本文主要研究内容
作者赵静,陶蓉,郝德君,肖留斌,谭永安（2019）在《甜菜夜蛾卵黄原蛋白受体基因的RNA干扰》一文中研究指出：【目的】卵黄原蛋白受体(vitellogenin receptor,VgR)是介导昆虫卵黄原蛋白胞吞作用的主要受体,通过RNA干扰(RNAi)方法研究甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)VgR的功能,为深入了解甜菜夜蛾生殖生理的分子机制及开发有效防治新方法提供依据。【方法】以甜菜夜蛾雌成虫腹部的cDNA为模板,通过PCR克隆得到甜菜夜蛾VgR基因片段,其包含配体结合域功能区。绿色荧光蛋白基因(GFP)片段通过特异性引物从笔者实验室保存的GFP质粒上扩增。将VgR和GFP目的片段连入pMD-19T载体后进行测序,利用DNAMAN软件分析基因序列的准确性。以测序验证正确的质粒作为DNA模板,利用带T7启动子的引物进行PCR扩增。用T7 RiboMAXTM Express RNAi System合成试剂盒合成VgR-dsRNA和GFP-dsRNA。应用10μL微量进样器在化蛹第2、6天的甜菜夜蛾雌蛹腹部注射3μL双链RNA(2μg·μL-1)。利用RT-qPCR技术检测甜菜夜蛾刚羽化、羽化24 h、羽化48 h雌成虫的VgR表达量变化,同时统计对照组(空白对照、注射GFP-dsRNA)和处理组(注射VgR-dsRNA)甜菜夜蛾的羽化率及单雌产卵量。【结果】扩增得到VgR和GFP基因片段,大小分别为327和417 bp。RT-qPCR检测结果表明,与对照组相比,注射dsRNA后甜菜夜蛾的VgR表达水平显著下降。对于刚羽化、羽化24 h、羽化48 h的雌成虫,注射VgR-dsRNA处理组的VgR表达量相比注射GFP-dsRNA的对照组分别下降了79.35%、84.22%、67.68%。通过解剖观察刚羽化、羽化24 h、羽化48 h的甜菜夜蛾卵巢,发现注射VgR-dsRNA处理组与注射GFP-dsRNA对照组相比,卵巢发育进度显著推迟。对于羽化24 h的甜菜夜蛾,与注射GFP-dsRNA组相比,注射VgR-dsRNA处理组卵巢管长度下降了23.92%;注射GFP-dsRNA组的卵巢成熟卵粒较多,平均直径为(0.46±0.05)mm,而注射VgR-dsRNA处理组成熟卵粒数量较少且相对较小,平均直径为(0.23±0.02)mm。注射GFP-dsRNA组和VgR-dsRNA组的羽化率无显著差异。注射VgR-dsRNA处理组的单雌平均产卵量只有170粒,而对照组(空白对照和注射GFP-dsRNA)单雌平均产卵量可达到451粒和420粒,处理组与对照组的产卵量存在显著差异。【结论】通过体外注射dsRNA的方法研究VgR的功能,能够显著降低VgR表达。VgR在甜菜夜蛾的生殖中起着不可替代的作用,直接影响甜菜夜蛾卵巢的发育与产卵量,可以作为控制甜菜夜蛾的潜在靶标。
Abstract
【mu de 】luan huang yuan dan bai shou ti (vitellogenin receptor,VgR)shi jie dao kun chong luan huang yuan dan bai bao tun zuo yong de zhu yao shou ti ,tong guo RNAgan rao (RNAi)fang fa yan jiu tian cai ye e (Spodoptera exigua)VgRde gong neng ,wei shen ru le jie tian cai ye e sheng shi sheng li de fen zi ji zhi ji kai fa you xiao fang zhi xin fang fa di gong yi ju 。【fang fa 】yi tian cai ye e ci cheng chong fu bu de cDNAwei mo ban ,tong guo PCRke long de dao tian cai ye e VgRji yin pian duan ,ji bao han pei ti jie ge yu gong neng ou 。lu se ying guang dan bai ji yin (GFP)pian duan tong guo te yi xing yin wu cong bi zhe shi yan shi bao cun de GFPzhi li shang kuo zeng 。jiang VgRhe GFPmu de pian duan lian ru pMD-19Tzai ti hou jin hang ce xu ,li yong DNAMANruan jian fen xi ji yin xu lie de zhun que xing 。yi ce xu yan zheng zheng que de zhi li zuo wei DNAmo ban ,li yong dai T7qi dong zi de yin wu jin hang PCRkuo zeng 。yong T7 RiboMAXTM Express RNAi Systemge cheng shi ji he ge cheng VgR-dsRNAhe GFP-dsRNA。ying yong 10μLwei liang jin yang qi zai hua yong di 2、6tian de tian cai ye e ci yong fu bu zhu she 3μLshuang lian RNA(2μg·μL-1)。li yong RT-qPCRji shu jian ce tian cai ye e gang yu hua 、yu hua 24 h、yu hua 48 hci cheng chong de VgRbiao da liang bian hua ,tong shi tong ji dui zhao zu (kong bai dui zhao 、zhu she GFP-dsRNA)he chu li zu (zhu she VgR-dsRNA)tian cai ye e de yu hua lv ji chan ci chan luan liang 。【jie guo 】kuo zeng de dao VgRhe GFPji yin pian duan ,da xiao fen bie wei 327he 417 bp。RT-qPCRjian ce jie guo biao ming ,yu dui zhao zu xiang bi ,zhu she dsRNAhou tian cai ye e de VgRbiao da shui ping xian zhe xia jiang 。dui yu gang yu hua 、yu hua 24 h、yu hua 48 hde ci cheng chong ,zhu she VgR-dsRNAchu li zu de VgRbiao da liang xiang bi zhu she GFP-dsRNAde dui zhao zu fen bie xia jiang le 79.35%、84.22%、67.68%。tong guo jie pou guan cha gang yu hua 、yu hua 24 h、yu hua 48 hde tian cai ye e luan chao ,fa xian zhu she VgR-dsRNAchu li zu yu zhu she GFP-dsRNAdui zhao zu xiang bi ,luan chao fa yo jin du xian zhe tui chi 。dui yu yu hua 24 hde tian cai ye e ,yu zhu she GFP-dsRNAzu xiang bi ,zhu she VgR-dsRNAchu li zu luan chao guan chang du xia jiang le 23.92%;zhu she GFP-dsRNAzu de luan chao cheng shou luan li jiao duo ,ping jun zhi jing wei (0.46±0.05)mm,er zhu she VgR-dsRNAchu li zu cheng shou luan li shu liang jiao shao ju xiang dui jiao xiao ,ping jun zhi jing wei (0.23±0.02)mm。zhu she GFP-dsRNAzu he VgR-dsRNAzu de yu hua lv mo xian zhe cha yi 。zhu she VgR-dsRNAchu li zu de chan ci ping jun chan luan liang zhi you 170li ,er dui zhao zu (kong bai dui zhao he zhu she GFP-dsRNA)chan ci ping jun chan luan liang ke da dao 451li he 420li ,chu li zu yu dui zhao zu de chan luan liang cun zai xian zhe cha yi 。【jie lun 】tong guo ti wai zhu she dsRNAde fang fa yan jiu VgRde gong neng ,neng gou xian zhe jiang di VgRbiao da 。VgRzai tian cai ye e de sheng shi zhong qi zhao bu ke ti dai de zuo yong ,zhi jie ying xiang tian cai ye e luan chao de fa yo yu chan luan liang ,ke yi zuo wei kong zhi tian cai ye e de qian zai ba biao 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学的赵静,陶蓉,郝德君,肖留斌,谭永安，发表于刊物中国农业科学2019年01期论文，是一篇关于甜菜夜蛾论文,卵黄原蛋白受体基因论文,干扰论文,卵巢发育论文,中国农业科学2019年01期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学2019年01期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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