导读:本文包含了钙调蛋白依赖蛋白激酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:心血管病学,钙,钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ,心律失常,慢性心力衰竭
钙调蛋白依赖蛋白激酶论文文献综述
范稣圳,徐林,浦涌[1]（2019）在《钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ与心律失常的研究进展》一文中研究指出钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)能通过调节离子通道和钙转运参与心肌细胞电活动,而诸如心力衰竭、心房颤动、急性心肌梗死等多种疾病和缺血-再灌注等病理状态都会导致CaMKⅡ的过度激活,继而通过其下游信号通路改变心肌细胞的电生理状态,导致心律失常的发生。研究表明,下调CaMKⅡ的活性能在某种程度上减少心律失常的发生,改善心肌细胞的功能。因此,CaMKⅡ有望成为新的抗心律失常靶点。(本文来源于《中国心脏起搏与心电生理杂志》期刊2019年01期）
姜旭东[2]（2017）在《激活的钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱγ在急性T淋巴细胞白血病发病中的作用和机制研究》一文中研究指出研究背景:急性 T 淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)是一种累及T淋巴细胞的造血系统恶性疾病,占儿童ALL的10%-15%,占成人ALL的20%-25%,临床上以高白细胞数、骨髓不成熟T淋巴细胞弥漫性浸润、纵膈淋巴结增大、胸腔积液和中枢神经系统受累为主要特征。尽管高强度化疗的使用改善了疗效,儿童T-ALL的长期生存率已超过75%,成人T-ALL的长期生存率也达到了 50%左右。但是由于原发耐药以及早期复发,试图进一步提高疗效将变得非常困难,因此,寻找新的引起T-ALL发生的分子机制迫在眉睫。激活的钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ γ(Ca~(2+)/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ γ,CaMKⅡγ)在调节髓系白血病细胞的增殖和分化中发挥着非常重要的作用,同时也可以促进慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)的急性变,用小檗胺靶向抑制CaMKⅡγ的激活可有效去除格列卫耐药的CML急性变的原始细胞以及白血病干细胞。既往研究表明激活的CaMKⅡγ可以诱导抗原依赖的记忆性T细胞的形成以及延长T细胞寿命、调节T细胞增殖、增强T细胞的细胞毒作用、调节T细胞免疫应答。但激活的CaMKⅡγ在T-ALL的发生、发展中的作用和机制仍未见报道。研究目的:1.明确激活的CaMKⅡγ(即p-CaMKⅡγ(Thr287))在T-ALL细胞株表达情况以及对T-ALL的肿瘤生物学特征的影响;2.明确激活的CaMKⅡγ(即p-CaMKⅡγ(Thr287))加速T-ALL发生的分子机制;3.明确 p-CaMKⅡγ(Thr287)、p-FOX03a(Thr32)在 T-ALL 原代标本中表达情况以及与T-ALL临床特点的关系。研究内容和结果:1.激活的CaMKⅡγ(即p-CaMKⅡγ(Thr287))在T-ALL细胞株表达情况以及对T-ALL的肿瘤生物学特征的影响1.1 激活的CaMKⅡγ(即p-CaMKⅡγ(Thr287))在T-ALL细胞株中高表达Western blot检测激活的CaMKⅡγ(即p-CaMKⅡ(γ(T287))在)在T-ALL细胞株和正常人血细胞中的表达情况。结果显示:相对于正常人的血细胞,T-ALL细胞株高表达 p-CaMKⅡγ(Thr287)。1.2小檗胺抑制T-ALL细胞系生长部分通过抑制CaMKⅡγ的激活小檗胺处理T-ALL细胞株48 h,CCK-8法检测OD值,计算IC50,Western blot检测p-CaMKⅡγ(Thr287)的表达情况。结果显示小檗胺明显抑制CEM、Jurkat、Molt4细胞株的生长,IC50值分别为4.95 μ/ml、3.83 μg/ml、3.73 μg/ml,在小檗胺处理的CEM、Jurkat中p-CaMKⅡγ(Thr287)明显下降,Molt4则下降不明显。1.3过表达CaMKⅡγ可以促进白血病细胞增殖、增强克隆形成能力、促进G2/M转换、增加DNA损伤过表达CaMKⅡγ的T-ALL细胞株Jurkat分别用CCK-8法检测增殖情况、克隆形成实验检测克隆形成能力、流式细胞术检测细胞周期以及免疫荧光检测阿霉素处理细胞后DNA损伤情况。结果显示:相较于对照组,过表达CaMKⅡγ的Jurkat增殖能力增强、克隆数明显增多、克隆体积也增大、G2/M转换加快、阿霉素未处理和阿霉素2.5 μg/ml处理12小时后的DNA双链断裂均明显增多。2.激活的CaMKⅡγ(即p-CaMKⅡγ(Thr287))加速T-ALL发生的分子机制2.1 抑制 CaMKⅡγ 的活性减少 p-AKT(Ser473)、p-FOXO3a(Thr32)、p-FOXO3a(Thr253)的表达水平抑制 CaMKⅡγ活性(CaMKII 抑制剂 KN93、CRISPR/CAS9 敲除 CaMKⅡγ、shRNA 敲低 CaMKⅡγ、显性负突变 CaMKⅡγ)后检测 AKT、p-AKT(Ser473)、FOXO3a、p-FOXO3a(Thr32)、p-FOXO3a(Thr253)、CaMKⅡγ、p-CaMKⅡγ(Thr287)、Notch1、cleaved Notch1、β-catenin的表达水平。结果显示:相较于对照,抑制CaMKⅡγ活性能显著减少 p-AKT(Ser473)、p-FOXO3a(Thr32)、p-FOXO3a(Thr253)的表达水平,而AKT、FOXO3a、Notch1、cleaved Notch1、β-catenin 的表达水平无显着变化。2.2 过表达 CaMKⅡγ增加 p-AKT(Ser473)、p-FOXO3a(Thr32)、p-FOXO3a(Thr253)的表达水平Jurkat 过表达 CaMKⅡγ后检测 AKT、p-AKT(Ser473)、FOXO3a、p-FOXO3a(Thr32)、p-FOXO3a(Thr253)、CaMKⅡγ、p-CaMKⅡγ(Thr287)的表达水平。结果显示:相较于对照组,过表达CaMKⅡγ能显著增加p-AKT(Ser473)、p-FOXO3a(Thr32)、p-FOXO3a(Thr253)的表达水平。2.3 CaMKⅡγ与AKT、FOXO3a形成蛋白复合物免疫共沉淀检测CaMKⅡγ与AKT、FOXO3a是否存在于同一蛋白复合物,结果显示CaMKⅡγ与AKT、FOXO3a形成蛋白复合物。2.4激活的CaMKⅡγ促进FOXO3a出核通过免疫荧光、核浆分离观察激活的CaMKⅡγ对FOXO3a的亚细胞定位的改变,免疫荧光结果显示:相较于对照组,过表达CaMKⅡγ的Jurkat中胞浆内FOXO3a增多。胞浆胞核分离实验显示:相较于对照组,过表达CaMKⅡγ的Jurkat胞浆内FOXO3a增多,过表达CaMKⅡγ的Jurkat胞核内FOXO3a减少。2.5激活的CaMKⅡγ抑制FOXO3a的转录水平通过荧光素酶报告基因和实时定量PCR观察FOXO3a的转录功能改变,荧光素酶报告基因结果显示HEK293细胞共转染PCDH-CaMKⅡγ的过表达质粒和p4xFHRE-luc质粒较HEK293细胞共转染PCDH的空质粒和p4xFHRE-luc质粒的相对荧光素强度明显下降,HEK293细胞共转染PCDH-dnCaMKⅡγ(T273A)突变质粒和p4xFHRE-luc质粒较HEK293细胞共转染PCDH-CaMKⅡγ过表达质粒和p4xFHRE-luc质粒的相对荧光素强度明显上升。实时定量PCR结果显示:与对照相比,过表达 CaMKⅡγ的 Jurkat 的 BTG1、catalase、DDB1、Gadd45a 以及 P27均有明显下降。3.p-CaMKⅡγ(Thr287)、p-FOX03a(Thr32)在 T-ALL 原代标本中表达情况以及与T-ALL临床特点的关系检测T-ALL临床病人标本的p-CaMKⅡγ(Thr287)和p-FOX03a(Thr32)的表达情况,分析它们表达情况与病人的临床特点(如骨髓原始细胞比例、白细胞数、发病年龄、染色体核型以及基因变异情况)的相关性。结果显示:与正常人和Jurkat相比,14/15(93.3%)的 T-ALL 病人样本中 p-CaMKⅡγ(Thr287)高表达,有 6/15(40%)的T-ALL病人样本高表达p-FOX03a(Thr32),3/15(20%)的T-ALL病人样本低表达 p-FOXO3a(Thr32),6/15(40%)的 T-ALL 病人样本不表达 p-FOXO3a(Thr32),p-CaMKⅡγ(Thr287)、p-FOX03a(Thr32)表达均为阳性组的白细胞数明显高于另一组(p<0.05)研究结论:1.激活的CaMKⅡγ(即p-CaMKⅡγ(Thr287))在T-ALL细胞株中高表达,在正常人中不表达或低表达,激活的CaMKⅡγ可以促进白血病细胞增殖,增强克隆形成能力,促进G2/M转换,增加DNA损伤,加速T-ALL的发病;2.激活的CaMKⅡγ(即p-CaMKⅡγ(Thr287))可以磷酸化AKT,继而磷酸化FOXO3a,引起FOXO3a出核,抑制FOXO3a的转录功能;3.T-ALL 病人样本存在 p-CaMKⅡγ(Thr287)、p-FOXO3a(Thr32)的表达,且 p-CaMKⅡγ(Thr287)、p-FOXO3a(Thr32)均阳性者较 p-CaMKⅡγ(Thr287)或p-FOXO3a(Thr32)阴性者白细胞数高。(本文来源于《浙江大学》期刊2017-05-01）
李珍[3]（2017）在《杏仁核钙/钙调蛋白依赖蛋白激酶Ⅱα在阿片诱导的大鼠痛觉过敏中的作用》一文中研究指出目的探讨右侧杏仁核中央核外侧包膜区(CeLC)中磷酸化钙/钙调蛋白依赖蛋白激酶Ⅱ α(p-CaMKⅡ α)在阿片诱导的痛觉过敏(OIH)中的作用。方法实验1,SD雄性大鼠均分为痛觉过敏组(Fentanyl组,n = 4)和对照组(Control组,n = 4),Fentanyl组注射芬太尼诱导OIH(60 μg/kg,皮下注射,每15 min 一次,共4次,累积给药总量240 μg/kg),Control组给予生理盐水。在D-1、D0(基础值),最后一次给药后1 h、5 h、6 h、6.5 h、7 h、8 h、D1、D2、D3、D4和D5各时点分别测量两组机械痛(PWMT,g)和热痛(PWTL,s)的变化;实验2,SD雄性大鼠均分为痛觉过敏组(Fentanyl组,n = 6)和对照组(Saline组,n = 6),建模成功后取右侧杏仁核中央核外侧包膜区(CeLC)组织用western blot检测磷酸化钙/钙调蛋白依赖蛋白激酶Ⅱ α(p-CaMKⅡ α)的表达量;实验3,SD雄性大鼠随机均分为Vehicle组(n = 10)、KN92组(n=10)、KN93(5 nmol)组(n = 10)、KN93(7.5 nmol)组(n = 10)和KN93(10nmol)组(n = 10),均进行右侧CeLC区置管,待其完全恢复后诱导OIH模型,成功后分别向各组CeLC内注射0.5 μl 10%DMSO(二甲基亚砜)、KN92(钙调蛋白依赖蛋白激酶抑制剂类似物)(10nmol)、KN93(钙调蛋白依赖蛋白激酶抑制剂)(5nmol)、KN93(7.5 nmol)、KN93(10 nmol);分别于OIH模型前、给药前及给药后0.5h测定各组机械痛和热痛的变化。于最后一次测痛后处死大鼠,采用western blot法检测各组右侧CeLC区p-CaMKⅡ α的表达量;实验4,SD雄性大鼠均分为Saline组和Fentanyl组(n = 6)。Fentanyl组注射芬太尼诱导OIH;同时Saline组给予生理盐水。12h后采用脑片膜片钳电生理技术,分别记录Saline组和Fentanyl组右侧CeLC区神经元微小自发性兴奋性突触后电流(mEPSCs),及Saline组和Fentanyl组给予KN93(10 μM),钙/钙调蛋白依赖蛋白激酶抑制剂后右侧CeLC区神经元mEPSCs的变化。结果1、与Control组相比,给予芬太尼后1h-5 h,Fentanyl组PWMT和PWTL值升高(P<0.05);5 h后,其PWMT和PWTL值开始降低,Fentanyl 组 PWMT 和 PWTL 值在 6.5 h、7 h、8 h、D1、D2、D3明显下降(P<0.05),且在6.5 h时下降最明显(P<0.05);D5时,Fentanyl 组 PWMT 和 PWTL 值与 Control 组 PWMT 和 PWTL 值无明显差异(P>0.05)。2、与Saline组相比,Fentanyl组给予芬太尼后右侧CeLC区p-CaMKⅡ α表达量明显升高(P<0.05)。3、OIH 造模前,Vehicle 组、KN92 组、KN93(5 nmol)组、KN93(7.5 nmol)组和 KN93(10 nmol)组 PWMT 和 PWTL 值无明显差异(P>0.05);给药前(OIH 建模后),Vehicle 组、KN92 组、KN93(5 nmol)组、KN93(7.5 nmol)组和 KN93(10 nmol)组 OIH 建模后PWMT和PWTL值均降低(P<0.05);给药0.5h后,与Vehicle组相比,KN93(5nmol)组、KN93(7.5nmol)组和 KN93(10nmol)组PWMT和PWTL值呈剂量依赖性升高(P<0.05);与Vehicle组相比,给抑制剂后KN93(5nmol)组、KN93(7.5nmol)组和KN93(10 nmol)组右侧CeLC区p-CaMKⅡ α表达量呈剂量依赖性升高(P<0.05)。4、与Saline组比较,Fentanyl组建立OIH模型后,右侧CeLC区神经元mEPSCs幅值及频率均明显增加(P<0.05),Saline组加入抑制剂KN93后右侧CeLC区神经元mEPSCs的幅值及频率无明显变化(P>0.05);Fentanyl组加入抑制剂KN93后右侧CeLC区神经元mEPSCs的幅值及频率均降至正常值(P<0.05)。结论1、芬太尼呈时效性诱导大鼠形成痛觉过敏;2、芬太尼诱导的痛觉过敏模型大鼠右侧杏仁核中央核外侧包膜区p-CaMKⅡ α表达量明显升高;3、KN93可呈剂量依赖性翻转芬太尼诱导的大鼠机械性和热痛觉过敏及右侧CeLC区p-CaMKⅡ α表达量的变化。4、芬太尼诱导大鼠右侧CeLC区突触传递增强,CaMKⅡα抑制剂可以逆转这些变化。综上:右侧杏仁核中央核外侧包膜区CaMKⅡα的激活参与了芬太尼诱导的痛觉过敏的过程,其参与机制可能与CeLC区神经元突触传递增强有关。(本文来源于《华中科技大学》期刊2017-05-01）
汤永峰,符浩,付欣,蔡志煅,李博伟[4]（2015）在《钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶激酶2在前列腺癌及癌旁组织中的表达及其临床意义》一文中研究指出目的研究CAMKK2在前列腺癌及癌旁组织中的表达,分析其表达与临床病理数据的关系。方法通过实时荧光定量PCR技术检测CAMKK2的mRNA水平在前列腺癌及癌旁组织中的表达情况,通过免疫印迹及免疫组化技术检测CAMKK2的蛋白水平在两种组织中的表达,分析CAMKK2的表达水平与前列腺癌相关临床病理特征及预后的关系。结果前列腺癌组织中的CAMKK2在mRNA及蛋白水平上均较癌旁组织中上调表达,CAMKK2的表达与血清PSA水平、是否转移及是否生化复发有关,CAMKK2的表达高低与无生化复发生存率相关,CAMKK2是生化复发的独立危险预测因素。结论 CAMKK2在前列腺癌组织中的表达增加,可能提示患者的预后情况,并可作为前列腺癌新的生物标记物。(本文来源于《贵州医药》期刊2015年08期）
荆玉谱[5]（2015）在《蜕皮激素引发的钙离子/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ信号转导途径以及蛋白激酶A信号转导途径对基因组转录的调控》一文中研究指出研究背景及存在的科学问题蜕皮激素(20-Hydroxyecdysone,20E)在昆虫蜕皮和变态中起主导作用。过去认为20E直接进入细胞启动基因转录,即基因组途径。近年的研究中发现细胞膜上存在响应蜕皮激素的G蛋白偶联受体(ErGPCRs),它们能介导20E引发的细胞内Ca2+浓度的迅速升高,进而活化蛋白激酶C (PKC)信号转导途径,即非基因组途径。胞内Ca2+浓度升高后需要与胞内多种钙结合蛋白形成复合物来发挥作用,如钙调蛋白(calmodulin, CaM)。CaM可以结合4个Ca2+形成Ca2+/CaM活性复合物,进而结合钙离子/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ),使CaMKⅡ发生白磷酸修饰而活化。活化后的CaMKⅡ在细胞核内可以磷酸化转录因子或其他蛋白,从而调节基因转录。但CaMKⅡ在20E调控的Ca2+信号途径中的功能及作用机理尚不清楚。果蝇中的研究还发现细胞膜上的多巴胺/蜕皮激素受体(DmDopEcR)可以和20E结合并可以介导胞内cAMP浓度升高；蜕皮激素在30 s内诱导家蚕前丝腺细胞内cAMP浓度升高,表明20E可能诱导cAMP介导的非基因组信号途径。cAMP与依赖cAMP的蛋白激酶A (PKA)调节亚基(PKAR)结合,使其与催化亚基(PKAC)分离,进入细胞核,使环磷腺苷应答元件结合蛋白(CREB)磷酸化并结合到环磷腺苷应答元件(CRE)上,调控基因表达,即PKA信号转导通路。然而20E激发的cAMP信号转导途径及其在调节昆虫变态发育中的作用及机理并不清楚。本论文用鳞翅目昆虫棉铃虫作为实验材料,并利用棉铃虫表皮细胞系(HaEpi)平台,研究了CaMKⅡ在20E调控的Ca2+信号途径中的功能及作用机理、PKAC在20E调控的昆虫变态发育中的作用及机理。研究结果1.20E诱导CaMKⅡ磷酸化进而通过调节细胞核内EcRBl/USP1转录异源二聚体的形成来调控基因的启动。在棉铃虫蜕皮期和变态期CaMKⅡ表达量升高。在虫体中通过RNA干扰技术(RNAi)沉默CaMKⅡ导致20E诱导基因表达量下降,进而导致棉铃虫不能顺利完成变态。在HaEpi细胞系中,20E快速诱导CaMKⅡ第290位苏氨酸发生磷酸化,并使CaMKⅡ进入细胞核。GPCR抑制剂Suramin、磷脂酶C (PLC)抑制剂U73122以及1,4,5-叁磷酸肌醇受体(IP3R)抑制剂光溜海绵素(Xestospongin C, XeC)对20E诱导的细胞内Ca2+浓度升高及CaMKⅡ磷酸化有显着抑制作用。在细胞内沉默ErGPCRl、 ErGPCR2以及G蛋白alpha q (Gaq)也能抑制20E诱导的CaMKⅡ磷酸化。细胞核内的CaMKⅡ介导去乙酰化酶3(HDAC3)的磷酸化并出核,维持转录因子USP1第303位赖氨酸乙酰化,使其与EcRB1形成转录异源二聚体,并与蜕皮激素响应元件(EcRE)结合。以上结果说明,20E通过ErGPCRs-、Gαq-，PLC-介导Ca2+信号转导途径凋控CaMKⅡ磷酸化和核移位,进而调节USP1赖氨酸乙酰化并形成EcRB1/USP1异源二聚体,最终调控基因组途径的启动。2.20E引发细胞内PKA信号转导途径磷酸化CREB上调基因组转录途径。在棉铃虫幼虫通过RNAi沉默PKA催化亚基1(PKAC1),导致幼虫不能顺利完成化蛹,并且20E诱导基因的表达量下降。GPCR抑制剂Suramin、cAMP生成抑制剂盐酸布比卡因、以及沉默ErGPCR2都能抑制20E介导的PKAC1的磷酸化。PKAC1在细胞核内直接磷酸化CREB的第143位丝氨酸残基。20E可以诱导含有CRE及EcRE核心元件的pHR3-P-IE1-RFP-His质粒表达红色荧光蛋白。GPCR抑制剂Surami、PKA抑制剂H89、以及沉默ErGPCR1和ErGPCR2都能抑制20E对该RFP的上调表达。缺失质粒中的CRE后,20E诱导RFP表达的能力下降。20E诱导CREB磷酸化并结合到CRE上,沉默PKAC1后CREB不能磷酸化因而不能结合到CRE上。这些结果说明,20E通过ErGPCR2介导PKAC1磷酸化,进而使CREB发生磷酸化并结合到CRE元件上,增强20E诱导基因表达。结论及意义20E调控CaMKII氨基酸序列的第290位苏氨酸磷酸化并入核,催化HDAC3磷酸化并出核,从而维持USP1在303位赖氨酸的乙酰化修饰,与EcRB1结合形成EcRB1/USP1转录复合体并结合在EcRE上,启动基因转录。20E通过ErGPCR2介导PKAC1磷酸化,PKAC1直接磷酸化CREB中的第143位丝氨酸残基,使CREB与CRE结合,增强20E诱导基因表达。阐明了20E激发的Ca2+及cAMP增加引发的下游级联反应,丰富了类固醇激素的非基因组信号转导途径理论,为昆虫发育研究开辟了新的领域,为害虫控制提供了新的靶标。(本文来源于《山东大学》期刊2015-05-30）
成映霞,段永强,杜娟,梁玉杰,杨晓轶[6]（2014）在《脾气虚大鼠小肠组织钙调蛋白信号通路中钙调蛋白、钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ基因表达规律的研究》一文中研究指出目的:观察脾气虚大鼠小肠组织钙调蛋白信号通路中钙调蛋白(Ca M)、钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)基因表达规律,揭示脾气虚证发生的内在机制。方法 :将48只大鼠随机分为正常对照组和脾气虚7 d、14 d、21 d组4组,每组12只。除正常对照组外,其余各组采用复合法(苦寒破气法、力竭法及饥饱失常法)建立脾气虚证大鼠模型,观测各组大鼠一般生存状态、脾虚证宏观证候积分、平均每日体质量增加量、负重游泳耐力时间和基础肛温;同时,采用实时荧光定量PCR技术检测小肠组织钙调蛋白信号通路中Ca M、Ca MKⅡ基因表达水平的变化。结果:与正常对照组对比,脾气虚模型7 d、14 d、21 d组大鼠平均每日体质量增加量、负重游泳耐力和基础肛温降低,脾虚证宏观证候积分升高,小肠组织Ca M、Ca MKⅡ基因相对表达量显着升高,且以脾气虚模型21 d组变化显着(P<0.05)。结论:脾气虚大鼠小肠组织钙调蛋白信号通路中Ca M、Ca MKⅡ基因表达水平异常增高。(本文来源于《中医研究》期刊2014年12期）
范衡宇,霍立军,陈大元,孙青原[7]（2003）在《钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在猪卵母细胞减数分裂成熟和受精中的作用》一文中研究指出钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)是一类分布广泛的丝/苏氨酸蛋白激酶家族,在钙离子和钙调蛋白(CaM)存在的条件下发生自磷酸化而被激活,在细胞内对于钙信号的传递具有重要的介导作用。本实验研究了在猪卵母细胞减数分裂成熟和激活过程中CaM和CaMKII对细胞周期进程的影响,及其对两种重要的减数分裂相关蛋白激酶MPF和MAPK活性的调节。结果发现,CaM抑制剂W7和CaMKII抑制剂KN-93、Ant-AIP-II在猪卵母细胞减数分裂成熟过程中以浓度依赖方式阻止生发泡破裂(GVBD)和MAPK磷酸化。CaMKII抑制剂和CaM抑制剂在减数分裂成熟过程中通过阻止周期蛋白B的积累而抑制MPF活性。CaMKII在减数分裂过程中具有与纺锤体密切相关的亚细胞定位。在猪卵母细胞孤雌激活过程中,CaMKII被迅速激活并发挥双重作用,促进cyclin B降解、MPF失活,并维持MAPK/p90rsk的活性稳定,使卵子向间期转化。如果用CaMKII抑制剂KN-93、Ant-AIP-II或CaM拮抗剂W7处理猪卵母细胞以后,孤雌刺激不再能够诱导原核形成。这些结果表明CaMKII是参与调节卵母细胞减数分裂的重要分子,在卵母细胞成熟、极体排放、受精和活化等过程中发挥作用。(本文来源于《第九次全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集》期刊2003-11-01）
范衡宇,霍立军,孙青原[8]（2003）在《钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ在卵母细胞减数分裂和受精中的作用(英文)》一文中研究指出钙调蛋白依赖的蛋白激酶 (CaMK)是一类分布广泛的丝 /苏氨酸蛋白激酶家族 ,在钙离子和钙调蛋白存在的条件下发生自磷酸化而被激活 ,在细胞内对于钙信号的传递具有重要的介导作用 .近年来的研究表明CaMKⅡ是参与调节卵母细胞减数分裂的重要分子 ,在卵母细胞成熟、极体排放、受精和活化等过程中发挥作用 .CaMKⅡ作为Ca2 + 的下游信号分子 ,在受精后促进成熟促进因子 (MPF)和细胞静止因子 (CSF)的失活 ,并调节纺锤体微管的组装和中心体的复制过程 .虽然CaMKⅡ在减数分裂中的作用广泛而关键 ,但目前的研究主要集中于低等动物和小鼠 ,今后有待进一步阐明该蛋白激酶在其他哺乳动物中的作用和调节机制(本文来源于《生物化学与生物物理进展》期刊2003年02期）
郭庆民,刘景生[9]（2002）在《Ca~(2+)/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ信息通路在DPDPE长时程作用的NG108-15细胞中的作用》一文中研究指出目的 观察阿片类依赖时Ca2 + /钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ )信息通路的变化 ,以及Ca2 + /CaMKⅡ信息通路与cAMP水平之间的关系。方法 以NG10 8 15细胞作为体外的细胞模型 ,分别采用竞争性蛋白结合法及放射免疫法、PDE法、γ 3 2 P参入法以及RT PCR测定cAMP水平、钙调蛋白 (CaM)活性、CaMKⅡ活性和mDOR的mRNA表达水平的变化。结果 DPDPE长时程作用NG10 8 15细胞 ,cAMP水平升高 ,形成阿片依赖 ;细胞CaM活性和CaMKⅡ活性也升高 ,该升高可被CaM拮抗剂W 7所抑制 ,而CaMKⅡ活性的升高可被CaMKⅡ特异性抑制剂KN 6 2所抑制。W 7或KN 6 2可抑制阿片依赖导致的细胞cAMP水平的升高。阿片依赖时 ,加入纳洛酮诱发戒断 ,CaM活性、CaMKⅡ活性进一步增高。而在阿片依赖时 ,δ阿片受体的mRNA表达水平无明显变化。结论 Ca2 + /钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ信息通路可通过调节cAMP水平参与阿片依赖的机制。(本文来源于《中国药理学通报》期刊2002年01期）
郭庆民,刘景生[10]（2001）在《阿片类药物对NG108-15细胞Ca~(2+)/钙调蛋白依赖的蛋白激酶II信息通路的作用》一文中研究指出目的 观察阿片类依赖时Ca2 + 钙调蛋白依赖的蛋白激酶II信息通路的变化。方法 以NG10 8 15细胞作为体外的细胞模型 ,分别用竞争性蛋白结合法及放射免疫法、PDE法、γ 32 P参入法测定cAMP水平、钙调蛋白(CaM)活性和钙调蛋白依赖的蛋白激酶II(CaMKII)活性。结果 DPDPE作用NG10 8 15细胞 48h可使细胞浆和细胞核CaM和CaMKII活性升高 ,该变化可被CaM特异性拮抗剂W 7所抑制 ;CaMKII特异性抑制剂KN 6 2可抑制CaMKII活性的增高 ,而对CaM活性无明显影响。DPDPE作用NG10 8 15细胞 48h后 ,加入纳洛酮 ,CaM活性、CaMKII活性进一步增高。结论 Ca2 + CaMKII信息通路参与了阿片依赖的机制。(本文来源于《药学学报》期刊2001年09期）
钙调蛋白依赖蛋白激酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究背景:急性 T 淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)是一种累及T淋巴细胞的造血系统恶性疾病,占儿童ALL的10%-15%,占成人ALL的20%-25%,临床上以高白细胞数、骨髓不成熟T淋巴细胞弥漫性浸润、纵膈淋巴结增大、胸腔积液和中枢神经系统受累为主要特征。尽管高强度化疗的使用改善了疗效,儿童T-ALL的长期生存率已超过75%,成人T-ALL的长期生存率也达到了 50%左右。但是由于原发耐药以及早期复发,试图进一步提高疗效将变得非常困难,因此,寻找新的引起T-ALL发生的分子机制迫在眉睫。激活的钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ γ(Ca~(2+)/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ γ,CaMKⅡγ)在调节髓系白血病细胞的增殖和分化中发挥着非常重要的作用,同时也可以促进慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)的急性变,用小檗胺靶向抑制CaMKⅡγ的激活可有效去除格列卫耐药的CML急性变的原始细胞以及白血病干细胞。既往研究表明激活的CaMKⅡγ可以诱导抗原依赖的记忆性T细胞的形成以及延长T细胞寿命、调节T细胞增殖、增强T细胞的细胞毒作用、调节T细胞免疫应答。但激活的CaMKⅡγ在T-ALL的发生、发展中的作用和机制仍未见报道。研究目的:1.明确激活的CaMKⅡγ(即p-CaMKⅡγ(Thr287))在T-ALL细胞株表达情况以及对T-ALL的肿瘤生物学特征的影响;2.明确激活的CaMKⅡγ(即p-CaMKⅡγ(Thr287))加速T-ALL发生的分子机制;3.明确 p-CaMKⅡγ(Thr287)、p-FOX03a(Thr32)在 T-ALL 原代标本中表达情况以及与T-ALL临床特点的关系。研究内容和结果:1.激活的CaMKⅡγ(即p-CaMKⅡγ(Thr287))在T-ALL细胞株表达情况以及对T-ALL的肿瘤生物学特征的影响1.1 激活的CaMKⅡγ(即p-CaMKⅡγ(Thr287))在T-ALL细胞株中高表达Western blot检测激活的CaMKⅡγ(即p-CaMKⅡ(γ(T287))在)在T-ALL细胞株和正常人血细胞中的表达情况。结果显示:相对于正常人的血细胞,T-ALL细胞株高表达 p-CaMKⅡγ(Thr287)。1.2小檗胺抑制T-ALL细胞系生长部分通过抑制CaMKⅡγ的激活小檗胺处理T-ALL细胞株48 h,CCK-8法检测OD值,计算IC50,Western blot检测p-CaMKⅡγ(Thr287)的表达情况。结果显示小檗胺明显抑制CEM、Jurkat、Molt4细胞株的生长,IC50值分别为4.95 μ/ml、3.83 μg/ml、3.73 μg/ml,在小檗胺处理的CEM、Jurkat中p-CaMKⅡγ(Thr287)明显下降,Molt4则下降不明显。1.3过表达CaMKⅡγ可以促进白血病细胞增殖、增强克隆形成能力、促进G2/M转换、增加DNA损伤过表达CaMKⅡγ的T-ALL细胞株Jurkat分别用CCK-8法检测增殖情况、克隆形成实验检测克隆形成能力、流式细胞术检测细胞周期以及免疫荧光检测阿霉素处理细胞后DNA损伤情况。结果显示:相较于对照组,过表达CaMKⅡγ的Jurkat增殖能力增强、克隆数明显增多、克隆体积也增大、G2/M转换加快、阿霉素未处理和阿霉素2.5 μg/ml处理12小时后的DNA双链断裂均明显增多。2.激活的CaMKⅡγ(即p-CaMKⅡγ(Thr287))加速T-ALL发生的分子机制2.1 抑制 CaMKⅡγ 的活性减少 p-AKT(Ser473)、p-FOXO3a(Thr32)、p-FOXO3a(Thr253)的表达水平抑制 CaMKⅡγ活性(CaMKII 抑制剂 KN93、CRISPR/CAS9 敲除 CaMKⅡγ、shRNA 敲低 CaMKⅡγ、显性负突变 CaMKⅡγ)后检测 AKT、p-AKT(Ser473)、FOXO3a、p-FOXO3a(Thr32)、p-FOXO3a(Thr253)、CaMKⅡγ、p-CaMKⅡγ(Thr287)、Notch1、cleaved Notch1、β-catenin的表达水平。结果显示:相较于对照,抑制CaMKⅡγ活性能显著减少 p-AKT(Ser473)、p-FOXO3a(Thr32)、p-FOXO3a(Thr253)的表达水平,而AKT、FOXO3a、Notch1、cleaved Notch1、β-catenin 的表达水平无显着变化。2.2 过表达 CaMKⅡγ增加 p-AKT(Ser473)、p-FOXO3a(Thr32)、p-FOXO3a(Thr253)的表达水平Jurkat 过表达 CaMKⅡγ后检测 AKT、p-AKT(Ser473)、FOXO3a、p-FOXO3a(Thr32)、p-FOXO3a(Thr253)、CaMKⅡγ、p-CaMKⅡγ(Thr287)的表达水平。结果显示:相较于对照组,过表达CaMKⅡγ能显著增加p-AKT(Ser473)、p-FOXO3a(Thr32)、p-FOXO3a(Thr253)的表达水平。2.3 CaMKⅡγ与AKT、FOXO3a形成蛋白复合物免疫共沉淀检测CaMKⅡγ与AKT、FOXO3a是否存在于同一蛋白复合物,结果显示CaMKⅡγ与AKT、FOXO3a形成蛋白复合物。2.4激活的CaMKⅡγ促进FOXO3a出核通过免疫荧光、核浆分离观察激活的CaMKⅡγ对FOXO3a的亚细胞定位的改变,免疫荧光结果显示:相较于对照组,过表达CaMKⅡγ的Jurkat中胞浆内FOXO3a增多。胞浆胞核分离实验显示:相较于对照组,过表达CaMKⅡγ的Jurkat胞浆内FOXO3a增多,过表达CaMKⅡγ的Jurkat胞核内FOXO3a减少。2.5激活的CaMKⅡγ抑制FOXO3a的转录水平通过荧光素酶报告基因和实时定量PCR观察FOXO3a的转录功能改变,荧光素酶报告基因结果显示HEK293细胞共转染PCDH-CaMKⅡγ的过表达质粒和p4xFHRE-luc质粒较HEK293细胞共转染PCDH的空质粒和p4xFHRE-luc质粒的相对荧光素强度明显下降,HEK293细胞共转染PCDH-dnCaMKⅡγ(T273A)突变质粒和p4xFHRE-luc质粒较HEK293细胞共转染PCDH-CaMKⅡγ过表达质粒和p4xFHRE-luc质粒的相对荧光素强度明显上升。实时定量PCR结果显示:与对照相比,过表达 CaMKⅡγ的 Jurkat 的 BTG1、catalase、DDB1、Gadd45a 以及 P27均有明显下降。3.p-CaMKⅡγ(Thr287)、p-FOX03a(Thr32)在 T-ALL 原代标本中表达情况以及与T-ALL临床特点的关系检测T-ALL临床病人标本的p-CaMKⅡγ(Thr287)和p-FOX03a(Thr32)的表达情况,分析它们表达情况与病人的临床特点(如骨髓原始细胞比例、白细胞数、发病年龄、染色体核型以及基因变异情况)的相关性。结果显示:与正常人和Jurkat相比,14/15(93.3%)的 T-ALL 病人样本中 p-CaMKⅡγ(Thr287)高表达,有 6/15(40%)的T-ALL病人样本高表达p-FOX03a(Thr32),3/15(20%)的T-ALL病人样本低表达 p-FOXO3a(Thr32),6/15(40%)的 T-ALL 病人样本不表达 p-FOXO3a(Thr32),p-CaMKⅡγ(Thr287)、p-FOX03a(Thr32)表达均为阳性组的白细胞数明显高于另一组(p<0.05)研究结论:1.激活的CaMKⅡγ(即p-CaMKⅡγ(Thr287))在T-ALL细胞株中高表达,在正常人中不表达或低表达,激活的CaMKⅡγ可以促进白血病细胞增殖,增强克隆形成能力,促进G2/M转换,增加DNA损伤,加速T-ALL的发病;2.激活的CaMKⅡγ(即p-CaMKⅡγ(Thr287))可以磷酸化AKT,继而磷酸化FOXO3a,引起FOXO3a出核,抑制FOXO3a的转录功能;3.T-ALL 病人样本存在 p-CaMKⅡγ(Thr287)、p-FOXO3a(Thr32)的表达,且 p-CaMKⅡγ(Thr287)、p-FOXO3a(Thr32)均阳性者较 p-CaMKⅡγ(Thr287)或p-FOXO3a(Thr32)阴性者白细胞数高。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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标签：心血管病学; 钙; 钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ; 心律失常; 慢性心力衰竭;