刘靖华1李正林2张姬华2
(1山东省菏泽市食品药品检验检测中心?274000)
(2山东省菏泽市牡丹区食品药品稽查大队??274000)
【摘要】目的快速准确对药物中克林霉素磷酸酯的含量进行测定。方法根据酸性介质下，克林霉素磷酸酯与Fe3+还原为Fe2+，而所生成的Fe2+与邻菲啰啉发生络合反应，在波长508nm处有强吸收，结合流动注射-分光光度计法间接对药物中的克林霉素磷酸酯进行测定。结果本实验方法测定线性范围0.65～150mg/L，检出限为0.060mg/L，RSD均＜2%。结论流动注射-分光光度法测定克林霉素磷酸酯的方法操作简便、快速，且重复性好，准确度高，可用于药物中克林霉素磷酸酯含量的测定。
【关键词】流动注射-分光光度法克林霉素磷酸酯含量测定
【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）29-0027-02
Flowinjection-spectrophotometricdeterminationofClindamycinPhosphateindrugs
【Abstract】OBJECTIVEThepurposeofthisstudyistodeterminetheclindamycinphosphateindrugs.METHETHODItwasfoundthattheFe3+wasreducedtoFe2+bytheClindamycinphosphateintheacidicmedium,andtheFe2+couldreactedwiththephenanthrolinecomplex.Thecomplexhadthestrongabsorptionatawavelengthof508nm.TheClindamycinPhosphateindrugsweredeterminatebyusingtheflowinjection-Spectrophotometermethod.RESULTSThelinearofthismethodswasrange0.65mg/Lfrom150mg/L,andthedetectionlimitwas0.060mg/L,RSDwerebothlessthan2%.ConclusionTheflowinjection-spectrophotometricissimple,fast,andithasbeengoodrepeatabilityandhighaccuracy,whichcanbeusedtodeterminetheclindamycinphosphateindrugs.
【Keywords】Flowinjection-spectrophotometricClindamycinPhosphateDetermination
克林霉素磷酸酯亦称为克林霉素-2-磷酸酯，为克林霉素的一种衍生物[1]。CLP在体外无活性，当其进入体内后可在碱性磷酸酯酶的作用下水解成克林霉素，对革兰阳性菌和厌氧菌有较强的抗菌活性，且吸收好，被广泛应用于临床的抗感染治疗中[2，3]。目前克林霉素磷酸酯的测定方法主要有HPLC法、UV法[4]等，但这些方法中有的需要用到昂贵的仪器，有的测定灵敏度低等。本研究通过利用克林霉素磷酸酯与铁发生氧化还原反应这一原理来间接的测定克林霉素磷酸酯的含量，旨在为克林霉素磷酸酯的测定提供一种新的方法和依据。
1实验原理
在pH为4左右的酸性缓冲介质中，克林霉素磷酸酯可将Fe3+还原为Fe2+，而所生成的Fe2+与邻菲啰啉反应生成桔红色的络合物，在波长508nm处有强吸收，且生成的Fe2+的含量与测定液中邻菲啰啉的含量存在定量关系，经换算所测得吸光度与药品种克林霉素磷酸酯的质量浓度在一定范围内呈线性关系。
2实验部分
2.1仪器与试剂
2.1.1仪器
岛津UV-1750紫外-可见分光度计；723型光栅分光光度计；wates2489高效液相色谱仪；pHS-818-S型精密pH计。
2.1.2试剂及制备
克林霉素磷酸酯标准溶液储备液（3.00g/L）：称取0.3000g克林霉素磷酸酯标准品与100mL容量瓶中，用水稀释至刻度；
Fe3+溶液（0.1.g/L）：称取硫酸铁铵固体2.1584g，加入2.00mL硫酸溶液（1mol/L），用水定容至250mL，再取10.00mL母液稀释定容至100mL；
邻菲罗啉溶液：0.0015mol/L；
乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH3.76）：0.2mol/L乙酸钠及0.2mol/L的乙酸溶液。
络合液A：移取5.00mLFe3+溶液（0.1g/L）与5.00mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH3.76）至50mL容量瓶中，用水定容至刻度；
所用试剂均为分析纯，实验用水均为去离子水。
2.2实验方法及条件
样品由泵1进样，载流流量为2.5mL/min，邻菲啰啉及络合液B由泵2泵入，流量为2.50mL/min。测定时，同时开启泵1、泵2，使载流溶液、络合液A、邻菲啰啉溶液同时进入系统内，同时进样阀打开，15s后关闭泵2，50s后再打开泵2，观察并记录吸光度测定值A0。然后旋转进样阀，将克林霉素磷酸酯溶液及样品测定液进入系统中，15s后关闭泵2，50s后重新开启，测定吸光度值A，△A（A-A0）则为测定液中吸光度值。检测波长为508nm，反应管长度为100cm，冷却管长度为75cm，反应停留时间为50s。
3结果和讨论
3.1波长选择
为选择最佳络合反应，本研究按照实验方法分别对多种体系在波长300～600nm的范围内对各反应体系进行扫描，结果如表1所示。
表1不同体系在波长300～600nm响应值
编号体系波长300～600nm响应
1邻菲啰啉溶液+克林霉素磷酸酯标准溶液+乙酸-乙酸钠缓冲液可见光区几乎无响应
2Fe3+溶液+克林霉素磷酸酯标准溶液+乙酸-乙酸钠缓冲液可见光区有较小响应
3Fe3+溶液+邻菲啰啉溶液+乙酸-乙酸钠缓冲液可见光区响应有所增强
4Fe3+溶液+邻菲啰啉溶液+乙酸-乙酸钠缓冲液+克林霉素磷酸酯标准溶液可见光区响应显著增强，在508nm处有最大吸收
结果表明，只有体系4响应发生显著变化，表明溶液中发生化学反应，主要是由于Fe3+与克林霉素磷酸酯溶液发生氧化还原反应产生Fe2+，导致吸光度发生显著变化。
3.2各流路参数的选择
本研究中多次测定发现：当反应管长度为100cm时，冷却管长度为75cm时，体系的ΔA最大，测量准确度最高；此外，考察停流时间对反应体系灵敏度的影响，结果表明：在20～45s内，随停留时间增加，ΔA持续增大，但当停留时间超过45s时，体系的ΔA基本不变，因此，选择停留时间为50s。
3.3各溶液浓度的选择
本研究中考察Fe3+溶液浓度对测定灵敏度的影响，结果表明，当Fe3+溶液的浓度超过9.5mg/L时，体系的△A基本保持不变，因此选择络合液中Fe3+的浓度为10mg/L；测定结果表明，邻菲啰啉溶液浓度＞0.0014mg/L后，体系△A基本保持不变，因此选择邻菲啰啉浓度为0.0015mg/L。
3.4标准曲线及检出限
按照实验方法对克林霉素磷酸酯标准系列进行测定，结果表明，克林霉素磷酸酯的含量在0.65～150mg/L的质量浓度范围内与吸光度△A呈线性相关，相关系数为0.9964。本方法测定检出限为0.060mg/L。
3.5样品含量测定
取克林霉素磷酸酯片20片，精密称定，求出平均片重后，研细混匀。平行称取适量粉末（约含克林霉素磷酸酯150mg）6份，分别置于100mL容量中，加适量水溶解，用水继续定容，充分摇匀，经0.22μm水系滤膜过滤，取续滤液，待用。
取克林霉素磷酸酯注射液5支，于烧杯中充分混匀后，平行量取1mL药液（约含克林霉素磷酸酯150mg）6份，分别置于100mL容量中，经水稀释定容至刻度，待用。
将上述各样品稀释到适当浓度后，按本方法进行测定，经标准曲线计算浓度。同时将结果与药典标准方法测定的结果相比较，结果如表2所示。结果表明，本法和药典测定的结果无明显差异（P＞0.05）。
表2药物中克林霉素磷酸酯的含量测定结果（n=6）
克林霉素磷酸酯本法药典方法RSD(%)
片剂147.6mg/片148.1mg/片1.020.98
注射液148.9mg/mL149.3mg/mL1.211.14
4结论
流动注射-分光光度法测定克林霉素磷酸酯的方法操作简便、快速，且重复性好，准确度高，可用于药物中克林霉素磷酸酯含量的测定。
参考文献
[1]陈嘹，杨贵芬，王莹.克林霉素磷酸酯注射液与盐酸异丙嗪注射液存在配伍禁忌[J].中国实用护理杂志，2013，29(024):46.
[2]邵秀兰，王巧岭，张彩红.妇科千金片联合克林霉素磷酸酯治疗慢性盆腔炎87例临床观察[J].河北中医，2013，34(11):1658～1660.
[3]赵平.克林霉素磷酸酯联合盐酸氨溴索治疗肺炎支原体感染致咳嗽30例[J].中国药业，2013，21(23):46～47.
[4]李颖，武涛，李莹.紫外分光光度法测定克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液中克林霉素磷酸酯的含量[J].中国医药指南，2013，10(32):453～454.