裂解性周期复制论文-贾雪梅

裂解性周期复制论文-贾雪梅

导读:本文包含了裂解性周期复制论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献,主要关键词:慢病毒,HIV-1,Vpr,KSHV,裂解性周期复制

裂解性周期复制论文文献综述

贾雪梅[1](2010)在《艾滋病毒Vpr蛋白抑制KSHV裂解性周期复制:GSK-3β信号通路的作用》一文中研究指出目的:研究人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)病毒蛋白R(viral protein R,Vpr)对卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)裂解性周期复制的影响,并对此过程所涉及到的信号通路进行鉴定。方法:1、包装和鉴定含Vpr基因的重组慢病毒,并进行滴度测定。以重组慢病毒Vpr感染原发性渗出性淋巴瘤细胞系【primary effusion lymphoma,PEL,又称体腔淋巴瘤(body cavity-based lymphoma,BCBL)】来源的BCBL-1细胞,反转录RCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)分别检测Vpr基因的mRNA转录和蛋白表达。2、用病毒感染方法将Vpr基因导入PEL细胞系,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,real-time PCR)、RT-PCR和Western blot检测KSHV裂解期基因的mRNA转录和蛋白表达;进一步检测感染后细胞上清中KSHV病毒含量,并以RT-PCR和Western blot检测经上清感染的Vero细胞中KSHV裂解期和潜伏期基因mRNA转录和蛋白表达;将重组慢病毒Vpr感染PEL细胞系,然后转染含KSHV ORF50/ORF73基因启动子的虫荧光素酶(Luciferase)报告质粒,检测Luciferase活性。3、以重组慢病毒Vpr感染BCBL-1细胞,提取细胞总RNA进行人信号通路发现者PCR芯片操作,采用Western blot对基因芯片结果进行验证,加入信号通路上关键蛋白激酶抑制剂、过表达突变质粒后再检测KSHV裂解期蛋白的表达。结果:1、携带Vpr基因的慢病毒获得成功包装,病毒滴度为4×107Tu/ml。重组慢病毒Vpr感染BCBL-1细胞后可检测到Vpr基因的转录和表达。2、Vpr蛋白不但可以显着抑制BCBL-1细胞中KSHV裂解期基因ORF50(编码KSHV“分子开关”蛋白)、ORF26(编码KSHV次要衣壳蛋白)mRNA的转录,而且还能够显着降低KSHV裂解期蛋白病毒白细胞介素6(viral Interleukin-6,vIL-6)和KSHV复制与转录激活子(replication and transcription activator,Rta,即“分子开关”蛋白)的表达。BCBL-1细胞中过表达Vpr蛋白一方面能够显着下调KSHV的病毒拷贝数,同时明显地降低了Vero细胞中KSHV ORF73/LANA【潜伏相关核抗原,(latency-associated nuclear antigen)】、ORF26 mRNA的转录及vIL-6蛋白的表达。Vpr蛋白能够直接抑制ORF50和ORF73基因启动子的活化。3、Vpr蛋白降低了GSK-3β【糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)】信号通路中GSK-3β的磷酸化水平,应用GSK-3β抑制剂LiCl及过表达其突变质粒GSK-3β-S9A后,Vpr蛋白对KSHV vIL-6的抑制作用分别被进一步增强和部分阻断。Vpr蛋白下调了PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)信号通路中PTEN的磷酸化水平,应用其过表达质粒pTEN后,Vpr蛋白对KSHV vIL-6的抑制作用被进一步增强。Vpr蛋白还降低了Ras/c-Raf/MEK/ERK信号通路中c-Raf、MEK1/2及ERK1/2的磷酸化水平。结论:1、含Vpr基因重组慢病毒可以有效地感染BCBL-1细胞,并在其中大量表达目的蛋白。2、Vpr蛋白能够显着抑制KSHV裂解性周期复制及子代病毒颗粒的释放,作用机制可能是通过抑制ORF50和ORF73基因启动子的活化。3、Vpr蛋白通过抑制GSK-3β及PTEN信号通路的活化下调KSHV复制,Ras/c-Raf/MEK/ERK信号通路可能参与调控Vpr蛋白抑制KSHV复制过程。推测在AIDS相关的KS(AIDS-KS)患者体内,Vpr蛋白有可能通过抑制KSHV裂解性周期复制来避免KSHV感染细胞后过早地被免疫清除,从而有利于潜伏感染的形成和肿瘤的发生。(本文来源于《南京医科大学》期刊2010-06-30)

王平[2](2010)在《艾滋病毒Vif蛋白抑制卡波济肉瘤相关疱疹病毒裂解性周期复制的初探》一文中研究指出背景:人类免疫缺陷病毒I型(又称艾滋病毒;human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)感染显着提高卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)感染者罹患卡波济肉瘤(Kaposi’s sarcoma,KS)的风险。KSHV与其它因素协同作用共同参与了KS的发生与发展。本课题组和其他小组的研究证实,HIV-1病毒颗粒、病毒编码的可溶性调节蛋白Tat及病毒感染诱生的细胞因子都能够调控KSHV裂解性周期复制。目的:本研究拟解决的问题是由重组慢病毒或腺病毒载体所介导的HIV-1病毒感染因子(viral infectivity factor,Vif)在原发性渗出性淋巴瘤【primary effusion lymphoma,PEL,又称体腔渗出性淋巴瘤(body cavity-based lymphoma,BCBL)】细胞系中的过表达对KSHV裂解性周期复制的影响,为阐明AIDS-KS的发病机制奠定基础。方法:首先分别构建含HIV-1 Vif基因的重组慢病毒和腺病毒,并利用梯度稀释法测定病毒滴度。然后以一系列不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)的重组病毒感染靶细胞BCBL-1,根据细胞中绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和Vif蛋白的表达水平验证重组病毒对BCBL-1细胞的感染能力。以一定MOI的重组病毒感染BCBL-1细胞,于感染后不同时间点提取细胞RNA和蛋白,分别利用RT-PCR和Western blot检测KSHV裂解期和潜伏期代表基因的mRNA转录和蛋白表达,初步探讨Vif对KSHV复制的影响。进一步以病毒颗粒释放实验评价Vif蛋白的过表达是否影响KSHV完整子代病毒颗粒的释放,检测指标包括经慢病毒感染后的BCBL-1培养上清中KSHV病毒载量、子代KSHV感染Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)的能力以及Vero细胞中KSHV mRNA转录和蛋白表达水平等方面的差异。为了实现对Vif影响KSHV复制机制的初步探讨,本文利用虫荧光素酶报告实验(luciferase reporter assay)检测了Vif蛋白对KSHV ORF50和ORF73启动子活性的调控作用,并对Vif影响KSHV复制过程中所涉及到的信号通路进行初步鉴定。结果:成功包装出含有HIV-1 Vif基因的重组慢病毒和腺病毒,滴度分别为4×107 TU/ml及2.5×108 TU/ml。以MOI为1.0的重组慢病毒或腺病毒感染靶细胞BCBL-1后,都能够检测到GFP和Vif蛋白表达。RT-PCR结果显示,Vif过表达能够抑制KSHV裂解期基因T1.1(即PAN,polyadenylated nuclear RNA)、ORF26(次要衣壳蛋白编码基因)的mRNA转录。Western blot同样证明Vif蛋白能够显着下调BCBL-1细胞中复制与转录激活子(replication and transcription activator,Rta)以及晚期基因病毒白细胞介素6(viral interleukin-6,vIL-6)的表达水平。病毒颗粒释放实验结果证实,Vif蛋白抑制了KSHV完整子代病毒颗粒的释放。机制方面的探索表明,Vif能够抑制ORF50和ORF73基因的启动子活性,并且下调ERK和GSK-3β的磷酸化水平。结论:Vif蛋白能够抑制KSHV的裂解性周期复制和完整子代病毒颗粒释放。Vif可能通过调控ORF50和ORF73的启动子活性影响KSHV复制。在Vif抑制KSHV裂解性周期复制的过程中,ERK MAPK和PI3K/Akt/GSK-3β信号通路可能起到了一定作用。提示,Vif可能通过调控KSHV启动子活性以及细胞内信号通路等方式抑制了KSHV裂解性周期复制,避免受感染细胞较大程度地激活免疫系统而被清除,从而有助于KSHV的潜伏感染和致瘤发生。(本文来源于《南京医科大学》期刊2010-06-30)

黄敏,李久明,王平,卢春[3](2010)在《人类免疫缺陷病毒-1 Rev蛋白调控卡波济肉瘤相关疱疹病毒的裂解性周期复制与潜伏感染》一文中研究指出目的:研究人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)Rev蛋白的表达水平对原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞BCBL-1中卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)裂解性周期复制与潜伏的影响。方法:自表达质粒pCI-neo-Rev中扩增出Rev基因,插入到pHAGE-CMV-MCS-IZsGreen中构建成慢病毒载体pLenti-Rev,利用脂质体将其与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞。荧光显微镜观察293T细胞中绿色荧光蛋白(IZsGreen)表达;收集培养上清经0.45μm滤器过滤后即获得病毒悬液。梯度稀释法测定病毒滴度并感染细胞,RT-PCR和Western blot检测Rev在293T细胞中的表达。用慢病毒感染BCBL-1细胞,同时将表达质粒pCI-neo-Rev转染该细胞,采用Western blot分别检测Rev以及KSHV Rta和vIL-6蛋白的表达;Real-timePCR进一步从mRNA水平上定量验证Rev对KSHV复制的影响。结果:限制性内切酶酶切反应和基因测序证实成功构建了携带Rev基因的慢病毒表达载体,病毒滴度为2×107TU/ml。重组慢病毒感染BCBL-1细胞72h后,能够检测到Rev蛋白的表达。Western blot结果显示,低水平表达的Rev能够上调KSHV裂解期蛋白Rta、vIL-6的表达,而高水平表达的Rev则能够抑制Rta和vIL-6的表达。Real-time PCR进一步验证了该结果,表明高水平表达的Rev能够显着抑制BCBL-1中Rta的mRNA转录,96h尤为明显。结论:成功构建了含Rev基因的慢病毒表达载体,获得的病毒能够有效感染BCBL-1细胞,并在其中大量表达Rev蛋白。Rev蛋白的表达水平对KSHV的复制与潜伏可能起到复杂的调控作用。(本文来源于《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊2010年06期)

黄敏[4](2010)在《重组慢病毒载体介导艾滋病毒Rev蛋白调控卡波济肉瘤相关疱疹病毒裂解性周期复制的研究》一文中研究指出背景:人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)的感染显着提高卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)感染者发生卡波济肉瘤(Kaposi’s sarcoma,KS)的风险。一般认为,KSHV感染是KS发生的必要条件,但是其它协同因子在KS的发病过程中也发挥了重要作用。研究证实,HIV-1病毒颗粒及其感染细胞释放的细胞因子、可溶性蛋白等都可以调节KSHV裂解性周期复制。我们前期的研究表明,HIV-1反式激活因子(trans-activator of transcription,Tat)能够激活KSHV复制。事实上,病毒颗粒蛋白表达调节因子(regulator of virion protein expression,Rev)与Tat蛋白同为HIV-1的重要调节蛋白,且编码两者的基因序列大部分重迭。目的:探讨HIV-1 Rev蛋白对原发性渗出性淋巴瘤【primary effusion lymphoma,PEL,又称体腔渗出性淋巴瘤(body cavity-based lymphoma,BCBL)】细胞系中KSHV复制周期的影响。方法:首先将分离获得的HIV-1 Rev基因定向克隆进慢病毒表达载体pHAGE-CMV-MCS-IZsGreen中,并将其与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞,包装出具有感染293T细胞能力的慢病毒并测定病毒滴度。接着用该病毒感染BCBL-1细胞,蛋白免疫印迹(Western blot)和荧光显微镜观察验证慢病毒对BCBL-1细胞的感染能力。慢病毒感染BCBL-1细胞48 h后加入TPA刺激,刺激后48 h收获细胞,同时用pCI-neo-Rev质粒转染BCBL-1细胞作对比,采用Western blot检测不同表达水平的胞内Rev对KSHV复制周期的影响。为了进一步研究Rev表达水平对KSHV复制的调控,首先采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)验证转染实验中Rev蛋白对BCBL-1细胞中KSHV开关基因Rta mRNA转录的影响,以此反映高水平表达的胞内Rev对KSHV复制的调控。为了研究低水平表达的胞内Rev对KSHV复制的影响,将Rev慢病毒感染BCBL-1细胞并加入TPA刺激,Western blot、反转录-聚合酶链式反应(reverse transcript polymerase chain reaction,RT-PCR)检测感染不同病毒量时和感染不同时间点的胞内Rev对KSHV复制周期的影响;再用重组慢病毒感染BCBL-1细胞1、4、7 d后的上清感染Vero细胞,PCR、RT-PCR、Western blot检测Rev蛋白对KSHV病毒颗粒释放的影响。为了进一步探讨Rev蛋白调节KSHV复制的机制,研究采用Luciferase报告实验对Rev慢病毒感染的PEL细胞中KSHV开关基因Rta和潜伏期基因ORF73的启动子活性进行检测;运用Western blot检测低表达胞内Rev蛋白是否通过调节丝裂原活化蛋白激酶( mitogen-activated protein kinase , MAPK )和磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)信号通路来诱导KSHV的裂解周期复制。结果:Rev慢病毒可以感染BCBL-1细胞,并在其中有效表达Rev蛋白。低水平表达的Rev能够上调KSHV裂解期蛋白Rta、病毒白细胞介素6(vIL-6)的表达,而高水平表达的Rev则能够抑制Rta和vIL-6的表达;Real-time PCR进一步证实高水平表达的Rev能够显着抑制BCBL-1细胞中Rta的mRNA转录。RT-PCR、Western blot实验结果显示,低水平表达的Rev于不同病毒量和在不同感染时间点均能够诱导KSHV的裂解复制,表现为Rev不仅能够诱导潜伏相关核抗原(latency-associated nuclear antigen,LANA/ORF73)、ORF26(编码KSHV次要衣壳蛋白)、ORF57、和vIL-6的mRNA转录水平显着上调,而且还可以诱导Rta和vIL-6蛋白的表达。病毒释放实验结果显示,Rev慢病毒感染BCBL-1后1、4、7 d的细胞上清中KSHV基因表达较对照组高,该上清感染Vero细胞24 h后细胞中KSHV潜伏期基因病毒flice抑制蛋白(viral flice-inhibitory protein,vFLIP)基因与裂解期基因ORF26、T1.1和vIL-6的mRNA转录水平出现了不同程度的上调,提示Rev蛋白能够诱导具有感染性的KSHV子代病毒颗粒的释放。Luciferase报告实验结果显示,胞内Rev能够使KSHV开关基因Rta的启动子活性下调,但是同时可以诱导潜伏期基因ORF73的启动子活性,提示Rev在PEL细胞中有可能通过间接途径激活KSHV的复制。Western blot结果显示,Rev慢病毒组的细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinases,ERK)和GSK-3β磷酸化水平均有不同程度的升高,提示Rev蛋白可能通过调节ERK MAPK和PI3K/GSK-3β信号通路来诱导KSHV的裂解周期复制。结论:成功构建了含Rev基因的慢病毒表达载体;获得的重组慢病毒能够感染BCBL-1细胞,并在其中有效表达Rev蛋白;低水平表达的Rev能够促进KSHV的复制,而高水平表达的Rev则能够抑制KSHV的裂解期复制,提示Rev蛋白的表达水平对KSHV的复制与潜伏可能起到复杂的调控作用。PEL细胞中的Rev可能不直接与Rta启动子结合,而是通过间接途径影响KSHV基因的启动子活性来诱导KSHV裂解复制,同时Rev蛋白诱导的KSHV裂解性周期复制可能是通过调控ERK MAPK和PI3K/GSK3β信号通路实现的,提示靶向调节这些信号通路的药物可能对AIDS-KS的治疗有一定意义。(本文来源于《南京医科大学》期刊2010-04-01)

王平,黄敏,卢春[5](2010)在《含HIV-1 Vif基因重组慢病毒表达载体的构建及其对KSHV裂解性周期复制影响的初探》一文中研究指出目的:利用慢病毒表达载体将HIV-1Vif基因导入原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞BCBL-1中使之持续表达目的蛋白Vif,并检测Vif对其中潜伏KSHV裂解性周期复制的影响。方法:自表达质粒pCI-neo-Vif中扩增出Vif基因,插入到pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen中构建成慢病毒载体pHAGE-Vif,利用脂质体将其与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞。荧光显微镜观察293T细胞中绿色荧光蛋白(GFP)表达情况;收集培养上清经0.45μm滤器过滤后即获得病毒悬液。梯度稀释法测定病毒滴度,感染293T细胞,48h或72h后进行RT-PCR和Western blot检测Vif基因的转录和表达情况。以MOI为1.0的病毒量感染靶细胞BCBL-1,利用Westernblot技术检测Vif蛋白的表达,同时检测KSHVvIL-6和Rta的蛋白表达水平,初步探讨Vif对KSHV复制的影响。结果:限制性内切酶检测和基因测序证实成功构建了携带Vif基因的慢病毒表达载体,滴度为4×107efu/ml。以MOI为1.0的重组慢病毒感染靶细胞BCBL-172h后,能够检测到外源基因Vif的蛋白表达。Western blot结果初步显示,Vif能够下调vIL-6和Rta的蛋白表达水平。结论:成功构建了含Vif基因的慢病毒表达载体,获得的病毒能够有效感染BCBL-1细胞,并在其中大量表达目的蛋白。初步结果提示,Vif能够下调vIL-6和Rta的蛋白表达水平,对KSHV裂解性周期复制可能起到抑制作用。(本文来源于《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊2010年03期)

方欣[6](2009)在《HIV-1Vpr蛋白调控KSHV裂解性周期复制的初探》一文中研究指出人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)感染使卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)感染者发生卡波济肉瘤(Kaposi’s sarcoma,KS)的风险大大增加。KSHV是导致KS的病原体,但必须在其它因子的协同作用下才足以发生KS。我们先前的研究表明,HIV-1反式激活蛋白(transactivative transcription protein,Tat)能够激活KSHV裂解性周期复制。本文探索了HIV-1的另一调节蛋白——病毒蛋白R(viral protein regulatory,Vpr)对于KSHV裂解性周期复制的影响。首先,根据GenBank中已登记的HIV-1 Vpr基因序列人工合成该基因,将其插入真核表达载体pCI-neo中成功构建重组Vpr真核表达质粒。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)显示,Vpr基因mRNA在原发性渗出性淋巴瘤【primary effusion lymphoma,PEL,又称体腔淋巴瘤(body cavity-based lymphoma,BCBL)】来源的BCBL-1细胞和NIH3T3细胞中得到了正确转录。免疫荧光(IFA)和Western blot分别显示Vpr蛋白在BCBL-1和NIH3T3细胞中得到了表达。随后,将构建的重组Vpr真核表达质粒转染PEL来源的BCBL-1和BC-3细胞。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,real-time PCR)检测KSHV裂解期基因的mRNA转录水平。结果显示,Vpr转染BCBL-1细胞后可诱导裂解期ORF50(编码KSHV“分子开关”蛋白)、ORF26(编码KSHV次要衣壳蛋白)的mRNA转录水平显着降低。RT-PCR进一步证实,Vpr能够下调PEL细胞系中KSHV裂解期基因的转录。免疫印迹(Western Blot,WB)结果表明,Vpr能够在BCBL-1细胞中下调裂解期基因编码蛋白病毒白细胞介素6(vIL-6)的表达水平。最后,运用虫荧光素酶报告实验(Luciferase Report Assay)对Vpr调控KSHV复制的机制进行了初探。结果显示,Vpr通过抑制ORF50启动子活性来抑制KSHV的裂解性周期复制。以上研究结果提示,在艾滋病相关的卡波济肉瘤(AIDS-associated KS,AIDS-KS)患者体内,Vpr有可能通过抑制KSHV裂解性周期复制来避免KSHV感染细胞后过早地被免疫清除。(本文来源于《南京医科大学》期刊2009-06-30)

吕志刚[7](2008)在《HIV-1 Tat蛋白对HSV-2激活KSHV裂解性周期复制的影响》一文中研究指出卡波济肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)是获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)患者晚期发生率最高的恶性肿瘤。既往研究证实,其病原卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)不能独立引发KS,还需要协同因子的参与。然而促使KSHV引发KS的因素目前还未完全清楚。已经证明,人类单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus 1,HSV-1)、人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)、人类疱疹病毒6型(human herpesvirus 6,HHV-6)和人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)反式激活蛋白(transactivative transcription protein,Tat)是激活KSHV裂解性周期复制的重要协同因子。鉴于HIV-1血清阳性人群中人类单纯疱疹病毒2型(human herpes simplex virus-2,HSV-2)阳性率远高于HIV-1阴性人群,HSV-2与HIV-1之间密切相关,本研究我们进一步探讨了HSV-2影响KSHV复制的潜能以及HIV-1 Tat对该过程的影响。实验首先将HSV-2标准株333感染原发性渗出性淋巴瘤【primary effusion lymphoma,PEL,又称体腔渗出性淋巴瘤(bodycavity-based lymphoma,BCBL)】来源的BCBL-1细胞,Western blot结果显示,HSV-2感染BCBL-1细胞72 h后HSV-2型特异性糖蛋白G-2(glycoprotein G-2,gG-2)开始稳定表达。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-timePCR)检测结果表明,HSV-2感染可以诱导KSHV ORF50(KSHV周期复制的开关基因)、ORF26(编码KSHV次要衣壳蛋白)和ORF29(编码KSHV包装相关蛋白)mRNA转录水平升高。与对照组比较,HSV-2感染组3、6、12、24、48、72和96 h ORF50 mRNA水平分别升高了9.92、2.55、227、31.6、6.6、75和3.02倍(P<0.05)。类似地,ORF26 mRNA表达水平在3~96 h也呈现不同程度的升高,而ORF29 mRNA表达水平的升高集中在48~96 h。免疫荧光测定(immunofluorescence assay,IFA)结果显示,HSV-2感染BCBL-1同时还可诱导KSHV裂解周期蛋白的表达。虫荧光素酶报告实验验证了HSV-2对ORF50启动子的直接激活作用。进一步将HIV-1 Tat质粒转染HSV-2感染的BCBL-1细胞,采用Real-time PCR和Western blot分别检测KSHV ORF26 mRNA转录和病毒白细胞介素6(Viral Interleukin-6,vIL-6)的表达。与单纯HSV-2感染比较,KSHV ORF26 mRNA转录水平在6、24、48和72 h分别升高了3.92、1.67、2.74和1.82倍(P<0.05),vIL-6表达水平在6~72 h同样有不同程度的升高。虫荧光素酶报告实验显示,Tat可以增强HSV-2激活KSHV ORF 50启动子活性。以上结果提示,HSV-2可能通过诱导KSHV复制来提高病毒载量从而参与KS的致病过程;HIV-1 Tat能够增强HSV-2对KSHV的激活作用。(本文来源于《南京医科大学》期刊2008-06-01)

曾怡[8](2007)在《JAK/STAT通路在HIV-1胞内Tat蛋白激活卡波济肉瘤相关疱疹病毒裂解周期复制中的作用》一文中研究指出人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)感染显着提高卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)感染者发生卡波济肉瘤(Kaposi’s sarcoma,KS)的风险。KSHV感染是KS发生的必要条件,但在没有其它协同因子作用时不足以引发KS,然而促使KSHV引发KS的因素还未完全清楚。之前我们发现人类疱疹病毒6型(human herpesvirus type 6,HHV-6)是激活KSHV裂解周期复制的因素之一。本文应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)和免疫组织化学技术(immunohistochemistry assay,IHC)分别检测原发性渗出性淋巴瘤[primary effusion lymphoma,PEL,又称体腔淋巴瘤(body cavity-based lymphoma,BCBL)]来源的BCBL-1细胞中KSHV裂解期的mRNA转录产物和病毒蛋白,证实HIV-1反式激活蛋白(transactivative transcription protein,Tat)是KS致病机制中一种潜在的重要因素。Tat可在转染细胞96 h诱导ORF50(KSHV周期复制的开关基因)、ORF26(编码KSHV次要衣壳蛋白)、ORF29(编码KSHV包装相关蛋白)的mRNA转录水平分别升高到4.33±0.49倍(P<0.05)、2.52±0.31倍(P<0.05)和2.33±0.3倍(P<0.05),转染120h分别升高到1.9±0.26倍(P<0.05)、1.82±0.26倍(P<0.05)和1.5±0.22倍(P<0.05)。虫荧光素酶报告实验验证了Tat对ORF50启动子的作用,结果显示Tat不能直接通过激活ORF50启动子来诱导KSHV复制。机制方面的研究证实,细胞内表达Tat可诱导人白细胞介素(interleukin,IL)-6及其受体(IL-6 receptor alpha,IL-6Rα)的表达并活化信号转导子和转录激活子3(signal transducers and activators of transcription,STAT)信号通路。以中和抗体中和hIL-6或IL-6Ra、以Janus激酶(Janus kinase,JAK)2抑制剂AG490和显性负相STAT3抑制STAT3信号通路均增强Tat诱导的KSHV复制。另外,细胞内表达Tat还诱导IL-4及其受体(IL-4 receptor alpha,IL-4Rα)的表达并活化STAT6信号通路。显性负相STAT6抑制STAT6磷酸化可降低Tat诱导的KSHV复制。以上研究结果表明Tat可通过诱导KSHV复制提高KSHV的病毒载量从而参与KS的致病机制;hIL-6/STAT3信号通路和IL-4/STAT6信号通路在调控Tat诱导KSHV复制的过程中均发挥重要作用。本研究结果提示JAK/STAT信号通路对AIDS相关的KS患者的治疗有一定意义。(本文来源于《南京医科大学》期刊2007-06-01)

曾怡[9](2004)在《HIV-1 Tat协同HHV-6对HHV-8裂解周期复制的影响》一文中研究指出本文旨在研究人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(human immunodificency virus 1,HIV-1)Tat蛋白协同人类疱疹病毒6型(human herpesvirus 6,HHV-6)对人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)裂解周期复制的影响。本研究将HHV-6 U1102株感染的JJhan细胞与HHV-8潜伏感染的BCBL-1细胞进行细胞融合,采用RT-PCR和RealTime RT-PCR对HHV-8裂解周期基因ORF26的转录水平进行检测。结果显示,细胞融合后实验组ORF26转录水平高于对照组(t检验,P<0.05)。进而将HHV-6 U1102株感染的JJhan细胞与HHV-8潜伏感染的BCBL-1细胞进行混合共培养,并以HHV-6感染细胞培养上清作为条件培养基培养BCBL-1细胞,RealTime RT-PCR检测ORF26的转录水平和ELISA检测培养上清中IFN-γ和IL-10水平。结果显示,混合共培养中实验组ORF26的转录水平高于对照组(t检验,P<0.05)。灭活前后的HHV-6感染细胞培养上清培养BCBL-1细胞均能上调ORF26转录水平(t检验,P<0.05);混合共培养和条件培养基培养的实验组与对照组细胞培养上清中IL-10的表达水平没有差异(t检验,P>0.05),混合共培养的实验组细胞培养上清中IFN-γ水平高于对照组(t检验,P<0.05),但条件培养基培养的实验组与对照组细胞培养上清中IFN-γ水平没有差异(t检验,P>0.05)。56℃和紫外线灭活前后的纯化的HHV-6病毒颗粒感染BCBL-1后,分别在不同时间点开始出现高于对照组的ORF26转录。应用基因转染和Transwell共培养系统分别研究胞内和胞外表达的HIV-1 Tat蛋 南京医科人学硕_}学位论文白与HHV-6组合对ORF26转录水平的影响;评价胞内Tat对HHV-8复制的影响C结果显示,单纯细胞内外表达的Tat蛋白不能上调ORF26转录水平,但是胞内表达的Tat蛋白协同HHV~6感染可上调ORF26转录水平;胞外表达的HIV- 1 Tat与HHV~6组合不仅可显着促进ORF26 mRNA转录(t检验,P<0.05),而且可诱导HHv-8 KS.l蛋白的表达。上述研究结果表明,HHv-6病毒颗粒可诱导HH丫8裂解周期复制,Hlv- 1 Tat蛋白可协同HHv-6增强这种激活作用。提示HHv-6和Hl v-- ITat通过诱导KSHv复制导致病毒数量增加,进而参与KS致病机制。(本文来源于《南京医科大学》期刊2004-04-01)

裂解性周期复制论文开题报告

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

背景:人类免疫缺陷病毒I型(又称艾滋病毒;human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)感染显着提高卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)感染者罹患卡波济肉瘤(Kaposi’s sarcoma,KS)的风险。KSHV与其它因素协同作用共同参与了KS的发生与发展。本课题组和其他小组的研究证实,HIV-1病毒颗粒、病毒编码的可溶性调节蛋白Tat及病毒感染诱生的细胞因子都能够调控KSHV裂解性周期复制。目的:本研究拟解决的问题是由重组慢病毒或腺病毒载体所介导的HIV-1病毒感染因子(viral infectivity factor,Vif)在原发性渗出性淋巴瘤【primary effusion lymphoma,PEL,又称体腔渗出性淋巴瘤(body cavity-based lymphoma,BCBL)】细胞系中的过表达对KSHV裂解性周期复制的影响,为阐明AIDS-KS的发病机制奠定基础。方法:首先分别构建含HIV-1 Vif基因的重组慢病毒和腺病毒,并利用梯度稀释法测定病毒滴度。然后以一系列不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)的重组病毒感染靶细胞BCBL-1,根据细胞中绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和Vif蛋白的表达水平验证重组病毒对BCBL-1细胞的感染能力。以一定MOI的重组病毒感染BCBL-1细胞,于感染后不同时间点提取细胞RNA和蛋白,分别利用RT-PCR和Western blot检测KSHV裂解期和潜伏期代表基因的mRNA转录和蛋白表达,初步探讨Vif对KSHV复制的影响。进一步以病毒颗粒释放实验评价Vif蛋白的过表达是否影响KSHV完整子代病毒颗粒的释放,检测指标包括经慢病毒感染后的BCBL-1培养上清中KSHV病毒载量、子代KSHV感染Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)的能力以及Vero细胞中KSHV mRNA转录和蛋白表达水平等方面的差异。为了实现对Vif影响KSHV复制机制的初步探讨,本文利用虫荧光素酶报告实验(luciferase reporter assay)检测了Vif蛋白对KSHV ORF50和ORF73启动子活性的调控作用,并对Vif影响KSHV复制过程中所涉及到的信号通路进行初步鉴定。结果:成功包装出含有HIV-1 Vif基因的重组慢病毒和腺病毒,滴度分别为4×107 TU/ml及2.5×108 TU/ml。以MOI为1.0的重组慢病毒或腺病毒感染靶细胞BCBL-1后,都能够检测到GFP和Vif蛋白表达。RT-PCR结果显示,Vif过表达能够抑制KSHV裂解期基因T1.1(即PAN,polyadenylated nuclear RNA)、ORF26(次要衣壳蛋白编码基因)的mRNA转录。Western blot同样证明Vif蛋白能够显着下调BCBL-1细胞中复制与转录激活子(replication and transcription activator,Rta)以及晚期基因病毒白细胞介素6(viral interleukin-6,vIL-6)的表达水平。病毒颗粒释放实验结果证实,Vif蛋白抑制了KSHV完整子代病毒颗粒的释放。机制方面的探索表明,Vif能够抑制ORF50和ORF73基因的启动子活性,并且下调ERK和GSK-3β的磷酸化水平。结论:Vif蛋白能够抑制KSHV的裂解性周期复制和完整子代病毒颗粒释放。Vif可能通过调控ORF50和ORF73的启动子活性影响KSHV复制。在Vif抑制KSHV裂解性周期复制的过程中,ERK MAPK和PI3K/Akt/GSK-3β信号通路可能起到了一定作用。提示,Vif可能通过调控KSHV启动子活性以及细胞内信号通路等方式抑制了KSHV裂解性周期复制,避免受感染细胞较大程度地激活免疫系统而被清除,从而有助于KSHV的潜伏感染和致瘤发生。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

裂解性周期复制论文参考文献

[1].贾雪梅.艾滋病毒Vpr蛋白抑制KSHV裂解性周期复制:GSK-3β信号通路的作用[D].南京医科大学.2010

[2].王平.艾滋病毒Vif蛋白抑制卡波济肉瘤相关疱疹病毒裂解性周期复制的初探[D].南京医科大学.2010

[3].黄敏,李久明,王平,卢春.人类免疫缺陷病毒-1Rev蛋白调控卡波济肉瘤相关疱疹病毒的裂解性周期复制与潜伏感染[J].南京医科大学学报(自然科学版).2010

[4].黄敏.重组慢病毒载体介导艾滋病毒Rev蛋白调控卡波济肉瘤相关疱疹病毒裂解性周期复制的研究[D].南京医科大学.2010

[5].王平,黄敏,卢春.含HIV-1Vif基因重组慢病毒表达载体的构建及其对KSHV裂解性周期复制影响的初探[J].南京医科大学学报(自然科学版).2010

[6].方欣.HIV-1Vpr蛋白调控KSHV裂解性周期复制的初探[D].南京医科大学.2009

[7].吕志刚.HIV-1Tat蛋白对HSV-2激活KSHV裂解性周期复制的影响[D].南京医科大学.2008

[8].曾怡.JAK/STAT通路在HIV-1胞内Tat蛋白激活卡波济肉瘤相关疱疹病毒裂解周期复制中的作用[D].南京医科大学.2007

[9].曾怡.HIV-1Tat协同HHV-6对HHV-8裂解周期复制的影响[D].南京医科大学.2004

标签:;  ;  ;  ;  ;  

裂解性周期复制论文-贾雪梅
下载Doc文档

猜你喜欢