本文主要研究内容
作者尤星力（2019）在《禽白血病及鸡白痢检测用标准物质的纯化及稳定》一文中研究指出：由禽白血病病毒和鸡白痢沙门氏菌感染引起的禽白血病和鸡白痢是两种严重的禽类传染病,不仅造成禽类大量死亡,产生巨大的经济损失,还可能感染人体,影响健康。由于缺乏有效的疫苗,目前主要通过诊断淘汰病鸡,净化鸡群来达到防控的目的。快速、准确的诊断检测对禽病的有效防控至关重要,但是由于缺乏标准物质,诊断试剂质量良莠不齐,导致检测结果的准确性难以判断。将诊断标志物研制成标准物质,对现有的诊断技术或诊断试剂盒等进行标定,使检测结果具有可溯源性、可比性和准确性,对禽病的防控具有重要意义。禽白血病病毒抗原蛋白P27和鸡白痢沙门氏菌感抗体是这两种疾病诊断检测的重要标志物。为此,本论文建立了针对该两种禽病诊断用标准物质的纯化及稳定工艺。主要研究结果如下:(1)针对用于禽白血检测的抗原蛋白P27,利用组氨酸标签建立了两步Ni亲和层析纯化工艺:首先通过吸附式Ni亲和层析纯化大肠杆菌重组表达带有His-tag的P27蛋白,经酶切去除标签后再次进行穿透式Ni亲和层析进行精制。最终P27纯度达到99%,ELISA活性回收率为30%。利用Tricine电泳及十二烷基硫酸钠毛细管电泳(CE-SDS)对纯化过程中P27的稳定性进行研究,发现-80℃保存能有效抑制原料液中P27末端His-tag的脱落,加入酶抑制剂和咪唑能有效抑制酶切过程中的蛋白裂解。最终精制得到的P27蛋白分子质量与理论分子量完全相符,可溯源性和纯度均能满足标准物质的制备要求。(2)针对用于鸡白痢沙门氏菌检测的抗体,构建了 Q-XL阴离子交换层析一步纯化鸡白痢沙门氏菌兔抗血清获得高纯度多抗IgG的方法。采用高效液相体积排阻色谱建立了 IgG的快速分析和定量方法,并利用多抗IgG与杂蛋白等电点的差异性指导阴、阳离子交换层析介质种类和pH条件的筛选。结果表明阴离子交换介质Q-XL在pH 5.5条件下,能够去除所有杂蛋白,纯度达99%,回收率为67.5%。进一步采用差示扫描荧光进行稳定剂快速筛选,其中20%(w/v)山梨醇稳定效果最佳,使裂解温度T71和Tm2分别提高5.52和8.84℃,在70℃加速稳定性中效果显著。最终制备的兔抗血清多抗IgG具有高纯度、高收率及高稳定性,且制备工艺简单,可作为标准物质,促进鸡白痢的防控。(3)考察了利用提取的鸡白痢沙门氏菌提取O-抗原多糖,制备超大孔亲和介质用于纯化特异性IgG,以及用于间接酶联免疫吸附诊断鸡白痢的可行性。经等温滴定量热仪检测,通过酸解法提取出的O-抗原与多抗IgG具有高度特异性的亲和作用。采用激光共聚焦显微镜观察O-抗原成功接枝到环氧活化的超大孔微球上,静态吸附结果表明所制备的亲和介质能特异性吸附IgG蛋白,载量为0.46 mg/g-介质。将O-抗原包被用于鸡白痢的间接酶联免疫吸附法诊断,结果表明检测具有特异性,最佳抗原包被浓度为40μg/mL,IgG最低检测限为46.92 ng/mL,从而为鸡白痢的准确诊断提供新的方法。
Abstract
you qin bai xie bing bing du he ji bai li sha men shi jun gan ran yin qi de qin bai xie bing he ji bai li shi liang chong yan chong de qin lei chuan ran bing ,bu jin zao cheng qin lei da liang si wang ,chan sheng ju da de jing ji sun shi ,hai ke neng gan ran ren ti ,ying xiang jian kang 。you yu que fa you xiao de yi miao ,mu qian zhu yao tong guo zhen duan tao tai bing ji ,jing hua ji qun lai da dao fang kong de mu de 。kuai su 、zhun que de zhen duan jian ce dui qin bing de you xiao fang kong zhi guan chong yao ,dan shi you yu que fa biao zhun wu zhi ,zhen duan shi ji zhi liang liang you bu ji ,dao zhi jian ce jie guo de zhun que xing nan yi pan duan 。jiang zhen duan biao zhi wu yan zhi cheng biao zhun wu zhi ,dui xian you de zhen duan ji shu huo zhen duan shi ji he deng jin hang biao ding ,shi jian ce jie guo ju you ke su yuan xing 、ke bi xing he zhun que xing ,dui qin bing de fang kong ju you chong yao yi yi 。qin bai xie bing bing du kang yuan dan bai P27he ji bai li sha men shi jun gan kang ti shi zhe liang chong ji bing zhen duan jian ce de chong yao biao zhi wu 。wei ci ,ben lun wen jian li le zhen dui gai liang chong qin bing zhen duan yong biao zhun wu zhi de chun hua ji wen ding gong yi 。zhu yao yan jiu jie guo ru xia :(1)zhen dui yong yu qin bai xie jian ce de kang yuan dan bai P27,li yong zu an suan biao qian jian li le liang bu Niqin he ceng xi chun hua gong yi :shou xian tong guo xi fu shi Niqin he ceng xi chun hua da chang gan jun chong zu biao da dai you His-tagde P27dan bai ,jing mei qie qu chu biao qian hou zai ci jin hang chuan tou shi Niqin he ceng xi jin hang jing zhi 。zui zhong P27chun du da dao 99%,ELISAhuo xing hui shou lv wei 30%。li yong Tricinedian yong ji shi er wan ji liu suan na mao xi guan dian yong (CE-SDS)dui chun hua guo cheng zhong P27de wen ding xing jin hang yan jiu ,fa xian -80℃bao cun neng you xiao yi zhi yuan liao ye zhong P27mo duan His-tagde tuo la ,jia ru mei yi zhi ji he mi zuo neng you xiao yi zhi mei qie guo cheng zhong de dan bai lie jie 。zui zhong jing zhi de dao de P27dan bai fen zi zhi liang yu li lun fen zi liang wan quan xiang fu ,ke su yuan xing he chun du jun neng man zu biao zhun wu zhi de zhi bei yao qiu 。(2)zhen dui yong yu ji bai li sha men shi jun jian ce de kang ti ,gou jian le Q-XLyin li zi jiao huan ceng xi yi bu chun hua ji bai li sha men shi jun tu kang xie qing huo de gao chun du duo kang IgGde fang fa 。cai yong gao xiao ye xiang ti ji pai zu se pu jian li le IgGde kuai su fen xi he ding liang fang fa ,bing li yong duo kang IgGyu za dan bai deng dian dian de cha yi xing zhi dao yin 、yang li zi jiao huan ceng xi jie zhi chong lei he pHtiao jian de shai shua 。jie guo biao ming yin li zi jiao huan jie zhi Q-XLzai pH 5.5tiao jian xia ,neng gou qu chu suo you za dan bai ,chun du da 99%,hui shou lv wei 67.5%。jin yi bu cai yong cha shi sao miao ying guang jin hang wen ding ji kuai su shai shua ,ji zhong 20%(w/v)shan li chun wen ding xiao guo zui jia ,shi lie jie wen du T71he Tm2fen bie di gao 5.52he 8.84℃,zai 70℃jia su wen ding xing zhong xiao guo xian zhe 。zui zhong zhi bei de tu kang xie qing duo kang IgGju you gao chun du 、gao shou lv ji gao wen ding xing ,ju zhi bei gong yi jian chan ,ke zuo wei biao zhun wu zhi ,cu jin ji bai li de fang kong 。(3)kao cha le li yong di qu de ji bai li sha men shi jun di qu O-kang yuan duo tang ,zhi bei chao da kong qin he jie zhi yong yu chun hua te yi xing IgG,yi ji yong yu jian jie mei lian mian yi xi fu zhen duan ji bai li de ke hang xing 。jing deng wen di ding liang re yi jian ce ,tong guo suan jie fa di qu chu de O-kang yuan yu duo kang IgGju you gao du te yi xing de qin he zuo yong 。cai yong ji guang gong ju jiao xian wei jing guan cha O-kang yuan cheng gong jie zhi dao huan yang huo hua de chao da kong wei qiu shang ,jing tai xi fu jie guo biao ming suo zhi bei de qin he jie zhi neng te yi xing xi fu IgGdan bai ,zai liang wei 0.46 mg/g-jie zhi 。jiang O-kang yuan bao bei yong yu ji bai li de jian jie mei lian mian yi xi fu fa zhen duan ,jie guo biao ming jian ce ju you te yi xing ,zui jia kang yuan bao bei nong du wei 40μg/mL,IgGzui di jian ce xian wei 46.92 ng/mL,cong er wei ji bai li de zhun que zhen duan di gong xin de fang fa 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国科学院大学(中国科学院过程工程研究所)的尤星力，发表于刊物中国科学院大学(中国科学院过程工程研究所)2019-07-18论文，是一篇关于鸡白痢论文,禽白血病论文,标准物质论文,纯化论文,稳定论文,中国科学院大学(中国科学院过程工程研究所)2019-07-18论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国科学院大学(中国科学院过程工程研究所)2019-07-18论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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