导读:本文包含了法尼基焦磷酸合成酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人参,法尼基焦磷酸合成酶,生物信息技术,人参皂苷
法尼基焦磷酸合成酶论文文献综述
杨林林,杨利民,马秀杰,韩梅[1]（2017）在《人参法尼基焦磷酸合成酶基因的表达及其与皂苷含量的关系》一文中研究指出以五年生人参根组织为试验材料,克隆得到人参法尼基焦磷酸合成酶(FPS)基因。通过生物信息技术对其氨基酸序列进行比对,使用MEGA5.1构建人参与相关物种的FPS系统进化树,运用实时荧光定量PCR方法检测FPS基因在不同生长时期的表达量,用高效液相色谱法测定根中8种单体皂苷含量,进行相关性分析。结果显示:人参FPS基因c DNA大小为1 134 bp,含有一个开放阅读框,编码342个氨基酸。FPS编码蛋白相对分子质量为39 567,等电点为5.83,不含信号肽,无跨膜区。二级结构中主要为α-螺旋,占58.19%。同源性分析显示,FPS基因与西洋参(ADJ68004)、叁七(AGS79228)核苷酸序列相似性为99%。实时荧光定量PCR结果显示,FPS基因在人参各生长时期中,以展叶期表达量最高。相关性分析表明,FPS基因的表达与Rb3含量显着正相关(P<0.05),与叁醇型皂苷含量呈正相关,但相关性不显着。(本文来源于《吉林农业大学学报》期刊2017年06期）
赵晨泽[2]（2017）在《体内抑制法尼基焦磷酸合成酶可以改善压力超负荷诱导的心脏重塑》一文中研究指出第一部分体内抑制法尼基焦磷酸合成酶可以改善压力超负荷诱导的心脏重塑研究背景:法尼基焦磷酸合成酶(FPPS)是甲羟戊酸途径中一个重要的分支酶。作为胆固醇合成的中间步骤,FPPS催化C5单位的异戊烯焦磷酸(IPP)和其同分异构体二甲基烯丙基焦磷酸(DMAPP)连续缩合,生成10C单位的牻牛儿基焦磷酸(GPP)和15C单位的法尼基焦磷酸(FPP)。FPP不仅是合成胆固醇和辅酶Q的重要底物,也是众多小G蛋白法尼基化修饰的法尼基来源。已有研究表明抑制FPPS可以改善AngII诱导的心脏重塑,而压力超负荷诱导的高血压大鼠模型中FPPS和部分小G蛋白表达升高。我们通过基因干扰技术抑制小鼠FPPS表达,探索FPPS在压力超负荷诱导的心脏重塑中的效应以及作用机制。目的:通过基因干扰技术抑制小鼠FPPS表达,探索FPPS在压力超负荷诱导的心脏重塑中的效应以及作用机制。方法:(1)设计若干FPPS短发夹RNA序列,慢病毒包装感染小鼠原代心肌细胞。用免疫蛋白印迹法验证每一个序列的干扰效率。(2)筛选出FPPS基因干扰效率高的序列,将对应序列的慢病毒显微注射到小鼠胚胎细胞。(3)筛选含有干扰序列的阳性转基因小鼠,验证小鼠心脏组织FPPS干扰效率。同时鉴定子代阳性小鼠的FPPS干扰效率,确保其干扰效率能稳定遗传到子代。(4)将F3代雄性FPPS干扰转基因雄鼠和非转基因同窝对照雄鼠随机分为手术组和假手术组。用腹主动脉缩窄术建立压力超负荷模型。(5)术后12周,测量小鼠的心脏功能,尾动脉血压。(6)组织病理学分析心肌细胞大小和心肌纤维化水平。(7)免疫蛋白印迹法测量FPPS蛋白及其通路下游蛋白水平变化。(8)G-LISA法测量Ras,RhoA,Rac1和CDC42活性。(9)荧光定量PCR法测量心脏胚胎基因的表达。结果:(1)pLVT202序列可以抑制心肌细胞FPPS表达。(2)成功构建了 FPPS干扰的转基因小鼠,其心脏组织FPPS干扰效率约为50%。其子代转基因小鼠均能稳定干扰FPPS表达,转基因小鼠较同窝野生型小鼠表达量降低了 50%。(3)成功构建了腹主动脉缩窄术引起的小鼠压力超负荷模型。术后12周,小鼠心脏明显扩大,心肌细胞肥厚,心肌纤维化明显。(4)术后12周时,干扰FPPS表达可以降低压力超负荷引起的心力衰竭指标升高水平、减少心肌细胞肥厚水平和心肌纤维化水平,同时提高射血分数。(5)术后12周时,干扰FPPS可以降低压力超负荷引起的Ras蛋白的活化和ERK1/2磷酸化升高,但并不能抑制活化RhoA水平的升高。结论:干扰FPPS表达可以部分改善压力超负荷引起的心力衰竭、心肌细胞肥厚和心肌纤维化。其机制可能是降低Ras蛋白的活化水平,进而降低ERK1/2磷酸化水平,抑制心肌细胞增殖和纤维化。第二部分构建心肌细胞条件性法尼基焦磷酸合成酶基因敲除小鼠研究背景:法尼基焦磷酸合成酶(FPPS)是甲羟戊酸途径中一个重要的分支酶。作为胆固醇合成的中间步骤,FPPS催化C5单位的异戊烯焦磷酸(IPP)和其同分异构体二甲基烯丙基焦磷酸(DMAPP)连续缩合,生成10C单位的牻牛儿基焦磷酸(GPP)和15C单位的法尼基焦磷酸(FPP)。FPP不仅是合成胆固醇和辅酶Q的重要底物,也是众多小G蛋白法尼基化修饰的法尼基来源。基因敲除小鼠模型被认为是很好的研究基因功能的模型,而目前并没有FPPS基因敲除小鼠模型的参考文献。因此,为了更深入的研究FPPS基因在心脏重塑病理中的作用,我们构建心肌细胞条件性法尼基焦磷酸合成酶基因敲除小鼠模型。目的:构建心肌细胞条件性法尼基焦磷酸合成酶基因敲除小鼠模型。方法:(1)设计并构建FPPS条件性基因敲除打靶载体质粒。(2)ES细胞电穿孔转移线性化质粒,筛选序列正确的阳性克隆,移植胚胎。(3)鉴定嵌合体小鼠,繁殖获得FPPS-Flox纯合子小鼠。(4)繁殖获得与心肌特异性表达Cre重组酶的Myh6-MerCreMer的FPPSfl/flCre+/-小鼠。腹腔注射他莫昔芬后验证心肌组织特异性敲除FPPS的效率。结果:(1)成功获得了 FPPS-Flox纯合子小鼠和心肌特异性表达Cre重组酶的Myh6-MerCreMer 的 FPPSfl/flCre+/-小鼠。(2)腹腔注射他莫昔芬后8周,小鼠心肌组织FPPS表达降低了约80%。结论:我们成功构建了心肌细胞条件性法尼基焦磷酸合成酶基因敲除小鼠模型。(本文来源于《浙江大学》期刊2017-04-01）
徐唯玮,胡申江[3]（2015）在《法尼基焦磷酸合成酶抑制剂改善心肌肥厚并影响连接蛋白重塑》一文中研究指出研究背景肥厚型心肌病心肌肥厚是心脏疾病中的一种病理改变,其可能与机体过度激活的神经内分泌体系和内环境失稳密切相关。心肌持续而过度的肥厚反应将最终导致心脏功能减退及慢性充血性心力衰竭。在心衰形成的整个过程中,心脏重构是一个动态发展的过程,其间涉及到细胞凋亡、纤维化、脂肪堆积、线粒体异常、离子通道改变及信号转导通路的变化等。以往的研究表明,法尼基焦磷酸合成酶(famesyl pyrophosphate synthase,FPPS)是甲羟戊酸途径中的一种关键酶,其催化合成下游产物法尼基焦磷酸(Farnesyl pyrophosphate,FPP)和牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸(Geranylgeranyl pyrophosphat,GGPP)所参与的信号转导通路直接参与心肌肥厚及心脏重构的发生。心肌细胞的纤维化是心脏重构中及其重要的特征,但其他如肌钙蛋白、缝隙连接蛋白等的变化也间接地反应了心肌重构的程度与趋势。目的探讨法尼基焦磷酸合成酶抑制剂在腹主动脉缩窄术所致心肌肥厚的动物模型中心肌重构的影响与作用。方法 1.腹主动脉缩窄术建立心肌肥厚大鼠模型并观察手术效果;2.将腹主动脉缩窄术后雄性SD大鼠随机分为3组:腹主动脉缩窄术组、腹主动脉缩窄术加药物组和假手术对照组。分别给予生理盐水10mg/kg/day或阿伦磷酸钠10mg/kg/day灌胃维持3、5、8周。3.运用超声、血流动力学等手段检测大鼠组织形态学变化;4.胫骨尺测量大鼠左侧胫骨长度;5.高效液相色谱法(HPLC)技术对大鼠心肌组织中FPP和GGPP含量进行检测;6.用BNP检测试剂盒检测大鼠血液样本中的BNP含量;7.对大鼠心肌组织切片染色并对Ⅰ型纤维胶原蛋白(Col-I)、T型肌钙蛋白(t-TnT)及缝隙连接蛋白(cx43)等进行免疫组化分析。结果 1.腹主动脉缩窄术导致大鼠心肌肥厚并增加心肌组织中FPP及GGPP的含量;2.FPPS抑制剂可部分改善心肌肥厚表现,同时心肌组织中FPP及GGPP含量下降;3.心肌肥厚中大鼠胫骨长度及血BNP水平无明显变化;4.心肌重构中心肌纤维化、肌钙蛋白及缝隙连接蛋白等发生改变,抑制FPPS可以部分逆转这种重构表现。结论 FPPS参与了心肌肥厚及重塑的发生、发展;抑制FPPS的活性可以部分改善心肌肥厚。(本文来源于《2015年浙江省心电生理与起搏学术年会论文汇编》期刊2015-06-25）
徐唯玮,胡申江[4]（2015）在《法尼基焦磷酸合成酶抑制剂阿伦磷酸钠对心肌肥厚大鼠中RhoA通路影响的研究》一文中研究指出研究背景心脏重塑是心肌肥厚发生与发展中重要的病理过程,并以心力衰竭为最终结局。很多研究表明被激活的RhoA/ROCK通路及其相关蛋白会介导心肌肥厚及细胞凋亡的发生。Rho激酶属于小G蛋白(蛋白激酶A,G,C)家族的丝氨酸/苏氨酸激酶,可以通过其下游靶效应分子,进一步调节ROCK,这些蛋白的调节可以对细胞收缩、黏附、迁移和增殖等多种生物学行为产生影响。而已知的事实是,RhoA/Rock信号通路在心室重塑过程中起着上调炎性细胞因子,抑制心肌收缩,促进心肌肥大与凋亡等作用。研究表明,阿伦磷酸钠是经典的FPPS抑制剂,其通过抑制FPP、GGPP的生成进而影响RhoA/Rock信号通路的转导达到改善心肌肥厚及纤维化等的病理过程。法尼基焦磷酸合成酶(FPPS)可能是治疗心肌肥厚和改善心脏重构的新思路。目的探讨FPPS抑制剂在改善心肌肥厚及重塑时可能的RhoA通路机制。方法 1.腹主动脉缩窄术建立心肌肥厚大鼠模型;2.将雄性SD大鼠分为3组:腹主动脉缩窄术组、腹主动脉缩窄术加药物组和假手术对照组。分别给予生理盐水10mg/kg/day或阿伦磷酸钠10mg/kg/day灌胃维持3、5、8周。3.运用超声、血流动力学等手段检测大鼠的组织形态学变化;4.高效液相色谱法(HPLC)技术对大鼠心肌组织中FPP和GGPP含量进行检测;5.RhoA试剂盒测定心肌组织中RhoA在490nm处的OD值;6.免役蛋白印记检测心肌组织中FDPS、RhoA及p-ERK1/2的蛋白含量。结果 1.抑制FPPS可改善心肌肥厚及心脏重塑;2.抑制FPPS可降低心肌组织中FPP、GGPP含量;3.抑制FPPS可降低心肌组织中RhoA含量;4.抑制FPPS可通过抑制RhoA相关通路的蛋白活性抑制心肌肥厚与心脏重塑。结论抑制FPPS可通过抑制RhoA通路上蛋白的表达从而改善心肌肥厚及心脏重塑;FPPS抑制剂可能是治疗心肌肥厚的新思路。(本文来源于《2015年浙江省心电生理与起搏学术年会论文汇编》期刊2015-06-25）
杜常青,刘小伟,曾广忠,金红峰,黄敬桓[5]（2015）在《抑制法尼基焦磷酸合成酶改善2型糖尿病大鼠左心室重构与心脏功能》一文中研究指出目的探讨抑制法尼基焦磷酸合成酶对改善2型糖尿病大鼠左心室重构与心功能的影响。方法采用高脂高糖饮食加一次性腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ 30mg/kg)建立2型糖尿病模型。健康雄性SD大鼠30只随机分成正常对照组(control组,n=10)、糖尿病组(DM组,n=10)、糖尿病+伊班膦酸钠组(DM+IB组,n=10)。建模成功后DM+IB组SD大鼠连续16周每天皮下注射5微克/千克剂量伊班膦酸钠溶液,control和DM组大鼠在相同位置注射相等剂量的0.9%氯化钠注射液。实验21周后分别对3组SD大鼠行心脏超声和血流动力学测定,HE染色观察心肌细胞形态横截面大小,Masson复合染色检测心肌组织胶原纤维沉积程度。结果与对照组相比,DM组大鼠左心室内径增大、室间隔及左心室后壁显着增厚、心功能降低、心肌细胞明显肥大、心肌间质及心肌血管周围胶原纤维沉积显着增多(P<0.01);DM+IB组大鼠虽出现上述结构及功能改变,但与DM组相比上述情况均有明显改善(P<0.05)。结论抑制法尼基焦磷酸合成酶在一定程度上可改善糖尿病心肌病大鼠左室重构与心脏功能。(本文来源于《心脑血管病防治》期刊2015年03期）
赵旭明[6]（2015）在《抑制法尼基焦磷酸合成酶改善心脏重塑作用的研究》一文中研究指出第一部分:法尼基焦磷酸合成酶抑制剂改善心肌肥厚并影响连接蛋白重塑研究背景:心肌肥厚是心脏疾病中的一种病理改变,其可能与机体过度激活的神经内分泌体系和内环境失稳密切相关。心肌持续而过度的肥厚反应将最终导致心脏功能减退及慢性充血性心力衰竭。在心衰形成的整个过程中,心脏重构是一个动态发展的过程,其间涉及到细胞凋亡、纤维化、脂肪堆积、线粒体异常、离子通道改变及信号转导通路的变化等。以往的研究表明,法尼基焦磷酸合成酶(famesyl pyrophosphate synthase,FPPS)是甲羟戊酸途径中的一种关键酶,其催化合成下游产物法尼基焦磷酸(Farnesyl pyrophosphate,FPP)和牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸(Geranylgeranylpyrophosphat,GGPP)所参与的信号转导通路直接参与心肌肥厚及心脏重构的发生。心肌细胞的纤维化是心脏重构中及其重要的特征,但其他如肌钙蛋白、缝隙连接蛋白等的变化也间接地反应了心肌重构的程度与趋势。目的:探讨法尼基焦磷酸合成酶抑制剂在腹主动脉缩窄术所致心肌肥厚的动物模型中心肌重构的影响与作用。方法:1.腹主动脉缩窄术建立心肌肥厚大鼠模型并观察手术效果;2.将腹主动脉缩窄术后雄性SD大鼠随机分为3组:腹主动脉缩窄术组、腹主动脉缩窄术加药物组和假手术对照组。分别给予生理盐水10mg/kg/day或阿伦磷酸钠10mg/kg/day 灌胃维持 3、5、8 周。3.运用超声、血流动力学等手段检测大鼠组织形态学变化;4.胫骨尺测量大鼠左侧胫骨长度;5.高效液相色谱法(HPLC)技术对大鼠心肌组织中FPP和GGPP含量进行检测;6.用BNP检测试剂盒检测大鼠血液样本中的BNP含量;7.对大鼠心肌组织切片染色并对I型纤维胶原蛋白(Col-I)、T型肌钙蛋白(t-TnT)及缝隙连接蛋白(cx43)等进行免疫组化分析。结果:1.腹主动脉缩窄术导致大鼠心肌肥厚并增加心肌组织中FPP及GGPP的含量;2.FPPS抑制剂可部分改善心肌肥厚表现,同时心肌组织中FPP及GGPP含量下降;3.心肌肥厚中大鼠胫骨长度及血BNP水平无明显变化;4.心肌重构中心肌纤维化、肌钙蛋白及缝隙连接蛋白等发生改变,抑制FPPS可以部分逆转这种重构表现。结论:FPPS参与了心肌肥厚及重塑的发生、发展;抑制FPPS的活性可以部分改善心肌肥厚。第二部分:法尼基焦磷酸合成酶抑制剂阿伦磷酸钠对心肌肥厚大鼠中RhoA通路影响的研究研究背景:心脏重塑是心肌肥厚发生与发展中重要的病理过程,并以心力衰竭为最终结局。很多研究表明被激活的RhoA/ROCK通路及其相关蛋白会介导心肌肥厚及细胞凋亡的发生。Rho激酶属于小G蛋白(蛋白激酶A,G,C)家族的丝氨酸/苏氨酸激酶,可以通过其下游靶效应分子,进一步调节ROCK,这些蛋白的调节可以对细胞收缩、黏附、迁移和增殖等多种生物学行为产生影响。而已知的事实是,RhoA/Rock信号通路在心室重塑过程中起着上调炎性细胞因子,抑制心肌收缩,促进心肌肥大与凋亡等作用。研究表明,阿伦磷酸钠是经典的FPPS抑制剂,其通过抑制FPP、GGPP的生成进而影响RhoA/Rock信号通路的转导达到改善心肌肥厚及纤维化等的病理过程。法尼基焦磷酸合成酶(FPPS)可能是治疗心肌肥厚和改善心脏重构的新思路。目的:探讨FPPS抑制剂在改善心肌肥厚及重塑时可能的RhoA通路机制。方法:1.腹主动脉缩窄术建立心肌肥厚大鼠模型;2.将雄性SD大鼠分为3组:腹主动脉缩窄术组、腹主动脉缩窄术加药物组和假手术对照组。分别给予生理盐水10mg/kg/day或阿伦酸纳10mg/kg/day灌胃维持3、5、8 周。3.运用超声、血流动力学等手段检测大鼠的组织形态学变化;4.高效液相色谱法(HPLC)技术对大鼠心肌组织中FPP和GGPP含量进行检测;5.RhoA试剂盒测定心肌组织中RhoA在490nm处的OD值;6.免疫蛋白印记检测心肌组织中FDPS、RhoA及p-ERKl/2的蛋白含量。结果:1.抑制FPPS可改善心肌肥厚及心脏重塑;2.抑制FPPS可降低心肌组织中FPP、GGPP含量;3.抑制FPPS可降低心肌组织中RhoA含量;4.抑制FPPS可通过抑制RhoA相关通路的蛋白活性抑制心肌肥厚与心脏重塑。结论:抑制FPPS可通过抑制RhoA通路上蛋白的表达从而改善心肌肥厚及心脏重塑;FPPS抑制剂可能是治疗心肌肥厚的新思路。(本文来源于《浙江大学》期刊2015-05-01）
李政伟[7]（2014）在《法尼基焦磷酸合成酶在血管紧张素Ⅱ诱导心肌纤维化中的研究》一文中研究指出第一部分抑制法尼基焦磷酸合成酶改善血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化研究背景：心肌成纤维细胞是心脏中的主要细胞,在心肌纤维化的过程中发挥重要作用。许多体液刺激因子可诱导心肌纤维化,例如血管紧张素Ⅱ、内皮素1等。多种细胞信号转导通路参与了血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化,如RhoA通路。以往的研究表明双膦酸盐,如阿伦磷酸钠、唑来磷酸钠等,可抑制甲羟戊酸途径中的一种关键酶—法尼基焦磷酸合成酶,从而抑制法尼基化和牻牛儿基牻牛儿基化,进而减少异戊二烯的合成,而拢牛儿基牻牛儿基焦磷酸对于RhoA的牛儿基牻牛儿基化和活化非常重要。目的：本实验主要研究唑来磷酸钠是否可通过抑制法尼基焦磷酸合成酶进而抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化,同时研究该作用是否与RhoA通路相关。方法：(1)、在心肌成纤维细胞中加入10-30μM唑来磷酸钠作用30分钟,然后加入0.1μM血管紧张素Ⅱ作用48小时,加药前细胞在无血清培养基中孵育24小时,检测心肌纤维化指标如Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、转化生长因子β1以及法尼基焦磷酸合成酶蛋白水平的改变。(2)、在心肌成纤维细胞中加入10μM唑来磷酸钠以及相同浓度的FOH或者GGOH作用30分钟,然后加入0.1μM血管紧张素Ⅱ作用48小时,加药前细胞在无血清培养基中孵育24小时,检测心肌纤维化指标如Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、转化生长因子β1以及法尼基焦磷酸合成酶蛋白和RNA水平的改变。(3)、在心肌成纤维细胞中加入10μM唑来磷酸钠以及相同浓度的GGOH作用48小时,然后加入1μM血管紧张素Ⅱ作用15分钟,加药前细胞在无血清培养基中孵育24小时,使用pull-down试剂盒和western blot技术检测活性和总RhoA的改变。(4)、在心肌成纤维细胞中加入50pM siRhoA或control siRNA作用24小时,然后在无血清培养基中孵育24小时后加入0.1μM血管紧张素Ⅱ作用48小时,检测心肌纤维化指标如Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、转化生长因子β1以及法尼基焦磷酸合成酶蛋白和RNA水平的改变。结果：(1)、唑来磷酸钠作为法尼基焦磷酸合成酶抑制剂可剂量依赖性抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化指标如Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、转化生长因子β1以及法尼基焦磷酸合成酶蛋白水平的表达。(2)、GGOH部分逆转了唑来磷酸钠的抗心肌纤维化反应。(3)、血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化反应与RhoA活化相关。(4)、siRhoA抑制了血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化指标如Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、转化生长因子β1以及法尼基焦磷酸合成酶蛋白和RNA水平的表达。结论：本研究实验结果表明唑来磷酸钠通过抑制法尼基焦磷酸合成酶可有效逆转血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化,这种结果与抑制RhoA的活化和牻牛儿基拢牛儿基焦磷酸化相关。同时,抑制RhoA的活性可抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化和法尼基焦磷酸合成酶的表达。第二部分RNA干扰技术沉默法尼基焦磷酸合成酶改善血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化研究背景：第一部分实验结果表明抑制法尼基焦磷酸合成酶可以逆转血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化,提示法尼基焦磷酸合成酶可能是血管紧张素Ⅱ介导心肌纤维化的重要靶点。以往的实验证明,在体内和体外水平的心肌肥厚模型中,法尼基焦磷酸合成酶的表达明显升高,同时,在血管紧张素Ⅱ介导的心肌纤维化模型中,RhoA活性表达明显上升。上述证据表明法尼基焦磷酸合成酶可能在血管紧张素Ⅱ介导的心肌纤维化模型中的重要性,以及可能与RhoA激活相关。本实验探索法尼基焦磷酸合成酶是否在血管紧张素Ⅱ介导的心肌纤维化反应中上调,同时在此基础上通过RNA干扰技术沉默法尼基焦磷酸合成酶,观察是否影响心肌纤维化的形成,探索法尼基焦磷酸合成酶下游RhoA活性的变化。目的：本实验探索法尼基焦磷酸合成酶是否在血管紧张素Ⅱ介导的心肌纤维化反应中上调,同时在此基础上通过RNA干扰技术沉默法尼基焦磷酸合成酶,观察是否影响心肌纤维化的形成,探索法尼基焦磷酸合成酶下游RhoA活性的变化。方法：(1)、使用western blot和real-time PCR技术检测血管紧张素Ⅱ介导的体内和心肌纤维化模型中法尼基焦磷酸合成酶转录和翻译水平的改变。(2)、选择法尼基焦磷酸合成酶重组慢病毒转染乳鼠心肌成纤维细胞,观察法尼基焦磷酸合成酶下调是否影响心肌纤维化指标如Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、转化生长因子p1的改变。(3)、进一步在细胞水平研究法尼基焦磷酸合成酶沉默后下游RhoA的改变,使用pull-down试剂盒和western blot技术检测活性RhoA和总RhoA的改变。结果：(1)、血管紧张素Ⅱ在诱导心肌纤维化形成的同时也引起法尼基焦磷酸合成酶的上调,同时在8周龄大鼠血管紧张素Ⅱ诱导的纤维化心脏中法尼基焦磷酸合成酶的转录和翻译水平也上调。(2)、法尼基焦磷酸合成酶重组慢病毒转染乳鼠心肌成纤维细胞可明显抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化指标如Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、转化生长因子p1的表达。(3)、法尼基焦磷酸合成酶重组慢病毒有效抑制血管紧张素Ⅱ诱导的RhoA活性。结论：法尼基焦磷酸合成酶表达在血管紧张素Ⅱ介导的心肌纤维化模型中上调,揭示了法尼基焦磷酸合成酶在心肌纤维化中的重要性。同时,法尼基焦磷酸合成酶调控的RhoA活性在血管紧张素Ⅱ介导的心肌纤维化扮演重要作用。(本文来源于《浙江大学》期刊2014-05-01）
杨剑[8]（2013）在《法尼基焦磷酸合成酶在心血管重塑中的作用研究》一文中研究指出研究背景：心肌肥厚和充血性心力衰竭是全世界人类死亡的主要原因之一。心肌肥厚是心力衰竭早期心肌细胞对室壁应力增加的一种重要的适应性、代偿性反应,最终会导致充血性心力衰竭。法尼基焦磷酸合成酶(famesyl pyrophosphate synthase, FPPS)是甲羟戊酸途径中的一种关键酶,它催化合成异戊二烯化产物,包括法尼基焦磷酸(FPP)和牻牛儿牻牛儿焦磷酸(GGPP)。最新的研究表明FPPS在血管紧张素Ⅱ (Ang Ⅱ)诱导的心肌肥厚细胞中以及自发性高血压大鼠中表达明显增高,同时在自发性高血压大鼠中抑制FPPS可以减轻心肌肥厚和改善血管重塑。这些结果都与RhoA相关,而GGPP对RhoA的牻牛儿牻牛儿焦磷酸化和活化非常重要。目的：本研究利用转基因动物模型来进一步探讨FPPS与心肌肥厚和心力衰竭的关系,并研究其机制。方法：(1)构建心脏特异性过表达FPPS转基因模型。(2)使用real-time PCR、western-blot、免疫组化等技术检测转基因小鼠心脏组织中FPPS表达水平。(3)使用高效液相色谱法(HPLC)技术检测转基因小鼠心脏组织中FPP和GGPP水平,酶法测定组织胆固醇浓度。(4)使用超声心动图、病理染色、心导管等方法检测转基因小鼠心脏功能及形态学变化。(5)使用real-time PCR技术检测小鼠心脏心肌肥厚基因(ANP、BNP、β-MHC)以及心肌纤维化基因(TGF-β、CTGF)表达。(6)使用G-Lisa方法检测小鼠心脏RhoA、Rac1、Cdc42、Ras等小G蛋白表达水平,使用western-blot方法检测小鼠心脏Erk1/2、P38MAPK、 Akt/GSK3β等的活性。(7)表达FPPS的腺病毒感染心肌细胞,免疫荧光鉴定心肌细胞表面积。FPPS抑制剂阿伦磷酸钠或者Rho的抑制剂C3exoenzyme、Ras抑制剂farnesylthiosalicylic acid (FTS)在感染后加入心肌细胞。(8)在腺病毒感染的心肌细胞中检测RhoA、Ras、Erk1/2、P38MAPK、 Akt/GSK3β等活性。(9)使用HPLC技术检测心肌细胞中FPP和GGPP水平,酶法测定细胞胆固醇浓度。结果：(1)转基因小鼠心脏组织中FPPS表达明显增加。(2)心脏特异性表达FPPS增加了FPP和GGPP、胆固醇合成。(3)心脏特异性表达FPPS诱导心肌肥厚基因(ANP、BNP、β-MHC)、心肌纤维化基因(TGF-β、CTGF)表达增高,最终导致心肌肥厚、纤维化、心力衰竭。(4)心肌细胞腺病毒过表达FPPS诱导心肌细胞肥厚基因表达、细胞体积增大。心肌细胞中加入阿伦磷酸钠或者C3exoenzyme可抑制FPPS过表达导致的心肌细胞肥大。(5)心脏特异性表达FPPS诱导RhoA活性增高,磷酸化的ERK和p38表达上调,与体内结果一致,心肌细胞腺病毒过表达FPPS导致RhoA活性增高,磷酸化的ERK和p38表达上调。结论：FPPS及FPPS调控的信号转导通路在心肌重塑过程中具有重要的作用。研究背景：血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)是一种血管加压素,肾素-血管紧张素系统(RAS)的八肽激素中间体。相当多的证据表明,AngⅡ在心肌肥厚和纤维化起着重要的作用。在以往的研究中,我们发现FPPS的表达水平在AngⅡ刺激的肥厚心肌细胞中显着增加,这表明FPPS在AngⅡ引起的心肌肥厚中发挥着重要的作用。另外也研究发现在心肌细胞中通过小分子RNA干扰抑制FPPS基因表达或者药物阿伦磷酸钠抑制FPPS可以阻止AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。目的：本研究观察抑制FPPS对体内AngⅡ介导的心肌肥厚和纤维化的影响,并探讨其机制。方法：(1)野生型小鼠分为四组：生理盐水,血管紧张素Ⅱ(2.88毫克/公斤/天),阿伦磷酸钠(0.1毫克/公斤/天),或血管紧张素Ⅱ(2.88毫克/公斤/天)和阿伦磷酸钠(0.1毫克/公斤/天)持续微泵注射4周。(2)使用real-time PCR、western-blot等技术检测各组小鼠心脏组织中FPPS表达水平。(3)使用HPLC技术检测各组小鼠心脏组织中FPP和GGPP水平。(4)使用超声心动图、病理染色等方法检测各组小鼠心脏功能及形态学变化。(5)使用real-time PCR技术检测各组小鼠心肌肥厚基因(ANP、BNP)以及心肌纤维化基因(TGF-β1、Procollagen Ⅰ、Procollagen Ⅲ)表达。(6)使用G-Lisa方法检测RhoA蛋白表达水平, western-blot方法检测P38MAPK的活性。结果：(1) AngⅡ诱导小鼠心肌肥厚和纤维化。(2)抑制FPPS改善AngⅡ诱导的小鼠心肌肥厚和纤维化。(3) AngⅡ增加FPPS的表达,抑制FPPS减少AngⅡ小鼠中磷酸化P-38的表达。(4)抑制FPPS降低AngⅡ诱导的ANP, BNP, TGF-β1, Procollagen Ⅰ, Procollagen ⅢmRNA及ANP, TGF-β1, collagen Ⅰ, collagen Ⅲ蛋白表达增加。(5)抑制FPPS降低AngⅡ诱导的FPP和GGPP水平增加(6)抑制FPPS减少AngⅡ诱导的RhoA活性增加。结论：FPPS在AngⅡ诱导的心肌肥厚和纤维化过程中具有重要的作用,至少部分是通过抑制RhoA的活化,减少p38的磷酸化和下调TGF-β1的表达来实现的。(本文来源于《浙江大学》期刊2013-01-01）
杨剑牟,云吴涛,江均昌,赵晨泽,朱欢欢[9]（2012）在《法尼基焦磷酸合成酶在心肌肥厚和心衰中的调节作用》一文中研究指出背景和目的法尼基焦磷酸合成酶(Farnesyl pyrophosphate synthase,FPPS)是甲羟戊酸通路中重要的合成酶。近年来的研究提示,FPPS除了调控脂质代谢之外还可能存在更为复杂的生物学功能。我们已在前期实验中发现FPPS含量在自发性高血压大鼠的肥厚心肌组织中显着增高,而慢性抑制FPPS表达能够改善大鼠心肌肥厚和纤维化的程度。方法和结果通过本研究,我们首次在动物模型和人类组织中证实了FPPS在心肌肥厚和心衰过程中参与调节心肌重构的功能并阐述了其分子机制:⑴心脏特异性表达FPPS的转基因小鼠与野生型小鼠相比具有明显的心肌肥厚、间(本文来源于《2012年浙江省心电生理与起搏学术年会论文集》期刊2012-06-28）
刘陈[10]（2012）在《调控橡胶树法尼基焦磷酸合成酶基因的转录因子的克隆及表达分析》一文中研究指出法尼基焦磷酸合成酶(farnesyl diphosphate synthase, FPS)是橡胶树中天然橡胶生物合成的关键和限速酶之一,催化两分子的IPP (isopentenyl pyrophosphate, IPP)和一分子的DMAPP (dimethylallyl diphosphate, DMAPP)合成法尼基焦磷酸(farnesyl diphosphate, FPP)。橡胶生物合成的速率与细胞内的FPP浓度呈正相关,FPP浓度越高,橡胶合成的速率越快。因此,提高橡胶树乳管细胞中FPP的浓度,可能会提高天然橡胶的产量。目前,国内外还未见橡胶树中法尼基焦磷酸合酶基因HbFPS的调控机理的研究报道。根据本课题组在前期研究中克隆的HbFPS启动子序列,构建了含有HbFPS启动子的Bait载体pFPS-AbA,并制备了橡胶树胶乳SMART Ⅲds-cDNA。通过对酵母单杂交文库的筛选,获得一个调控HbFPS的MYC类转录因子的cDNA,暂命名为HbMYC3。已克隆的HbMYC3共2489bp,包括2046bp的开放阅读框,编码681个氨基酸,以及127bp的5'非编码区和316bp的3'非编码区。Blastx分析表明HbMYC3与蓖麻(Ricinus communis) MYC2(XP_002519814)、葡萄(vitis vinifera) MYC2-like、烟草(Nicotiana tabacum) MYC1a和MYClb等MYC类转录因子同源性分别是83%、76%、63%、63%。]HbMYC3的C端含有由52个氨基酸组成的MYC转录因子家族保守的bHLH结构域。荧光定量PCR结果表明,HbMYC3在树皮中表达量最高,胶乳和花中的次之,胚和愈伤组织中的最低。乙烯和茉莉酸的刺激对HbMYC3的表达无显着影响,但HbMYC3的表达与激素的关系尚需通过进一步的实验论证。本研究利用酵母单杂交文库筛选技术初步克隆了一个调控HbFPS的转录因子,为进一步研究法尼基焦磷酸合成酶基因的表达调控机制提供了实验基础。(本文来源于《海南大学》期刊2012-04-01）
法尼基焦磷酸合成酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
第一部分体内抑制法尼基焦磷酸合成酶可以改善压力超负荷诱导的心脏重塑研究背景:法尼基焦磷酸合成酶(FPPS)是甲羟戊酸途径中一个重要的分支酶。作为胆固醇合成的中间步骤,FPPS催化C5单位的异戊烯焦磷酸(IPP)和其同分异构体二甲基烯丙基焦磷酸(DMAPP)连续缩合,生成10C单位的牻牛儿基焦磷酸(GPP)和15C单位的法尼基焦磷酸(FPP)。FPP不仅是合成胆固醇和辅酶Q的重要底物,也是众多小G蛋白法尼基化修饰的法尼基来源。已有研究表明抑制FPPS可以改善AngII诱导的心脏重塑,而压力超负荷诱导的高血压大鼠模型中FPPS和部分小G蛋白表达升高。我们通过基因干扰技术抑制小鼠FPPS表达,探索FPPS在压力超负荷诱导的心脏重塑中的效应以及作用机制。目的:通过基因干扰技术抑制小鼠FPPS表达,探索FPPS在压力超负荷诱导的心脏重塑中的效应以及作用机制。方法:(1)设计若干FPPS短发夹RNA序列,慢病毒包装感染小鼠原代心肌细胞。用免疫蛋白印迹法验证每一个序列的干扰效率。(2)筛选出FPPS基因干扰效率高的序列,将对应序列的慢病毒显微注射到小鼠胚胎细胞。(3)筛选含有干扰序列的阳性转基因小鼠,验证小鼠心脏组织FPPS干扰效率。同时鉴定子代阳性小鼠的FPPS干扰效率,确保其干扰效率能稳定遗传到子代。(4)将F3代雄性FPPS干扰转基因雄鼠和非转基因同窝对照雄鼠随机分为手术组和假手术组。用腹主动脉缩窄术建立压力超负荷模型。(5)术后12周,测量小鼠的心脏功能,尾动脉血压。(6)组织病理学分析心肌细胞大小和心肌纤维化水平。(7)免疫蛋白印迹法测量FPPS蛋白及其通路下游蛋白水平变化。(8)G-LISA法测量Ras,RhoA,Rac1和CDC42活性。(9)荧光定量PCR法测量心脏胚胎基因的表达。结果:(1)pLVT202序列可以抑制心肌细胞FPPS表达。(2)成功构建了 FPPS干扰的转基因小鼠,其心脏组织FPPS干扰效率约为50%。其子代转基因小鼠均能稳定干扰FPPS表达,转基因小鼠较同窝野生型小鼠表达量降低了 50%。(3)成功构建了腹主动脉缩窄术引起的小鼠压力超负荷模型。术后12周,小鼠心脏明显扩大,心肌细胞肥厚,心肌纤维化明显。(4)术后12周时,干扰FPPS表达可以降低压力超负荷引起的心力衰竭指标升高水平、减少心肌细胞肥厚水平和心肌纤维化水平,同时提高射血分数。(5)术后12周时,干扰FPPS可以降低压力超负荷引起的Ras蛋白的活化和ERK1/2磷酸化升高,但并不能抑制活化RhoA水平的升高。结论:干扰FPPS表达可以部分改善压力超负荷引起的心力衰竭、心肌细胞肥厚和心肌纤维化。其机制可能是降低Ras蛋白的活化水平,进而降低ERK1/2磷酸化水平,抑制心肌细胞增殖和纤维化。第二部分构建心肌细胞条件性法尼基焦磷酸合成酶基因敲除小鼠研究背景:法尼基焦磷酸合成酶(FPPS)是甲羟戊酸途径中一个重要的分支酶。作为胆固醇合成的中间步骤,FPPS催化C5单位的异戊烯焦磷酸(IPP)和其同分异构体二甲基烯丙基焦磷酸(DMAPP)连续缩合,生成10C单位的牻牛儿基焦磷酸(GPP)和15C单位的法尼基焦磷酸(FPP)。FPP不仅是合成胆固醇和辅酶Q的重要底物,也是众多小G蛋白法尼基化修饰的法尼基来源。基因敲除小鼠模型被认为是很好的研究基因功能的模型,而目前并没有FPPS基因敲除小鼠模型的参考文献。因此,为了更深入的研究FPPS基因在心脏重塑病理中的作用,我们构建心肌细胞条件性法尼基焦磷酸合成酶基因敲除小鼠模型。目的:构建心肌细胞条件性法尼基焦磷酸合成酶基因敲除小鼠模型。方法:(1)设计并构建FPPS条件性基因敲除打靶载体质粒。(2)ES细胞电穿孔转移线性化质粒,筛选序列正确的阳性克隆,移植胚胎。(3)鉴定嵌合体小鼠,繁殖获得FPPS-Flox纯合子小鼠。(4)繁殖获得与心肌特异性表达Cre重组酶的Myh6-MerCreMer的FPPSfl/flCre+/-小鼠。腹腔注射他莫昔芬后验证心肌组织特异性敲除FPPS的效率。结果:(1)成功获得了 FPPS-Flox纯合子小鼠和心肌特异性表达Cre重组酶的Myh6-MerCreMer 的 FPPSfl/flCre+/-小鼠。(2)腹腔注射他莫昔芬后8周,小鼠心肌组织FPPS表达降低了约80%。结论:我们成功构建了心肌细胞条件性法尼基焦磷酸合成酶基因敲除小鼠模型。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
法尼基焦磷酸合成酶论文参考文献
[1].杨林林,杨利民,马秀杰,韩梅.人参法尼基焦磷酸合成酶基因的表达及其与皂苷含量的关系[J].吉林农业大学学报.2017
[2].赵晨泽.体内抑制法尼基焦磷酸合成酶可以改善压力超负荷诱导的心脏重塑[D].浙江大学.2017
[3].徐唯玮,胡申江.法尼基焦磷酸合成酶抑制剂改善心肌肥厚并影响连接蛋白重塑[C].2015年浙江省心电生理与起搏学术年会论文汇编.2015
[4].徐唯玮,胡申江.法尼基焦磷酸合成酶抑制剂阿伦磷酸钠对心肌肥厚大鼠中RhoA通路影响的研究[C].2015年浙江省心电生理与起搏学术年会论文汇编.2015
[5].杜常青,刘小伟,曾广忠,金红峰,黄敬桓.抑制法尼基焦磷酸合成酶改善2型糖尿病大鼠左心室重构与心脏功能[J].心脑血管病防治.2015
[6].赵旭明.抑制法尼基焦磷酸合成酶改善心脏重塑作用的研究[D].浙江大学.2015
[7].李政伟.法尼基焦磷酸合成酶在血管紧张素Ⅱ诱导心肌纤维化中的研究[D].浙江大学.2014
[8].杨剑.法尼基焦磷酸合成酶在心血管重塑中的作用研究[D].浙江大学.2013
[9].杨剑牟,云吴涛,江均昌,赵晨泽,朱欢欢.法尼基焦磷酸合成酶在心肌肥厚和心衰中的调节作用[C].2012年浙江省心电生理与起搏学术年会论文集.2012
[10].刘陈.调控橡胶树法尼基焦磷酸合成酶基因的转录因子的克隆及表达分析[D].海南大学.2012