导读:本文包含了沉默突变论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:基因沉默,CRISPR,Cas,原核表达,酵母双杂交
沉默突变论文文献综述
蒋梦婷[1]（2019）在《拟南芥快速运输沉默突变体imos1基因的克隆》一文中研究指出外源基因在转基因植物稳定表达,是改变农艺性状和胁迫抗性的重要手段之一。但是在成功导入并且结构完整的情况下,仍会出现基因不能表达或者表达效率低下的问题,这种现象常常与基因沉默机制相关。其中RNA水平基因调控的基因沉默现象普遍存在,有研究表明韧皮部从源到各个库运输同化物同时也运输一些如m RNA与小RNA等生物大分子,且m RNA介导的基因沉默可以在细胞与细胞间传递,也可以进行从根到芽的长距离传递。目前对于基因沉默的长距离运输机制仍不甚明了,本试验立足基因沉默的长距离运输可以稳定遗传的拟南芥突变体,筛选与沉默速率相关基因并进行功能验证。本研究的主要结果如下:1)本实验利用基于EMS处理转基因Rt SS材料得到的沉默速率不同的可稳定遗传突变体材料imos1和GS6杂交构建F3代基因混合池,通过全基因组测序与WT比对分析差异SNP,得到9个候选基因:AT1G32230,AT1G47560,AT1G62580,AT3G09405,AT4G28050,AT4G30170,AT5G45960,AT5G56470,AT5G59740。2)基于前人研究基础,构建CRISPR/Cas系统p Cas Kana,该系统植物筛选为Kana抗性并且可通过显微镜直接观察荧光蛋白筛选无CRISPR/Cas结构突变体。构建CRISPR/Cas系统p KEE401E-m Cherry,该系统以EC1.2-1.1作为融合启动子,并插入筛选蛋白m Cherry,为易于观察且在T_1代纯合突变体高的双元载体。3)成功将9个候选基因构建到质粒p HDE-35S-Cas9-m Cherry-UBQ上,完成侵染并得到T0代种子,其中五个基因AT1G32230,AT1G47560,AT5G45960,AT5G56470,AT5G59740抗性培养基筛选分别得到3株,24株,6株,31株,6株T0代阳性植株,从对编辑AT1G47560的阳性植株中选取8株进行PCR并测序,并未发现突变。将AT1G32230与其同源基因AT2G35510构建到质粒p KEE401,经转基因获得T_0代,筛选得到13株抗性苗,在表型观察时发现有3株出现明显变异,提取DNA,根据靶点附近设计特异性引物扩增,送样测序,比对结果,其中1号植株在两个位点均出现基因编辑。4)RCI3基因与沉默信号的运输速率有关,根据此基因的CDS序列设计引物构建原核表达载体p DEST15-RCI3,经测序确定插入片段正确;利用IPTG诱导,未得到符合预计的蛋白片段,经多试验与对RCI3基因进行蛋白结构预测,分析后又进行分段表达,去除跨膜结构等操作,但是效果依然不理想,初步判断此基因不适合原核表达。5)本实验在成功构建入门载体的情况下,利用Gateway技术构建钓饵载体p DEST32-RCI3,为通过酵母双杂交系统筛选出与其相互作用的蛋白从而为研究基因的作用机制及功能奠定基础。(本文来源于《长江大学》期刊2019-04-01）
张运峰[2]（2016）在《热激对玉米大斑病菌Stste12基因沉默突变体发育的影响》一文中研究指出为了探明温度升高对玉米大斑病菌Stste12基因沉默突变体生长发育、基因表达水平等方面的影响,对玉米大斑病菌野生型菌株Wt01-23和Stste12基因沉默突变体StRNAi9-10同时进行热激处理,比较2个菌株菌落形态、菌丝形态、菌落生长速度及分生孢子产量方面的差异,并通过半定量PCR技术检测热激处理对Stste12基因表达的影响。结果显示,热激处理提高了突变体StRNAi9-10菌落的生长速度,其菌落形态和生长速度接近Wt01-23菌株,但对Wt01-23菌落的生长速度和形态无显着影响;半定量PCR检测显示,StRNAi9-10在热激处理后Stste12基因表达量增加,且随着温度的升高而增加,而Wt01-23菌株的Stste12基因表达量未发生显着变化。以上结果表明,热激处理恢复了玉米大斑病菌RNAi突变体的生理特征,具有抑制RNAi的作用。(本文来源于《河南农业科学》期刊2016年11期）
叶文武,张萌,曹明娜,翟春花,李爱宁[3]（2016）在《大豆疫霉PsMPK1沉默突变体的基因表达谱分析》一文中研究指出[目的]促有丝分裂原蛋白激酶(MAPK)是真核生物细胞信号转导途径中的关键蛋白激酶,对植物病原菌的生长发育与侵染致病具有重要作用。我们前期发现1个MAPK基因Ps MPK1参与调控大豆疫霉的细胞壁完整性、菌丝生长、游动孢子形成,以及对大豆的致病性等生物学性状。本文旨在进一步探究Ps MPK1如何调控大豆疫霉的上述性状。[方法]利用数字基因表达谱技术对大豆疫霉Ps MPK1沉默突变体在游动孢子囊阶段的基因表达情况进行分析。[结果]样品间基因表达水平的整体相关性分析和实时定量PCR结果表明:数据具有较高的可靠性。与野生型菌株相比,Ps MPK1沉默突变体中分别有1 451个显着下调和981个显着上调的基因,占所有被检测基因的23%。与之相比,被检测的细胞壁相关基因和分泌蛋白编码基因中,显着差异表达的基因比例更高(分别占37%和28%),且大部分基因为下调表达(分别占87%和78%)。显着下调表达的分泌蛋白编码基因中,37个基因可能与侵染过程相关,主要编码Rx LR、NLP和CRN等家族的效应分子,CBEL蛋白,富含半胱氨酸蛋白,氧化还原相关蛋白以及水解酶等。[结论]首次通过转录组学方法揭示了特定的功能基因Ps MPK1沉默后大豆疫霉基因组的转录变化,鉴定了可能与Ps MPK1信号途径相关的基因和基因家族,为进一步研究大豆疫霉中MAPK的调控网络奠定了基础。(本文来源于《南京农业大学学报》期刊2016年03期）
张丹丹,吴殿星,周波[4]（2016）在《OsDCL1基因沉默突变体诱导稻瘟病抗性的转录组分析》一文中研究指出稻瘟病是严重危害水稻生长的真菌病害,每年给水稻生产带来重大经济损失。与野生型日本晴NPB相比,OsDCL1基因沉默突变体增强了水稻对稻瘟菌的广谱抗病性。为了解水稻OsDCL1-RNAi突变体的抗病机制,我们分析和比较了它和野生型日本晴NPB在稻瘟菌侵染前后转录组水平的变化。响应稻瘟菌侵染的7 129个差异表达基因(DEGs)中,NPB和OsDCL1-RNAi突变体分别有5 382和5 180个基因表达发生了变化,参与生物胁迫反应、信号通路、蛋白代谢和RNA调控4个通路的基因明显被富集。以野生型未受稻瘟菌侵染的基因表达为对照,在OsDCL1-RNAi突变体中共发现1 318个DEGs,且超过70%是上调的,其中很多基因参与了生物胁迫反应(26.9%)和信号通路(11%),上调表达基因中与生物胁迫反应相关的主要为PR基因和细胞壁相关基因。另外,还发现10个茉莉酸相关基因和11个水杨酸相关基因分别在OsDCL1-RNAi突变体中显着下调和上调表达。在OsDCL1-RNAi突变体中还发现WRKY和MYB等一些转录因子家族以及部分受体类激酶被诱导表达。用qRT-PCR方法验证部分差异表达的基因,其结果与DEGs基本一致。OsDCL1-RNAi突变体中转录组变化的分析,为深入了解该突变体抗瘟性增强的机制奠定了基础。(本文来源于《植物病理学报》期刊2016年02期）
吴多,周艳,宋傲群,刘浏,史筱靓[5]（2016）在《利用靶拟态合成和Gateway技术构建水稻miR164c沉默突变体》一文中研究指出以水稻基因组DNA为模板,PCR扩增得到与miR399互补的Os MIM399后,改造成与miR164c互补的靶拟态序列Os MIM164c,经测序分析后连入p GWC载体,获得入门载体p GWC-Os MIM164c;利用Gateway技术,将入门载体p GWC-Os MIM164c经LR反应连接到植物表达载体GCS中,获得GCS-Os MIM164c表达载体,经农杆菌介导将该表达载体导入水稻品种Kasalath的愈伤组织中,组织培养后获得再生植株并进行目的基因的PCR鉴定,Real Time PCR方法检测阳性突变体植株中miR164c的表达量.研究结果表明,miR164c在突变体植株中的表达量显着低于野生型,说明miR164c沉默突变体构建成功.(本文来源于《湖南师范大学自然科学学报》期刊2016年01期）
沉默突变论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了探明温度升高对玉米大斑病菌Stste12基因沉默突变体生长发育、基因表达水平等方面的影响,对玉米大斑病菌野生型菌株Wt01-23和Stste12基因沉默突变体StRNAi9-10同时进行热激处理,比较2个菌株菌落形态、菌丝形态、菌落生长速度及分生孢子产量方面的差异,并通过半定量PCR技术检测热激处理对Stste12基因表达的影响。结果显示,热激处理提高了突变体StRNAi9-10菌落的生长速度,其菌落形态和生长速度接近Wt01-23菌株,但对Wt01-23菌落的生长速度和形态无显着影响;半定量PCR检测显示,StRNAi9-10在热激处理后Stste12基因表达量增加,且随着温度的升高而增加,而Wt01-23菌株的Stste12基因表达量未发生显着变化。以上结果表明,热激处理恢复了玉米大斑病菌RNAi突变体的生理特征,具有抑制RNAi的作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
沉默突变论文参考文献
[1].蒋梦婷.拟南芥快速运输沉默突变体imos1基因的克隆[D].长江大学.2019
[2].张运峰.热激对玉米大斑病菌Stste12基因沉默突变体发育的影响[J].河南农业科学.2016
[3].叶文武,张萌,曹明娜,翟春花,李爱宁.大豆疫霉PsMPK1沉默突变体的基因表达谱分析[J].南京农业大学学报.2016
[4].张丹丹,吴殿星,周波.OsDCL1基因沉默突变体诱导稻瘟病抗性的转录组分析[J].植物病理学报.2016
[5].吴多,周艳,宋傲群,刘浏,史筱靓.利用靶拟态合成和Gateway技术构建水稻miR164c沉默突变体[J].湖南师范大学自然科学学报.2016