本文主要研究内容
作者刘烨（2019）在《基于G2型PEDV S1蛋白检测特异性IgA和IgG间接ELISA方法的建立及其灭活疫苗被动免疫评价》一文中研究指出：猪流行性腹泻病毒(PEDV)是世界范围内致猪只腹泻的主要病原体之一,尤其近十年G2型PEDV造成了养猪行业巨大的经济损失。各个年龄阶段中PEDV均有很高的感染率,能够引起腹泻、脱水等症状。目前对PEDV防控最主要的方式是疫苗免疫,免疫形式包括主动免疫和被动免疫。PEDV能够引起7日龄以下的仔猪高发病率以及高死亡率,对幼龄仔猪龄PEDV的防控方式主要为被动免疫疫苗。因此,本研究以妊娠母猪及其所产新生仔猪为研究对象,初步评价G2型PEDV灭活疫苗的被动免疫。灭活疫苗免疫后通常引起机体产生特异性的抗体,为探究免疫保护效果是否与血清中IgA、IgG抗体水平变化具有相关性,本研究首先建立了检测PEDV特异性IgA和IgG抗体的间接ELISA方法。以真核表达并纯化的PEDV S1蛋白作为包被抗原,以羊抗猪IgA-HRP、IgG-HRP分别为二抗,优化反应条件并进行特异性、敏感性以及重复性试验。特异性试验结果显示该方法对TGEV、PoRV、PDCoV和PCV2常见致猪腹泻病毒的阳性血清均无交叉反应;敏感性试验显示该方法分别能检测出400倍稀释的IgA阳性血清以及800倍稀释的IgG阳性血清;批内和批间重复性变异系数均小于15%。利用IgA和IgG抗体间接ELISA方法与间接免疫荧光(IFA)对临床样品检测,结果显示IgA、IgG抗体间接ELISA方法和IFA的总符合率分别为98.6%和96.5%。为了评估G2型PEDV的被动免疫,本研究选用DMEM和PEDV灭活疫苗分别经后海穴对妊娠母猪A、B组进行了产前40 d和产前20 d的两次免疫。产后使初生仔猪采食初乳,将5日龄仔猪随机分为3组:攻毒组、对照组以及抗体水平监测组。攻毒组和对照组分别口服PEDV LNct2a毒株F13和DMEM。临床症状显示产于未免疫母猪的仔猪在感染病毒24 h后可见精神沉郁、腹泻症状,攻毒5 d内发病率为100%,腹腔剖检结果可见肠壁组织变薄,充满淡黄色稀液和食物残渣。同时,该组仔猪排毒量高,肠组织均能检测到病毒RNA,免疫组化能观测到PEDV对回肠和空肠肠上皮细胞的感染。与之相反,产于免疫母猪的仔猪感染PEDV 5 d后只有10.5%的仔猪出现了轻微的腹泻症状,仔猪获得了高达89.5%的保护。B组仔猪几乎没有排毒现象,肠组织内病毒RNA含量极低。间接ELISA结果显示猪血清中IgA和IgG抗体水平与其中和抗体水平有极显著相关性,PEDV灭活疫苗后海穴免疫能够引起较高水平的抗体反应,并且对仔猪形成了免疫保护。综上,本研究初步证明了后海穴免疫PEDV灭活疫苗使母猪产生的高水平IgA、IgG和中和抗体为5日龄仔猪提供了被动保护,为进一步研究PEDV免疫保护机制提供理论基础。
Abstract
zhu liu hang xing fu xie bing du (PEDV)shi shi jie fan wei nei zhi zhu zhi fu xie de zhu yao bing yuan ti zhi yi ,you ji jin shi nian G2xing PEDVzao cheng le yang zhu hang ye ju da de jing ji sun shi 。ge ge nian ling jie duan zhong PEDVjun you hen gao de gan ran lv ,neng gou yin qi fu xie 、tuo shui deng zheng zhuang 。mu qian dui PEDVfang kong zui zhu yao de fang shi shi yi miao mian yi ,mian yi xing shi bao gua zhu dong mian yi he bei dong mian yi 。PEDVneng gou yin qi 7ri ling yi xia de zai zhu gao fa bing lv yi ji gao si wang lv ,dui you ling zai zhu ling PEDVde fang kong fang shi zhu yao wei bei dong mian yi yi miao 。yin ci ,ben yan jiu yi ren shen mu zhu ji ji suo chan xin sheng zai zhu wei yan jiu dui xiang ,chu bu ping jia G2xing PEDVmie huo yi miao de bei dong mian yi 。mie huo yi miao mian yi hou tong chang yin qi ji ti chan sheng te yi xing de kang ti ,wei tan jiu mian yi bao hu xiao guo shi fou yu xie qing zhong IgA、IgGkang ti shui ping bian hua ju you xiang guan xing ,ben yan jiu shou xian jian li le jian ce PEDVte yi xing IgAhe IgGkang ti de jian jie ELISAfang fa 。yi zhen he biao da bing chun hua de PEDV S1dan bai zuo wei bao bei kang yuan ,yi yang kang zhu IgA-HRP、IgG-HRPfen bie wei er kang ,you hua fan ying tiao jian bing jin hang te yi xing 、min gan xing yi ji chong fu xing shi yan 。te yi xing shi yan jie guo xian shi gai fang fa dui TGEV、PoRV、PDCoVhe PCV2chang jian zhi zhu fu xie bing du de yang xing xie qing jun mo jiao cha fan ying ;min gan xing shi yan xian shi gai fang fa fen bie neng jian ce chu 400bei xi shi de IgAyang xing xie qing yi ji 800bei xi shi de IgGyang xing xie qing ;pi nei he pi jian chong fu xing bian yi ji shu jun xiao yu 15%。li yong IgAhe IgGkang ti jian jie ELISAfang fa yu jian jie mian yi ying guang (IFA)dui lin chuang yang pin jian ce ,jie guo xian shi IgA、IgGkang ti jian jie ELISAfang fa he IFAde zong fu ge lv fen bie wei 98.6%he 96.5%。wei le ping gu G2xing PEDVde bei dong mian yi ,ben yan jiu shua yong DMEMhe PEDVmie huo yi miao fen bie jing hou hai xue dui ren shen mu zhu A、Bzu jin hang le chan qian 40 dhe chan qian 20 dde liang ci mian yi 。chan hou shi chu sheng zai zhu cai shi chu ru ,jiang 5ri ling zai zhu sui ji fen wei 3zu :gong du zu 、dui zhao zu yi ji kang ti shui ping jian ce zu 。gong du zu he dui zhao zu fen bie kou fu PEDV LNct2adu zhu F13he DMEM。lin chuang zheng zhuang xian shi chan yu wei mian yi mu zhu de zai zhu zai gan ran bing du 24 hhou ke jian jing shen chen yu 、fu xie zheng zhuang ,gong du 5 dnei fa bing lv wei 100%,fu qiang pou jian jie guo ke jian chang bi zu zhi bian bao ,chong man dan huang se xi ye he shi wu can zha 。tong shi ,gai zu zai zhu pai du liang gao ,chang zu zhi jun neng jian ce dao bing du RNA,mian yi zu hua neng guan ce dao PEDVdui hui chang he kong chang chang shang pi xi bao de gan ran 。yu zhi xiang fan ,chan yu mian yi mu zhu de zai zhu gan ran PEDV 5 dhou zhi you 10.5%de zai zhu chu xian le qing wei de fu xie zheng zhuang ,zai zhu huo de le gao da 89.5%de bao hu 。Bzu zai zhu ji hu mei you pai du xian xiang ,chang zu zhi nei bing du RNAhan liang ji di 。jian jie ELISAjie guo xian shi zhu xie qing zhong IgAhe IgGkang ti shui ping yu ji zhong he kang ti shui ping you ji xian zhe xiang guan xing ,PEDVmie huo yi miao hou hai xue mian yi neng gou yin qi jiao gao shui ping de kang ti fan ying ,bing ju dui zai zhu xing cheng le mian yi bao hu 。zeng shang ,ben yan jiu chu bu zheng ming le hou hai xue mian yi PEDVmie huo yi miao shi mu zhu chan sheng de gao shui ping IgA、IgGhe zhong he kang ti wei 5ri ling zai zhu di gong le bei dong bao hu ,wei jin yi bu yan jiu PEDVmian yi bao hu ji zhi di gong li lun ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学院的刘烨，发表于刊物中国农业科学院2019-07-05论文，是一篇关于间接论文,灭活疫苗论文,被动免疫保护论文,中国农业科学院2019-07-05论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学院2019-07-05论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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