选。结果获得了一致性的序列“PLYISN#N”,这与PA中686-693位氨基酸“PLYISNPN”基本一致。为了进一步证实,于是用表达不同长度的PA截断突变体,分析单抗的结合位点,结果发现所有的截断突变体都不能与单抗4B2结合,这与之前噬菌体随机肽库筛选结果并不一致,说明这株单抗的识别表位也存在构象部分。根据噬菌体筛选结果设计了缺失突变体PAdelPL,PAdelYI,PAdelSNPN,进一步分析突变体的单抗结合活性,结果显示686-689位氨基酸“PLYI”是两种单抗结合表位的关键氨基酸,而690-693位氨基酸“SNPN”仅是单抗4B2识别表位的关键位点。国内外的研究表明PA的682N和683D在PA与受体的结合中起着至关重要的作用,因此利用实验室已经构建的突变体PAD683A,PAD683N,PAN682D,PAN683A,检测其单抗结合活性,结果发现PAN682D和PAN683A均不能和单抗482、4F12结合,由此推断682位氨基酸可能是这两株单抗结合表位的关键位点。因此推测PA结构域4的4β_8-4β_9 loop中也存在一个主要的中和性表位。通过PA与受体结合实验证实识别结构域4的单抗482和4F12能够抑制PA与受体的结合,切断了毒素致病途径中的起点。从PA的晶体结构来看,PA domain4是一个相对独立的球状实体,与其他结构域的相互作用较少。目前已经明确PA domain4的4β_8-4β_9 loop在PA与受体结合的过程中起至关重要的作用,因此可以推断该中和性表位在毒素作用的起始步骤中有着重要的意义。本研究获得了多株针对PA不同结构域的中和性单抗,一方面可以发展成为抗毒素药物,另一方面也为研究毒素作用机理提供了有力工具;在PA结构域2、3、4均存在优势中和性表位,分析表明这些中和性表位与毒素作用机制密切相关;探讨了中和性表位特异性抗体的动态变化对PA保护性免疫的意义,为发展新型疫苗(表位疫苗)提供了依据。(本文来源于《中国人民解放军军事医学科学院》期刊2008-05-27）
任声权,易绍琼,于婷,杨秀旭,刘树玲[4]（2008）在《炭疽毒素保护性抗原的不同结构域对其表达可溶性的影响》一文中研究指出目的:对炭疽毒素保护性抗原(PA)的不同结构域进行了缺失突变,以期找到免疫原性降低而功能变化不大的PA蛋白突变体。方法:在对PA结构域的缺失突变体进行表达时,意外发现不同的突变体表达效果之间存在很大差异,遂用DNAStar软件对PA的4个结构域和突变体进行分析。结果:PA蛋白结构域2的表面特性与其他结构域存在很大差异。结论:推断这种表面特性影响了PA突变体的可溶性特征。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2008年02期）
赵剑,徐俊杰,陈薇[5]（2006）在《炭疽毒素受体及其与保护性抗原结合机制的研究进展》一文中研究指出本文阐述了炭疽毒素的细胞表面受体研究及其与保护性抗原结合分子机制等方面的进展。到目前为止,共发现两种炭疽毒素受体,分别由TEM8和CMG2基因编码。炭疽毒素受体的发现和鉴定对炭疽的病理学研究具有重要的意义,而且体外实验发现的受体与毒素的高亲和力也为受体本身作为炭疽的治疗剂带来了希望。CMG2和PA结合状态晶体结构的解析使我们能够对毒素进入细胞质过程的分子细节有所推论。所建立的理论模型为研究其他类型穿透细胞膜发挥作用的毒素的作用过程提供了重要的参考。(本文来源于《军事医学科学院院刊》期刊2006年01期）
余燕,孙志伟,沈应柏,俞炜源,陈学英[6]（2005）在《炭疽毒素保护性抗原第四结构域在大肠杆菌中的可溶性表达》一文中研究指出人工优化设计并合成炭疽毒素保护性抗原第四结构域基因,并与噬菌体gⅢ蛋白N端结构域基因融合,在大肠杆菌中可溶性表达融合蛋白。结果表明合成了炭疽毒素保护性抗原第四结构域基因,并在大肠杆菌中获得了高效可溶性融合表达,可溶性表达产物占细菌总蛋白量的36%左右;经亲和层析纯化获得了重组蛋白;Western印迹分析表明,表达产物能与His单抗(重组蛋白羧基端带有6×His)发生特异性结合反应。以上结果表明获得了炭疽毒素保护性抗原第四结构域,为利用人抗体库进行筛选抗炭疽毒素的人源性中和抗体奠定了基础。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2005年04期）
杜佩英[7]（1999）在《免疫接种编码炭疽保护性抗原的DNA质粒能抵御炭疽毒素攻击》一文中研究指出炭疽杆菌能造成人畜共同感染。炭疽毒素由3种成分组成,其中炭疽保护性抗原（PA）能与靶细胞结合,其抗体可抗御感染。目前批准上市的炭疽菌苗是由PA吸附至Al(OH）_3;而构成的,需在18个月内多次免疫接种,随后再每年加强,此接种程序常使部分接种者产生局部不良反应。本文旨在研究一种能编码PA的DNA疫苗,探察其诱发抗炭疽毒素抗体的可能性。(本文来源于《国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册》期刊1999年05期）
炭疽毒素保护性抗原论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:建立检测炭疽毒素保护性抗原(PA)与靶细胞受体(ATR)结合能力的Binding-ELISA方法,并对两者结合特征进行分析。方法:以ELISA实验为基础,建立PA与ATR结合的体外模型,并对实验中的反应条件进行优化。采用Binding-ELISA方法,通过测定不同包被蛋白、不同二价阳离子条件下的D450以及相对饱和度等参数,分析PA与两种ATR的结合特征。结果与结论:以重组PA作为包被抗原时灵敏度更高,包被浓度为2μg/ml;二价阳离子浓度为5 mmol/L。两种受体与PA的亲和力不同,其中CMG2与PA的结合能力更强;并且两者与PA结合时离子依赖特征不同,PA与TEM8的结合能力在Mn2+存在时最强,PA与CMG2的结合能力在Ca2+存在时最强。这一结果与国外报道相符,进一步说明Binding-ELISA方法用于定性分析炭疽毒素与其受体结合能力的可行性,为评价以抑制PA与ATR结合为靶点的毒素抑制剂提供了有效的手段。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
炭疽毒素保护性抗原论文参考文献
[1].吕洪臻,唐小军,熊四平,徐鑫,郑峰.抗炭疽毒素保护性抗原单克隆抗体的制备及功能分析[J].南京医科大学学报(自然科学版).2013
[2].张军,赵剑,董大勇,宋小红,徐俊杰.炭疽保护性抗原与炭疽毒素受体结合特征分析[J].军事医学科学院院刊.2008
[3].张军.炭疽毒素保护性抗原中和性表位的研究[D].中国人民解放军军事医学科学院.2008
[4].任声权,易绍琼,于婷,杨秀旭,刘树玲.炭疽毒素保护性抗原的不同结构域对其表达可溶性的影响[J].生物技术通讯.2008
[5].赵剑,徐俊杰,陈薇.炭疽毒素受体及其与保护性抗原结合机制的研究进展[J].军事医学科学院院刊.2006
[6].余燕,孙志伟,沈应柏,俞炜源,陈学英.炭疽毒素保护性抗原第四结构域在大肠杆菌中的可溶性表达[J].生物技术通讯.2005
[7].杜佩英.免疫接种编码炭疽保护性抗原的DNA质粒能抵御炭疽毒素攻击[J].国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册.1999