导读:本文包含了增强型荧光蛋白基因论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:脂肪干细胞,慢病毒,增强型绿色荧光蛋白,多向分化
增强型荧光蛋白基因论文文献综述
张瑶瑶,吴国民,张潇毅,王琳,肖艳菊[1]（2019）在《慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因标记大鼠脂肪干细胞及体内示踪研究》一文中研究指出目的探讨慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)标记大鼠脂肪干细胞(ADSCs)最适感染复数,检测EGFP-ADSCs干细胞特性及体内活性。方法提取培养大鼠脂肪干细胞,流式细胞仪表型鉴定及成骨、成脂、成软骨多向诱导分化。采用携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体(Lentivirus-EGFP)以不同的感染复数MOI=0、1、5、10、25、50转染ADSCs,流式细胞仪测转染率,筛选合适MOI。CCK8测转染后ADSCs的增殖能力。EGFP-ADSCs成骨、成脂、成软骨诱导后分别行碱性磷酸酶、油红O及阿尔新蓝染色检测。将标记后的细胞注射到大鼠皮下,术后1,2,4w取材行冰冻切片荧光观察及免疫组织化学染色,观察EGFP-ADSCs在体内的表达情况。结果 CD90阳性表达,CD34阴性表达,脂肪干细胞向成骨、成脂、成软骨分化。MOI=0、1、5、10、25、50的转染率分别是0.12%、3.62%、42.4%、66.6%、90.4%、98.0%。CCK8法测转染组(MOI=25)与未转染组(MOI=0)细胞增殖能力无明显差别。EGFP-ADSCs经诱导后仍向成骨、成脂、成软骨分化。1w,2w,4w见细胞于移植部位。结论慢病毒介导的EGFP基因标记大鼠脂肪干细胞最适感染复数为25,且不影响干细胞活性及多向分化潜能,可以成为标记脂肪干细胞的理想方法。(本文来源于《现代口腔医学杂志》期刊2019年05期）
朱慧,朱文侠,黄广智,马小娜[2]（2019）在《携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒标记小鼠脐带间充质干细胞示踪方法》一文中研究指出目的探讨慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorecent protein,eGFP)转染小鼠脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)。方法通过组织贴壁法得到mUCMSCs;用生长增殖曲线、成骨、成软骨及成脂分化进行鉴定;以MOI为50、100、150、200携载eGFP的慢病毒载体介导转染mUCMSC,倒置显微镜下观察荧光表达,确定荧光表达率最高的MOI组。结果 eGFP慢病毒以MOI=150转染mUCMSC,效率较高,可直接用于体内示踪。结论用小鼠脐带可以分离出mUCMSCs,MOI=150时携载eGFP的慢病毒传染mUCMSCs效果最好。(本文来源于《延安大学学报(医学科学版)》期刊2019年03期）
王福科,张红,杨桂然,肖渝,何川[3]（2019）在《携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒转染骨髓间充质干细胞示踪方法》一文中研究指出目的本实验研究旨在研究使用携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced Green Fluorescent Protein,eGFP的慢病毒转染骨髓间充质干细胞(bone marrowmesenchymal stem cell,BMSCs)的方法,用于解决组织工程骨研究中种子细胞分化、增殖过程中的示踪问题。方法用携带eGFP的慢病毒转染第3代BMSCs,用流式细胞仪检测转染率,获得稳定表达eGFP的BMSCs,并通过描绘生长曲线来判定对BMSCs增殖性能的影响。结果当MOI值为70时,经eGFP慢病毒转染后的BMSCs能够得到活性较好、转染率高的eGFP-BMSCs;转染后各细胞生长曲线呈"S"形,MOI=70与MOI=0时细胞增殖最好,MOI=100会对BMSCs增殖造成影响。结论 MOI=70时携载eGFP基因慢病毒转染BMSC效果最好。(本文来源于《昆明医科大学学报》期刊2019年05期）
武成聪,荣树,任静,吴铮,刘涛[4]（2018）在《腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓间充质干细胞的效率及毒性》一文中研究指出背景:重组腺病毒对细胞生长、存活存在一定的毒性反应,其最适感染复数的确定相关研究较少。目的:研究重组腺病毒在不同感染复数下其转染效率、细胞毒性及对骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的影响。方法:携带增强型绿色荧光蛋白基因的重组腺毒载体分别以感染复数为0,50,100,150,200,250转染第5代骨髓间充质干细胞。转染24 h后观察细胞形态,锥虫蓝染色计数死亡率;转染48 h后荧光倒置显微镜下计算转染率,q PCR检测EGFP及Runx2基因表达量。MTT法评价不同感染复数转染对细胞活性的影响,确定最佳感染复数。结果与结论:(1)随感染复数值增加,骨髓间充质干细胞贴壁能力减弱,部分细胞老化、死亡;(2)以感染复数值为0,50,100,150,200,250转染24 h,其细胞死亡率依次为5.80%,6.67%,7.95%,7.76%,10.35%,11.18%,死亡率与感染复数值成正相关;(3)当感染复数值为100时即可达到最大转染效率,但当感染复数增大至200时,细胞活性即受到影响;当感染复数达到250时,骨髓间充质干细胞成骨分化潜能受到影响;(4)通过上述结果可以认为,腺病毒转染兔骨髓间充质干细胞的感染复数安全范围为50-150,其最适感染复数为100。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年17期）
何佳,邓峰美,林友胜,刘漪沦[5]（2018）在《网素蛋白1和增强绿色荧光蛋白基因共表达慢病毒载体构建和鉴定及在结直肠癌细胞SW480中表达》一文中研究指出目的构建和鉴定网素蛋白基因(PLS)1和增强绿色荧光蛋白(EGFP)共表达慢病毒载体,并检测其在人结直肠癌细胞株SW480中的表达水平。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法克隆PLS1基因;将PLS1基因连接到带有EGFP的慢病毒表达载体p EZ-Lv201中构建慢病毒载体;将构建的慢病毒载体质粒p EZ-PLS1-SV40-e GFP-IRES-Puro(p EZ-PLS1)与慢病毒包装质粒混合物Lenti-Pac HIV mix共转染293T细胞,收集慢病毒悬液;重组病毒转染H1299细胞,定量PCR法检测重组病毒滴度;将构建的p EZ-PLS1感染SW480细胞,荧光显微镜观察和Western印迹检测感染后SW480细胞中EGFP和目的基因PLS1表达。结果基因测序分析证实克隆的PLS1基因与Gen Bank提供的序列完全一致;构建的重组慢病毒载体经双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定证实PLS1正确插入p EZ-Lv201;定量PCR测定慢病毒滴度为0.1×10~9~1.0×10~9TU/ml。在SW480细胞中重组病毒感染96 h后在荧光显微镜下可检测到较强的绿色荧光蛋白表达,Western印迹检测到在SW480细胞中PLS1蛋白过表达。结论成功构建携带PLS1基因的重组慢病毒载体,在SW480细胞中有效表达。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2018年02期）
李世伟,谢晓丽,杨晓东,刘利君,唐学阳[6]（2017）在《超声微泡转基因技术促增强型绿色荧光蛋白基因在骨缺损处转染的实验研究》一文中研究指出目的探讨超声微泡转基因技术介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因在兔骨缺损处转染时,不同超声辐照时间对转染效率及局部组织的影响。方法 3月龄雄性新西兰大白兔30只,体质量2.5~3.0 kg,制备右尺骨骨缺损模型,并随机分为5组(n=6)。造模后第10天于骨缺损断端间注射EGFP质粒微泡混悬液(0.3 m L/kg)后,在超声频率1 MHz、超声强度0.5 W/cm~2、占空比20%条件下,对骨缺损部位分别进行1、2、3、4、5 min超声辐照(分别为1、2、3、4、5 min组)。观察动物存活情况;转染后1周取材,大体观察骨缺损处软组织形态;荧光染色观察基因表达情况;HE染色及透射电镜观察局部组织损伤情况。结果各组动物均存活至实验完成。转染后1周各组骨缺损处有软组织生长,周围肌肉组织部分内陷填充于其间。荧光显微镜下观察,各组兔骨缺损处均有绿色荧光表达,其中2 min组表达最强,1 min组表达最弱,其吸光度(A)值与其他各组比较差异有统计学意义(P<0.05);3、4、5 min组间差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色及透射电镜观察示,各组骨缺损处局部均有不同程度组织损伤,损伤程度随辐照时间的延长而加重。结论超声微泡转基因技术介导EGFP质粒在兔骨缺损部位转染时,其转染效率和超声辐照时间相关。当超声参数为1 MHz、0.5 W/cm~2、20%占空比时,超声辐照2 min可获得最佳转染效率及相对较轻的组织损伤。(本文来源于《中国修复重建外科杂志》期刊2017年04期）
贺可贵,闵祥栋,王云,韩纪举,辛晓明[7]（2016）在《转基因增强绿色荧光蛋白小鼠血小板黏附聚集功能的变化》一文中研究指出目的探讨转基因增强绿色荧光蛋白小鼠血小板黏附和聚集功能的变化。方法选用12~14周龄转基因增强绿色荧光蛋白小鼠和C57BL/6J小鼠,戊巴比妥钠麻醉,心脏取血,肝素抗凝,全自动血细胞分析仪测定血小板参数,灌流小室法测定血小板在胶原面的黏附变化,比浊法测定不同浓度二磷酸腺苷诱导下的血小板最大聚集率。结果与转基因增强绿色荧光蛋白雄性小鼠比较,雌性小鼠的血小板数、血小板平均体积、血小板压积、黏附率和最大聚集率(二磷酸腺苷3、10和30μmol)下降(P<0.05);与C57BL/6J雌性小鼠比较,转基因增强绿色荧光蛋白小鼠血小板数降低(P<0.05)。结论转基因增强绿色荧光蛋白雌雄小鼠之间血小板数、血小板平均体积、血小板压积和黏附聚集功能有差异,转基因增强绿色荧光蛋白小鼠与C57BL/6J雌性小鼠之间血小板数也有差异。(本文来源于《中国现代医学杂志》期刊2016年19期）
汪勇[8]（2015）在《利用基因工程技术在大肠杆菌中表达增强型绿色荧光蛋白》一文中研究指出以含有绿色荧光蛋白基因的质粒为模板,PCR扩增该基因片段。使用p EASY-Blunt E1载体构建重组表达载体,并将其转化至大肠杆菌感受态细胞中诱导表达。在可见光下,转化子菌落呈黄绿色;在荧光显微镜下可观察到发绿色荧光的菌落和菌体。结果表明,构建的重组表达载体得到高效表达。本研究为在高中开展基因工程实验提供技术支持。(本文来源于《生物学教学》期刊2015年08期）
马涛,姚明月,刘延琳[9]（2015）在《酿酒酵母APA1的定点突变以及与增强型绿色荧光蛋白EGFP基因的共表达》一文中研究指出应用基因突变技术向酿酒酵母APA1基因中引入同义突变,为进一步研究APA1表达量与酿酒酵母硫化氢产量的关系提供实验基础。从酿酒酵母S288c中利用聚合酶链式反应扩增APA1基因,与EGFP基因融合构建表达载体。以该载体为模板,通过一步法点突变技术向APA1基因中分别引入APA1-1/2/3/4 4个突变。测序结果表明突变位点与预期结果一致。成功获得了APA1的4个同义突变。一步法点突变技术是一种高效的定点突变方法。分别转化酿酒酵母YS59,荧光显微镜下可见绿色激发荧光,表明APA1-1/2/3/4与EGFP基因共表达。(本文来源于《食品科学》期刊2015年23期）
夏婷婷,苏晓慧,翟少华,简子健[10]（2015）在《增强型绿色荧光蛋白eGFP基因与犬瘟热N蛋白基因重组质粒的构建》一文中研究指出【目的】构建增强型绿色荧光蛋白(e GFP)基因与犬瘟热核蛋白N基因(CDV N)的重组质粒,为获得犬瘟热重组病毒的感染性克隆奠定研究基础。【方法】设计重组PCR引物,分别扩增e GFP,CDV N基因,并融合重组基因。【结果】成功克隆了e GFP基因和CDV N基因,大小分别为720 bp和1 572 bp,经测序鉴定与Gen Bank中已发表的e GFP(登录号:X83959)和CDV N(登录号:AY466011)序列同源性分别为100%和99.81%。重组基因e GFP-CDV N大小为2 292 bp,与预期大小一致。【结论】采用重组PCR技术构建的Te GFP-CDVN重组质粒,可用于e GFP-CDVN重组蛋白的表达。(本文来源于《新疆农业科学》期刊2015年02期）
增强型荧光蛋白基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorecent protein,eGFP)转染小鼠脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)。方法通过组织贴壁法得到mUCMSCs;用生长增殖曲线、成骨、成软骨及成脂分化进行鉴定;以MOI为50、100、150、200携载eGFP的慢病毒载体介导转染mUCMSC,倒置显微镜下观察荧光表达,确定荧光表达率最高的MOI组。结果 eGFP慢病毒以MOI=150转染mUCMSC,效率较高,可直接用于体内示踪。结论用小鼠脐带可以分离出mUCMSCs,MOI=150时携载eGFP的慢病毒传染mUCMSCs效果最好。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
增强型荧光蛋白基因论文参考文献
[1].张瑶瑶,吴国民,张潇毅,王琳,肖艳菊.慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因标记大鼠脂肪干细胞及体内示踪研究[J].现代口腔医学杂志.2019
[2].朱慧,朱文侠,黄广智,马小娜.携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒标记小鼠脐带间充质干细胞示踪方法[J].延安大学学报(医学科学版).2019
[3].王福科,张红,杨桂然,肖渝,何川.携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒转染骨髓间充质干细胞示踪方法[J].昆明医科大学学报.2019
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[5].何佳,邓峰美,林友胜,刘漪沦.网素蛋白1和增强绿色荧光蛋白基因共表达慢病毒载体构建和鉴定及在结直肠癌细胞SW480中表达[J].中国老年学杂志.2018
[6].李世伟,谢晓丽,杨晓东,刘利君,唐学阳.超声微泡转基因技术促增强型绿色荧光蛋白基因在骨缺损处转染的实验研究[J].中国修复重建外科杂志.2017
[7].贺可贵,闵祥栋,王云,韩纪举,辛晓明.转基因增强绿色荧光蛋白小鼠血小板黏附聚集功能的变化[J].中国现代医学杂志.2016
[8].汪勇.利用基因工程技术在大肠杆菌中表达增强型绿色荧光蛋白[J].生物学教学.2015
[9].马涛,姚明月,刘延琳.酿酒酵母APA1的定点突变以及与增强型绿色荧光蛋白EGFP基因的共表达[J].食品科学.2015
[10].夏婷婷,苏晓慧,翟少华,简子健.增强型绿色荧光蛋白eGFP基因与犬瘟热N蛋白基因重组质粒的构建[J].新疆农业科学.2015