导读:本文包含了功能失活论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:Myostatin基因,CRISPR,Cas9,蛋白质组学,转录组学
功能失活论文文献综述
王腊梅[1]（2019）在《基于组学技术对Myostatin功能突变失活影响成肌细胞发育调控及线粒体功能的分析研究》一文中研究指出背景Myostatin(MSTN)是肌肉生长抑制素,又称为GDF-8,它属于转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)超家族的分泌生长因子。MSTN是一个结构高度保守,能通过控制肌肉前体细胞的增殖调控肌肉发育和生长的负调控因子。哺乳动物的MSTN基因突变后会导致肌肉肥大,出现双肌型。目前关于MSTN调控肌肉发育的分子机制的相关研究大多数集中在传统的方法上,利用转录组学和蛋白质组学联合分析MSTN基因敲除对肌肉发育调控的分子机制还未报道。羊作为农业生产领域的重要经济动物,其产量和质量的改良从未停止。基因编辑技术,转录组学和蛋白质组学等技术迅速发展,有利于我们从MSTN基因敲除的哺乳类细胞及动物体内筛选出大量与肌肉发育相关的蛋白及信号通路。目的本研究利用CRISPR/Cas9技术制备MSTN基因敲除C2C12单克隆细胞和实验室保存的MSTN基因编辑陕北白绒山羊肌肉组织样本,通过多组学分析筛选出与肌肉发育相关的潜在调控因子和信号通路;通过在C2C12细胞中上调或者下调这些调控因子,对它们进行功能研究,明确这些调控因子对肌肉发育的相关机制。最终,根据细胞学实验结果,证实它们的功能及对成肌细胞增殖和分化的可能作用机制,为动物育种提供新思路。方法1.以小鼠成肌细胞C2C12为研究对象,采用CRISPR/Cas9技术构建小鼠成肌细胞MSTN基因敲除模型。利用T7EI检测突变效率,Sanger测序检测基因突变单克隆细胞株的突变类型。用RT-q PCR和Western Blot检测MSTN m RNA和蛋白的表达水平,建立MSTN敲除的细胞模型,为后续试验分析所用。2.利用建立的MSTN基因敲除的C2C12细胞模型,分析MSTN基因突变失活的C2C12细胞的蛋白质组学变化:实验分为对照组和处理组(MSTN基因敲除组),收集小鼠成肌细胞C2C12细胞样品并提取总蛋白、蛋白质定量、SDS-PAGE、蛋白质酶解和LC-MS/MS检测。检测结果选择合适的蛋白质序列数据库进行蛋白质生物信息学分析。分析比较两组蛋白质表达谱差异,挖掘可以调控肌肉细胞增殖和分化的的差异表达蛋白以及差异蛋白所在的信号通路。3.在细胞蛋白质组学研究的基础上,利用转录组学分析MSTN基因敲除的陕北白绒山羊肌肉组织:实验分为叁组:成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因单独敲除(FGF5+/-)、MSTN和FGF5基因同时敲除(FM+/-)和对照组(WT)。利用高通量RNA-Seq技术对MSTN基因敲除的陕北白绒山羊的肌肉组织进行转录组测序分析。应用生物信息学分析筛选出MSTN基因敲除的陕北白绒山羊与野生型之间的差异表达基因。4.综合分析蛋白质组学和转录组学的结果,寻求共有的差异表达蛋白和分子信号通路。5.应用MSTN基因敲除C2C12细胞株和慢病毒介导的FST过表达成肌细胞株和相应对照组,用RT-q PCR和Western blot检测MSTN m RNA和蛋白的表达水平。通过RT-q PCR、Western blot检测与肌肉发育相关信号通路的关键差异表达蛋白。进一步探索BNIP2-CDC42介导p38MAPK信号通路促进成肌细胞的分化。通过Western blot和免疫共沉淀的方法研究MSTN缺失后促进BNIP2-CDC42的表达以激活p38MAPK信号通路。6.基于动物福利因素,研究MSTN基因敲除对线粒体能量代谢的影响。用RT-q PCR和Western blot检测线粒体特异表达因子PGC-1α、Cox1、Cox2、ND1和ND2的表达。开展Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖、葡萄糖吸收、ATP含量、线粒体膜电位、乳酸浓度、RT-q PCR、Western blot实验检测。结果1.细胞蛋白质组学分析结果显示,通过光谱计算共鉴定和定量了3003个差异表达蛋白,有77个蛋白属于P值<0.05,差异倍数≥±2的蛋白。77个蛋白有38个蛋白表达显着上调,39个蛋白表达显着下调。差异蛋白主要包括线粒体定位、细胞脂质代谢过程、脂肪酸合成,细胞周期,泛素化调节蛋白作用信号通路。2.陕北白绒山羊肌肉组织转录组学的差异表达谱显示,MSTN基因敲除后显着性差异表达基因主要富集在脂肪酸合成、钙离子信号通路、c AMP信号通路、MAPK信号通路和细胞黏附分子(CAMs)。3.联合分析蛋白质组学和转录组学数据发现,MSTN基因敲除由BNIP2-CDC42介导的p38MAPK信号通路可促进成肌细胞分化。4.MSTN基因敲除后,处理组和对照组细胞均添加p38MAPK抑制剂,通过RT-q PCR、Western blot实验检测发现p38MAPK信号通路的相关基因和蛋白明显减少。研究证明,MSTN基因失活可激活骨骼肌细胞中BNIP2-CDC42-p38MAPK信号通路,从而促进细胞分化。5.MSTN功能缺失突变后,可以影响骨骼肌C2C12细胞线粒体的生成和能量代谢。结论我们的研究表明通过CRISPR/Cas9基因编辑技术可以成功的敲除小鼠成肌细胞C2C12的MSTN基因。通过蛋白质组学和转录组学联合分析筛选出BNIP2-CDC42-KIF5B蛋白复合体通过激活p38MAPK信号通路促进肌肉细胞分化。同时证实MSTN可以促进肌细胞线粒体的生成,并且不损害细胞的活力。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2019-05-01）
万晓枫[2]（2019）在《TSC1/TSC2复合物失活上调EGFR促进TSC肿瘤发生的机制及功能研究》一文中研究指出常染色体显性遗传病——结节性硬化症(Tuberous sclerosis complex,TSC)是一种以全身多器官良性肿瘤为特征的常染色体显性遗传病,抑癌基因TSC1或TSC2的突变失活是导致TSC发病的主要原因,但其具体机制不完成清楚。TSC1和TSC2能够形成一种功能性复合物,作为哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)上游重要的抑制因子,TSC1或TSC2基因突变缺失或上游PI3K-AKT信号通路的激活都能引起TSC1/TSC2复合物失活,Rheb-GTP蓄积,从而导致mTORC1活化,促进细胞的生长、增殖,导致肿瘤的发生。但是mTORC1活化促进TSC肿瘤发生的具体机制仍不清楚,这是个亟待解决的科学问题。前期研究工作中,我们对Tsc2缺失的小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEFs)及对照细胞(分别记为Tsc2~(-/-)和Tsc2~(+/+)MEFs)进行了RNA-seq分析,结果发现与对照MEFs相比,Tsc2缺失细胞的表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)表达明显上调。和Tsc2~(-/-)MEFs一样,我们通过免疫蛋白印记(Western Blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测,Tsc1缺失的小鼠胚胎成纤维细胞中EGFR的表达明显高于对照Tsc1~(+/+)MEFs,证实了RNA-seq的结果。接着,我们对NCBI-GEO数据库进行大数据分析,发现TSC患者的肿瘤组织中EGFR的mRNA表达丰度明显高于正常组织,这表明TSC1/TSC2复合物缺失促进EGFR的高表达。在本研究中,我们深入探讨了TSC1/TSC2复合物失活导致EGFR表达上调的机制及其功能。mTOR在Tsc1~(-/-)和Tsc2~(-/-)MEFs中呈现异常活化,特异性抑制mTORC1活性后EGFR的表达有所降低,表明EGFR的高表达依赖mTORC1活化。接着,我们成功构建了敲低EGFR的Tsc2~(-/-)MEFs和过表达EGFR的Tsc1~(+/+)MEFs,并进行了生物学功能的研究。用EGFR抑制剂吉非替尼作用于Tsc1~(-/-)和Tsc2~(-/-)MEFs,证实EGFR的表达水平调控STAT3的活性,而STAT3可以介导EGFR促进细胞增殖和肿瘤生长的功能。综上所述,我们的研究进一步阐明TSC1/TSC2负调控EGFR的分子机制及功能,发现TSC1/TSC2负调控EGFR依赖mTORC1激活,且证实了EGFR促进细胞增殖和细胞成瘤能力,mTOR活化促进EGFR高表达上调STAT3的活性,提出mTOR/EGFR/STAT3信号通路在肿瘤发展过程中的重要作用,为mTOR活化的肿瘤治疗提供新的靶向。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2019-03-01）
谢梦利[3]（2018）在《mda5基因功能失活的DF1细胞系的构建》一文中研究指出禽流感作为重要的人畜共患病,一直以来对养殖业和公共卫生健康造成重大影响。H9N2禽流感病毒感染家禽后虽不会造成很高的死亡率,但被感染的鸡抵抗力降低,导致鸡对其他病原易感而引发二次感染,对家禽养殖业造成重大经济损失。当禽流感病毒感染哺乳动物时其体内的RIG-I和MDA5受体能识别病毒RNA产生天然免疫反应,天然免疫系统的激活会引起下游的信号通路产生级联反应,并释放干扰素(IFN)和多种炎性因子发挥抗病毒效应。有研究表明在鸡的体内缺乏RIG-I受体,但当鸡被禽流感病毒感染时鸡体内同样可产生抗病毒作用的IFN-I。在哺乳动物MDA5的研究中,发现MDA5在抗流感病毒感染过程中可发挥识别病毒RNA并诱导IFN应答的作用,虽鸡的体内存在MDA5受体,但其在抗流感病毒中的功能并不清楚。因此本研究拟通过CRISPR/Cas9技术构建DF1细胞mda5功能失活的细胞系,评价mda5对H9N2禽流感病毒诱导IFN-β及对病毒增殖的影响,为阐释禽流感诱导IFN信号通路及开发适合H9N2流感病毒疫苗株增殖细胞系奠定基础。本研究首先拟通过将既可表达Cas9蛋白又可直接转录sgRNA的质粒转染到细胞完成基因突变,但结果显示在抗生素筛选下细胞均无存活,即该方法未能成功。接着在优化的慢病毒构建体系基础上,通过lenti-CRISPR-v2慢病毒系统构建突变细胞系,但同样构建失败。因此又选择运用两个小骨架慢病毒系统进行构建,首先通过lentiCas9-Blast慢病毒系统构建稳定表达Cas9蛋白的DF1细胞系,经检测可知DF1-Cas9细胞系构建成功;其次通过lenti-Guide-puro慢病毒系统将sgRNA整合入该细胞中,并通过T7E1试验及基因测序验证细胞系功能,结果表明在构建的DF1-Cas9细胞系中可发挥对mda5基因靶向切割的功能。利用对IFN敏感的VSV-GFP荧光病毒进一步筛选mda5基因功能失活的细胞系,结果显示成功实现DF1-?chmda5细胞系的构建。为探究mda5对H9N2诱导的IFN-β及H9N2增殖的影响,因此分别测定了DF1-?chmda5和DF1-Cas9细胞感染H9N2后诱导IFN-β和PKR转录水平。结果显示,DF1-Cas9感染H9N2后,细胞中IFN-β和PKR的转录水平随感染时间的延长呈现上升趋势,表明在H9N2刺激下DF1-Cas9细胞可诱导IFN的应答;在DF1-?chmda5细胞系中也可检测到IFN-β的转录,但其转录水平显着低于DF1野生细胞,表明鸡mda5虽不是禽流感诱导IFN-β和PKR转录的唯一受体,但仍在IFN诱导中发挥主导作用。进一步测定细胞上清病毒的血凝价,结果显示mda5功能失活后可在24h内快速提高H9N2病毒血凝素含量。通过CRISPR/Cas9技术成功构建了稳定表达Cas9蛋白的DF1细胞系;在该细胞系的基础上成功构建mda5功能失活的DF1细胞系;DF1细胞中mda5功能的失活可显着下调H9N2诱导IFN-β的转录,并在短时间内提高H9N2病毒血凝素含量。(本文来源于《华中农业大学》期刊2018-06-01）
程慧珍[4]（2018）在《叁角梅核糖体失活蛋白在毕赤酵母中的表达及其抗肿瘤功能研究》一文中研究指出核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating proteins,RIPs)是广泛存在于高等植物的一类RNA N-糖苷酶,它能够催化断裂真核生物28S rRNA的特殊颈环结构的N-C糖苷键,脱去一个腺嘌呤,从而破坏核糖体的结构,阻遏蛋白质的生物合成。近年来,利用核糖体失活蛋白构造与抗癌药物结合构造的免疫毒素在治疗癌症方面显示出广阔的应用前景。叁角梅核糖体失活蛋白Bouganin最初从红花叁角梅(Bougainvillea spectabilis wild)中分离,为Ⅰ型核糖体失活蛋白,是目前所发现的毒性最低的一种RIPs。本实验室利用同源序列克隆法从厦门市紫叶叁角梅中成功克隆Bouganin基因并进行了原核表达等研究工作。但由于原核表达的蛋白多以包涵体的形式存在,纯化困难,另外原核表达蛋白免疫制备的抗体效价不高。本研究克隆了叁角梅核糖体失活蛋白基因Bouganin,然后以毕赤酵母(Pichia pastoris GS115)为表达菌株中,以pPIC9K为载体,构建了GS115-pPIC9K-Bouganin酵母的体外表达系统,然后对表达条件进行优化,最后利用固相金属离子亲和层析(IMAC)纯化得到Bouganin蛋白,并进行了 MTT法抗肿瘤活性鉴定。研究结果表明(1)所得到的酵母GS115转化子表型是muts型,利用的是酵母表达系统的AOX2启动子;(2)最佳表达时间为48 h,最佳表达温度为22℃;(3)重组蛋白Bouganin能够分泌到培养基中,纯化方便,但是表达量相对前期本实验室原核表达该蛋白低,为0.225 mg/L;(4)MTT法抗肿瘤活性鉴定表明其对肿瘤细胞的抑制性比原核表达的Bouganin蛋白的抑制效果略好,在Bouganin加入浓度为100ug/mL时,真核Bouganin蛋白对Hela、HEP3B、A549细胞的抑制率分别为为27.75%、18.05%、20.68%,而原核Bouganin蛋白抑制率分别为为20.27%、6.84%、13.79%。经过单因素方差分析,各个浓度下真核和原核Bouganin蛋白对肿瘤细胞的抑制率之间不具有显着性。(本文来源于《厦门大学》期刊2018-05-01）
孔茹[5]（2017）在《叁角梅核糖体失活蛋白转基因番茄抗病虫功能研究》一文中研究指出核糖体失活蛋白(ribosome inactivatingproteins,RIPs)是一种广泛存在于高等植物体内的防御性毒蛋白,通过RNAN-糖苷酶活性专一地水解核糖体第A4234位上的核糖与腺嘌呤碱基之间的糖苷键,进而破坏核糖体结构从而达到抑制蛋白质合成的目的。RIPs具有广泛的多态性及多种生物学功能,目前在抗癌症、抗病毒等医学领域的研究应用尤为受到重视,同时RIPs抗植物病虫害的特性也广见报道。本研究以叁角梅为材料,根据文献报道的分布于地中海区域的叁角梅(Bougainvillea spectablis Willd)RIPs基因cDNA序列设计引物,以厦门本地光叶艳紫叁角梅(B.glabraChoisy)cDNA为模板,经RT-PCR扩增得到10条叁角梅RIPs同源目的基因片段并分别编号命名,其中一条Bou-J与本实验室前期已经扩增得到的目的片段在编码区基因序列完全相同,另一条Bou-K与文献中已经报道的红花叁角梅(BB.spectabilis Willd)核糖体失活蛋白基因序列完全相同。选取Bou-J和Bou-K这两条目的片段,通过构建表达载体,利用农杆菌介导的植物转基因技术分别将目的基因片段Bou-J和Bou-K导入番茄植株,得到了 18株Bou-J和6株Bou-Kd阳性转基因番茄植株,对转基因番茄植株的抗病虫害特性进行了初步研究,结果如下:Bou-J及Bou-K转基因番茄植株均对蚜虫表现出了显着的抗性,并且Bou-J组抗性强于Bou-K组;Bou-J及Bou-K转基因植株同样表现出了对于灰霉菌的抗性,两组植株的抗性基本一致;Bou-K转基因植株对于烟草花叶病毒表现出一定的抗性,而Bou-J植株组则没有表现出明显的抗性。本研究表明:通过对转基因再生番茄植株的抗性鉴定证实了叁角梅RIPs确实具有抗病虫特性,可以应用于植物的转基因抗病虫育种。同时叁角梅RIPs具有多抗性,为叁角梅RIPs在植物抗病虫基因资源以及培育多抗性植物新品种方面提供了理论基础与指导。本研究得到了多条RIPs同源基因片段,这与本实验室前期对叁角梅RIPs基因存在多态性的研究相符合。同时Bou-J和Bou-K转基因番茄的抗病虫特性存在差异,这说明叁角梅RIPs功能上也存在多态性。因此,我们在利用叁角梅RIPs进行植物的转基因抗病虫育种时要对目的基因进行筛选,得到抗性强且抗菌、抗虫谱广的转基因植株。(本文来源于《厦门大学》期刊2017-05-01）
王丽[6]（2017）在《TSC1/TSC2复合物失活抑制AKT的机制及其功能研究》一文中研究指出目的结节性硬化症(TSC)是由两种抑癌基因TSC1或TSC2的功能性失活突变导致哺乳动物雷帕霉素靶点复合物1(m TORC1)的活化所引起。而且TSC1/TSC2复合物失活导致的m TORC1过度活化能够负反馈抑制AKT,这被认为是TSC多为良性肿瘤的主要原因之一。然而,这种负反馈调节的确切机制我们仍然不是很清楚,而我们的研究目的则是进一步阐明这种机制。方法在前期的研究工作中,我们通过基因芯片分析,发现与对照小鼠胚胎成纤维细胞(Tsc2+/+MEFs)相比,Tsc2缺失的小鼠胚胎成纤维细胞(Tsc2-/-MEFs)中血小板源性生长因子受体α(PDGFRɑ)的表达明显下调。蛋白印记(WB)和实时定量PCR(q RT-PCR)进一步证实。并且雷帕霉素(rapamycin)处理或si Raptor干扰能够恢复Tsc2-/-MEFs中的PDGFRα的表达。接着我们构建PDGFRα过表达的Tsc2-/-MEFs或Tsc1-/-MEFs以及PDGFRα敲低的Tsc2+/+MEFs或Tsc1+/+MEFs,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力。将PDGFRα过表达的Tsc2-/-MEFs及其对照细胞分别皮下注射到裸鼠体内诱导形成肿瘤,接着监测肿瘤生长。肿瘤组织进行HE和免疫组织化学染色分析。构建的过表达或敲低PDGFRα的细胞系进行饥饿加血清或PDGF处理,WB检测蛋白表达情况。收集Tsc2+/+or Tsc1+/+MEFs、Tsc2-/-or Tsc1-/-MEFs以及雷帕霉素处理的Tsc2-/-or Tsc1-/-MEFs进行蛋白印迹实验,并对Tsc2+/+MEFs、Tsc2-/-MEFs以及雷帕霉素处理的Tsc2-/-MEFs进行核质蛋白分离分析和激光共聚焦实验检测Tsc2缺失以及雷帕霉素处理后FOXO3a表达变化。建立FOXO3a过表达的Tsc2-/-MEFs或Tsc1-/-MEFs和用si FOXO3a干扰敲低FOXO3a表达的Tsc2+/+MEFs或Tsc1+/+MEFs,WB和q RT-PCR验证并检测PDGFRα,p-AKT的表达。在线预测小鼠PDGFRα基因上的FOXO3a结合位点,并对结合位点进行突变,荧光素酶报告基因实验分析相对荧光素酶活性。雷帕霉素和AG1295(PDGFRα抑制剂)联合处理Tsc2-/-MEFs或Tsc1-/-MEFs后检测细胞增殖情况。NTC/T2缺失细胞皮下注射到裸鼠靠近腋窝的位置来评估体内联合使用雷帕霉素和AG1295的效果,监测肿瘤体积,重量以及小鼠体重。结果在这里我们展示了Tsc1或Tsc2的缺失下调PDGFRα的表达是由活化的m TORC1介导的。另外,我们还证明了PDGFRα的异位表达促进了AKT的活化,增强了TSC1或TSC2功能性缺失的小鼠胚胎成纤维细胞的增殖和成瘤能力,反之亦然。此外,我们发现m TORC1是FOXO3a的负调控因子,并且活化的m TORC1是通过FOXO3a介导的PDGFRα基因转录下调抑制PDGFRα的表达。有趣的是,我们通过实验还发现在体内和体外联合使用雷帕霉素与AG1295都能明显抑制TSC1/TSC2复合物缺陷细胞的生长。结论因此,我们得出TSC1/TSC2-m TORC1信号通路通过抑制FOXO3a负调控PDGFRɑ的表达,PDGFRɑ的表达下调抑制了AKT激活和限制了TSC肿瘤的发生发展。表明FOXO3a/PDGFRα/AKT信号通路在抵抗TSC1/TSC2复合物缺失引起m TORC1的过度活化从而诱导肿瘤发生中起保护作用。并且联合使用雷帕霉素和AG1295可能是TSC治疗的一个新的有效的策略。我们的研究将为阐明TSC的发病机制和开发TSC的治疗方法做出贡献。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2017-03-01）
谢亚君[7]（2016）在《富含亮氨酸的胶质瘤失活基因1(LGI1)在小鼠小脑和髓鞘发育中的功能研究》一文中研究指出富含亮氨酸的胶质瘤失活基因1(LGI1)是一种能够与去整合素和金属蛋白酶(ADAM)结合的分泌性蛋白,LGI1的突变与人类的癫痫相关。但是LGI1在中枢神经系统发育中的功能是未知的。我们发现LGI1基因在小脑发育中的新功能,它能够对小脑颗粒细胞前体细胞(CGPs)产生和放射状胶质细胞(RGCs)的分化过程起到调节作用。在LGI1敲除鼠中,我们观察到胚胎期小鼠的外颗粒层变薄和小脑分叶减少的现象。通过Brdu染色发现CGPs增殖过程受到LGI1的敲除抑制,进一步研究发现这个过程是由于Sonic Hedgehog信号通路受到抑制导致。同时,我们还发现在出生后LGI1基因敲除会抑制Bergmann glia的分化。这个过程可能是因为LGI1抑制了β-secretase水解过程进而导致了Jagged 1-Notch信号通路发生异常。我们还发现LGI1能够调节中枢和外周髓鞘发育,在全敲除鼠中,我们通过电镜观察到出生后中枢脊髓髓鞘包裹变薄,髓鞘化轴突数目变少,免疫印迹反应显示全敲鼠的中枢髓鞘相关蛋白表达显着减少。进一步体内染色和体外慢病毒干扰和过表达LGI1发现LGI1仅影响OPCs(少突胶质细胞前体细胞)的分化,但不影响OPCs增殖过程。在cuprizone诱导脱髓鞘模型中,LGI1半敲鼠表现出更严重脱髓鞘表型,同时,我们还发现敲除鼠的外周髓鞘包裹变薄并呈现松散结构。我们还揭示LGI1敲除会抑制脂肪酸酶合成,并且这个过程是通过抑制TSCI表达和激活mTORC1信号通路介导的。综上所述,我们的研究证明LGI1基因在小脑和髓鞘发育过程中起到至关重要的作用。(本文来源于《浙江大学》期刊2016-05-01）
杨谷良,李士明,王书珍[8]（2016）在《苦瓜核糖体失活蛋白生物活性与功能研究进展》一文中研究指出核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating proteins,RIPs)是一类能够脱去真核细胞28S r RNA内SRL区域的A4342,从而破坏延伸因子与核糖体的结合,将蛋白质的生物合成抑制在延伸阶段的蛋白质家族。RIPs有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型,苦瓜中已发现的α-苦瓜素、β-苦瓜素、γ-苦瓜素、δ-苦瓜素、ε-苦瓜素、MAP30等,均属于Ⅰ型RIPs。这些RIPs具有抗病毒、抗菌、抗虫害、抑制肿瘤细胞生长等生物学活性,受到了人们的广泛关注。本文从RIPs的分类、生物学活性、功能与应用等方面,对苦瓜中的RIPs进行了综述。(本文来源于《食品科学》期刊2016年13期）
李锐,肖卫华[9]（2015）在《肿瘤微环境对树突状细胞功能失活的影响及机制》一文中研究指出树突状细胞(Dendritic cells)因受肿瘤微环境影响而导致其激活机体抗肿瘤免疫应答的功能异常,被认为是导致肿瘤免疫逃逸的重要原因。由于临床肿瘤相关的DC细胞来源有限,而现有体外模型同肿瘤微环境相比仍有较大差异,对于稳定、有效的实验模型的缺乏限制了对DC所介导的肿瘤免疫逃逸相关机制的研究。本课题利用临床肿瘤患者血清样本,建立了一套稳定、可靠的体外模拟肿瘤微环境诱导DC功能失活的实验模型,并对其中DC细胞诱导分化及成熟活化的过程进行了鉴定分析。进一步采用全基因表达谱的分析及胞内信号通路上下游的鉴定对其中的分子机制进行了研究。结果显示,肿瘤微环境会显着抑制DC抗原吞噬、抗原提呈及细胞因子分泌的能力,系统性干扰了DC的功能,导致其无法有效激活抗肿瘤免疫应答。进一步生物信息学分析发现DC胞内大量功能相关基因的转录调控发生下调,而其上游的NF-κB经典通路及STAT3通路受到显着抑制,可能是导致DC功能失活的重要原因。在此基础上,采用相关通路抑制剂研究其对于DC诱导分化的影响,发现与肿瘤微环境所诱导DC胞内信号通路的改变类似。由于肿瘤微环境中包含大量的促炎症及抑炎症信号,共同作用于DC并最终展现出对NF-κB经典通路及STAT3通路的抑制效果,提示可能有关键性的胞内抑制性信号的存在。同时DC诱导分化过程中胞内信号通路的动态变化过程及多条信号通路间的cross-talk也可能参与了这一过程。对信号通路的深入研究将有助于加深对肿瘤微环境导致DC功能失活的机制的了解,并可以结合对上游受体的分析追踪胞外引起通路改变的关键性信号,为进一步通过靶向性调节DC信号通路从而逆转细胞免疫抑制状态提供了一定的指导。(本文来源于《第十四届全国肿瘤生物治疗大会论文集》期刊2015-05-15）
曹东亮,金家贵,沈富兵[10]（2014）在《苦瓜核糖体失活蛋白广泛的生物学功能》一文中研究指出核糖体失活蛋白(ribosomal inactivating proteins,RIPs)广泛存在于植物界,目前已从350余种植物中筛选到110多种RIPs[1],少数细菌和真菌中也分离出了RIPs。苦瓜RIPs是从苦瓜籽或果肉中分离纯化得到的碱性蛋白质,具有抗病毒、抗肿瘤、抗细菌及真菌和抗生育等广泛生物活性,其中因其抗HIV等病毒及抗肿瘤作用而受到广泛关注和(本文来源于《成都医学院学报》期刊2014年05期）
功能失活论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
常染色体显性遗传病——结节性硬化症(Tuberous sclerosis complex,TSC)是一种以全身多器官良性肿瘤为特征的常染色体显性遗传病,抑癌基因TSC1或TSC2的突变失活是导致TSC发病的主要原因,但其具体机制不完成清楚。TSC1和TSC2能够形成一种功能性复合物,作为哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)上游重要的抑制因子,TSC1或TSC2基因突变缺失或上游PI3K-AKT信号通路的激活都能引起TSC1/TSC2复合物失活,Rheb-GTP蓄积,从而导致mTORC1活化,促进细胞的生长、增殖,导致肿瘤的发生。但是mTORC1活化促进TSC肿瘤发生的具体机制仍不清楚,这是个亟待解决的科学问题。前期研究工作中,我们对Tsc2缺失的小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEFs)及对照细胞(分别记为Tsc2~(-/-)和Tsc2~(+/+)MEFs)进行了RNA-seq分析,结果发现与对照MEFs相比,Tsc2缺失细胞的表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)表达明显上调。和Tsc2~(-/-)MEFs一样,我们通过免疫蛋白印记(Western Blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测,Tsc1缺失的小鼠胚胎成纤维细胞中EGFR的表达明显高于对照Tsc1~(+/+)MEFs,证实了RNA-seq的结果。接着,我们对NCBI-GEO数据库进行大数据分析,发现TSC患者的肿瘤组织中EGFR的mRNA表达丰度明显高于正常组织,这表明TSC1/TSC2复合物缺失促进EGFR的高表达。在本研究中,我们深入探讨了TSC1/TSC2复合物失活导致EGFR表达上调的机制及其功能。mTOR在Tsc1~(-/-)和Tsc2~(-/-)MEFs中呈现异常活化,特异性抑制mTORC1活性后EGFR的表达有所降低,表明EGFR的高表达依赖mTORC1活化。接着,我们成功构建了敲低EGFR的Tsc2~(-/-)MEFs和过表达EGFR的Tsc1~(+/+)MEFs,并进行了生物学功能的研究。用EGFR抑制剂吉非替尼作用于Tsc1~(-/-)和Tsc2~(-/-)MEFs,证实EGFR的表达水平调控STAT3的活性,而STAT3可以介导EGFR促进细胞增殖和肿瘤生长的功能。综上所述,我们的研究进一步阐明TSC1/TSC2负调控EGFR的分子机制及功能,发现TSC1/TSC2负调控EGFR依赖mTORC1激活,且证实了EGFR促进细胞增殖和细胞成瘤能力,mTOR活化促进EGFR高表达上调STAT3的活性,提出mTOR/EGFR/STAT3信号通路在肿瘤发展过程中的重要作用,为mTOR活化的肿瘤治疗提供新的靶向。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
功能失活论文参考文献
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标签：Myostatin基因; CRISPR; Cas9; 蛋白质组学; 转录组学;