广西华都建筑科技有限公司广西南宁530031
摘要：随着城市水污染越来越严重，为了保证人们生活饮用水安全需通过相关检测方法对水质中的微生物进行监测。GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》中对总大肠菌群检测步骤有详细的讲解，本文主要针对多管发酵法和滤膜法进行分析总结。
关键词：生活饮用水；总大肠菌群；多管发酵法；滤膜法
一、前言
生活饮用水虽然经过沉淀、过滤、加氯消毒等处理，含微生物很少，但当其水源水不洁或处理达不到要求时，仍然有相当量的微生物甚至含有致病性微生物[1]。我国生活饮用水水质标准中规定生活饮用水中菌落总数不得大于100CFU/ml，总大肠菌群不得检出。相关调查显示，存在于饮用水中的革兰氏阴性杆菌外，在饮用水中常见的微生物还有沙门氏菌、大肠杆和霍乱弧菌等微生物[2]。这类大肠菌群一旦进入胆囊、膀胱等处可能引起炎症、腹泻、呕吐、胃痛和发热等症状，严重时可能危害小孩和老人的生命。目前常见的总大肠菌群检查方法包括滤膜法以及多管发酵法等众多方法。
二、总大肠菌群进行检测的方法及步骤
（一）多管发酵法
多管发酵法主要用于对生活饮用水中总大肠菌群进行测定。总大肠菌群是一种革革兰氏阴性菌，是一类无芽孢杆菌，在培养温度为37℃的环境中进行24小时的培养，可产酸产气、发酵乳糖，并具有厌氧与需氧的特性。在多管发酵法中，需要采用培养基及其相关试剂进行培养，主要包括革兰氏染色液、乳糖蛋白胨培养液、伊红美蓝培养基等。在采用该方法进行检测时，需要采用培养基与实验试剂进行测定。
1、仪器及设备
培养箱、天平、冰箱、显微镜、小倒管、试管、平皿、锥形瓶、分度吸管、载玻片。
2、试验步骤
分别将10mL、1mL水样放至l0mL的双料乳糖蛋白胨培养液以及lOmL的单料乳糖蛋白胨培养液中。另将lmL水样放入9mL无菌生理盐水中，将其混匀后，取1mL将其放入单料乳糖蛋白胨培养液中进行培养，并将每一种稀释度进行5管接种。对于经处理后的饮用水，也应每天进行检验。对水源水样进行检验时，当发现水源污染严重，应将稀释度加大，将3种接种水样的稀释度进行5管接种，共15管。在对少于lmL的水样进行接种时，应稀释10倍，随后取lmL进行接种，采用逐次递增法进行稀释，在稀释时的吸管应具有灭菌刻度。试管接种后，将其置于37℃的恒温培养箱中进行培养，时间为24小时。培养后，试管内无产气产酸的现象，则为总大肠菌群阴性，如果出现产酸产气时，则应采取以下步骤继续进行检验。对于产酸产气的接种管，将其在伊红美蓝琼脂板上进行转种，置于培养箱中培养，时间为24小时。随后对菌落形态进行观察，将紫黑色合并金属光泽或无金属光泽以及淡紫红色且中心部分颜色较深的菌落进行染色，并通过镜检进行证实。采用染色镜进行染色，证实为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则可对其进行乳糖蛋白胨的培养，将接种管置于恒温培养箱中，进行24小时的培养之后，出现产酸气的接种管，则为总大肠菌群阳性。
（二）滤膜法
在对总大肠菌群进行检测时，滤膜法主要采用0.45微米的微孔滤膜对水样进行过滤，在乳糖上黏贴过滤膜，进行恒温培养后出现产酸产气则可证实水中存在总大肠菌群。
1、仪器及设备
0.45微米孔径滤膜、滤器、无齿镊子、抽滤设备，培养箱、天平、冰箱、显微镜、小倒管、试管、平皿、锥形瓶、分度吸管、载玻片。
2、试验步骤
首先，灭菌，包括滤器灭菌法以及滤膜灭菌法。滤器灭菌法：采用火焰进行灭菌，可将酒精棉球点燃实施灭菌，还可采用蒸汽灭菌器实施灭菌，灭菌时间为20min。滤膜灭菌法：在烧杯中放置滤膜，并将蒸馏水加入烧杯中，将水煮沸三次进行灭菌，每次灭菌时间为15min。将水煮沸两次之后，需先将水进行更换，并将容器内残留的试剂清除，再进行第三次煮沸。其次，过滤水样，将灭菌滤膜采用无菌镊子进行夹取，将滤膜的粗糙面朝上，置于无菌滤床上，随后将100mL水样在滤器中注入，并打开阀门，进行抽滤。再次，培养，对水样进行过滤之后，再抽气5s，随后把滤器阀门关上，并将滤膜用灭菌镊子夹取至品红亚硫酸钠培养基上，将滤膜截留的细菌面朝上放置，津贴培养基后在恒温箱中进行培养。
三、多管发酵法与滤膜法的比较
多管发酵法是用MPN来表示其实验结果的，实际上它是根据统计学理论估计水体的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法，如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。多管发酵法可适用于各种各样的样品，但操作繁重，需要时间长，与滤膜法相比，滤膜法主要适用于杂质较少的水样，操作简单快速，而多管发酵法的适用范围比较广，是最常用的一种方法，准确度也较高。多管发酵法与滤膜法的结果作统计学比较，显示后者较为精密，虽然从这两种技术所得到的数据都提供了基本相同的水质根据，但检验结果的数目的数值不同，在做水源水的检验时，可以预期约有80%的滤膜试验的数据落在多管发酵试验的置信界限内。
结语
总而言之，生活饮用水的卫生与人类身体的健康具有紧密联系，因此，相关部门应加强饮用水的卫生工作，加大对水源的管理力度，严格防止人畜粪便污染或其他水质污染，防止水污染。各级政府部门应加大对水质管理以及检测的监督管理力度，加大经费的投入，加强对水质净化消毒以及管网设施以及设备的保养与维修，同时，对广大人民群众进行饮用水卫生的宣传，提高群众的自我保护意识和卫生意识。最重要的是，定期、定时对水质进行检测，尤其是对总大肠菌群进行检测，保证饮用水的质量。
参考文献
[1]王小东，陈诚.生活饮用水微生物检验方法和评价标准探讨[J].健康必读旬刊，2012，11（10）.
[2]蔡东梅.自来水中微生物检测技术及发展方向[J].质量控制，2016，11（10）