一、大鼠皮肤创面愈合过程中IGF-1的定量学研究（论文文献综述）
冯天琪[1]（2021）在《自组装肽纳米纤维和PNIPAM共构建温敏型水凝胶及其对创面修复的研究》文中研究表明水凝胶作为创伤敷料具有合适的粘度、机械性能和良好的生物相容性,因此,水凝胶作为一种柔性的功能材料广泛应用于创面愈合。温敏水凝胶是一种智能水凝胶,主要特征是通过响应温度变化产生溶胶-凝胶转变的效果,低温下呈现低粘度的溶胶相,可以流动状态填补空腔、缺陷或手术伤口,温度升高至体温发生相变形成水凝胶,能够适应不规则形状的边界;在换药时可将水凝胶从伤口剥离,减少换药过程中对伤口的二次伤害;并且药物或细胞等治疗剂可以通过简单的溶液混合快速的加入到体系中,也可作为局部药物治疗的持续药物释放载体或组织修复的细胞生长基质。优良的创伤敷料应该符合不同愈合阶段的特殊需求,寻找合适的水凝胶材料成为生物材料研究的热点。本研究筛选出PNI/RA-Amps复合水凝胶的最优配方,通过涂板法和生长动力学确定了RADA16-Amps对细菌的抑菌特性,与PNIPAM配伍,采用试管倒置法、紫外分光光度计和流变学特性确定了复合水凝胶的温敏特性和力学性能,通过成胶时间筛选出复合水凝胶的最适配比。SEM观察水凝胶的微观形态。结果表明:偶联Amps的RADA16-Amps保留了Amps的抗菌功效,并筛选出RADA16-Amps浓度在148.00μM时,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率达到100%。筛选出复合水凝胶PNI/RA-Amps最适配比量为30.00mg/m L:0.90μM,且温度响应的特性主要与PNIPAM有关。体系呈现出多孔网状结构,有利于气体和液体的交换,可用于止血、伤口愈合、药物释放等。通过构建PNI/RA-Amps和载药PNI/RA-Amps/E,验证其对MGF E肽的缓释性能,并研究了其对细胞功能的影响。结果表明:不同浓度复合水凝胶对细胞相对增殖率均大于80%,溶血率均小于5%,符合国家安全标准,生物相容性好;复合水凝胶可负载MGF E肽,并在体外可以持续释放长达24 h。载药复合水凝胶PNI/RA-Amps最适负载浓度为50.00 ng/m L,且在48 h内可显着促进HFF细胞增殖（P<0.01）,同时PNI/RA-Amps可以改善共聚物PNIPAM的细胞粘附性能（P<0.01）。利用小鼠建立肝脏止血模型,研究温敏水凝胶对止血的作用。通过拉伸倒置处理猪皮和大鼠伤口探究温敏水凝胶对组织粘附性能的影响。建立大鼠皮肤创伤模型,研究温敏水凝胶对创伤修复的作用。结果表明:温敏水凝胶能可显着加速止血（P<0.01）,止血效果明显强于市售的液体创口贴且差异显着（P<0.05）。PNI/RA-Amps原位水凝胶成凝胶后可以在大鼠创面和拉伸倒置处理的猪皮上牢固粘附,具有良好的黏附性,有利于覆盖皮肤创面。在皮肤创伤修复周期中,观察皮肤病理变化,载药PNI/RA-Amps/E温敏水凝胶可以减轻创面伤口处炎症细胞聚集,加速上皮化和新血管的生成,促进胶原纤维生成,促进创面愈合。本文筛选出具有止血特性的自组装肽RADA16和短链抗菌肽Amps,将二者偶联成一条肽链,在水溶液中通过自组装形成具有止血和抑菌双特性的肽纤维,通过与温敏共聚物PNIPAM混合,使复合水凝胶同时具有温敏特性和优良的机械性能。通过体外细胞实验、体内动物实验对皮肤创伤愈合功能进行研究,结果表明PNI/RA-Amps温敏水凝胶生物相容性良好,可负载小分子MGF E肽并实现缓慢释放,载药PNI/RA-Amps/E水凝胶促进成纤维细胞增殖,且可促进皮肤损伤的修复,是一种应用前景广阔的生物材料,为临床应用提供理论基础和方向。
詹婧[2]（2021）在《聚乳酸-羟基乙酸共聚物的仿生功能化及皮肤创伤修复研究》文中指出由于意外事故、生产生活、疾病等各种因素所导致的皮肤创伤患者每年都加速递增。创伤修复过程通常需要用到敷料以加速和促进皮肤创伤愈合。理想的皮肤创伤修复敷料应具有良好的生物相容性、适宜的生物可降解性、合理的机械性能、抗菌性、诱导细胞生长和组织再生的能力等。皮肤创伤修复敷料的主要材料包括:天然材料（如纤维素、壳聚糖、海藻酸钠、胶原等）和人工合成材料（如聚乳酸（PLA）、聚乙烯醇（PVA）、聚己内酯（PCL）、聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）等）。天然材料来源广泛,但天然材料只能利用一些材料表面的活性基团进行有限的修饰。合成材料可根据敷料所需的物理和化学性质进行设计和制备,可获得生物可降解、力学性能优良、生物相容性好和加工性能优良的敷料材料。但在实际的皮肤损伤修复过程中,有多种生长因子参与,调控各阶段的细胞生长和分化。而无论是天然材料或合成材料诱导及促进细胞和组织生长的能力都相对较弱。此外,细菌感染也会带来创面难以愈合的风险。因此,需要在敷料中添加一些活性因子和抗菌剂来实现多种功能。在众多人工合成高分子中,PLGA具有体内生物相容性好、可降解、加工性能优良等特点。PLGA通过改变合成过程中乳酸和羟基乙酸单体的比例可以控制PLGA降解速度,因此已经被广泛应用于药物载体和组织工程修复支架中,并且已经获得美国FDA认证。因此,PLGA被认为是一种理想的用于制备皮肤创伤修复敷料的材料。在本研究中,我们受贻贝足蛋白5中含有的黏附分子多巴（DOPA）的启发,基于分子仿生理论,利用基因工程技术将DOPA分子引入到具有促进成纤维细胞增殖和血管化能力的成纤维细胞生长因子bFGF及抗菌多肽PonG1的末端。同时,采用图案化静电纺丝技术制备了一种PLGA纺丝膜作为敷料的基底材料,图案化电纺丝膜与无序电纺丝膜相比,拉伸力学性能、透气性能得到提升,更有利于伤口愈合。为了赋予敷料促伤口位置细胞黏附和血管化的功能及抗菌能力,本研究表达和提取了带有DOPA的DOPA-bFGF和DOPA-PonG1,随后通过DOPA的黏附能力将DOPA-bFGF和DOPA-PonG1黏附于敷料基底材料表面,制备了一种具有促进细胞黏附与增殖并抗菌的双重仿生功能化皮肤创伤修复敷料。本研究使用扫描电子显微镜（SEM）、红外光谱（FTIR）、接触角测量、力学性能测试、体外bFGF和PonG1的结合和释放、体外抗菌和细胞生物相容性等实验手段对表面仿生黏附有DOPA-bFGF和DOPA-PonG1的图案化PLGA纺丝膜进行了表征。结果显示,表面黏附有DOPA-bFGF和DOPA-PonG1的纤维表面粗糙度增加,可见生物活性因子的大量沉积。FTIR结果显示有大量的DOPA-bFGF和DOPA-PonG1通过仿生黏附作用与图案化PLGA纺丝膜结合。接触角测量结果显示图案化纺丝膜的亲水性也得到了增强。力学性能测试结果表明,图案化纺丝膜比无序的纺丝膜具有更高的拉伸强度。抗菌实验结果显示,仿生黏附有DOPA-PonG1组的抗菌能力得到了明显提升。细胞实验结果显示,图案化纺丝膜表面仿生黏附了DOPA-bFGF后,细胞的增殖和COL-I、VEGF基因表达能力也有显着增强。本研究进一步采用大鼠全皮层伤口模型验证仿生黏附有DOPAbFGF和DOPA-PonG1的图案化PLGA纺丝膜的皮肤创伤修复能力,观察1-14天不同组别的伤口修复情况。结果表明,7天时,表面仿生黏附有DOPA-bFGF组的伤口愈合率开始大于其他组。14天时,这种差距更加明显,这说明仿生黏附的DOPA-bFGF在伤口愈合过程中发挥了促进作用,在DOPA-PonG1的联合作用下加速了创面修复。与商品化壳聚糖季铵盐敷料、藻酸盐敷料进行大鼠全皮肤层损伤修复对比,DOPA-bFGF/DOPA-PonG1@PLGA纺丝纤维膜修复的效果最为显着,明显优于商品化敷料组。综上所述,本研究使用电纺丝技术制备了一种图案化PLGA电纺丝纤维膜,基于分子仿生理论,制备了两种仿生化生物活性因子DOPA-bFGF和DOPAPonG1,利用DOPA分子的黏附作用增强了bFGF和PonG1与图案化PLGA纺丝膜的结合力,体外实验结果验证了表面结合有DOPA-bFGF和DOPA-PonG1的PLGA纺丝膜的抗菌和促进细胞生长的能力,体内实验表明这种图案化纤维膜能够加速大鼠背部全皮层伤口的愈合。
郭倩倩[3]（2021）在《鹿茸再生初始阶段伤口愈合分子调控机制的研究》文中进行了进一步梳理
史哲[4]（2021）在《生长因子纳米复合水凝胶GelMa的成骨微环境对骨再生的作用及机制》文中进行了进一步梳理第一部分GelMa水凝胶的制备,相关表征和体外生物学性能及优化研究目的制备并合成GelMa水凝胶,并对其相关表征,理化性质和生物学性质初步检测,确定其最优参数。方法制备出不同浓度的GelMa,并进行溶胀率测试,弹性模量的评估,体外胶原酶降解实验,大鼠体内水凝胶降解实验,电镜观察水凝胶的表征。观察不同紫外光交联时间对水凝胶内大鼠骨髓间充质干细胞BMSCs活性的影响。结果浓度为3%,5%,7%和10%GelMa水凝胶24h溶胀率分别为20.1±0.6,15.7±0.8,13.2±0.9 和 8.3±0.6,弹性模量分别为 3.3±2.6kPa,7.6±3.3kPa,15.9±4.4 kPa,25.0±6.6kPa,完全降解时间分别为 3d,7d,14d 和 21d。水凝胶种植于SD大鼠背部降解时间约为20天。扫描电镜观察水凝胶切面可见水凝胶内部为光滑、多孔的三维立体网架结构。紫外光交联时间越短细胞活性越好,细胞增值能力越强。结论GelMa水凝胶的孔径适合成骨环境。水凝胶的弹性模量与水凝胶的浓度成正比。水凝胶的溶胀速率和降解速率与浓度成反比。水凝胶在体内和体外的降解速率基本相同。紫外线灯的交联时间越长,对细胞生物学行为的影响越大。在紫外灯交联30S时间,浓度为10%的GelMa适合大鼠骨髓间充质干细胞成骨的微环境。第二部分负载纳米硅酸盐和生长因子SDF-1 α的GelMa水凝胶的性能及其修复颅骨骨缺损中的作用研究目的自体骨移植是治疗骨缺损的金标准。受限于供体部位有限的骨量和多种发病率,如感染和疼痛等。具有成骨潜能的可注射水凝胶具有微创并填补不规则骨缺损的优势,纳米硅酸盐（SN）具有良好的骨诱导性,缓慢释放生长因子和增强水凝胶可注射性的作用。基质细胞衍生因子1 α（SDF-1 α）除了作为骨诱导因子外还具有招募干细胞的能力。所以我们设计了一种简单,无需细胞,快速可注射GelMa-SN-SDF-1 α水凝胶,具有招募干细胞,良好的骨诱导性,并且对生长因子有缓释作用的复合水凝胶。并在颅骨缺损模型中验证其成骨效果。方法将SN和SDF-1 α引入到预聚物中,合成明胶-甲基丙烯酰基（GelMa）预聚物,提高可注射性、控释性能、成骨能力和干细胞归巢。分析不同型号针头的水凝胶可注射性,扫描电镜观察内部结构和孔隙率,测试水凝胶样品压缩模量,进行溶胀率测试和降解能力测试。使用大鼠SDF-1 α ELISA试剂盒测定释放的SDF-1 α的浓度。分析细胞活力,扩散,增殖和迁移。茜素红S染色,定量分析骨蛋白表达。在SD大鼠体内颅骨8mm缺损模型上,通过Micro-CT,H&E染色和Goldner-Masson三色染色进一步分析体内成骨效果。结果GelMa-SN-SDF-1 α在室温下通过各种型号针头显示出优异的注射性。加载的SDF-1 α表现出长期的控制释放模式,并有效的刺激了 MSC的迁移和归巢。GelMa-SN-SDF-1 α水凝胶可促进细胞扩散,迁移,成骨相关生物标志物表达和基质矿化。GelMa-SN-SDF-1 α水凝胶填补了大鼠的临界颅骨缺损,修复体积达百分之77%。成骨效果明显优于GelMa,GelMa-SN,GelMa-SDF-1 α。结论GelMa-SN-SDF-1 α水凝胶是一种简单,快速制备的无细胞的可注射成水凝胶,用于刺激骨再生。SN和SDF-1 α引入的GelMa水凝胶可促进水凝胶成骨并引导MSC归巢。GelMa-SN-SDF-1 α可注射水凝胶在体外和体内均显示出优异的注射性,生物相容性,成骨能力。加载的SDF-1 α表现出受控的长期释放模式。GelMa-SN-SDF-1 α在大鼠颅骨缺损修复模型中效果显着。第三部分介孔二氧化硅微球贯序释放SDF-1 α和IGF-1的GelMa水凝胶在胫骨骨缺损和椎间骨融合中的应用研究目的大多数生物仿生材料由三个重要部分组成,支架、细胞、生长因子。对于支架的要求基本为较少的免疫排斥反应,良好的生物形容性,以及起到为细胞提供攀爬骨架的作用。生物体内生长因子种类繁多,并在骨再生不同的时间段对骨诱导发挥作用。SDF-1 α时间窗口为1d～10d,具有骨诱导作用和招募干细胞归巢的功能,IGF-1在7d-20d发挥骨诱导作用。介于骨再生初期对最终愈合效果有重要作用,我们利用GelMa缓释SDF-1 α,并通过介孔二氧化硅微球将IGF-1释放窗口进一步延长到20d,希望通过此方式达到两种生长因子的贯序释放,制作并注射GelMa-SDF-1 α-SiO2（IGF-1）在大鼠胫骨骨缺损模型和尾椎骨融合模型上验证其成骨效果。方法水凝胶自身可降解特点以及孔隙结构可将水凝胶内的SDF-1 α缓慢释放,介孔二氧化硅微球表面的介孔可延缓IGF-1流出从而进入到水凝胶中。GelMa-SDF-1 α-SiO2（IGF-1）在体外运用矿化染色分析以及骨蛋白表达定量分析,体内实验则为大鼠胫骨骨缺损模型,将胫骨结节向上方用磨转制造6mm缺损,深度达骨髓腔。大鼠尾椎骨融合模型,将C3/4尾椎椎间盘切除,并用PEEK管保持3mm间隙进行骨融合。两种模型通过Micro-CT进一步分析体内成骨效果。结果SDF-1 α第3天释放过半,第15天释放达95.8%,接近释放完毕。IGF-1第7天释放量过半,第21天释放量累积达90.5%。GelMa-SDF-1 α-SiO2（IGF-1）可促进成骨相关蛋白的表达,水凝胶的矿化。GelMa-SDF-1 α-SiO2（IGF-1）在体内胫骨骨缺损的模型中修复面积大于其他三个组,X线可见修复效果良好,micro-CT分析骨量BV/TV达67.55%。在尾椎融合模型中,X线可见尾椎之间有新生骨连接,椎体间间隙小于其他实验组,micro-CT分析骨量BV/TV达80.72%。结论GelMa水凝胶负载SDF-1 α可以对该生长因子起到缓释效果。通过离心使IGF-1进入介孔二氧化硅微球,再将介孔二氧化硅微球与GelMa共混可以更持久的释放该生长因子。GelMa-SDF-1 α-SiO2（IGF-1）可以贯序释放两种生长因子,在体外更好的促进成骨细胞分化,成骨蛋白表达。GelMa-SDF-1 α-SiO2（IGF-1）在动物体内的胫骨骨缺损模型和尾椎椎间融合模型中成骨效果良好。
岑小宁[5]（2021）在《MEBT/MEBO对慢性创面组织修复中STAT6和SOCS1表达的影响》文中提出目的:探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏（MEBT/MEBO）对慢性创面组织修复中STAT6和SOCS1表达的影响,为MEBT/MEBO临床推广提供可靠的理论依据。方法:（1）本实验选择150只Wistar大鼠作为研究对象,将这些大鼠分为模型组、空白组、急性组以及贝复新组、MEBO组,每组30只。按要求处理各组大鼠,分别在实验分组后的第3、第7天、第14天观察各组大鼠创面愈合情况,并于这3个时间节点切取大鼠创面组织行石蜡包埋,进行Masson染色及HE染色;（2）采用Western Blot法分别对信号转导子和转录激活子6（signal transducer and activator of transcription 6,STAT6）及细胞因子信号抑制因子（suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1）进行检测与对比,分析在各组大鼠创面组织中STAT6和SOCS1蛋白表达量的情况;（3）采用Real Time PCR法检测各组大鼠慢性难愈合创面肉芽组织中STAT6和SOCS1 mRNA基因转录情况。结果:（1）通过研究对比各组大鼠创面大体愈合情况及创面组织Masson及HE染色结果,可以发现MEBO组、急性组、贝复新组三组组间对比都未见显着差异性,且这三组的愈合情况明显好于模型组。（2）对比各组大鼠创面组织STAT6、SOCS1蛋白在各时间点的表达水平:急性组、MEBO组和贝复新组STAT6蛋白表达呈先降低后再增高的趋势（P<0.05）,而模型组呈持续降低现象（P<0.05）。建模后第3天、第7天,对比模型组,其他四组的STAT6蛋白表达水平均较低,第14天,五组的STAT6蛋白表达水平未见显着差别（P>0.05）。急性组、MEBO组和贝复新组SOCS1蛋白表达呈先上升后降低趋势（P<0.05）,而模型组则持续升高（P<0.05）;建模后第3天、第7天,急性组、MEBO组和贝复新组SOCS1蛋白表达最高,最低为模型组。第14天时,各组有关该值实验结果的差异性并不明显（P>0.05）。（3）SOCS1 mRNA、STAT6mRNA的基因转录水平比较:建模后急性组、MEBO组和贝复新组的STAT6 mRNA转录水平均呈先降低,后增高趋势（P<0.05）,而模型组则表现为持续降低的趋势（P<0.05）;建模后第3天、第7天,空白组、急性组、贝复新组与MEBO组STAT6 mRNA转录水平均明显低于模型组（P<0.05）;第14天五组mRNA转录水平无明显差异（P>0.05）。建模后急性组、MEBO组和贝复新组SOCS1 mRNA转录水平呈先升高后降低现象（P<0.05）,模型组呈持续升高现象（P<0.05）;建模后第3、第7天,急性组、贝复新组与MEBO组SOCS1 mRNA转录水平均明显高于空白组及模型组（P<0.05）,对比模型组,空白组转录水平更高（P<0.05）;五组在第14天时的SOCS1 mRNA转录水平无统计学差异。结论:（1）通过MEBT/MEBO治疗可有效促进创面的愈合,明显减少浸润的炎症细胞,促进毛细血管、毛囊、皮质腺的生成;（2）MEBT/MEBO能够下调慢性难愈合创面中STAT6的蛋白表达及STAT6 mRNA转录水平,抑制2型固有免疫的促进纤维化修复的作用,从而减少瘢痕的形成;（3）MEBT/MEBO能够上调SOCS1蛋白表达及SOCS1 mRNA转录水平,从而抑制STAT6的蛋白表达及STAT6 mRNA转录水平,缓解慢性难愈合创面中的炎症反应,促进慢性难愈合创面组织原位再生修复。
张开华[6]（2020）在《局部外用表皮生长因子促进糖尿病足溃疡创面愈合的临床研究》文中提出第一部分表皮生长因子联合纳米银敷料促进糖尿病足溃疡创面愈合的临床研究目的:探究表皮生长因子联合纳米银敷料促进糖尿病足溃疡创面愈合的临床效果。方法:筛选2017-06至2020-06南昌大学第二附属医院收治的120例糖尿病足部溃疡患者,均自愿参与本实验并签署知情同意书。采用随机表法将120例患者随机分为4组:表皮生长因子组30例、纳米银敷料组30例、联合组30例、生理盐水对照组（生理盐水为常规治疗方式）30例。表皮生长因子组每次换药时使用重组人表皮生长因子40IU/平方厘米;纳米银敷料组每次换药给予外用纳米银敷料,联合组使用表皮生长因子和纳米银敷料;其余治疗（生理盐水常规治疗方式）四组均相同。对照组仅用生理盐水进行常规治疗。各组都给予隔日换药一次,观察创面修复到各愈合阶段所需时间,愈合阶段分创面表皮愈合率及肉芽组织生长程度进行分级。治疗2周和4周后分别对创面渗出液进行细菌培养。结果:4组病例达到治疗有效阶段（1级）的时间无明显差异。与对照组相比,表皮生长因子组和联合组达到创面修复2、3级的时间更短,差异有显着性（P<0.05）;且联合组的创面修复时间比表皮生长因子组更短（P<0.05）。纳米银敷料组的创面修复时间比对照组短,但差异无显着性（P>0.05）。结论:在临床显效期内,四组的创面愈合效果无明显差异,在此期后使用表皮细胞生长因子能促进创面愈合,纳米银敷料对创面愈合有积极影响但效果不够明显;联合使用重组表皮生长因子和纳米银敷料则具有明显良好的促进创面愈合效果且能有效预防感染的发生。第二部分表皮生长因子联合酸性成纤维细胞生长因子治疗糖尿病足创面的临床研究目的:探究表皮生长因子联合酸性成纤维细胞生长因子对糖尿病足创面的愈合影响。方法:筛选2018-02至2020-02南昌大学第一附属医院烧伤科创面治疗中心及南昌大学附属九江医院普外科收治的80例糖尿病足部溃疡患者,均自愿参与本实验并签署知情同意书。采用随机表法将80例患者随机分为4组:重组人表皮生长因子组20例、酸性成纤维细胞生长因子组20例、生长因子联合组20例、桐叶烧伤油对照组（桐叶烧伤油为常规治疗方式）20例。各组患者在接受创面治疗期间,均将空腹血糖控制在11.1mmol/L以下,伴感染者使用相应抗生素治疗至感染完全控制,创面清创、清洗、去除病理性肉芽。联合用药组每次给予外用重组人表皮生长因子40IU/平方厘米,外用酸性成纤维细胞生长因子100/平方厘米,其余治疗（桐叶烧伤油常规治疗方式）同对照组;重组人表皮生长因子组每次单纯给予外用重组人表皮生长因子40IU/平方厘米,其余治疗（桐叶烧伤油常规治疗方式）同对照组;酸性成纤维细胞生长因子组每次给予外用酸性成纤维细胞生长因子100U/平方厘米,其余治疗（桐叶烧伤油常规治疗方式）同对照组;桐叶烧伤油对照组仅用桐叶烧伤油进行常规治疗（以桐叶烧伤油浸泡纱布,将油纱敷于创面,主要为创面保湿及收敛创面作用,是临床上常规创面换药方式）。各组都给予每日换药一次,观察创面修复到各愈合阶段所需时间,愈合阶段分创面表皮愈合率及肉芽组织生长程度进行分级。结果:研究纳入糖尿病足患者80例,患者均进入结果分析。创面处理后各组创面愈合到各阶段的时间比较:4组在治疗开始后第3-4天（即临床显效期）,创面愈合情况相近（P>0.05）;而在此之后,联合用药组的愈合情况明显优于对照组（P<0.05）且表皮生长因子组的情况与联合组更为相近。4组病例在治疗开始后第3-4天（临床显效期）,肉芽组织生长情况相近（P>0.05）;在后期,联合用药组的愈合情况明显优于对照组（P<0.05）且表皮生长因子组的情况与联合组更为相近。结论:两种生长因子在临床显效期内对促进创面愈合的效果无明显差异,在此期后单独使用表皮细胞生长因子或酸性成纤维细胞生长因子,对创面愈合有积极影响但效果不够明显,而联合使用重组表皮生长因子和酸性成纤维细胞生长因子则具有明显良好的促进创面愈合效果。第三部分表皮生长因子等多种生长因子在糖尿病足溃疡管理中的作用:临床试验的系统评价和荟萃分析目的:生长因子是糖尿病足溃疡的新兴疗法,尽管已有临床报道,但尚未有研究对生长因子在糖尿病足溃疡中的功效和安全性进行临床证据的全面、系统评估。我们通过对随机对照试验（RCT）进行系统综述来解决这一问题,并通过荟萃分析探究表皮生长因子对糖尿病足溃疡的治疗效果,为其临床使用提供循证医学证据。方法:搜索Pub Med,Cochrane库,Scopus,Embase和Google Scholar数据库,并选择有关生长因子治疗糖尿病患者溃疡创面的RCT研究文献。文献检索和评估由两名独立的审阅者进行。研究的方法学质量使用雅达量表进行评估。我们搜索数据库包括Pub Med,EMBASE,Cochrane图书馆,Web of Science,EBSCOhost,Science Direct和Scopus（截至2020年6月）,筛选表皮生长因子和安慰剂治疗糖尿病足溃疡创面的研究文章,并进行文献质量评估,从而纳入高质量文献。以糖尿病足治愈率为对比指标,根据给药途径的类型进行分层荟萃分析（局部注射和局部应用）,通过计算比值比（OR）和95%置信区间（95%CI）确定研究结论的准确性。结果:我们鉴定了涉及糖尿病的糖尿病患者的18项RCT,评估了血小板衍生生长因子,表皮生长因子,成纤维细胞生长因子,粒细胞集落刺激因子,血管内皮生长因子,促红细胞生成素,转化生长因子的有效性。主要的主要结局是完全愈合,尽管采用了不同的指标来定义这一点,例如伤口闭合,肉芽组织形成或完全再上皮化。很少有研究有随访期来报告任何复发和截肢率。由于干预,没有不良反应的报道。Meta分析共纳入六项研究,涉及530例患者符合分析条件。组合的OR（局部注射和局部适用）是4.005（95%CI:（2.248;7.135）,p<0.001）。病灶内注射和局部用药应用分别为3.599（95%CI:（1.213;10.677）,p=0.021）和4.176（95%CI:（2.112;8.256）,p<0.001）。统计异质性在整体治疗和两个子组（I2:24.56,p=0.25,I2:33.26,p=0.213）中并无明显意义（I2=15.17,p=0.317）。结论:总体而言,文献分析关于EGF增强糖尿病溃疡愈合效果的共识更大,meta分析结果也支持使用表皮生长因子对治疗糖尿病足创面溃疡有效。然而,由于大多数生长因子的试验很少,并且可用的研究方法也不相同,因此其他生长因子治疗糖尿病足创面的有效性缺乏明确循证医学证据。
闫欢欢[7]（2020）在《贻贝仿生导电性苯胺齐聚物生物材料的制备及在组织工程中的应用》文中指出随着生物医用高分子材料的发展,导电高分子以其独特的物理和化学性质在生物医学领域被广泛研究和应用探索。导电高分子,如聚苯胺、聚噻吩等在提供导电性的同时,本身表现出良好的氧化还原活性即电活性,能够诱导细胞生长和分化。但这些导电聚合物用于组织工程时,不可降解性、不可吸收性和加工性差等成为限制它们应用的主要因素,因此多种类型的可降解导电性和电活性高分子被设计和合成。苯胺齐聚物（如苯胺三聚体、四聚体等低聚体）具有规整的分子结构、可逆的氧化还原性和较好的生物相容性,且可在生理环境中通过肾脏清除并排出体外。因此,开发基于苯胺齐聚物的可降解功能支架材料用于组织工程修复具有重要的意义。外加电刺激被报道可以有效的调控细胞行为和促进组织再生,而包含苯胺齐聚物的导电生物材料可以实现局部定位电刺激,提高电刺激效率,从而更好的调控细胞粘附、迁移、增殖和分化。然而,简单有效地合成出生物相容、成型方便的导电性和电活性聚合物依然是组织工程中的难点和挑战,有待进一步设计和挖掘。因此,我们设计并合成了一系列新颖的导电性和电活性聚合物,进一步通过静电纺丝和静电滴球技术等分别制备了图案化导电性纳米纤维毡和电活性微球等不同应用形式的材料,然后通过体内和体外实验,系统地评价了它们潜在的生物医用前景,全文主要包括以下四部分的内容。（1）我们以苯胺四聚体、多巴胺和聚乙二醇为原料,通过自由基加成反应合成了具有粘附性的导电无规共聚物poly（ATMA-co-DOPAMA-co-PEGMA）（PAT）。该材料不仅保持一定的导电性和电活性,还具有良好的亲水性和血液相容性,结合电刺激具有协同提高MC3T3-E1细胞增殖、碱性磷酸酶活性、细胞外基质钙沉积和成骨基因表达的特性。贻贝来源多巴胺分子的引入赋予材料良好的粘附性和生物相容性,使其应用形式更灵活、更广泛。（2）在高碘酸钠作用下,将上述电活性共聚物（PAT）通过其多巴胺段的氧化还原反应修饰于可降解PLGA/HA微球上,制备出电活性微球（PAT@HA/PLGA）。进一步地将含YKYKY的胰岛素样生长因子（IGF-1）在酪氨酸酶作用下转变为DOPA-IGF-1并固定于微球表面,制备出具有电活性和生物活性的可降解微球。体外细胞培养表明,所制备的微球具有良好的生物相容性,显着提高成骨细胞增殖效率和分化的特性。将不同功能性微球注射到5 mm尺寸的大鼠颅骨临界缺损处,植入8周后的修复结果表明,电活性和生物活性微球可显着促进缺损处新骨的生成和骨愈合效果。（3）将PAT共聚物和聚己内酯（PCL）复合,通过静电纺丝方法制备出生物降解的图案化导电性纳米纤维毡,利用PAT内的DOPA分子将神经生长因子（NGF）修饰于纤维表面,进而应用于神经组织工程。获得的导电纤维毡具有连续交替的谷和脊图案化结构。在电刺激下,具有特定形貌的的导电性纤维毡固定有NGF后,对神经干细胞（NSCs）的增殖和分化具有正向协同作用,促进NSCs向神经元方向分化,并抑制向星形胶质细胞方向的分化,表明有利于神经的再生与修复。（4）将苯胺三聚体和PCL通过逐步加成反应合成了导电聚合物（PCL-IPDI-AT）,以高温溶剂蒸发法制备了形状记忆性的导电弹性体薄膜,并初步探索了其体外生物相容性和应用性。该共聚物薄膜具有尺寸均一的多孔结构、优异的可拉伸性和形状记忆性。这种具有导电性、一定粗糙度和多孔结构的导电弹性体材料在电刺激下促进了成骨细胞的生长和成骨分化。综上所述,我们制备的多种应用形式的导电性和电活性功能支架材料不仅加快细胞间电信号的传导,而且在外加电刺激的作用下可调控植入材料表面的细胞行为,进而有效的促进了细胞的功能性分化以及体内缺损组织的修复和再生。
李婧嫄[8]（2020）在《人羊膜间充质干细胞（hAMSCs）对小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤的治疗作用及其机制研究》文中提出研究背景与研究目的:皮肤是由表皮、真皮及皮下组织构成的人体最大器官,具有调节人体温度、维持内环境稳定、阻止化学物质及微生物进入等作用。皮肤损伤包括烧烫伤、外伤、糖尿病足导致的损伤等,严重的皮肤损伤可以是致命的。皮肤烧烫伤是指因热力、热液、化学物质、放射线、光、以及电等作用于人体而引起的损伤,主要包括皮肤或粘膜损伤,严重者可能伤及皮下组织,是日常工作和生活中最常见且极其复杂的外伤疾病之一。目前,深度皮肤烫伤的治疗效率不高,伤口愈合缓慢,导致新生皮肤组织无泌汗功能、缺乏弹性,且常常伴随瘢痕形成。因此,寻找治疗皮肤烫伤、加快皮肤创面愈合的新方法迫在眉睫。间充质干细胞是一簇来源于组织中胚层间质的能够进行自我更新和多向分化的干细胞,它属于成体干细胞的一种。近年来,大量的研究表明间充质干细胞可以产生和分泌多种细胞因子,促进皮肤的损伤修复。人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs）是一种来源于新生儿羊膜的新型干细胞,具有取材方便、增殖能力强、无伦理障碍、安全不致瘤性等优点。hAMSCs是否可以促进皮肤烫伤的损伤修复?其具体的作用机制及分子机制又是什么?到目前为止,还没有相关报道。本文旨在探讨hAMSCs对深Ⅱ度皮肤烫伤的治疗作用及其机制,从而为寻找治疗皮肤烧烫伤的新方法及新靶点提供实验依据。实验方法:1.hAMSCs的分离、培养及鉴定:1)利用胰酶及胶原酶从羊膜上分离及培养hAMSCs;2)利用流式细胞术、RT-PCR及免疫荧光检测hAMSCs表面分子标志;3)成骨成脂分化检测hAMSCs体外多向分化潜能:4)利用软琼脂集落形成实验及NOD-SCID小鼠体内移植实验检测hAMSCs体内及体外致瘤性。2.hAMSCs、hAMSC-CM促进深Ⅱ度皮肤烫伤损伤修复的潜能及作用机制研究:1)利用自制皮肤烫伤装置构建小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤模型;2)将PBS、PKH26标志的hAMSCs、H-DMEM及hAMSC-CM原位注射在皮肤烫伤伤口附近,计算不同组别小鼠在在不同时间点伤口的面积;3)利用活体成像及免疫荧光检测hAMSCs在深Ⅱ度皮肤烫伤小鼠体内的存活、迁移及分化;4)利用HE染色、TUNEL凋亡染色、PCNA及CK19免疫组化及Western blot检测不同组别小鼠皮肤组织中热损伤皮肤细胞凋亡及增殖情况。3.hAMSCs、hAMSC-CM促进皮肤损伤修复的分子机制研究:1)体外建立表皮细胞HaCAT及真皮成纤维细胞DFL的热损伤模型,并利用Transwell共培养小室构建hAMSCs与HaCAT及DFL细胞的共培养体系;2)利用Annexin V/PI流式细胞凋亡实验、CCK8实验、划痕实验检测正常培养组、热损伤组、热损伤后hAMSCs共培养组及hAMSC-CM处理组热损伤皮肤细胞的凋亡、增殖及迁移;3)Western blot检测正常培养组、热损伤组、hAMSCs共培养组及hAMSC-CM处理组热损伤皮肤细胞中PI3K/AKT及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达;4)在hAMSCs与HaCAT及DFL细胞的共培养体系加入AKT抑制剂LY294002及β-catenin的抑制剂ICG001,利用流式细胞凋亡检测及Western blot检测其在hAMSCs抑制热损伤皮肤细胞凋亡、促进其增殖过程中发挥的作用;5)抗体芯片检测hAMSC-CM中440种细胞因子的表达水平,并筛选出可能激活PI3K/AKT信号的候选因子。实验结果:1.hAMSCs具有间充质干细胞的特性:1)利用两步消化法可从羊膜上分离培养得到具有典型间充质干细胞形态的hAMSCs,且hAMSCs扩增能力极强;2)RT-PCR、流式细胞术及免疫荧光检测表明hAMSCs表达间充质干细胞标志基因CD105、CD29、CD73、CD90及胚胎干细胞标志基因Oct-4、Nanog、SSEA-4,不表达造血干细胞标志基因CD34、CD133及CD45,不表达主要组织相容性Ⅱ类抗原HLA-DR,低表达主要组织相容性Ⅰ类抗原HLA-ABC,但不表达其共同刺激分子CD80、CD86及CD40,表明hAMSCs具有极低的免疫原性;2)hAMSCs可在体外定向分化为骨细胞及脂肪细胞:3)成瘤/致瘤研究表明,hAMSCs在体内及体外均不致瘤。2.hAMSCs及hAMSC-CM体内移植可通过抑制热损伤皮肤细胞的凋亡、促进热损伤皮肤细胞的增殖促进深Ⅱ度皮肤烫伤损伤修复:1)80℃热水烫伤100s可成功构建小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤模型:2)通过计算伤口面积及伤口愈合率表明hAMSCs及hAMSC-CM体内移植可促进深Ⅱ度皮肤烫伤的创面愈合:3)活体成像及免疫荧光检测表明hAMSCs可在小鼠皮肤烫伤部位存活超过21天且未分化为其它类型细胞,但细胞数目逐渐减少;4)TUNEL凋亡检测表明hAMSCs及hAMSC-CM可抑制热损伤皮肤细胞的凋亡,免疫组化及Western blot检测表明hAMSCs及hAMSC-CM可促进热损伤皮肤细胞的增殖。3.hAMSCs及hAMSC-CM可通过旁分泌作用激活PI3K/AKT及Wnt/β-catenin信号通路抑制热损伤皮肤细胞凋亡、促进热损伤皮肤细胞增殖:1)43℃处理50min,可成功在体外构建HaCAT及DFL细胞热损伤模型;2)hAMSCs及hAMSC-CM体外共培养可抑制热损伤皮肤细胞凋亡并促进其增殖及迁移;3)hAMSCs通过激活PI3K/AKT信号通路,抑制热损伤皮肤细胞的凋亡,而PI3K/AKT信号通路的活化,又可进一步激活Wnt/β-catenin信号通路,而促进热损伤皮肤细胞的增殖;4)抗体芯片检测表明,hAMSCs可能通过分泌包括PAI-1、G-CSF、Periostin及TIMP-1等在内的一系列细胞因子激活PI3K/AKT信号通路来促进皮肤烫伤的损伤修复。结论:1.hAMSCs具有增殖能力强、表达间充质干细胞及胚胎干细胞标志基因、不表达造血干细胞标志基因、免疫原性低、具有多向分化潜能、不致瘤等特征;2.hAMSCs及hAMSC-CM体内原位移植可通过旁分泌作用促进深Ⅱ度皮肤烫伤的损伤修复,其机制与hAMSCs及hAMSC-CM抑制热损伤皮肤细胞的凋亡及促进热损伤皮肤细胞的增殖有关;3.hAMSCs可分泌PAI-1、G-CSF、Periostin及TIMP-1等因子,通过旁分泌作用激活PI3K/AKT信号通路抑制热损伤皮肤细胞的凋亡,而PI3K/AKT信号通路的活化又进一步激活Wnt/β-catenin信号通路,继而促进热损伤皮肤细胞的增殖。
吴鹏[9]（2019）在《microRNA-96-5p通过抑制BNIP3介导的FAK信号通路调控创面愈合的研究》文中进行了进一步梳理研究背景:长久以来,创面愈合一直是医学界深入研究的主题之一。对于烧伤整形外科医生来讲,经常会遇到由于外伤或烧伤等原因所导致的皮肤缺如的修复,因此掌握皮肤创面的愈合机制及过程,以及相关的治疗手段非常必要。创面修复历经复杂的生物学过程,包括炎症细胞浸润、肉芽组织填充、表皮细胞增殖、以及瘢痕组织重新塑形等过程,这些步骤既相继发生又彼此重叠。并需要多种功能细胞的参与,如中性粒细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、表皮细胞等,它们在细胞因子的趋化下,自创周组织血管内迁移至创面床,清除组织碎片、产生胶原等基质、完成创面封闭。如果上述细胞的生物学行为失常,将会造成创面修复延迟甚至修复困难,包括出现瘢痕增生等过度修复现象。上皮组织重建在创面愈合进程中至关重要,这个过程中需要角质形成细胞从创伤的边缘通过细胞增殖以及迁徙来修复创面。因此,对于角质形成细胞增殖和迁移的调控机制研究有助于我们掌握创面的愈合过程并为临床治疗提供理论依据。在创面愈合过程中,有一系列的基因和信号通路调控角质形成细胞迁移和增殖。在这当中,BCL-2/腺病毒E1B19kDa结合蛋白3（BNIP3）逐渐引起了人们的重视。最近有研究表明:BNIP3能够促进角质形成细胞在缺氧情况下的运动和转移,并且参与修复低氧诱导的神经元损伤,可以作为临床促进创面愈合的潜在分子靶点。然而BNIP3在创面愈合中的调控机制尚不清楚。许多报道microRNAs（miRNAs）在包括创面愈合的多种疾病中发挥靶点作用。miRNA是一类长度有22个核苷酸大小的内源性非编码RNA,通过靶定基因的3’-非翻译区域（UTR）调控基因的表达,发挥转录抑制作用。miRNA能够通过调控多种目标mRNA表达,来完成对细胞增殖、凋亡和分化等一系列细胞生物学功能的调节。另外,大量研究表明miRNA参与调控细胞增殖、免疫因子的释放、细胞外基质的重建和创面愈合时的血管生成。根据TargetScan预测miR-96-5p 为 BNIP3 的上游调控 miRNA,BNIP3 的 3’-UTR 段与 miR-96-5p 有相互作用位点,并且文章报道miR-96-5p参与对成纤维细胞增殖和分化的调控。鉴于这些发现,我们的研究试图探究miR-96-5p对BNIP3的调控机制,研究miR-96-5p通过调控BNIP3基因表达促进创面愈合的机制,为临床应用提供理论依据。黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）也称pp125FAK,在整合素的信号转导中发挥着重要作用。研究发现:FAK可与细胞内信号转导蛋白相互作用,形成局部黏着斑,参与调节细胞的黏附、迁移、增殖、凋亡等过程,细胞的凋亡也与其表达水平有关,FAK过表达有可能阻止细胞凋亡。也有文献表明FAK可能参与对表皮细胞的迁移的调控,进而促进创面愈合。特异性的整合素单克隆抗体可下调FAK的表达水平并抑制表皮细胞迁移;如果FAK缺失,则小鼠创面的愈合明显延迟。有研究表明,细胞内肌动蛋白骨架的聚合、解聚及重排与FAK信号传导通路密切相关,其下游信号参与了细胞迁移相关环节的调节,而BNIP3与细胞肌动蛋白骨架的重构有关。因此FAK可能参与了BNIP3对表皮细胞迁移的调控。研究目的:本课题旨在通过实验解决下列问题:1、探讨miR-96-5p和BNIP3的表达水平在皮肤损伤的愈合过程当中是如何变化的,是否具有相关性;2、验证BNIP3是否能够调控人角质形成细胞的增殖及迁移;3、探讨BNIP3是否是miR-96-5p的一个直接下游靶基因以及miR-96-5p如何调控BNIP3的表达;4、探讨miR-96-5p对人角质形成细胞的增殖和迁移是否起到调控作用;5、验证miR-96-5p是否通过BNIP3介导的FAK信号通路调控皮肤创面愈合。研究方法:1、构建皮肤损伤模型:随机选取15只Sprague-Dawley大鼠进行皮肤创伤模型的建立,大鼠背部脱毛,麻醉后用3 mm皮肤穿孔器在脱毛部位造成创伤,在创伤后1天、3天、5天和7天时用4 mm皮肤穿孔器在创伤位置取损伤组织,同时在健康鼠的同一位置取皮肤组织;2、提取创面及健康组织中的蛋白质,通过Western blot检测损伤组织与健康组织间BNIP3的蛋白表达差异;3、提取创面及健康组织中的RNA,通过实时定量PCR（qRT-PCR）检测损伤组织与健康组织miR-96-5p的差异性表达;4、人原代角质形成细胞（HPK）购买自美国模式培养物集存库,进行培养及传代;5、构建 BNIP3 过表达质粒 pcDNA3.1-BNIP3;6、将培养传代的HPK分为四组:转染pcDNA3.1-BNIP3组、转染BNIP3-siRNA组、阴性对照组及空白对照组;Western blot方法检测各组细胞BNIP3的蛋白表达水平;7、用MTT 比色法检测转染pcDNA3.1-BNIP3的HPK的细胞活力,用细胞划痕实验方法检测其迁移能力;8、用MTT 比色法检测检测转染BNIP3-siRNA的HPK的细胞活力,用细胞划痕实验方法检测其迁移能力;9、利用TargetScan生物信息学分析与靶点预测网站进行miRNA靶基因的预测;10、根据TargetScan预测miR-96-5p为BNIP3的上游调控miRNA,首先将BNIP3的3’-UTR片段突变,将野生型或突变型的BNIP3 3’-UTR克隆到含有荧光酶报告基因载体pmirGLO的下游,并且与miR-96-5p mimics共转染到HPK中,72小时后计算相对荧光素酶活性值,检测在miR-96-5p mimics存在的情况下能否导致荧光素酶活性的改变;1 1、分别用 miR-96-5p mimic、miR-96-5p inhibitor 转染 HPK,并与各自阴性组细胞做对照;12、用 MTT 比色法检测转染 miR-96-5p mimics 或 miR-96-5p inhibitor 的 HPK的细胞活力;13、用细胞划痕实验方法检测转染miR-96-5p mimics或miR-96-5p inhibitor后细胞的迁移能力;14、提取转染miR-96-5p mimics或miR-96-5p inhibitor细胞及对照组细胞的miRNA,qRT-PCR 检测 miR-96-5p 的表达水平;15、提取转染miR-96-5p mimics或miR-96-5p inhibitor细胞及对照组的细胞蛋白,用Western blot方法检测BNIP3的表达水平以及FAK信号通路关键基因FAK的磷酸化蛋白（p-FAK）表达水平;16、统计学处理:所有结果均以三次重复测量的平均值±标准差表示。两组间的差异采用SPSS 15.0统计软件,采用t检验进行评估;在比较两组以上时采用单因素方差分析进行评估。配对组织比较采用配对t检验确定统计学意义,如果P<0.05,则差异有统计学意义。实验结果:1、Western blot结果显示:与大鼠健康组织相比,BNIP3在大鼠皮肤损伤组织中的蛋白表达量明显升高,并且随着愈合天数的增多,BNIP3的蛋白表达量明显增加,（P<0.05）;2、qRT-PCR结果显示,皮肤损伤组织中miR-96-5p的表达量随着创面愈合天数的增加表达逐渐降低（P<0.05）,这与BNIP3的表达水平相反;3、Western blot 检测转染 pcDNA3.1-BNIP3 或转染 BNIP3-siRNA 后 HPK的BNIP3表达水平显示:转染pcDNA3.1-BNIP3的细胞,BNIP3的表达水平明显升高（P<0.05）,而 BNIP3-siRNA 组明显下降（P<0.05）;4、MTT 比色法检测细胞活力:与对照组相比,HPK转染pcDNA3.1-BNIP3质粒后的细胞活力明显增强（P<0.05）,而转染BNIP3-siRNA的细胞活力降低（P<0.05）;5、细胞划痕试验表明,转染pcDNA3.1-BNIP3质粒后HPK的迁移能力明显升高（P<0.05）;而转染BNIP3-siRNA的细胞迁移能力明显降低（P<0.05）;BNIP3对HPK有促增殖、促迁移的作用;6、野生型BNIP3与miR-96-5p mimics共转染HPK能够降低荧光素酶活性（P<0.05）,提示miR-96-5p能够下调BNIP3的表达,而突变型BNIP3与miR-96-5p mimics共转染则未出现荧光素酶活性降低;7、BNIP3在蛋白水平上的表达量由于miR-96-5p mimics的转染而显着减少（P<0.05）,而在miR-96-5p inhibitor作用下BNIP3蛋白的表达量明显增加（P<0.05）;8、MTT实验表明:转染miR-96-5p mimics后的HPK增殖速率与阴性对照组相比明显抑制（P<0.05）,miR-96-5p inhibitor处理后HPK的增殖活力增加（P<0.05）;9、细胞划痕实验表明:miR-96-5p mimic转染组HPK的迁移能力明显受到抑制（P<0.05）。,然而miR-96-5p inhibitor处理后细胞的迁移能力增加（P<0.05）;10、qRT-PCR 检测显示:miR-96-5p mimic 转染 HPK 可诱导 miR-96-5p 过表达（P<0.05）,miR-96-5p inhibitor 转染 HPK 抑制 miR-96-5p 表达（P<0.05）;11、miR-96-5p mimics 转染 HPK 后 p-FAK 表达下降（P<0.05）,而 miR-96-5p inhibitor作用下p-FAK表达升高（P<0.05）。证明miR-96-5p对细胞增殖和迁移的调控作用与BNIP3介导的FAK信号通路密切相关。结论:1、大鼠皮肤损伤组织中的BNIP3蛋白与miR-96-5p的表达量随着创面愈合时间延长呈现相反的变化趋势,提示二者呈负相关;2、BNIP3过表达对HPK有促增殖、促迁移的作用,而BNIP3低表达则抑制HPK的增殖和迁移;3、HPK中的BNIP3是miR-96-5p的一个直接下游靶基因,受miR-96-5p负向调控,后者可以通过直接结合来抑制BNIP3的表达;4、miR-96-5p对于HPK的增殖和迁移具有负向调控作用;5、miR-96-5p的负向调控作用是通过抑制BNIP3的表达以及与之相关的FAK信号通路来完成的。总之,我们通过上述实验验证了 BNIP3促进创面修复的作用,证实了miR-96-5p对下游靶基因BNIP3和FAK通路的负向调控作用,为临床上促进创面愈合提供分子依据。
曲鹏[10]（2019）在《一效膏调节PCNA及IGF-1R表达，促进糖尿病小鼠皮肤溃疡愈合的实验研究》文中研究指明目的:在建立的糖尿病皮肤溃疡小鼠模型上应用一效膏进行治疗并观察,初步探讨其促进糖尿病皮肤溃疡修复、愈合的作用机制,为进一步研究及临床应用一效膏治疗糖尿病皮肤溃疡提供相关基础研究依据。材料与方法:将28只SPF级昆明种雄性小鼠按随机数字表法分为2组:糖尿病皮肤溃疡造模组21只、正常组7只,造模组在成功造模后,再采取随机数字表法随机分成3组:一效膏组;康复新液组;生理盐水组。3组分别以一效膏;康复新液;生理盐水每日创面处换药,连续换药14天。每日观察实验小鼠一般状态,并密切关注创面大小,渗出多少及新生肉芽情况。第14d以薄膜法测量各小鼠创面面积,记录创面缩小面积及计算愈合率,并于创面处取材,分别应用HE染色法及免疫组化法观察新生毛细血管;成纤维细胞、炎性细胞数变化、增殖细胞核抗原（PCNA）和胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）的表达情况,并用统计软件SPSS17.0进行统计学分析。结果:1.经过适应性喂养,各组小鼠空腹血糖和体质量均无明显差异;换药前造模组小鼠空腹血糖明显高于正常组（P<0.05）;换药期间一效膏组,康复新液组,生理盐水组较正常组小鼠均出现消瘦,精神萎靡,皮毛欠光泽,反应略迟钝,饮食、水量均明显增加,尿量多,色黄质稠,味臭秽的表现;换药14天测各组小鼠空腹血糖及体质量,正常组和造模组三组间存在明显差异（P<0.05）,但三组组间未见明显差异（P>0.05）2.经治疗,一效膏组创面缩小面积及愈合率优于康复新液组优于生理盐水组（P<0.05）。创面基底组织HE染色显示一效膏组切片可见大量新生毛细血管偶见炎性细胞;康复新液组切片可见部分新生毛细血管,仍存在少量炎性细胞;生理盐水组切片见新生毛细血管少,大量炎性细胞浸润;正常组未见新生毛细血管及炎性细胞。免疫组织化学检测情况IGF-IR及PCNA表达:IGF-1R在生理盐水组的表达低于正常组（P<0.05）;PCNA在生理盐水组的表达高于正常组（P<0.05）;二者的表达在一效膏组均高于康复新液组高于生理盐水组（P<0.05）。结论:1.一效膏能够促进实验性糖尿病皮肤溃疡创面的愈合。2一效膏促进实验性糖尿病皮肤溃疡愈合的机制之一是上调组织中PCNA及IGF-IR的表达水平。
二、大鼠皮肤创面愈合过程中IGF-1的定量学研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、大鼠皮肤创面愈合过程中IGF-1的定量学研究（论文提纲范文）
（1）自组装肽纳米纤维和PNIPAM共构建温敏型水凝胶及其对创面修复的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写词表 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 皮肤创伤的研究概述 |
| 1.1 创伤愈合理论概述 |
| 1.1.1 全层皮肤损伤特征简述 |
| 1.2 皮肤创面修复的治疗途径 |
| 1.2.1 浅表及部分厚度伤口治疗途径 |
| 1.2.2 全层皮肤损伤治疗途径 |
| 第二章 温敏水凝胶的研究进展 |
| 2.1 温敏水凝胶的分类及温敏机理研究 |
| 2.1.1 负向温敏水凝胶分类 |
| 2.1.2 正向温敏水凝胶 |
| 2.2 温敏水凝胶在创面修复领域的研究进展 |
| 2.2.1 温敏水凝胶在药物缓释方面促进创伤愈合 |
| 2.2.2 温敏水凝胶在干细胞移植方面促进创伤愈合 |
| 2.2.3 温敏水凝胶在蛋白质传递和基因治疗方面促进创伤愈合 |
| 第三章 皮肤修复功效性肽的研究进展 |
| 3.1 MGF E肽的来源与功能 |
| 3.1.1 MGF E肽的来源 |
| 3.1.2 MGF E肽的功能 |
| 3.2 多肽药物缓释体系研究 |
| 3.2.1 颗粒药物缓释系统 |
| 3.2.2 胶束药物缓释系统 |
| 3.2.3 水凝胶药物缓释系统 |
| 3.3 自组装多肽的分类 |
| 3.3.1 芳香短肽 |
| 3.3.2 两亲性多肽 |
| 3.3.3 离子互补型多肽 |
| 3.3.4 环肽及其衍生物 |
| 3.4 自组装多肽在组织修复领域的研究简述 |
| 3.4.1 自组装多肽在皮肤组织修复领域的研究简述 |
| 3.4.2 自组装多肽在其他组织修复领域的研究简述 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 PNI/RA-Amps温敏水凝胶的制备及理化性质表征 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 菌株 |
| 1.1.2 主要试剂与材料 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 实验部分 |
| 1.2.1 自组装多肽(RADA16-Amps)溶液的制备 |
| 1.2.2 RADA16-Amps的抑菌性能检测 |
| 1.2.3 温敏水凝胶(PNI/RA-Amps)的制备 |
| 1.2.4 温敏水凝胶的表面形貌测试 |
| 1.2.5 温敏水凝胶的相变温度的检测 |
| 1.2.6 温敏水凝胶的流变学特性 |
| 1.2.7 数据统计学分析 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 RADA16-Amps对常见致病菌的抑菌和杀菌活性的结果 |
| 1.3.2 温敏共聚物PNIPAM浓度的筛选 |
| 1.3.3 PNI/RA-Amps温敏水凝胶的制备及相变温度的分析 |
| 1.3.4 PNI/RA-Amps温敏水凝胶流变学性能的分析 |
| 1.3.5 PNI/RA-Amps温敏水凝胶相变时间的分析 |
| 1.3.6 PNI/RA-Amps温敏水凝胶的形貌分析 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 PNI/RA-Amps温敏水凝胶安全性分析及载药PNI/RA-Amps/E温敏水凝胶的生物学性质评价 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要试剂与材料 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 HFF细胞的复苏与培养 |
| 2.2.2 复合水凝胶生物相容性的测试 |
| 2.2.3 MGF E肽标准曲线的绘制 |
| 2.2.4 载药水凝胶(PNI/RA-Amps/E)的制备 |
| 2.2.5 药物的体外释放率的测定 |
| 2.2.6 载药水凝胶细胞增殖检测 |
| 2.2.7 载药水凝胶细胞粘附性能检测 |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 生物相容性分析 |
| 2.3.2 标准曲线的绘制 |
| 2.3.3 复合水凝胶体外释放的结果 |
| 2.3.4 不同浓度MGF E肽的载药水凝胶对细胞增殖的影响 |
| 2.3.5 不同浓度MGF E肽的载药水凝胶对细胞粘附的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 载药PNI/RA-Amps/E温敏水凝胶在止血和创伤修复中的应用 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 主要试剂 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.1.3 实验动物 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 建立动物肝脏出血模型 |
| 3.2.2 粘附特性测试 |
| 3.2.3 动物皮肤创伤模型的建立与给药 |
| 3.2.4 创面愈合情况分析 |
| 3.2.5 组织切片染色分析 |
| 3.2.6 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 动物出血模型止血评价 |
| 3.3.2 组织粘附性能 |
| 3.3.3 创伤愈合情况研究 |
| 3.3.4 创面H&E染色结果分析 |
| 3.3.5 伤口处胶原蛋白分布研究 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（2）聚乳酸-羟基乙酸共聚物的仿生功能化及皮肤创伤修复研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 皮肤创伤修复的过程和机制 |
| 1.2.1 皮肤创伤修复的阶段 |
| 1.2.2 参与皮肤创伤修复的生长因子 |
| 1.2.3 生长因子的作用模式 |
| 1.3 皮肤创伤修复敷料的材料特点 |
| 1.3.1 生物相容性 |
| 1.3.2 生物降解性 |
| 1.3.3 机械性能 |
| 1.3.4 加工方式 |
| 1.4 皮肤创伤修复敷料的材料分类 |
| 1.4.1 天然材料 |
| 1.4.2 人工合成高分子材料 |
| 1.5 创伤修复材料的生长因子功能化方式 |
| 1.5.1 共混法 |
| 1.5.2 吸附法 |
| 1.5.3 共价结合法 |
| 1.5.4 特异结合法 |
| 1.6 创伤修复材料的抗菌功能化 |
| 1.6.1 抗生素 |
| 1.6.2 金属纳米粒子 |
| 1.6.3 抗菌肽 |
| 1.7 基于贻贝蛋白的仿生材料 |
| 1.7.1 非电镀法金属沉积 |
| 1.7.2 DOPA协助生长因子黏附于材料表面 |
| 1.8 本课题设计思路和主要研究内容 |
| 1.8.1 设计思路 |
| 1.8.2 主要研究内容 |
| 1.9 研究路线图 |
| 第2章 仿生黏附成纤维细胞生长因子的制备 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 原料和试剂 |
| 2.2.2 主要器材和设备 |
| 2.2.3 Y-bFGF和bFGF的表达载体构建 |
| 2.2.4 重组蛋白的表达与纯化 |
| 2.2.5 重组蛋白的Western blot检测 |
| 2.2.6 Y-bFGF和bFGF生物学活性 |
| 2.2.7 Y-bFGF中的酪氨酸羟化反应 |
| 2.2.8 DOPA-bFGF和bFGF与PLGA膜的结合效率 |
| 2.2.9 DOPA-bFGF和bFGF的释放能力 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 Y-bFGF和bFGF的表达与纯化 |
| 2.3.2 Y-bFGF和bFGF的Western-blot检测 |
| 2.3.3 生物学活性 |
| 2.3.4 DOPA-bFGF的黏附能力 |
| 2.3.5 DOPA-bFGF和 bFGF的缓释能力 |
| 2.4 结果讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 仿生黏附抗菌肽的制备和表征 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料、仪器和试剂 |
| 3.2.1 主要试剂 |
| 3.2.2 实验材料和仪器 |
| 3.2.3 试剂配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 DOPA-PonG1的合成 |
| 3.3.2 荧光成像法检测DOPA-PonG1与聚合物材料结合能力 |
| 3.3.3 BCA法检测DOPA-PonG1的释放 |
| 3.3.4 DOPA-PonG1抗菌能力检测 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 DOPA-PonG1与聚合物材料结合能力分析 |
| 3.4.2 DOPA-PonG1释放行为分析 |
| 3.4.3 DOPA-PonG1抗菌性能分析 |
| 3.5 结果讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 第4章 图案化纳米纤维膜的静电纺丝制备及理化表征 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料、仪器和试剂 |
| 4.2.1 主要试剂 |
| 4.2.2 实验材料和仪器 |
| 4.2.3 试剂配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 仿生黏附因子改性图案化纺丝膜的制备 |
| 4.3.2 纺丝纤维膜表面形貌观测 |
| 4.3.3 接触角及机械性能测试 |
| 4.3.4 纺丝纤维膜溶胀率及蛋白吸附性能检测 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 电纺丝纤维膜表面形貌观测 |
| 4.4.2 纺丝纤维膜亲水性及机械性能分析 |
| 4.4.3 纺丝纤维膜溶胀率及蛋白吸附能力 |
| 4.5 结果讨论 |
| 4.6 本章小结 |
| 第5章 负载仿生黏附活性因子的纤维膜的生物活性研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料、仪器和试剂 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 主要试剂 |
| 5.2.3 实验材料和仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 细胞增殖和黏附能力检测 |
| 5.3.2 组织修复相关基因表达的实时定量PCR检测 |
| 5.3.3 动物的饲养和分组 |
| 5.3.4 大鼠全层皮肤缺损模型建立 |
| 5.3.5 术后护理 |
| 5.3.6 表皮创伤愈合程度评估 |
| 5.3.7 皮肤组织的取材和切片 |
| 5.3.8 组织切片的HE染色 |
| 5.3.9 组织切片的Masson染色 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 纺丝纤维膜对细胞增殖和黏附的影响 |
| 5.4.2 组织修复相关基因表达 |
| 5.4.3 大鼠创面愈合外相观察 |
| 5.4.4 大鼠创面愈合率评价 |
| 5.4.5 HE染色观察皮肤愈合情况 |
| 5.4.6 Masson染色观察组织胶原沉积情况 |
| 5.4.7 与商品化创伤敷料对比实验 |
| 5.5 结果讨论 |
| 5.6 本章小结 |
| 第6章 总结与展望 |
| 6.1 总结 |
| 6.2 展望 |
| 第7章 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及科研成果 |
| 致谢 |
（4）生长因子纳米复合水凝胶GelMa的成骨微环境对骨再生的作用及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 GelMa水凝胶的制备,相关表征和体外生物学性能以及优化 |
| 1.1 背景 |
| 1.2 材料 |
| 1.2.1 试剂 |
| 1.2.2 仪器与设备 |
| 1.2.3 实验动物 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 水凝胶的制备 |
| 1.3.2 不同浓度水凝胶溶胀率的测定 |
| 1.3.3 不同浓度水凝胶弹性模量测试 |
| 1.3.4 不同浓度水凝胶体外降解实验测试 |
| 1.3.5 GelMa的表征 |
| 1.3.6 10%浓度水凝胶体外降解测试 |
| 1.3.7 紫外灯最适交联时间检测 |
| 1.3.8 统计学方法与处理 |
| 1.4 结果 |
| 1.4.1 不同浓度GelMa水凝胶溶胀率 |
| 1.4.2 不同浓度GelMa水凝胶弹性模量 |
| 1.4.3 不同浓度GelMa水凝胶体外降解 |
| 1.4.4 浓度10%GelMa水凝胶体内降解 |
| 1.4.5 水凝胶电镜观察 |
| 1.4.6 紫外灯交联时间对细胞活性的影响 |
| 1.5 讨论与结论 |
| 1.5.1 结论 |
| 第二部分 负载纳米硅酸盐和生长因子SDF-1α的GelMa水凝胶的性能及其修复颅骨骨缺损的作用 |
| 2.1 背景 |
| 2.2 材料 |
| 2.2.1 试剂 |
| 2.2.2 仪器与设备 |
| 2.2.3 实验动物 |
| 2.3 方法 |
| 2.3.1 可注射SDF-1α负载的Laponite-GelMa水凝胶的制备 |
| 2.3.2 负载SDF-1α的Laponite-GelMa水凝胶的表征 |
| 2.3.3 细胞活力,扩散,增殖和迁移分析 |
| 2.3.4 成骨生物标志物表达分析 |
| 2.3.5 基质矿化分析 |
| 2.3.6 修复大鼠颅骨骨缺损 |
| 2.3.7 骨再生分析 |
| 2.3.8 统计学方法与处理 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 材料表征 |
| 2.4.2 细胞活力,扩散,增殖和迁移分析 |
| 2.4.3 成骨相关的生物标志物表达 |
| 2.4.4 基质矿化 |
| 2.4.5 体内骨愈合和再生 |
| 2.5 讨论与结论 |
| 2.5.1 结论 |
| 第三部分 介孔二氧化硅微球贯序释放SDF-1α和IGF-1的GelMa水凝胶在胫骨骨缺损和椎间骨融合中的应用 |
| 3.1 背景 |
| 3.2 材料 |
| 3.2.1 试剂 |
| 3.2.2 仪器与设备 |
| 3.2.3 实验动物 |
| 3.3 方法 |
| 3.3.1 GelMa-SDF-1α-SiO2(IGF-1)水凝胶的制备 |
| 3.3.2 水凝胶的表征 |
| 3.3.3 SiO2细胞毒性检测 |
| 3.3.4 茜素红S矿化染色 |
| 3.3.5 生长因子释放检测 |
| 3.3.6 四种骨蛋白的表达 |
| 3.3.7 胫骨骨缺损模型 |
| 3.3.8 尾椎融合模型 |
| 3.3.9 统计学方法与处理 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 材料的表征 |
| 3.4.2 介孔SiO2微球细胞毒性检测 |
| 3.4.3 茜素红S矿化染色 |
| 3.4.4 生长因子释放 |
| 3.4.5 成骨相关蛋白表达 |
| 3.4.6 大鼠胫骨骨缺损动物模型 |
| 3.4.7 大鼠椎间骨融合动物模型 |
| 3.5 结论与小结 |
| 3.5.1 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 生物材料与生长因子在骨再生的作用 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的代表性研究成果 |
| 致谢 |
（5）MEBT/MEBO对慢性创面组织修复中STAT6和SOCS1表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 慢性难愈合创面模型的建立及取材 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组大鼠创面的疗效观察 |
| 2.2 各组不同时间点STAT6、SOCS1蛋白表达水平比较 |
| 2.3 各组STAT6 mRNA、SOCS1 mRNA的基因转录水平比较 |
| 3 讨论 |
| 3.1 慢性难愈合创面的概述 |
| 3.2 课题组关于MEBT/MEBO治疗慢性难愈合创面的防治研究 |
| 3.3 实验结果分析 |
| 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 MEBT/MEBO治疗糖尿病足溃疡创面的机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
（6）局部外用表皮生长因子促进糖尿病足溃疡创面愈合的临床研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩写词表 |
| 第一部分:表皮生长因子联合纳米银敷料促进糖尿病足溃疡创面愈合的临床研究 |
| 引言 |
| 资料与方法 |
| 1.资料与方法 |
| 结果 |
| 2.1 参与者的基本信息和组间差异的比较 |
| 2.2 各组伤口愈合效果比较 |
| 2.3 各组新肉芽组织生长率比较 |
| 2.4 两组患者的细菌培养结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第二部分:表皮生长因子联合酸性成纤维细胞生长因子治疗糖尿病足创面的临床研究 |
| 引言 |
| 1 实验材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验对象 |
| 1.3 治疗分组 |
| 1.4 观察指标 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 描述性统计 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第三部分:表皮生长因子等多种生长因子在糖尿病足溃疡管理中的作用:临床试验的系统评价和荟萃分析 |
| 1 引言 |
| 2 资料与方法 |
| 2.1 搜索策略 |
| 2.2 学习程序 |
| 2.3 数据综合与分析 |
| 2.4 偏见风险及出版偏差 |
| 2.5 敏感性分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 血小板源性生长因子 |
| 3.2 表皮生长因子 |
| 3.3 成纤维生长因子 |
| 3.4 其他生长因子 |
| 3.5 不良事件与质量评估 |
| 3.6 表皮生长因子meta分析的研究项目选择 |
| 3.7 meta分析纳入研究的特征 |
| 3.8 rhEGF与安慰剂的完全治愈率对比 |
| 3.9 证据质量与偏见风险评估 |
| 3.10 出版偏差与敏感性分析 |
| 4 讨论 |
| 5.结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 关于生长因子及细胞因子在糖尿病足临床治疗应用的研究进展 |
| 参考文献 |
（7）贻贝仿生导电性苯胺齐聚物生物材料的制备及在组织工程中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 导电高分子材料 |
| 1.2.1 导电高分子概述 |
| 1.2.2 导电高分子的合成、结构和掺杂 |
| 1.2.3 导电高分子复合材料 |
| 1.2.4 导电高分子存在的不足 |
| 1.3 含导电高分子齐聚物的生物材料 |
| 1.3.1 含导电高分子齐聚物生物材料概述 |
| 1.3.2 含苯胺齐聚物的生物材料 |
| 1.4 导电性生物材料的应用形式 |
| 1.4.1 导电性薄膜 |
| 1.4.2 导电性纳米纤维 |
| 1.4.3 导电性水凝胶 |
| 1.4.4 导电性复合材料3D支架 |
| 1.5 导电性生物材料的组织工程应用 |
| 1.5.1 骨组织工程 |
| 1.5.2 骨骼肌组织工程 |
| 1.5.3 神经组织工程 |
| 1.5.4 心脏组织工程 |
| 1.5.5 皮肤组织工程 |
| 1.6 电刺激的生物学反应 |
| 1.6.1 电刺激对蛋白质行为的影响 |
| 1.6.2 电刺激对细胞行为的影响 |
| 1.6.3 导电生物材料结合电刺激在组织工程中的应用 |
| 1.7 论文的设计思路和研究内容 |
| 第2章 贻贝仿生的导电性生物粘合剂的制备及在体外成骨诱导方面的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 主要试剂与仪器 |
| 2.2.2 苯胺四聚体甲基丙烯酰胺(ATMA)单体的合成 |
| 2.2.3 多巴胺甲基丙烯酰胺(DOPAMA)单体的合成 |
| 2.2.4 电活性无规共聚物的合成 |
| 2.2.5 材料的基本表征 |
| 2.2.6 血液相容性测试 |
| 2.2.7 体外生物学实验 |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 材料的合成和表征 |
| 2.3.2 共聚物的电化学性质及电导率 |
| 2.3.3 共聚物表面的亲水性 |
| 2.3.4 共聚物的粘结强度 |
| 2.3.5 PAT共聚物体外生物相容性评估 |
| 2.3.6 电刺激下PAT共聚物上MC3T3-E1细胞成骨分化评估 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 电活性和生物活性微球的制备及在大鼠颅骨缺损修复中的应用研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 主要试剂与仪器 |
| 3.2.2 材料的合成 |
| 3.2.3 PLGA/HA微球的制备 |
| 3.2.4 PLGA/HA微球的功能化 |
| 3.2.5 材料的基本表征 |
| 3.2.6 QCM-D测定微球对DOPA-IGF-1生长因子的吸附能力 |
| 3.2.7 体外生物学实验 |
| 3.2.8 大鼠颅骨缺损修复研究 |
| 3.2.9 统计学分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 电活性微球的制备与表征 |
| 3.3.2 DOPA-IGF-1在微球上的粘附性表征 |
| 3.3.3 电活性生物活性微球的体外生物学性质研究 |
| 3.3.4 电活性生物活性微球的体内生物学评估(大鼠颅骨缺损修复) |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 图案化导电性静电纺丝纤维毡的制备及在体外神经分化方面的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 主要试剂与仪器 |
| 4.2.2 材料的合成 |
| 4.2.3 PAT/PCL复合材料无序和图案化纤维毡的制备 |
| 4.2.4 静电纺丝材料的掺杂 |
| 4.2.5 材料的基本表征 |
| 4.2.6 ELISA法测定静电纺丝材料对NGF的吸附能力 |
| 4.2.7 体外生物学研究 |
| 4.2.8 统计学分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 PCAT纳米纤维的制备 |
| 4.3.2 PCAT纳米纤维的电化学性质和电导率 |
| 4.3.3 PCAT纳米纤维的亲水性 |
| 4.3.4 静电纺丝纳米纤维毡的形貌 |
| 4.3.5 纺丝纤维对NGF蛋白的粘附能力 |
| 4.3.6 无序纺丝纤维的生物相容性评价 |
| 4.3.7 电刺激下PCAT纤维毡对神经细胞生物活性和分化的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 导电性形状记忆弹性体的制备及在体外成骨诱导方面的应用研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 主要试剂与仪器 |
| 5.2.2 端氨基苯胺三聚体(ACAT)的合成 |
| 5.2.3 PCL的合成 |
| 5.2.4 导电弹性体的合成 |
| 5.2.5 材料的基本表征 |
| 5.2.6 弹性体的宏观记忆性评估 |
| 5.2.7 体外生物学实验 |
| 5.2.8 统计学分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 导电性聚氨酯弹性体的合成与表征 |
| 5.3.2 导电性弹性体的热力学性质 |
| 5.3.3 导电性弹性体的形状记忆性 |
| 5.3.4 导电性弹性体的表面形貌 |
| 5.3.5 导电性弹性体的细胞相容性评价 |
| 5.3.6 ALP活性和钙沉积 |
| 5.3.7 成骨基因表达 |
| 5.3.8 成骨蛋白免疫荧光染色和western blotting分析 |
| 5.4 本章小结 |
| 第6章 全文总结和展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
（8）人羊膜间充质干细胞（hAMSCs）对小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤的治疗作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩写一览表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 hAMSCs分离、培养及鉴定 |
| 2.1 实验材料与试剂 |
| 2.1.1 实验小鼠及羊膜组织 |
| 2.1.2 试剂耗材 |
| 2.1.3 试剂配制 |
| 2.1.4 主要仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞复苏、培养、传代及冻存 |
| 2.2.2 hAMSCs的分离及培养 |
| 2.2.3 hAMSCs的鉴定 |
| 2.2.3.1 RT-PCR检测hAMSCs标志基因表达 |
| 2.2.3.2 流式细胞术检测hAMSCs标志分子 |
| 2.2.3.3 免疫荧光检测hAMSCs表面标志蛋白 |
| 2.2.3.4 hAMSCs成骨成脂分化 |
| 2.2.3.5 hAMSCs体内及体外致瘤性检测 |
| 2.3 统计学分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 hAMSCs的分离、培养与鉴定 |
| 2.4.2 hAMSCs体内及体外均无致瘤性 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 干细胞及其分类 |
| 2.5.2 羊膜间充质干细胞 |
| 第3章 hAMSCs及hAMSC-CM促进小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤的损伤修复 |
| 3.1 实验材料与试剂 |
| 3.1.1 实验小鼠 |
| 3.1.2 实验细胞 |
| 3.1.3 试剂耗材 |
| 3.1.4 试剂配制 |
| 3.1.5 主要仪器设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 hAMSCs条件培养基的提取及浓缩 |
| 3.2.2 C57BL/6J小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤模型的构建 |
| 3.2.3 PKH26标志hAMSCs |
| 3.2.4 hAMSCs及hAMSC-CM对小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤的治疗 |
| 3.2.5 皮肤伤口愈合率计算及小动物活体成像 |
| 3.2.6 皮肤组织切片的制作 |
| 3.2.7 组织免疫荧光染色(IF) |
| 3.2.8 HE染色 |
| 3.2.9 皮肤组织细胞凋亡染色(TUNEL法) |
| 3.2.10 免疫组织化学染色 |
| 3.2.11 Western blot免疫印迹检测 |
| 3.2.11.1 蛋白提取与分离 |
| 3.2.11.2 蛋白浓度测定(BCA法) |
| 3.2.11.3 SDS-PAGE 电泳 |
| 3.2.12 管形成实验 |
| 3.3 统计学分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 皮肤深Ⅱ度烫伤模型的构建 |
| 3.4.2 hAMSCs及hAMSC-CM体内移植促进深Ⅱ度皮肤烫伤的创面愈合 |
| 3.4.3 hAMSCs在深Ⅱ度皮肤烫伤小鼠体内存活、迁移及分化 |
| 3.4.4 hAMSCs及hAMSC-CM促进热损伤皮肤组织再生 |
| 3.4.5 hAMSCs及hAMSC-CM抑制热损伤皮肤细胞凋亡并促进其增殖 |
| 3.4.6 hAMSCs及hAMSC-CM促进热损伤皮肤组织血管再生 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 皮肤组织概述 |
| 3.5.2 皮肤烧伤及其分类 |
| 3.5.3 皮肤的损伤修复 |
| 3.5.4 MSCs治疗皮肤损伤的潜能及机制 |
| 3.5.4.1 MSCs分化为皮肤细胞和内皮细胞 |
| 3.5.4.2 MSCs抑制皮肤细胞凋亡、促进皮肤细胞增殖及迁移 |
| 3.5.4.3 MSCs促进皮肤组织血管再生 |
| 3.5.4.4 MSCs抑制损伤皮肤组织炎症 |
| 第4章 hAMSCs及hAMSC-CM促进热损伤皮肤细胞损伤修复的分子机制 |
| 4.1 实验材料与试剂 |
| 4.1.1 实验皮肤组织 |
| 4.1.2 实验细胞 |
| 4.1.3 主要耗材及试剂 |
| 4.1.4 试剂配制 |
| 4.1.5 主要仪器设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 DFL的分离与培养 |
| 4.2.2 HaCAT及DFL细胞热损伤模型的构建 |
| 4.2.3 实验分组及体外共培养体系的构建 |
| 4.2.4 Annexin V-FITC/PI流式细胞凋亡检测 |
| 4.2.5 CCK8检测细胞增殖 |
| 4.2.6 划痕实验 |
| 4.2.7 抗体芯片检测 |
| 4.3 统计学分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 HaCAT及DFL细胞的分离、培养及传代 |
| 4.4.2 HaCAT及DFL细胞体外热损伤模型的构建 |
| 4.4.3 hAMSCs及hAMSC-CM抑制热损伤皮肤细胞凋亡 |
| 4.4.4 hAMSCs、hAMSC-CM促进热损伤皮肤细胞增殖 |
| 4.4.5 hAMSCs、hAMSC-CM促进热损伤皮肤迁移 |
| 4.4.6 hAMSCs及hAMSC-CM激活热损伤皮肤细胞中PI3K/AKT及Wnt/β-catenin信号通路 |
| 4.4.7 hAMSCs通过活化PI3K/AKT信号通路抑制热损伤皮肤细胞凋亡 |
| 4.4.8 hAMSCs通过活化PI3K/AKT-Wnt/β-catenin信号通路促进热损伤皮肤细胞增殖 |
| 4.4.9 抗体芯片筛选hAMSCs旁分泌作用中活化AKT的关键因子 |
| 4.5 讨论 |
| 4.5.1 表皮角质细胞、真皮成纤维细胞与皮肤损伤修复 |
| 4.5.2 PI3K/AKT信号通路与皮肤细胞凋亡 |
| 4.5.3 Wnt/β-catenin信号通路与皮肤细胞增殖 |
| 4.5.4 hAMSCs旁分泌作用中活化PI3K/AKT信号的关键因子筛选 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 工作总结示意图 |
| 5.3 进一步工作的方向 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（9）microRNA-96-5p通过抑制BNIP3介导的FAK信号通路调控创面愈合的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一部分 miR-96-5p及BNIP3在皮肤损伤组织中的表达 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 BNIP3对人角质形成细胞增殖和转移的调控作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 miR-96-5p通过BNIP3介导FAK信号通路抑制人角质形成细胞增殖和迁移 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况 |
| 外文论文 |
（10）一效膏调节PCNA及IGF-1R表达，促进糖尿病小鼠皮肤溃疡愈合的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
四、大鼠皮肤创面愈合过程中IGF-1的定量学研究（论文参考文献）
- [1]自组装肽纳米纤维和PNIPAM共构建温敏型水凝胶及其对创面修复的研究[D]. 冯天琪. 吉林大学, 2021(02)
- [2]聚乳酸-羟基乙酸共聚物的仿生功能化及皮肤创伤修复研究[D]. 詹婧. 吉林大学, 2021(01)
- [3]鹿茸再生初始阶段伤口愈合分子调控机制的研究[D]. 郭倩倩. 中国农业科学院, 2021
- [4]生长因子纳米复合水凝胶GelMa的成骨微环境对骨再生的作用及机制[D]. 史哲. 南方医科大学, 2021(02)
- [5]MEBT/MEBO对慢性创面组织修复中STAT6和SOCS1表达的影响[D]. 岑小宁. 右江民族医学院, 2021
- [6]局部外用表皮生长因子促进糖尿病足溃疡创面愈合的临床研究[D]. 张开华. 南昌大学, 2020(01)
- [7]贻贝仿生导电性苯胺齐聚物生物材料的制备及在组织工程中的应用[D]. 闫欢欢. 中国科学技术大学, 2020(01)
- [8]人羊膜间充质干细胞（hAMSCs）对小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤的治疗作用及其机制研究[D]. 李婧嫄. 南昌大学, 2020(01)
- [9]microRNA-96-5p通过抑制BNIP3介导的FAK信号通路调控创面愈合的研究[D]. 吴鹏. 山东大学, 2019(03)
- [10]一效膏调节PCNA及IGF-1R表达，促进糖尿病小鼠皮肤溃疡愈合的实验研究[D]. 曲鹏. 辽宁中医药大学, 2019(02)