李林丰夏勤刘智(四川遂宁市中心医院病理科629000)
【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）03-0192-01
HE染色中的显蓝又称返蓝、促蓝、变蓝，是指用苏木将染色的组织切片经分化液分化后，其颜色由原来的深蓝色变成粉红色，再用弱碱性水溶液处理，使其由浅色变为有的蓝色，苏木素染色这一显蓝过程是HE染色所必需的，显蓝处理恰当，核才能呈现出鲜艳的蓝色，核膜及染色质形态结构清楚，而且利于下一步用伊红将胞浆染成艳丽的颜色。现将使用过的几种显蓝方法和体会介绍如下：
1、材料和方法
1.1材料收集遂宁市人民病理科常规石蜡切片200例，随机抽样将标本分为5组。
1.2试剂①氢氧化铵（氨水）;②碳酸锂;③碳酸氢钾;④硫酸镁;⑤PBS（即用型）购自基团公司;⑥HE染色常用试剂苏木素伊红=甲苯、乙醇。
①和②逐滴加入蒸馏水中，经搅拌后，用PH试纸检验溶液，调值PH7.5—8.0左右配成氢氧化铵水溶液及碳酸锂水溶液，碳酸锂银1g硫酸镁10g蒸馏水500ml混匀配制为SCOTT氏促蓝液。
1.3方法①石蜡切片3-4mm脱蜡至水;②苏木素染色2min水洗;③1%盐酸乙醇分化数秒水洗;④使用5种不同的方法进行显蓝;⑤伊红1mm水洗;⑥梯度乙醇脱水;⑦二甲苯透明;⑧中性树胶封固。
1.4结果判定显微镜下观察，细胞核与细胞质染色对比是否清晰，颜色是否鲜艳。
2、结果
5种方法中PBS（即磷酸盐缓冲液）效果及效率最佳，不易脱片，层次分明，细胞核蓝色鲜艳，核膜及染色质形态结构特点清楚，核浆对比度明显。
3、讨论
在HE染色中，因为明矾苏木精染液的性质是在酸性溶液中颜色变浅，在碱性环境中才能显色，显蓝的目的不仅是为了确定苏木精染色程度和确定分化是否恰当，同时还能增强染色的强度，使苏木精色淀与组织中该着色部分结合得更加牢固。因此，经苏木精染色后的组织切片，应先用流动的自来水冲洗，以洗去残有的染液和浮色，增强已着染的颜色强度，经分化液分化后再充分水洗，为了促使及早显蓝，可用PH7-8弱碱性水溶液处理。常用的方法是氢氧化铵水溶液及碳酸锂水溶液，SCOTT氏促蓝液，以上方法配制相对复杂，且PH值不能达到理想效果，显蓝液的碱性过强易使切片脱落，甚至拒染伊红，有时虽能染上色但切片不能久存，易褪色，显蓝不足时，核的形态特点不清楚，复染伊红后变得模糊。自来水偏碱性，长时间的流动自动水冲洗，也能达到显蓝的目的，但受时间和条件的限制，在实际工作中也较少使用。在临床工作中，这几种返蓝液均出现个别脱片现象，尤其像脱钙后的骨组织，平滑肌组织及甲状腺等纤维成分或脂肪成为多的组织更甚。0.01mol/LPBS由磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、Nacl及蒸馏水组成，PH值在7.2—7.4之间，能够对抗外来少量强酸或少量强碱，不易引起溶液PH值改变，PBS还具有缓冲作用，缓冲1%乙醇分化后形成的少量强酸的作用，从而起到蓝化细胞核的作用，而且PBS为一种盐PH值稳定，不易引起组织脱落，可长期反复使用且防脱片效果好，在工作中观察优于其它几种方法，效率较高，适合临床工作的使用。
参考文献
[1]张哲，宋辉.实用病理组织染色技术.1987.11.
[2]王永军.刘世正.等常规HE染色中蓝化方法的改进.（诊断病理学杂志）2005，12（6）.475-476.