导读:本文包含了细胞培养同位素标记技术论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:稳定同位素,副溶血性弧菌,迟钝爱德华氏菌,蛋白质组
细胞培养同位素标记技术论文文献综述
马维兴[1]（2018）在《稳定同位素标记氨基酸细胞培养技术在冷激细菌定量蛋白质组学的应用研究》一文中研究指出本课题用相对定量蛋白质组学的方法,对经过2周冷激后的副溶血性弧菌和迟钝爱德华氏菌的蛋白质组发生的具体变化进行比对,并对变化可能产生的潜在危害从定量蛋白质组学的层面进行分析。使用的技术是稳定同位素标记氨基酸细胞培养技术结合高分辨同位素比质谱(SILAC-MS),与传统化学方法或非标记方法相比,SILAC-MS最大限度地降低了误差,结果更加精确。同时用mRNA水平定量分析和基因时间过程表达分析作为定量蛋白质组分析的辅助认证手段。另外,对细胞低温损伤修复也进行了研究,并尝试开发稳定同位素标记培养基的最优配方。副溶血性弧菌的定量蛋白质组分析中,共鉴定1182个蛋白质,其中定量601个蛋白质(根据表达变化大于50%的规则,51个蛋白质表达明显上调,129个蛋白质表达明显下调)。其中过氧化氢酶、芳香族氨基酸氨基转移酶和16S rRNA甲基转移酶上调表达排前叁位,但同时发现其对应的基因表达与蛋白质表达出现变化不一致的情况。谷氨酰胺合成酶、天冬酰胺合成酶、多核苷酸磷酸化酶以及与磷酸戊糖途径相关的一些关键酶类冷激后表达都发生了上调,磷酸葡萄糖转移酶系统活跃。而与DNA合成、糖酵解、叁羧酸循环、转录和翻译相关的蛋白质表达下调。并发现冷激后副溶血性弧菌血清学反应异常。迟钝爱德华氏菌的定量蛋白质组分析中,共鉴定1391个蛋白质,其中定量898个蛋白质(根据表达变化大于50%的规则,72个蛋白质表达明显上调,164个蛋白质表达明显下调)。即使迟钝爱德华氏菌不是嗜冷菌,但是与DNA合成(DNA回旋酶、ATP合酶、DNA拓扑异构酶和DNA错配修复蛋白)、转录(RNA聚合酶和转录修复偶联因子)、糖酵解(果糖1,6-二磷酸酶和3-磷酸甘油醛脱氢酶)、乙醛酸循环(乙醛酸羟基丙酮还原酶)、毒力(氢化酶、乳酸通透酶和外膜蛋白A)和抗逆性(DNA饥饿/固定相保护蛋白和通用应激蛋白)相关蛋白质发生了明显上调;即使本研究中的迟钝爱德华氏菌ATCC 15947在水产行业中是不致病或条件致病菌,但是与溶血素激活(对哺乳动物有致病性)和糖异生相关的蛋白质依然发生了明显的上调。另外,膜蛋白中的氨基酸组成也因低温而发生了改变。根据质谱结果,副溶血性弧菌和迟钝爱德华氏菌在长时间冷激之后,与菌体的抗逆性提升和菌体自我环境适应能力提升的蛋白质表达都会上调,我们认为这些蛋白质的上调与造成水产品和人类健康的潜在风险应该具有一定的关联性。多数下调的蛋白质,都能达到使菌体能量储存和自我保护的目的,从而应对不利的外界环境。本研究通过蛋白质组相对定量手段,呈现了经冷激后的副溶血性弧菌和迟钝爱德华氏菌的蛋白质组发生的具体变化倍数,并对变化可能产生的潜在风险从蛋白质组水平上进行了初步分析,为今后的蛋白质组分析提供参考依据。细胞低温损伤修复时,TCBC(选择性培养基)中加入丙酮酸盐可以增强副溶血性弧菌修复能力,丙酮酸盐浓度为0.5%时,修复效率最高,达到52%;在TSA(非选择性培养基)中加入过氧化氢酶可以增强迟钝爱德华氏菌修复能力,过氧化氢酶浓度为50 U/mL时,修复效率最高,达到26%。稳定同位素培养基研制时,两种菌都以(NH_4)_2SO_4和NH_4Cl作为唯一氮源,葡萄糖和乙酸钠作为碳源,其他成分包括KH_2PO_4、K_2HPO_4、MgSO_4和NaCl保持不变,设计五因素四水平正交试验。通过直观分析、方差分析和效应曲线发现:副溶血性弧菌最优配方是3 g/L(NH_4)_2SO_4、2 g/L NH_4Cl和10 g/L葡萄糖,~(15)N标记培养基和未做标记培养基为2 g/L NH_4Cl、10 g/L葡萄糖、0.6 g/L KH_2PO_4、0.9g/L K_2HPO_4、0.2 g/L MgSO_4和20 g/L NaCl;迟钝爱德华氏菌最优配方是3 g/L(NH_4)_2SO_4,3 g/L NH_4Cl和10 g/L葡萄糖,~(15)N标记培养基和未做标记培养基为3g/L(NH_4)_2SO_4或3 g/L NH_4Cl、10 g/L葡萄糖、0.6 g/L KH_2PO_4、0.9 g/L K_2HPO_4、0.2 g/L MgSO_4和20 g/L NaCl。(本文来源于《青岛科技大学》期刊2018-11-29）
朱丽,刘安,杨洪军,陈畅,李德凤[2]（2012）在《细胞培养稳定同位素标记技术的发展及其在脑病研究中的应用》一文中研究指出寻找脑中特异的蛋白标记物,对于脑病临床诊断及药物机制研究至关重要。人脑是一个复杂的有机体,采用单靶点、非动态、局部的方法不适于脑病研究,而以质谱技术为基础的定量蛋白质组学的出现和发展,加快了脑病标志分子的研究进程。细胞培养稳定同位素标记技术(SILAC)作为精确的蛋白定量方法,是系统、动态的研究方法,为脑病机制和治疗脑病中药的研究提供了新的思路。(本文来源于《中国药理学通报》期刊2012年07期）
沈国波,徐玉环,龚凤鸣,梁淑芳[3]（2009）在《细胞培养稳定同位素标记技术在蛋白质组学中的应用与进展》一文中研究指出细胞培养稳定同位素标记技术(SILAC)是在细胞培养过程中,利用稳定同位素标记的氨基酸结合质谱技术,对蛋白表达进行定量分析的一种新技术。它不仅可以对蛋白质进行定性分析,还可通过质谱图上一对轻-重稳定同位素峰的比例来反映对应蛋白在不同状态下的表达水平,实现对蛋白质的精确定量。SILAC结合质谱技术在定量蛋白质组学中发挥了巨大的作用,其应用范围从细胞系扩展到亚细胞器、组织与动物整体水平,具体的应用策略也在不断完善发展。我们总结评述了SILAC技术在差异表达蛋白质组、蛋白质翻译后修饰、药物蛋白质组和蛋白质相互作用等方面的应用与进展。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2009年02期）
高红军,孙玉琳,赵晓航[4]（2007）在《细胞培养稳定同位素标记技术与肿瘤标志分子研究》一文中研究指出以质谱为基础的定量蛋白质组学分析技术的发展,大大加快了肿瘤标志分子的研究进程。细胞培养稳定同位素标记技术,已成为目前定量蛋白质组学的主要策略之一,它将不同来源或不同状态的细胞分别培养于含轻/重型稳定同位素标记必需氨基酸的培养基中,经过若干次细胞倍增后,稳定同位素按照序列特异的方式,完全掺入到新合成的蛋白质中。通过比较标记前后同一肽段的质谱峰值变化,可以实现对蛋白质的精确定量。它具有样本需求量少、简单、直接、高效及定量准确等特点,不仅可以定性和定量地分析差异表达蛋白质,而且可以分析蛋白质翻译后修饰和蛋白质相互作用,已逐渐成为研究差异蛋白质组的重要工具之一,在肿瘤分子标志研究中发挥重要作用。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2007年02期）
细胞培养同位素标记技术论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
寻找脑中特异的蛋白标记物,对于脑病临床诊断及药物机制研究至关重要。人脑是一个复杂的有机体,采用单靶点、非动态、局部的方法不适于脑病研究,而以质谱技术为基础的定量蛋白质组学的出现和发展,加快了脑病标志分子的研究进程。细胞培养稳定同位素标记技术(SILAC)作为精确的蛋白定量方法,是系统、动态的研究方法,为脑病机制和治疗脑病中药的研究提供了新的思路。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞培养同位素标记技术论文参考文献
[1].马维兴.稳定同位素标记氨基酸细胞培养技术在冷激细菌定量蛋白质组学的应用研究[D].青岛科技大学.2018
[2].朱丽,刘安,杨洪军,陈畅,李德凤.细胞培养稳定同位素标记技术的发展及其在脑病研究中的应用[J].中国药理学通报.2012
[3].沈国波,徐玉环,龚凤鸣,梁淑芳.细胞培养稳定同位素标记技术在蛋白质组学中的应用与进展[J].生物技术通讯.2009
[4].高红军,孙玉琳,赵晓航.细胞培养稳定同位素标记技术与肿瘤标志分子研究[J].基础医学与临床.2007