导读:本文包含了冻存骨髓基质细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:骨髓基质细胞,胶原膜,免疫组化,裸鼠
冻存骨髓基质细胞论文文献综述
郑瑜谦,袁芳,闫福华,赵欣,林敏魁[1]（2011）在《冻存骨髓基质细胞复合材料体内成骨基质的合成能力(英文)》一文中研究指出背景:课题组以往研究显示:体外培养条件下,冻存骨髓基质细胞复苏后仍保持较高的细胞存活率、细胞增殖及成骨分化能力。上述结果仍然需要进一步在体内环境下证实。目的:观察经超低温冻存后的骨髓基质细胞和支架材料胶原膜BME-10X复合体植入裸鼠体内后Ⅰ型胶原的合成情况。方法:体外分离培养Beagle犬骨髓基质细胞,冻存12个月后复苏,体外构建骨髓基质细胞和胶原膜材料复合体。分别经矿化诱导培养液、基础培养液培养5d后,植入裸鼠体内,于术后第4周取出标本,进行大体观察、组织病理学和免疫组化分析,并应用图像分析系统对各组标本中的Ⅰ型胶原进行定量分析。以矿化诱导培养液培养的单纯胶原膜材料为对照组。结果与结论:对照组在植入胶原膜后,胶原膜边界清晰,膜边缘及内部基本没有细胞生长,Ⅰ型胶原分布很少;在未诱导矿化组,术后第4周可见,胶原膜内有细胞长入,并有细小的条索状新生胶原形成,Ⅰ型胶原分布明显增多;在诱导矿化组,植入后也可见支架材料的分解降解和更多的细胞生长,大量新生的胶原形成类骨质样组织,与前两组对比,Ⅰ型胶原分布增多有显着性意义。结果表明冻存骨髓基质细胞复苏后进行体外培养扩增与诱导分化,并在体内环境下复合胶原支架材料,仍然具有较强成骨能力。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2011年12期）
袁芳,李厚轩,金峰,郑瑜谦,闫福华[2]（2010）在《矿化诱导促进冻存骨髓基质细胞在裸鼠体内形成Ⅰ型胶原的实验研究》一文中研究指出目的观察矿化诱导培养能否促进冻存骨髓基质细胞(BMSCs)在裸鼠体内形成Ⅰ型胶原,为牙周组织工程中选择适宜的种子细胞的保存和培养条件提供参考。方法体外分离培养Beagle犬BMSCs,经冻存12个月后,在矿化诱导培养液(矿化诱导组)或基础培养液(非矿化诱导组)中形成BMSCs-胶原膜支架复合物,将矿化诱导培养液处理的单纯胶原膜支架(空白对照组)、2种BMSCs-胶原膜复合物分别植入裸鼠背部皮下组织中,术后第4周行组织病理学和免疫组织化学观察,分析各组标本中的Ⅰ型胶原形成量。结果空白对照组植入胶原膜后,新生胶原分布很少;非矿化诱导组胶原分布明显增多;矿化诱导组中见大量新生的胶原形成。免疫组织化学光密度测量显示,矿化诱导组(0.1963±0.0126)>非矿化诱导组(0.1489±0.0037)>空白对照组(0.0775±0.0058)(P<0.05)。结论矿化诱导培养能够促进冻存的BMSCs在裸鼠体内形成Ⅰ型胶原。(本文来源于《福建医科大学学报》期刊2010年04期）
解芳[3]（2010）在《长期冻存后同种异体骨髓基质干细胞修复颅骨标准骨缺损的实验研究》一文中研究指出目的建立可靠、纯度高的犬骨髓基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)的分离纯化方法,观察其在体外扩增、成骨分化的能力。并进一步探索和评估：(1)长期冻存后的BMSCs的成骨分化能力；(2)同种异体BMSCs修复颅骨标准骨缺损的能力；(3)同种异体BMSCs移植是否引起明显的免疫排斥反应。旨在建立随用随取的同种异体BMSCs库,解决骨组织工程种子细胞的来源问题,促进骨组织工程早日在临床上广泛应用。方法采用1.077g／mlFicoll分离液,密度梯度离心法分离Beagle犬骨髓得到BMSCs,体外培养、扩增并用成骨条件培养液进行成骨诱导,进行碱性磷酸酶、茜素红染色和OPN、OCN、Ⅰ型胶原免疫细胞化学或免疫荧光染色。将大量扩增且成骨诱导后的BMSCs在液氮中冷冻保存6个月,复苏后接种于β-TCP支架上共培养,构建BMSCs／TCP复合物。在10只平均体重为11.9kg的成年Beagle犬颅骨上分别制造左右两个直径为20mm的标准骨缺损,分别为实验侧和对照侧。实验动物共分为叁组,分别为同种异体组、自体组和空白组。同种异体组接种的同种异体BMSCs来自于自体组的2只Beagle犬骨髓。自体组接种的BMSCs来自于自体组的2只Beagle犬各自本身,即为相同来源的BMSCs,其分离、纯化、成骨诱导后冻存、复苏、共培养及移植的方法在各组之间完全一致。其中6只为同种异体组,实验侧(左)应用成骨诱导后的同种异体BMSCs／β-TCP复合物修复,对照侧(右)单独应用β-TCP修复。另外2只犬(提供骨髓犬)为自体组,实验侧(左)应用成骨诱导后的自体BMSCs／β-TCP复合物修复,对照侧(右)单独应用β-TCP修复。其余2只犬为空白组,实验侧(左)单独应用β-TCP修复,对照侧(右)为空白对照,不接种任何材料。应用1-0号丝线封闭切口。采用组织学和影像学方法评估术后16和24周的修复情况。同时监测外周血T淋巴细胞亚群CD4+／CD8+的变化,对术后全身免疫反应进行评估。结果采用1.077g／mlFicoll液可获得纯度较高的BMSCs,细胞生长良好,平均倍增时间为24h,经成骨诱导培养后可定向分化为成骨细胞。应用成骨诱导后的冻存半年的同种异体BMSCs复合β-TCP修复Beagle犬颅骨标准骨缺损,无明显不良反应,所有动物术后均存活,无感染发生。16周后初步的组织学和影像学检查表明,同种异体组(6例)的成骨情况良好。免疫学分析表明CD4+和CD8+T细胞数量以及CD4+／CD8+比值在叁组Beagle犬中无显着性差异(p>0.05)。结论采用1.077g／mlFicoll液能有效地分离Beagle犬骨髓中的BMSCs,通过成骨诱导可分化为成骨细胞,从而为骨缺损的修复提供理想的组织工程种子细胞。长期冻存的同种异体BMSCs复苏后与β-TCP支架共培养,植入Beagle犬颅骨标准骨缺损中,在没有使用免疫抑制的情况下可以很好的修复骨缺损,没有明显的免疫排斥反应发生。(本文来源于《中国协和医科大学》期刊2010-04-10）
尹宏宇,孙剑,刘广鹏,崔磊,曹谊林[4]（2009）在《玻璃化冻存骨髓基质干细胞的实验研究》一文中研究指出目的:骨髓基质干细胞(BMSCs)是构建组织工程化骨主要的种子细胞,实现BMSCs的深低温保存对骨组织工程具有重要意义。目前,玻璃化冻存是最有发展前景的冻存方法,因此希望通过改进玻璃化液和预处理条件来提高BMSCs的玻璃化冻存效果。方法:采用不同组成及浓度的玻璃化液在不同的预处理条件下对第2(P2)代成骨诱导的犬骨髓基质干细胞(cBMSCs)进行玻璃化冻存实验,通过复苏后的细胞存活率来选择一种理想的玻璃化液及适合的预处理条件,并在此基础上再与常规冻存的实验结果进行比较,同时考虑冻存过程对细胞成骨活性的影响。结果:将VS226作为玻璃化液,在0℃/5min的预处理条件下玻璃化冻存P2代成骨诱导的cBMSCs,与常规冻存后的细胞存活率相比无统计学差异,且冻存过程对此细胞的成骨能力没有影响。结论:采用VS226来玻璃化冻存BMSCs,可实现为骨组织工程提供大量种子细胞的目的。(本文来源于《中国美容医学》期刊2009年03期）
袁芳,闫福华,郑瑜谦,李厚轩,赵欣[5]（2007）在《冻存骨髓基质细胞和胶原膜在裸鼠体内的成骨研究》一文中研究指出目的:研究经超低温冻存后的骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)和支架材料胶原膜BME-10X复合体植入裸鼠体内的成骨情况。方法:体外分离培养Beagle犬BMSCs,冻存二代生长状况良好的BMSCs。12个月后,复苏冻存的BMSCs,并在体外构建BMSCs和0.5cm×0.5cm大小的BME-10X复合体。将胶原膜+BMSCs+矿化诱导培养液、胶原膜+BMSCs+基础培养液、单纯胶原膜+矿化诱导培养液培养5d后,植入裸鼠体内,并于术后第4、8、12周取出标本,进行大体观察和组织病理学分析。结果:单纯胶原膜+诱导培养液组在植入胶原膜后,胶原膜边界清晰,膜边缘及内部基本没有细胞生长;在胶原膜+BMSCs+基础培养液组,术后第4周可见,胶原膜内有细胞长入,并有细小的条索状新生胶原形成,随着时间的延长,支架胶原逐渐分解,新形成的条索状胶原纤维变粗大;在胶原膜+BMSCs+矿化诱导培养液组,植入后也可见支架胶原的分解和更多的细胞生长,大量新生的胶原形成类骨质样组织。结论:冻存BMSCs复苏后进行体外培养扩增与诱导分化,并在在体内环境下复合胶原支架材料,仍然具有较强成骨能力。(本文来源于《口腔医学研究》期刊2007年03期）
袁芳[6]（2007）在《冻存骨髓基质细胞在诱导条件下成骨潜能的实验研究》一文中研究指出目的：骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)作为间充质细胞，具有多向分化潜能，是一种理想的骨组织工程的种子细胞，有着广泛的应用前景。随着细胞生物学及组织工程学研究的深入和发展，对BMSCs的需求量越来越大，故对其进行长期、大量的保存十分必要。本实验通过对冻存一年后Beagle犬BMSCs进行复苏，传代扩增与诱导分化，探讨冻存后BMSCs在体外的成骨潜能，同时，建立实验动物模型，探讨冻存BMSCs与胶原膜构建细胞和支架材料复合体在裸鼠体内的成骨能力，为进一步研究BMSCs修复颌骨缺损、牙周组织缺损的临床应用提供科学依据。方法：本研究分为体外细胞实验和动物体内实验两个部分：第一部分冻存骨髓基质细胞体外成骨潜能的实验研究：选取于液氮中冻存11个月后的成年Beagle犬BMSCs复苏后进行体外扩增培养，并在实验组传代培养中加入10~(-8)mol／L地塞米松、50mg／L维生素C和10mmol／Lβ-甘油磷酸钠进行诱导分化，对照组未加矿化诱导液，对比观察细胞生长形态、细胞诱导前后增殖情况、细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)含量以及形成矿化结节能力的改变。第二部分冻存骨髓基质细胞和胶原膜复合材料在裸鼠体内的成骨潜能研究：体外分离培养Beagle犬BMSCs，冻存二代生长状况良好的BMSCs。12个月后，复苏冻存的BMSCs，并在体外构建BMSCs和0.5×0.5cm~2大小的BME-10X复合体。将胶原膜+BMSCs+矿化诱导培养液、胶原膜+BMSCs+基础培养液、单纯胶原膜+矿化诱导培养液培养5天后，植入裸鼠体内，并于术后第4，8，12周取出标本，进行大体观察和组织病理学分析。结果：第一部分：冻存BMSCs复苏后呈成纤维样表现，增殖力强。体外矿化结节形成检测发现，常规非诱导培养组细胞于3周左右其中央部分细胞形成细胞团，此细胞团最终形成钙化结节。诱导培养组细胞5天后即出现矿化结节状。检测冻存BMSCs增殖情况发现，复苏后非诱导BMSCs和诱导BMSCs细胞在1～2天生长缓慢，从第3天起快速增长，于第7天达最高峰。非诱导BMSCs在各个时间点上的A值均高于诱导组；诱导组BMSCs增殖能力降低，生长比较平缓。检测冻存BMSCs的ALP活性发现，随着培养时间的延长，非诱导和诱导BMSCs的ALP平均值均增加。4天时两组无明显差别，但随着培养时间延长，诱导组细胞ALP活性增加更为明显。第二部分：单纯胶原膜+诱导培养液组在植入胶原膜后，胶原膜边界清晰，膜边缘及内部基本没有细胞生长；在胶原膜+BMSCs+基础培养液组，术后第4周可见，胶原膜内有细胞长入，并有细小的条索状新生胶原形成，随着时间的延长，支架胶原逐渐分解，新形成的条索状胶原纤维变粗大；在胶原膜+BMSCs+矿化诱导培养液组，植入后也可见支架胶原的分解和更多的细胞生长，大量新生的胶原形成类骨质样组织。结论：1、冻存BMSCs复苏传代后，在体外培养条件下仍保持了较高的细胞存活率、细胞增殖及成骨分化能力，与未矿化诱导相比，经矿化诱导后BMSCs的增殖能力下降，但分化能力增强。2、冻存BMSCs复苏后在胶原膜支架材料上生长良好；细胞支架材料复合物移植到裸鼠体内后，随着时间的延长，支架材料逐渐降解，细胞持续分泌细胞外基质，类骨质组织逐渐增多。矿化诱导组较非诱导组增加更明显。3、冻存BMSCs复苏后进行培养扩增与诱导分化，不仅在体外培养条件下该细胞仍保持了较高的细胞增殖及成骨分化能力，而且该细胞在体内环境下复合支架材料，仍具有较强成骨能力，是目前最有希望在临床广泛使用的骨组织工程种子细胞。说明冻存可以保持BMSCs的成骨定向分化能力，这为今后大量使用同一来源的冻存种子细胞进行组织工程修复重建研究提供了坚实的理论基础。(本文来源于《福建医科大学》期刊2007-05-01）
郭宗科,章庆国,李静[7]（2006）在《超低温冻存对人骨髓基质干细胞生物学特性的影响》一文中研究指出目的观察超低温冻存对人骨髓基质干细胞(BMSC)生物学特性的影响。方法从正常献髓者髂骨采集骨髓,分离培养出BMSC,并对其进行成骨诱导培养。将第4代人BMSC经短期超低温冻存、复苏后,通过细胞活性率测定、形态学比较、细胞增殖功能、碱性磷酸酶(ALP)活性检测及体外矿化能力比较,观察超低温冻存对人BMSC生物学特性的影响。结果第4代人BMSC冻存、复苏前后的两组细胞无论在细胞活性率、细胞形态、生长过程、ALP活性等方面均无显着性差异(P>0.05)。结论短期的超低温冻存对人BMSC的生物活性无明显影响。(本文来源于《现代医学》期刊2006年06期）
曲强,李秉璐,赵玉沛,陈翠珠,闫旭[8]（2006）在《成人骨髓基质干细胞分化来源的肝细胞的冻存与复苏研究》一文中研究指出目的在体外诱导人骨髓基质干细胞向肝细胞分化成熟的基础上,将细胞深冻保存,观察冻存复苏后细胞存活率及功能状况。方法在含有多种细胞因子的条件培养基中体外诱导成人骨髓基质干细胞,当细胞显示成熟肝细胞特征后,将细胞分别冻存于90%胎牛血清(FBS)和10%二甲亚砜(DMSO)(A组)、10%FBS、30%甘油和60%培养基(B组)和10%FBS、10%DMSO和80%威斯康星器官保存液(UW液)(C组)中。冻存4周后复苏细胞,测定各组细胞存活率及白蛋白合成情况。结果成人骨髓基质干细胞分化来源的肝细胞经冻存复苏后可恢复功能细胞形态,A、B和C组冻存液中细胞复苏后细胞存活率分别为(60·0±3·3)%、(91·0±2·6)%和(89·0±1·4)%,培养24h后检测上清液白蛋白浓度分别为(0·210±0·005)g/L、(0·340±0·020)g/L和(0·330±0·030)g/L。结论成人骨髓基质干细胞分化来源的肝细胞冻存复苏后仍保持较高的细胞存活率和功能,可作为临床肝细胞移植及生物人工肝的重要肝细胞来源。(本文来源于《中华外科杂志》期刊2006年21期）
袁芳,闫福华,李厚轩,赵欣,林敏魁[9]（2006）在《冻存骨髓基质细胞体外成骨潜能的实验研究》一文中研究指出目的观察冻存骨髓基质细胞(BMSC)的体外生长特点及诱导与非诱导条件下的成骨能力。方法取冻存11个月犬BMSC复苏后进行体外扩增培养,传代培养中加入10-8mol/L地塞米松、50 mg/L Vit C和10mmol/Lβ-甘油磷酸钠进行诱导分化,观察细胞形态、细胞诱导前后增殖情况、细胞碱性磷酸酶(ALP)含量以及形成矿化结节能力的改变。结果冻存BMSC复苏后呈成纤维样表现,增殖力强。在诱导液的作用下冻存BMSC增殖性能降低,ALP活性增加,诱导5 d后可见矿化结节。结论冻存BMSC增殖能力强,经诱导后表现出明显的成骨活性,可作为骨组织工程的种子细胞。(本文来源于《福建医科大学学报》期刊2006年04期）
张文元,杨亚冬,房国坚,陈勇[10]（2006）在《不同冻存时间与温度对兔骨髓基质干细胞存活率的影响》一文中研究指出目的:以二甲基亚砜作为保护剂,采用慢冻快融法观察不同温度及不同时间冻存的兔骨髓基质干细胞复苏后存活率的变化。方法:实验于2003-09/2005-06在浙江省医学科学院生物工程所完成。①选取清洁级3月龄新西兰大白兔5只,抽取兔髂骨及胫骨的骨髓液,密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化出兔骨髓基质干细胞,并进行增殖。②取第3代骨髓基质干细胞,经消化后离心重悬,用完全培养液调整细胞浓度为6×109L-1。将质量浓度为250g/L的二甲基亚砜缓慢滴入同体积含骨髓基质干细胞的上述培养液中,混匀,二甲基亚砜的终浓度为125g/L,骨髓基质干细胞的终密度为3×109L-1,1mL/安瓿冻存。③4℃冻存直接将安瓿置4℃冰箱中;-20℃及-60℃冻存,则将安瓿置于有脱脂棉的聚丙烯泡沫盒中,壁厚1.5cm,扎紧密封,各置-20℃及-60℃冰箱过夜,取出后分别直接放于-20℃及-60℃冰箱保存;-196℃液氮冻存,则将置有安瓿的泡沫盒于-60℃冰箱过夜后,取出冻存安瓿直接放于液氮中保存。骨髓基质干细胞分别于4℃、-20℃、-60℃、-196℃条件下进行3d,10d,1,3,8个月以及1年的冻存。④经不同温度及不同时间冻存后,给予复苏。复苏时将冻存安瓿从液氮或冰箱中取出,立即置37℃水浴并轻轻摇动,约1min迅速解冻。含骨髓基质干细胞的冻存液经5倍于冻存液量的完全培养液稀释后,离心重悬,进行骨髓基质干细胞存活率测定。复苏后的骨髓基质干细胞以1×104/cm2用完全培养液再培养,观察骨髓基质干细胞的形态变化及生长活性情况。结果:实验选取3月龄新西兰大白兔5只,全部进入结果分析。①兔骨髓基质干细胞原代培养情况:培养3d时,骨髓基质干细胞数量较少,散在分布,呈短梭形形态。培养1周时细胞形成大量的小集落,细胞变长。此后集落细胞迅速增多,逐渐汇合成片,形态为均一的长梭形,呈旋涡状排列,2周时细胞长成单层。②兔骨髓基质干细胞传代培养情况:刚传代的骨髓基质干细胞呈圆形,数小时后迅速贴壁,重新成为梭形。之后细胞呈长梭形均匀分布生长,形态比原代培养更均一,细胞生长旺盛、增殖迅速。连续传代22代无明显变化。但随传代次数增多,细胞形态出现多样性,逐渐呈老化现象。③不同温度不同冻存时间下复苏后的兔骨髓基质干细胞存活率的比较:兔骨髓基质干细胞液氮保存1年,存活率为79%;-60℃保存1,3,8个月的存活率分别为67%,38%和0%;不宜于4℃及-20℃保存。④复苏后的骨髓基质干细胞再培养情况:复苏后的骨髓基质干细胞细胞形态及生长状况与冻存前无明显差异,呈长梭形生长,增殖旺盛。结论:分离纯化的兔骨髓基质干细胞生长增殖能力强,短期保存可用-60℃冻存,长期需液氮保存,为择期进行骨髓基质干细胞实验和应用提供实验依据。(本文来源于《中国临床康复》期刊2006年13期）
冻存骨髓基质细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的观察矿化诱导培养能否促进冻存骨髓基质细胞(BMSCs)在裸鼠体内形成Ⅰ型胶原,为牙周组织工程中选择适宜的种子细胞的保存和培养条件提供参考。方法体外分离培养Beagle犬BMSCs,经冻存12个月后,在矿化诱导培养液(矿化诱导组)或基础培养液(非矿化诱导组)中形成BMSCs-胶原膜支架复合物,将矿化诱导培养液处理的单纯胶原膜支架(空白对照组)、2种BMSCs-胶原膜复合物分别植入裸鼠背部皮下组织中,术后第4周行组织病理学和免疫组织化学观察,分析各组标本中的Ⅰ型胶原形成量。结果空白对照组植入胶原膜后,新生胶原分布很少;非矿化诱导组胶原分布明显增多;矿化诱导组中见大量新生的胶原形成。免疫组织化学光密度测量显示,矿化诱导组(0.1963±0.0126)>非矿化诱导组(0.1489±0.0037)>空白对照组(0.0775±0.0058)(P<0.05)。结论矿化诱导培养能够促进冻存的BMSCs在裸鼠体内形成Ⅰ型胶原。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
冻存骨髓基质细胞论文参考文献
[1].郑瑜谦,袁芳,闫福华,赵欣,林敏魁.冻存骨髓基质细胞复合材料体内成骨基质的合成能力(英文)[J].中国组织工程研究与临床康复.2011
[2].袁芳,李厚轩,金峰,郑瑜谦,闫福华.矿化诱导促进冻存骨髓基质细胞在裸鼠体内形成Ⅰ型胶原的实验研究[J].福建医科大学学报.2010
[3].解芳.长期冻存后同种异体骨髓基质干细胞修复颅骨标准骨缺损的实验研究[D].中国协和医科大学.2010
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[6].袁芳.冻存骨髓基质细胞在诱导条件下成骨潜能的实验研究[D].福建医科大学.2007
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[8].曲强,李秉璐,赵玉沛,陈翠珠,闫旭.成人骨髓基质干细胞分化来源的肝细胞的冻存与复苏研究[J].中华外科杂志.2006
[9].袁芳,闫福华,李厚轩,赵欣,林敏魁.冻存骨髓基质细胞体外成骨潜能的实验研究[J].福建医科大学学报.2006
[10].张文元,杨亚冬,房国坚,陈勇.不同冻存时间与温度对兔骨髓基质干细胞存活率的影响[J].中国临床康复.2006