导读:本文包含了内皮细胞活性论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:血小板,冻干,生长因子,细胞增殖
内皮细胞活性论文文献综述
施琳颖,李艳辉,周谋,丁慧慧,林放[1]（2019）在《冻干保护液用于较大容量冻干血小板生长因子活性的保护及其对人静脉内皮细胞增殖的作用》一文中研究指出目的研制用于较大容量(50 mL)冻干血小板生长因子的冻干保护液,探讨其对人静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的作用。方法采集12位健康志愿者全血,并使用血液成分分离机手工分离血小板。将血小板汇集后,调整血小板计数约至1 000×10~9/L。将调整好计数的血小板血浆分为5份,每份50 mL。分组:A组为新鲜血小板组;B组为冻干保护液处理组;C组为无冻干保护液处理组;D组为冻干保护液处理保存3个月组;E组为无冻干保护液保存3个月组。ELISA法检测血小板中生长因子的含量,CCK8法检测HUVECs增殖率。结果生长因子含量与细胞增殖结果一致,C组(TGF:192 216.680±109 705.640,VEGF:78.157±8.831, PDGF:16 985.43±1 031.256, bFGF:178.969±13.282,CCK-8:1.008±0.151), D组(TGF:246 626.621±17 039.413, VEGF:85.694±12.292, PDGF:15 472.204±378.222, bFGF:116.736±16.149,CCK-8:0.681±0.035), E组(TGF:150 862.825±9 023.450, VEGF:46.945±1.311, PDGF:9 389.033±262.193, bFGF:98.691±9.679,CCK-8:0.037±0.029)与A组(TGF:425 458.163±25 862.627, VEGF:383 507.356±50170.545, PDGF:26 531.360±1 188.531, bFGF:178.969±13.282,CCK-8:1.258±0.047)相比,均显着降低(P<0.05);C、D、E与B组(TGF:383 507.356±50 170.545, VEGF:119.250±10.928, PDGF:23 850.094±2 185.510, bFGF:172.993±23.169,CCK-8:1.237±0.045)相比,均显着降低(P<0.05)E组与D组相比,E组显着降低(P<0.05)。结论研制的冻干保护液对较大容量冻干血小板中生长因子活性及其促进HUVECs生长有较好的保护作用。(本文来源于《中国输血杂志》期刊2019年11期）
朱雅琳,聂晶,帕丽达·阿布利孜[2]（2019）在《强脉冲光与长脉宽Nd:YAG激光对婴幼儿血管瘤内皮细胞活性的影响》一文中研究指出目的:从分子生物学水平探讨强脉冲光和长脉宽1 064nmNd:YAG激光治疗血管瘤的机制。方法:使用不同能量强脉冲光和长脉宽1 064nmNd:YAG激光对婴儿血管瘤血管内皮细胞进行体外照射,照射后测量不同时间点细胞OD值,并进行比较。结果:强脉冲光组照射后,在同一时间点能量越高,体外培养血管瘤内皮细胞OD值越低,表明照射后存活细胞数减少,差异具有统计学意义(P<0.05),在所有测试时间点均呈现相同的改变趋势。Nd:YAG组照射后,在同一时间点,不同能量显示相同的变化趋势。在同一能量组,不同时间点的变化趋势有所不同。结论:强脉冲光和Nd:YAG激光对于血管瘤的抑制作用除了"选择性光热作用"外,还通过影响血管瘤内皮细胞的生长发挥抑制作用,并且影响程度在一定范围内受到能量和时间的影响。(本文来源于《中国美容医学》期刊2019年09期）
高爱社,杨洒,刘亚美,陈芳,张妍[3]（2019）在《丹蒌片对Aβ_(1-40)致脑微血管内皮细胞损伤模型活性的影响》一文中研究指出目的:观察丹蒌片对β淀粉样蛋白(β-Amyloid protein,Aβ)致脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMEC)损伤模型活性的影响。方法:培养BMEC,用Aβ_(1-40)造成BMEC损伤,加入不同剂量的丹蒌片含药血清,6 h、12 h、24 h后用CCK8染色法检测细胞活性,并检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的漏出量。结果:与正常对照组比较,模型组细胞活性降低,细胞培养上清液中LDH释放量增加(P<0.01)。与模型组比较,12 h后各剂量丹蒌片含药血清组细胞活性显着升高,12 h细胞活性高于24 h的细胞活性(P<0.05);丹蒌片含药血清各组细胞培养上清液中LDH水平降低,12 h上清液中LDH水平显着低于6 h、24 h(P<0.05);高剂量、中剂量含药血清组细胞上清液LDH水平显着降低(P<0.05)。结论:丹蒌片能提高Aβ_(1-40)致BMEC损伤后细胞的活性,减少细胞LDH的漏出量,起到保护脑微血管内皮的作用。(本文来源于《中医学报》期刊2019年09期）
郑文慧[4]（2019）在《HAD及非HAD患者HIV-1 Tat对内皮细胞活性及紧密连接蛋白含量的影响》一文中研究指出目的:HIV-1 Tat是HIV-1 tat基因编码的重要调控蛋白,可参与病毒的转录与激活,促进病毒在细胞内的复制;同时Tat蛋白还可以借助被HIV-1感染的T细胞、巨噬细胞等多种细胞分泌、释放到细胞外,借助自身的穿膜功能,到达机体多个部位。研究表明,大部分HIV-1感染者后期,尤其是发展成为艾滋病脑病和艾滋病脑炎的患者,血脑屏障(blood brain barrier,BBB)都有不同程度的结构损伤和功能减退。内皮细胞是血脑屏障的第一道防线,在控制BBB物质进出、维持BBB动态平衡发挥重要作用。紧密连接蛋白是内皮细胞间相互连接的复杂结构,降低紧密连接蛋白的表达量可增加内皮细胞的通透性。紧密连接蛋白主要是由跨膜蛋白、胞质附着蛋白和细胞骨架蛋白叁种组成,闭合小环蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)为胞质附着蛋白,在维持连接系统的稳定性、细胞信号转导、调节细胞增殖分化和血脑屏障通透性中发挥重要作用,常被用作观察紧密连接屏障功能和评价通透性功能的指标。HIV-1 Tat蛋白对内皮细胞的作用可分为两类:①直接作用:Tat蛋白可通过损伤内皮细胞的细胞器、上调促凋亡蛋白表达等方式损伤内皮细胞,也可降低紧密连接蛋白的表达量,增加内皮细胞的通透性;②间接作用:Tat蛋白刺激星形胶质细胞分泌促炎症介质,参与炎症反应,进而损伤内皮细胞。近些年,HIV-1 Tat蛋白损伤内皮细胞机制的研究众多,但其机制尚未阐释清楚。因此,对Tat蛋白损伤内皮细胞的机制进行全面、深入的研究对HIV相关神经认知障碍的预防、治疗以及控制具有重要意义。本研究在原核细胞中表达并纯化了 HIV相关脑病(HIV-associated dementia,HAD)患者基底核(basal ganglia,BG)来源HIV-1 Tat蛋白,研究了 HIV-1 Tat蛋白对内皮细胞的活性的影响,探讨HIV-1 Tat蛋白对内皮细胞的直接作用。同时在U87细胞中表达了 HAD、非HAD(non-HIV-associated dementia,non-HAD)患者脾脏(spleen,SPL)和BG来源Tat蛋白,研究了 U87细胞上清对原代小鼠脑微血管内皮细胞(mouse cerebral microvascular endothelial cells,MCMECs)紧密连接蛋白 ZO-1 含量的影响,探讨了 HIV-1 Tat蛋白对内皮细胞的间接作用,以期为HAD发病机制研究提供科学依据。方法:1.HIV-1 Tat对内皮细胞活性的影响(1)pET-32a-tat原核表达载体的构建 以测序正确的pGEX-KG-tat重组质粒为模板,扩增HAD-BG来源的HIV-1 tat基因,引物中加入His标签用于HIV-1 Tat蛋白的纯化。PCR产物和pET-32a载体进行酶切、连接,构建pET-32a-tat原核表达载体,将其转化大肠杆菌感受态DH5α,经氨苄青霉素筛选,挑取单菌落经菌液PCR鉴定后送公司测序,测序结果进行比对。(2)HIV-1 Tat蛋白的表达、纯化与定量构建成功的pET-32a-tat原核表达载体转化大肠杆菌感受态BL21(DE3),挑取单菌落接种于含1‰氨苄青霉素的LB培养基中,培养至吸光度(absorbance,A)在0.6～0.8之间,IPTG诱导其表达Tat蛋白。SDS-PAGE和Western Blot鉴定蛋白表达。破碎菌体后,离心收取上清,通过镍亲和层析柱和凝胶过滤预装柱进行纯化,浓缩后经BCA蛋白定量目的蛋白。(3)HIV-1 Tat蛋白对HUVECs活性的影响将HUVECs接种至96孔板,加入Tat蛋白,终浓度依次为100 ng/ml,200 ng/ml,300 ng/ml,400 ng/ml,500 ng/ml,1000 ng/ml,每个浓度设5个平行孔,以正常细胞为阴性对照,培养基作为空白对照。作用36h后,加入cck-8溶液,酶标仪检测450nm波长处的A值。2.表达HIV-1 Tat蛋白的U87细胞上清对MCMECs ZO-1含量的影响(1)pEGFP-N1-tat真核表达载体的构建分别以含有HAD-SPL、HAD-BG、non-HAD-SPL、non-HAD-BG 的HIV-1 tat基因pGEX-KG-tat和pMD119-T-tat重组质粒作为模板,扩增不同来源的HIV-1 tat基因。PCR产物和pEGFP-N1载体进行酶切、连接,构建pEGFP-N1-tat真核表达载体,将其转化大肠杆菌感受态DH5α,经氨苄青霉素筛选,挑取单菌落经菌液PCR鉴定后送公司测序,测序结果进行比对。(2)HIV-1 Tat蛋白在U87细胞内的表达将构建成功的 HAD-SIL、HAD-BG、non-HAD-SPL、non-HAD-BG来源 Tat的真核表达载体pEGFP-NI1-tat转染U87细胞,并以正常细胞作为空白对照,pEGFP-N1载体组作为阴性对照。通过观察绿色荧光蛋白判断HIV-1 Tat蛋白表达情况,免疫组化法鉴定HIV-1 Tat在U87细胞内的表达。(3)原代MCMECs提取、培养与鉴定选取6～8只4～6周龄的昆明鼠,无菌取脑组织,剪碎并用木瓜蛋白酶和DNA酶I消化,加入1.7倍体积的22%BSA后离心,下层沉淀用内皮细胞培养基重悬后接种于包被鼠尾胶原I的培养板上。待细胞铺满单层后,免疫荧光技术检测细胞CD31和VIII因子,对原代培养的细胞进行鉴定。(4)表达HIV-1 Tat蛋白U87上清对原代MCMECs ZO-1含量的影响分别收集表达 HAD-SPL、HAD-BG、non-HAD-SPL、non-HAD-BG HIV-1 Tat蛋白的U87上清,并加入MCMECs中孵育,Western Blot检测MCMECs中ZO-1含量,以正常细胞作为空白对照,pEGFP-N1载体组作为阴性对照。经Image J软件对ZO-1与β-actin灰度值进行分析,通过计算ZO-1/β-actin比值,分析不同来源的U87细胞上清对ZO-1的蛋白含量的影响。3.统计学分析用SPSS 16.0软件对各组HUVECs活性和MCMECs ZO-1蛋白含量进行统计学处理,数据用均数士标准差(x±s)描述,采用方差分析进行检验(α =0.05)。结果:1.HIV-1 Tat对内皮细胞活性的影响(1)pET-32a-tat原核表达载体的构建PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,在250bp处出现与预计的tat第一外显子基因(216bp)片段大小相符的条带。挑取单菌落进行PCR鉴定证实为HIV-1 tat基因。测序结果比对正确,证明pET-32a-tat原核表达载体构建成功。(2)HIV-1 Tat蛋白的表达、纯化与定量SDS-PAGE和Western Blot鉴定结果显示,在15KD处有明显的蛋白条带,与HIV-1 Tat蛋白大小一致,还有小部分以多聚体存在。同时结果显示大部分目的蛋白可溶性的在上清中表达,还有少部分在包涵体内。上清经镍亲和层析柱纯化,Western Blot结果可知,500mmol/L洗脱液中的目的蛋白含量较高,加入DTT对减少目的蛋白多聚体不显着。将500mmol/L洗脱峰收集后浓缩,经凝胶过滤预装柱Column Superdex 75 Increase 10/300 GL进一步纯化,AKTA explorer UV吸收图可见单个吸收峰。根据UV吸收图出峰位置可知,该蛋白为一分子量较大的多聚体,经鉴定为HIV-1 Tat蛋白,且在DTT作用下分解成以单体为主的多种形式。BCA测定浓度为0.47mg/ml。(3)HIV-1 Tat蛋白对HUVECs活性的影响随着Tat浓度的增加,HUVECs活性逐渐降低,与阴性对照组相比,100ng/ml、200ng/ml两组细胞活性差异均无统计学意义(P>0.05),300ng/ml、400ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml四组细胞活性差异均有统计学意义(P<0.05),但四组组间差异无统计学意义(P>0.05)。2.表达HIV-1 Tat蛋白的U87细胞上清对MCMECs ZO-1含量的影响(1)pEGFP-N11-tat真核表达载体的构建PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,在250bp处出现与预计的tat第一外显子基因(216bp)片段大小相符的条带。挑取单菌落进行PCR鉴定证实为HIV-1 tat基因。测序结果比对正确,证明 HAD-SPL、HAD-BG、non-HAD-SPL、non-HAD-BG 四组pEGFP-N 1-tat真核表达载体构建成功。(2)HIV-1 Tat蛋白在U87细胞内的表达HAD-SPL、HAD-BG、non-HAD-SPL、non-HAD-BG 四组 pEGFP-N11-tat 真核表达载体和pEGFP-N1载体转染U87细胞后,12h可观察到U87细胞内有绿色荧光出现,随时间延长,荧光强度逐渐增加,48h时达到最大值,72h时较之减弱,空白对照未见绿色荧光。转染48h的U87细胞经免疫组化法检测,各实验组均可见清晰的棕色颗粒,阴性对照和空白对照未见棕色颗粒。综上可知,HIV-1 Tat蛋白能在U87细胞内表达。(3)原代MCMECs提取、培养与鉴定从小鼠脑组织中提取、培养的细胞经免疫荧光法鉴定,CD31和Ⅷ因子检测结果均可见绿色荧光,经DAPI染色的细胞核可见蓝色荧光,表明提取培养的细胞为原代MCMECs。(4)表达HIV-1 Tat蛋白U87上清对原代MCMECs ZO-1含量的影响孵育表达 HAD-SPL、HAD-BG、non-HAD-SPL、non-HAD-BG 四组 Tat 蛋白的U87上清后,MCMECs紧密连接蛋白ZO-1含量出现了不同程度的变化。与阴性对照组相比,HAD-SPL和 non-HAD-SPL组 ZO-1 的含量降低;HAD-BG和 non-HAD-BG组的ZO-1的含量升高,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:1.在原核细胞中高效表达并纯化了具有生物学活性的HIV-1 Tat蛋白,浓度达到300ng/ml可显着降低HUVECs的活性。2.表达HAD-SPL、HAD-BG、non-HAD-SPL、non-HAD-BG Tat蛋白的 U87上清对MCMECs ZO-1含量无影响。(本文来源于《山东大学》期刊2019-05-20）
刘晓霞[5]（2019）在《利拉鲁肽通过AMPK/mTOR信号通路对高糖环境下内皮细胞自噬活性的影响》一文中研究指出目的:(1)观察在高糖环境培养下人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)自噬流活性的相关变化,探讨其可能的作用机制。(2)研究胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like Peptide-1,GLP-1)受体激动剂利拉鲁肽(Liraglutide,LIRA)对高糖诱导的HUVECs自噬(Autophagy)的影响及其可能机制,明确其是否能成为糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)大血管病变可能的治疗靶点。方法:(1)在体外传代培养HUVECs,分为对照组(A组)和高糖组(B组),分别用5.5mmol/L、25mmol/L的正常糖及高糖培养基培养,培养时间分别为12 h、24 h和48h。实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time fluorescent quantitative polymerize chain reaction,RT-PCR)测定细胞内自噬相关基因BECN1/Beclin-1、微管相关蛋白质I轻链3(Microtubule-associated protein I light chain 3,LC3)以及核孔蛋白SQSTM1/p62mRNA含量的表达,确定高糖对自噬影响的最佳培养时间点。(2)以HUVECs作为研究对象,分别给予低剂量、中剂量、高剂量不同浓度梯度(10 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L)的LIRA进行干预(C_1、C_2、C_3组),按第一部分实验得出的最佳时间点培养细胞后,采用同样的方法检测上述指标,得出最适宜的LIRA干预浓度。(3)分别在最佳剂量LIRA干预高糖组(C组)和单纯高糖组(B组)基础上,加入腺苷酸活化蛋白激酶(Amp-activated protein Kinsey,AMPK)抑制剂Compound C(ComC,10μmol/L)处理(D组和E组)。采用高分辨激光共聚焦荧光显微镜监测LC3与绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)融合(GFP-LC3)的荧光斑点数量来观察自噬小体的形成。Western blotting检测细胞内自噬标志物BECN1/Beclin-1、SQSTM1/p62蛋白的表达和LC3-II/LC3-I、磷酸化AMPK(Phosphorylation-AMP K,p-AMPK)/AMPK、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-The mammalian target of rapamycin,p-mTOR)/mTOR的比值变化。结果:(1)与A组相比,B组GFP-LC3荧光斑点数量减少,不同时间点下BECN1/Beclin-1、LC3mRNA表达含量减少(均P<0.05),而SQSTM1/p62mRNA表达含量增加(P<0.05),且24h时这种变化最为显着。故选择24h作为最佳培养时间,其蛋白表达与基因表达结果相一致。与此同时,B组p-AMPK/AMPK比值较A组表达降低,p-mTOR/mTOR比值反而较A组表达上升。(2)与24h培养的B组相比,C_3组BECN1/Beclin-1、LC3 mRNA表达增加,SQSTM1/p62 mRNA表达减少(均P<0.05),且C_1、C_2、C_3组LC3mRNA表达上升(均P<0.05),并且呈现一定的剂量依赖性趋势,故将100nmol/L作为LIRA的最佳干预浓度。(3)C组较B组相比,GFP-LC3荧光聚集信号明显增多,同时BECN1/Beclin-1蛋白、LC3-II/LC3-I和p-AMPK/AMPK比值表达升高(均P<0.05),SQSTM1/p62蛋白、p-mTOR/mTOR比值表达反而降低(均P<0.05)。D组LC3-II/LC3-I、p-AMPK/AMPK的比值低于C组(均P<0.05),p-mTOR/mTOR比值反而高于C组(P<0.05),而BECN1/Beclin-1、SQSTM1/p62表达差异无统计学意义(均P>0.05)。(4)与D组相比,E组LC3-II/LC3-I比值减少(P<0.05),同时SQSTM1/p62蛋白增多(P<0.05)。免疫荧光检测GFP-LC3自噬荧光点数量变化的趋势与蛋白水平变化趋势一致。结论:(1)高糖培养的HUVECs自噬水平明显受到抑制,表现为BECN1/Beclin-1、LC3蛋白表达下降,而SQSTM1/p62蛋白表达升高,GFP-LC3荧光斑点数量减少。同时高糖组p-AMPK/AMPK比值表达下调,反而p-mTOR/mTOR比值表达上调,提示高血糖状态能够抑制AMPK/mTOR信号通路的表达。(2)LIRA能够上调BECN1/Beclin-1蛋白、LC3-II/LC3-I和p-AMPK/AMPK的比值,下调SQSTM1/p62蛋白和p-mTOR/mTOR的比值,即LIRA能够促进细胞自噬的发生。且可能是通过磷酸化激活AMPK/mTOR介导的信号通路,减轻高血糖状态对HUVECs的损伤,对受损的HUVECs产生保护性的作用。(本文来源于《山西医科大学》期刊2019-05-20）
杨雁华,汤建民,来桂棵,王丰云[6]（2019）在《正五聚蛋白3对血管紧张素Ⅱ刺激后血管内皮细胞凋亡及血管活性物质分泌的影响》一文中研究指出目的探讨正五聚蛋白(PTX)3对血管紧张素(Ang)Ⅱ刺激后的血管内皮细胞(HUVECs)凋亡及血管活性物质分泌的影响。方法以10~(-7) mol/L AngⅡ刺激体外培养的HUVECs 0、12、24和48 h后,Western印迹检测HUVECs中PTX3蛋白的表达。利用Lipofectamine2000将PTX3 siRNA转染至HUVECs,Western印迹检测其转染效果。将HUVECs随机分为空白组(未做任何处理)、AngⅡ组(10~(-7)mol/L AngⅡ刺激)、AngⅡ+siNC组(转染阴性对照序列后,给予10~(-7) mol/L AngⅡ刺激)和AngⅡ+siPTX3组(转染PTX3 siRNA后,给予10~(-7)mol/L AngⅡ刺激),噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡,实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞中血管活性物质内皮素(ET)-1和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达。结果随着AngⅡ刺激时间的延长,PTX3蛋白表达水平显着升高。转染PTX3 siRNA后成功下调了AngⅡ引起的PTX3表达。AngⅡ刺激可引起HUVECs增殖减弱,凋亡增强,ET-1和iNOS mRNA表达升高;下调PTX3表达能够减弱AngⅡ引起的HUVECs损伤,促进HUVECs增殖,抑制凋亡,并下调ET-1和iNOS mRNA表达。结论 PTX3在AngⅡ刺激后HUVECs中表达升高,下调其表达可抑制AngⅡ诱导的细胞凋亡及血管活性物质的分泌。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2019年09期）
余玲玲[7]（2019）在《HSP22抑制线粒体活性氧合成对抗高糖诱导内皮细胞损伤的机制研究》一文中研究指出第1章引言2型糖尿病(Type 2 diabetes,T2D)是一种慢性炎症进展性疾病,可诱发多种微血管和大血管相关的并发症,如动脉粥样硬化,糖尿病肾病,糖尿病视网膜病变和心血管相关疾病等。其中,内皮细胞损伤和炎症应答是引起糖尿病并发症发生发展的关键。但是,T2D诱导的内皮细胞功能障碍分子机制至今仍未完全阐明。内皮细胞活化(Endothelial cells activation)是血管损伤的启动环节。研究发现,内皮细胞活化后诱导产生的细胞间粘附分子-1(Intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)和血管细胞粘附分子-1(Vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)可促进单核细胞粘附发生,同时促进炎症因子释放和破坏内皮细胞完整性,随后,平滑肌细胞增殖和迁移,最终引起血管功能障碍并诱发各种血管相关疾病,如动脉粥样硬化。此外,近年来研究证实,高糖通过诱导内皮细胞活化并释放各种炎症因子促进血管损伤。线粒体是一种高活跃的细胞器,参与多种生物进程,如能量代谢,活性氧(Reactive oxygen species,ROS)产生,炎症反应和细胞死亡等。近年来,越来越多的研究发现,线粒体活性氧(Mitochondrial reactive oxygen species,mtROS)是高糖介导内皮细胞内超氧化物阴离子产生的主要来源,过度的mtROS形成通过损害线粒体动态平衡引起内皮细胞损伤及相关并发症发生。有趣的是,mtROS还是细胞内重要的信号分子,可激活细胞内多种炎症相关转录因子,例如激活蛋白-1(Activator protein-1,AP-1)和NFκB,进而促进炎症因子释放并加重细胞的损伤,如Yang等在动脉粥样硬化模型中发现mtROS产生可促进内皮细胞活化和相关细胞因子释放。因此,抑制高糖刺激的内皮细胞mtROS产生可能减少糖尿病血管损伤和并发症,这对糖尿病后期并发症的防治具有重要意义。热休克蛋白22(Heat shock protein22,HSP22)属于小分子热休克蛋白(Small heat shock proteins,sHSPs)家族成员,应激和有害刺激可诱导其升高,并通过对抗氧化应激和炎症减少细胞损伤。虽然研究报道HSP22在糖尿病肾脏和心脏组织中上调,但尚不清楚HSP22是否可以对抗高糖刺激引起的血管内皮细胞损伤~([1,2])。因此,本研究中我们将探讨高糖环境下,HSP22能否通过降低mtROS合成保护血管内皮细胞。于是,我们提出如下假说:高糖环境下,HSP22通过抑制mtROS合成减少内皮细胞活化和炎症应答,最终降低血管损伤。为了验证我们的假说,在体实验我们采用高脂喂养和链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)腹腔内注射的方法构建T2D小鼠模型,体外实验采用高糖干预人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),同时过表达或干扰HSP22表达,探讨HSP22在糖尿病血管损伤中的作用。第2章高糖诱导血管内皮损伤和热休克蛋白22(HSP22)表达升高目的:探讨高糖诱导血管内皮细胞活化和损伤过程中HSP22是否表达。方法:1)采用高脂饲养和STZ注射构建T2D小鼠模型,即糖尿病组(Diabetes),并分别以基础饮食和高脂饮食设置为正常对照组(Control)和高脂对照组(High fat control,HF-control)。每隔4周测量小鼠体重和血糖,小鼠空腹血糖>200 mg/dl为T2D模型构建成功。2)小鼠主动脉切片行苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色,免疫组化分析ICAM-1、VCAM-1和HSP22蛋白表达。3)小鼠炎症因子抗体芯片实验检测血清中炎症因子变化。4)RT-PCR检测小鼠主动脉中炎症因子和HSP22mRNA表达。5)30mM高糖刺激HUVECs构建高糖损伤模型(High glucose,HG),并分别以5mM低糖干预(Normal glucose,NG)和30mM甘露醇干预(Osmotic control,OC)为对照组。Cell counting kit-8(CCK-8)试剂盒检测内皮细胞活性;乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)释放实验用于检测细胞内毒性,明确高糖模型是否构建成功。6)单核细胞粘附实验分别检测NG、OC和HG叁组细胞粘附能力;RT-PCR分别检测叁组细胞内粘附分子(ICAM-1和VCAM-1)表达和炎症因子水平。7)免疫荧光、RT-PCR和Western blot实验分别检测高糖诱导内皮细胞中HSP22表达情况。结果:1)每4周监测小鼠体重和空腹血糖变化。发现模型组小鼠空腹血糖较Control组和HF-control组显着升高(P<0.05),而体重较Control组和HF-control组降低,提示T2D小鼠模型构建成功。2)主动脉HE染色结果提示,Control组主动脉的细胞排列较整齐,细胞核大小均一,胞浆染色均匀;HF-control组细胞排列稍紊乱,细胞核大小稍不规则,小部分胞浆深染;Dibetes组细胞排列紊乱,细胞核大小不规则,纤维断裂明显,胞浆深染。分析免疫组化结果发现,相比于Control组和HF-control组,Diabetes组小鼠主动脉粘附分子(ICAM-1和VCAM-1)表达明显增加(P<0.05)。3)小鼠炎症因子抗体芯片实验发现,Diabetes组小鼠血清中炎症因子表达明显高于Control组和HF-control组,特别是IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1表达(P<0.05)。RT-PCR进一步检测小鼠主动脉中IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1表达,发现Diabetes组炎症因子表达均明显高于Control组和HF-control组(P<0.05)。4)免疫组化和RT-PCR检测主动脉中HSP22表达,发现Diabetes组中HSP22表达明显高于Control组和HF-control组(P<0.05)。5)相比于NG和OC组,HG组内皮细胞活性明显降低(P<0.05),而细胞毒性明显增加(P<0.05)。6)相比于NG和OC组,HG组内皮细胞粘附单核细胞的数量明显增加(P<0.05);HG组中粘附分子(ICAM-1和VCAM-1)和炎症因子(IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1)表达也明显高于NG和OC对照组(P<0.05)。7)免疫荧光检测HG组内皮细胞中HSP22表达,发现HG组中HSP22表达明显高于NG和OC对照组(P<0.05),而内皮标志蛋白CD31表达明显较NG和OC对照组低(P<0.05)。RT-PCR和Western blot检测均发现HG组中内皮细胞HSP22表达高于NG和OC组(P<0.05)。结论:1)成功构建高糖损伤模型,明确长期高糖刺激引起内皮细胞活化和血管损伤。2)高糖刺激促进血管内皮细胞中HSP22上调。第3章HSP22抑制高糖诱导的血管内皮细胞活化和损伤目的:探讨HSP22能否抑制内细胞活化、炎症应答和血管损伤。方法:1)分别构建HSP22过表达质粒和HSP22干扰片段转染HUVECs细胞,同时给予细胞高糖干预,通过高表达或沉默HSP22蛋白表达,明确HSP22在高糖诱导内皮细胞损伤中的作用。过表达HSP22实验分组:低糖+空白对照组(NG+Non)、低糖+阴性对照组(NG+NC)、低糖+HSP22过表达组(NG+HSP22)、高糖+空白对照组(HG+Non)、高糖+阴性对照组(HG+NC)、高糖+HSP22过表达组(HG+HSP22);沉默HSP22实验分组:低糖+空白对照组(NG+Non)、低糖+阴性对照RNA组(NG+NC si)、低糖+HSP22 si RNA组(NG+HSP22 si)、高糖+空白对照组(HG+Non)、高糖+阴性对照RNA组(HG+NC si)、高糖+HSP22si RNA组(HG+HSP22 si)。2)Western blot检测各组HSP22表达,明确过表达和沉默HSP22细胞模型是否构建成功。3)CCK-8和LDH分别检测各组细胞活性和毒性变化;单核细胞粘附实验检测各组内皮细胞粘附能力;RT-PCR检测各组细胞内粘附分子(ICAM-1、VCAM-1)和炎症因子(IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1)表达。4)分别构建过表达(Transgene,TG)和敲除(Knock out,KO)HSP22转基因小鼠T2D模型,在体实验验证HSP22在糖尿病血管损伤中的作用。TG-HSP22实验分组:野生型正常对照组(WT-control)、野生型糖尿病组(WT-diabetes)、HSP22G过表达正常对照组(TG-control)、HSP22过表达糖尿病组组(TG-diabetes);KO-HSP22实验分组:野生型正常对照组(WT-control)、野生型糖尿病组(WT-diabetes)、HSP22敲除正常对照组(KO-control)、HSP22敲除糖尿病组组(KO-diabetes)。5)每4周测量小鼠体重和空腹血糖确定T2D模型是否构建成功;免疫组化和RT-PCR检测HSP22在小鼠主动脉中表达,并明确TG-HSP22和KO-HSP22小鼠是否构建成功。6)小鼠主动脉切片行HE染色,免疫组化分析主动脉中粘附分子(ICAM-1和VCAM-1)表达。7)RT-PCR检测各组小鼠主动脉内皮IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1表达。结果:1)相比于NG+NC组,NG+HSP22组内皮细胞中HSP22表达明显升高(P<0.05);相比于HG+NC组,HG+HSP22组内皮细胞中HSP22表达进一步升高(P<0.05),提示过表达HSP22细胞模型构建成功。相比于NG+NC si组,NG+HSP22 si组内皮细胞中HSP22表达明显降低(P<0.05);相比于HG+NC si组,HG+HSP22 si组内皮细胞HSP22表达亦明显降低(P<0.05),提示沉默HSP22细胞模型构建成功。2)相比于NG+NC组,HG+NC组细胞活性明显降低,而细胞毒性明显增加(P<0.05);而相比于HG+NC组,HG+HSP22组细胞活性明显增加,细胞毒性降低(P<0.05)。沉默HSP22后得到相反的结果,相比于NG+NC si组,HG+NC si组细胞活性降低而细胞毒性增加(P<0.05);相比于HG+NC si组,HG+HSP22si组内皮细胞活性进一步降低,细胞毒性进一步增加(P<0.05)。3)单核细胞粘附实验提示,相比于NG+NC组,HG+NC组内皮细胞粘附程度增加(P<0.05);而相比于HG+NC组,HG+HSP22组细胞粘附程度显着降低(P<0.05)。沉默HSP22后得到相反的结果,相比于NG+NC si组,HG+NC si组内皮细胞粘附程度增加(P<0.05);相比于HG+NC si组,HG+HSP22 si组内皮细胞粘附程度进一步增加(P<0.05)。4)RT-PCR分别检测各组粘附分子(ICAM-1和VCAM-1)和炎症因子(IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1)表达,相比于NG+NC组,HG+NC组内皮细胞粘附分子(ICAM-1和VCAM-1)和炎症因子(IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1)水平均明显升高(P<0.05);而HG+HSP22组细胞粘附分子(ICAM-1和VCAM-1)和炎症因子(IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1)水平均明显低于HG+NC组(P<0.05)。相比于NG+NC si组,HG+NC si组内皮细胞粘附分子(ICAM-1和VCAM-1)和炎症因子(IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1)水平均明显升高(P<0.05);HG+HSP22 si组内皮细胞粘附分子(ICAM-1和VCAM-1)和炎症因子(IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1)表达较HG+NC si进一步升高(P<0.05)。5)每4周监测小鼠体重和空腹血糖变化。结果发现,TG-diabetes组小鼠血糖和WT-diabetes组相比无明显差异,但均高于TG-control组和WT-control组(P<0.05);相比于WT-control组,WT-diabetes组小鼠体重明显下降(P<0.05);但TG-diabetes组小鼠体重下降明显低于WT-diabetes组(P<0.05)。相比于KO-control组和WT-control组,KO-diabetes组小鼠和WT-diabetes组小鼠血糖明显升高,而体重均明显降低(P<0.05);但KO-diabetes组小鼠和WT-diabetes组小鼠血糖和体重比较均无明显差异。6)免疫组化检测各组主动脉HSP22表达,发现WT-diabetes组HSP22表达明显高于WT-control组(P<0.05);而TG-diabetes组小鼠主动脉中HSP22表达进一步升高(P<0.05)。相比于WT-diabetes组,KO-diabetes组主动脉中HSP22表达明显下降(P<0.05)。7)HE染色检测发现,TG-diabetes组小鼠主动脉形态较WT-diabetes组更有规则,表现为细胞排列更整齐,细胞核大小更均一,胞浆染色更均匀,且少见纤维断裂;KO-diabetes组小鼠主动脉形态较WT-diabetes组更无规则,细胞排列更紊乱,细胞核大小均一性更差,胞浆染色不均匀,且纤维断裂更明显。免疫组化结果提示,WT-diabetes组ICAM-1和VCAM-1表达高于WT-control组(P<0.05);TG-diabetes组小鼠ICAM-1和VCAM-1表达明显低于WT-diabetes(P<0.05);而KO-diabetes组主动脉内皮细胞中ICAM-1和VCAM-1表达明显高于WT-diabetes组(P<0.05)。8)RT-PCR进一步检测小鼠主动脉中IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1表达,发现相比于WT-control组,WT-diabetes组IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1表达明显增加(P<0.05);相比于WT-diabetes组,TG-diabetes组小鼠IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1表达明显降低(P<0.05);而KO-diabetes组主动脉中IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1表达明显高于WT-diabetes组(P<0.05)。结论:1)高糖环境下,过表达HSP22显着抑制内皮细胞活化和炎症应答,进而减少血管损。2)高糖环境下,沉默HSP22加重内皮细胞活化和炎症应答,最终增加血管损伤。第4章高糖诱导血管内皮细胞氧化应激、mt ROS产生和线粒体损伤目的:研究高糖诱导血管内皮细胞mt ROS合成和和线粒体功能障碍。方法:1)动物实验分组如第2章,分别为Control对照组、HF-control组和Diabetes组。2)各组小鼠主动脉的切片用超氧化物阴离子荧光探针(Dihydroethidium,DHE)染色。3)各组小鼠血清进行ELISA检查,评估血清中8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2’-deoxyguanosine,8-OHd G)水平。4)细胞实验分组如第2章,分别为NG对照组,OC对照组和HG组。5)将采用线粒体特异性探针mito SOX孵育,随后采用流式细胞术检测各组细胞内mt ROS合成水平。6)采用线粒体荧光探针mitotracker和膜电位探针JC-1孵育HUVECs,随后采用激光共聚焦荧光显微镜观察各组细胞线粒体的形态和膜电位变化。结果:1)相比于Control组和HF-control组,Diabetes组小鼠主动脉中ROS水平显着升高(P<0.05)。2)相比于Control组和HF-control组,Diabetes组小鼠血清中8-OHd G水平明显升高(P<0.05)。3)Mito SOX检测细胞内皮mt ROS水平,发现HG组内皮细胞中mt ROS水平明显高于NG和OC组(P<0.05)。4)线粒体探针mitotracker检测线粒体形态,发现HG组内皮细胞线粒体荧光密度明显弱于NG和OC组(P<0.05);JC-1检测线粒体的膜电位,发现相比于NG和OC组,HG组细胞线粒体的膜电位更低(P<0.05)。结论:1)糖尿病小鼠血管中氧化应激水平明显增强。2)高糖刺激促进血管内皮细胞中mt ROS产生和线粒体功能障碍。第5章HSP22抑制高糖诱导血管内皮细胞氧化应激、mt ROS产生和线粒体损伤目的:探讨HSP22能否抑制高糖诱导的mt ROS形成和线粒体功能障碍。方法:1)细胞实验分组如第3章,分别为过表达HSP22实验分组:低糖+空白对照组(NG+Non)、低糖+阴性对照组(NG+NC)、低糖+HSP22过表达组(NG+HSP22)、高糖+空白对照组(HG+Non)、高糖+阴性对照组(HG+NC)、高糖+HSP22过表达组(HG+HSP22);沉默HSP22实验分组:低糖+空白对照组(NG+Non)、低糖+阴性对照RNA组(NG+NC si)、低糖+HSP22 si RNA组(NG+HSP22 si)、高糖+空白对照组(HG+Non)、高糖+阴性对照RNA组(HG+NC si)、高糖+HSP22 si RNA组(HG+HSP22 si)。2)采用线粒体特异性荧光探针mito SOX孵育HUVECs,随后对每组细胞mt ROS水平进行流式细胞术分析。3)采用线粒体探针mitotracker和膜电位探针JC-1孵育HUVECs,随后激光共聚焦显微镜观察各组细胞线粒体的形态和膜电位变化。4)动物实验分组如第3章,分别为TG-HSP22实验分组:野生型正常对照组(WT-control)、野生型糖尿病组(WT-diabetes)、HSP22G过表达正常对照组(TG-control)、HSP22过表达糖尿病组组(TG-diabetes);KO-HSP22实验分组:野生型正常对照组(WT-control)、野生型糖尿病组(WT-diabetes)、HSP22敲除正常对照组(KO-control)、HSP22敲除糖尿病组组(KO-diabetes)。5)各组小鼠主动脉的切片行DHE染色检测ROS水平。6)各组小鼠血清进行ELISA检查,评估血清中8-OHd G水平。结果:1)相比于NG+NC组,HG+NC组细胞内mt ROS水平明显增加(P<0.05);相比于HG+NC组,HG+HSP22组细胞内mt OS水平明显降低(P<0.05)。沉默HSP22后得到相反的结果,相比于NG+NC si组,HG+NC si组内皮细胞内mt ROS水平明显增加(P<0.05);相比于HG+NC si组,HG+HSP22 si组内内mt ROS水平进一步升高(P<0.05)。2)Mitotracker染色观察线粒体形态变化,发现相比于NG+NC组,HG+NC组线粒体荧光密度明显降低(P<0.05);而相比于HG+NC组,HG+HSP22组线粒体荧光密度明显增加(P<0.05)。沉默HSP22后得到相反的结果,相比于NG+NC si组,HG+NC si组线粒体荧光密度明显降低(P<0.05);而相比于HG+NC si组,HG+HSP22 si组内线粒体荧光密度进一步降低(P<0.05)。3)JC-1检测线粒体膜电位,相比NG+NC组,HG+NC组线粒体膜电位明显降低(P<0.05);而HG+HSP22组细胞内线粒体膜电位明显增加(P<0.05)。相比于NG+NC si组,HG+NC si组内皮细胞线粒体膜电位明显降低(P<0.05);HG+HSP22 si组细胞线粒体膜电位较HG+NC si进一步降低(P<0.05)。4)相比于WT-control组,WT-diabetes组小鼠主动脉中ROS水平显着升高(P<0.05);而TG-diabetes组小鼠主动脉中ROS水平明显低于WT-diabetes(P<0.05);KO-diabetes组小鼠主动脉内皮细胞中ROS水平则较WT-diabetes组明显升高(P<0.05)。5)相比于WT-control组,WT-diabetes组小鼠血清中8-OHd G水平明显升高(P<0.05);相比于WT-diabetes组,TG-diabetes组小鼠血清中8-OHd G水平显着降低(P<0.05);而KO-diabetes组小鼠血清8-OHd G水平较WT-diabetes组进一步升高(P<0.05)。结论:1)过表达HSP22抑制高糖刺激内皮细胞mt ROS产生和线粒体功能障碍。2)沉默HSP22后促进高糖诱导内皮细胞mt ROS产生和线粒体功能障碍。第6章HSP22通过抑制高糖介导mt ROS产生减少内皮细胞活化和损伤目的:探讨HSP22是否能通过抑制mt ROS产生减少高糖诱导内皮细胞活化和损伤。方法:1)HSP22干扰片段转染HUVECs细胞,同时给予Mito TEMPP和高糖干预细胞,明确HSP22通过抑制mt ROS合成减少高糖诱导内皮细胞活化和损伤。实验分组:低糖+阴性对照组(NG+NC)、高糖+阴性对照组(HG+NC)、高糖+阴性对照+Mito TEMPO组(HG+NC+Mito TEMPO)、高糖+HSP22沉默组(HG+si RNA-HSP22)、高糖+HSP22沉默+Mito TEMPO组(HG+si RNAHSP22+Mito TEMPO)。2)CCK-8和LDH分别检测各组细胞活性和毒性变化;单核细胞粘附实验检测各组内皮细胞粘附能力;RT-PCR检测各组细胞内粘附分子(ICAM-1、VCAM-1)和炎症因子(IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1)表达。3)采用线粒体特异性探针mito SOX孵育HUVECs,随后流式细胞术分析各组细胞mt ROS水平。4)采用线粒体探针mitotracker和膜电位探针JC-1孵育HUVECs,随后激光共聚焦显微镜观察各组细胞线粒体的形态和膜电位变化。5)ATP试剂盒检测各组细胞内ATP水平;Western blot检测各组线粒体分裂蛋白DRP1和p-DRP1的表达。结果:1)与NG+NC组相比,HG+NC组细胞活性显着降低,而细胞毒性明显增加(P<0.05);而HG+NC+Mito TEMPO组细胞活性较HG+NC组明显增加,细胞毒性则降低(P<0.05);HG+si RNA-HSP22+Mito TEMPO组内皮细胞活性较HG+NC+Mito TEMPO组明显降低,而细胞毒性增加(P<0.05);但HG+si RNA-HSP22+Mito TEMPO组较HG+si RNA-HSP22组细胞活性增加和细胞毒性降低(P<0.05)。2)相比于NG+NC组,HG+NC组内皮细胞粘附程度和粘附分子(ICAM-1和VCAM-1)表达增加(P<0.05);而相比于HG+NC组,HG+NC+Mito TEMPO组细胞粘附程度和粘附分子(ICAM-1和VCAM-1)表达均显着降低(P<0.05)。相比于HG+si RNA-HSP22组,HG+si RNA-HSP22+Mito TEMPO组单核细胞粘附能力和粘附分子(ICAM-1和VCAM-1)表达降低(P<0.05);而HG+si RNA-HSP22+Mito TEMPO组单核细胞粘附能力和粘附分子(ICAM-1和VCAM-1)表达高于HG+NC+Mito TEMPO组(P<0.05)。3)RT-PCR分别检测各组炎症因子IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1表达,相比NG+NC组,HG+NC组细胞内炎症因子(IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1)水平均明显升高(P<0.05);相比于HG+NC组,HG+NC+Mito TEMPO组细胞内炎症因子(IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1)水平明显降低(P<0.05);HG+si RNA-HSP22+Mito TEMPO组内皮细胞中炎症因子(IL5,IL6,IL13,Mip3a和TGFβ1)表达较HG+NC+Mito TEMPO组显着升高(P<0.05),但低于HG+si RNAHSP22组(P<0.05)。4)相比于NG+NC组,HG+NC组细胞内mt ROS水平明显增加(P<0.05);相比于HG+NC组,HG+NC+Mito TEMPO组细胞内mt ROS水平明显降低(P<0.05);相比于HG+NC+Mito TEMPO组,HG+si RNA-HSP22+Mito TEMPO组细胞内mt ROS水平增加(P<0.05);但HG+si RNA-HSP22+Mito TEMPO组细胞内mt ROS水平明显低于HG+si RNA-HSP22组(P<0.05)。5)Mitotracker染色观察线粒体形态变化,发现相比于NG+NC组,HG+NC组线粒体荧光密度明显降低(P<0.05);而相比于HG+NC组,HG+NC+Mito TEMPO组线粒体荧光密度明显增加(P<0.05);相比于HG+NC+Mito TEMPO组,HG+si RNA-HSP22+Mito TEMPO组线粒体荧光密度降低(P<0.05);但相比于HG+si RNA-HSP22组,HG+si RNA-HSP22+Mito TEMPO组内线粒体荧光密度增加(P<0.05)。6)JC-1检测线粒体膜电位,相比NG+NC组,HG+NC组线粒体膜电位明显降低(P<0.05);而HG+NC+Mito TEMPO组细胞内线粒体膜电位较HG+NC组增加(P<0.05);相比于HG+NC+Mito TEMPO组,HG+si RNA-HSP22+Mito TEMPO组内皮细胞线粒体膜电位明显降低(P<0.05);但HG+si RNA-HSP22组细胞线粒体膜电位较HG+si RNA-HSP22+Mito TEMPO组进一步降低(P<0.05)。7)相比于NG+NC组,HG+NC组ATP水平明显降低(P<0.05);而HG+NC+Mito TEMPO组细胞内ATP水平较HG+NC组增加(P<0.05);相比于HG+NC+Mito TEMPO组,HG+si RNA-HSP22+Mito TEMPO组内皮细胞ATP水平明显降低(P<0.05);但HG+si RNA-HSP22组细胞ATP水平较HG+si RNA-HSP22+Mito TEMPO组进一步降低(P<0.05)。8)相比于NG+NC组,HG+NC组p-DRP1/DRP1水平明显升高(P<0.05);而HG+NC+Mito TEMPO组细胞内p-DRP1/DRP1水平较HG+NC组降低(P<0.05);相比于HG+NC+Mito TEMPO组,HG+si RNA-HSP22+Mito TEMPO组内皮细胞p-DRP1/DRP1水平明显增加(P<0.05);但HG+si RNA-HSP22组细胞内p-DRP1/DRP1水平较HG+si RNA-HSP22+Mito TEMPO组进一步升高(P<0.05)。结论:1)HSP22通过抑制高糖介导的mt ROS产生来减少内皮细胞活化和炎症应答。2)Mito TEMPO减轻高糖环境下HSP22缺乏引起的内皮细胞mt ROS产生和线粒体功能障碍。第7章总结本研究中,我们证实在高糖环境下,HSP22通过抑制内皮-单核细胞粘附和炎症因子释放减少内皮细胞活化和炎症反应,最终降低血管损伤。此外,HSP2可抑制高糖环境下内皮细胞氧化应激,减少细胞内mt ROS产生和线粒体功能障碍。我们进一步探讨HSP22抑制高糖诱导内皮细胞损伤的分子机制,发现HSP22可通过抑制mt ROS合成,减少内皮细胞活化和炎症应答,进而降低血管内皮细胞损伤。总之,我们在本研究中探索了HSP22在糖尿病血管损伤中的作用及其分子机制,这将为糖尿病并发症的防治提供新思路和新靶点。(本文来源于《南昌大学》期刊2019-05-01）
陈爱凤,丁士标,林旭瑷,孔亮亮,徐俭朴[8]（2019）在《红花注射液对野百合碱损伤血管内皮细胞NO活性、内皮型NO合成酶及结缔组织生长因子表达的影响》一文中研究指出目的探讨红花注射液对野百合碱(MCT)损伤的血管内皮细胞一氧化氮(NO)产生、内皮型NO合成酶(e NOS及结缔组织生长因子(CTGF)表达及活性的影响。方法人血管内皮细胞(HUVECs)分为空白对照组、MCT组、红花注射液组。以CCK-8法检测红花注射液对HUVECs增殖的抑制作用,硝酸还原酶法检测NO含量,荧光定量PCR和Western blot法检测e NOS和CTGF的mRNA和蛋白表达情况。结果红花注射液有效抑制HUVECs增殖,呈浓度依赖性。与空白对照组相比,MCT组e NOS表达降低,NO生成降低(均P<0.05),而CTGF表达增加(P<0.05);与MCT组比较,红花注射液组e NOS活性及NO的生成均增加(均P<0.05),而CTGF表达降低(P<0.05)。结论红花注射液可促进MCT损伤的血管内皮细胞e NOS活性增加及NO产生,抑制CTGF的表达和分泌。(本文来源于《心电与循环》期刊2019年02期）
丁玉梅[9]（2019）在《5种不同中药组合对血管内皮细胞生物活性的影响》一文中研究指出目的比较5种不同中药组合对人微血管内皮细胞株(HMEC-1)生物活性的影响,为抗肿瘤血管形成复方中药的研制提供依据。方法设置7个组,A组(阴性对照组)为生理盐水,B_1组为藤黄酸+人参皂苷Rg3+斑蝥素,B_2组为藤黄酸+人参皂苷Rg3+青蒿琥脂,B_3组为斑蝥素+人参皂苷Rg3+青蒿琥脂,B_4组为藤黄酸+人参皂苷Rg3,B_5组为藤黄酸+苦参碱,C组(阳性对照组)为沙利度胺。药物浓度:藤黄酸为20μg/mL,去甲斑蝥素为20μg/mL,人参皂苷Rg3为100μg/mL,青蒿琥脂为150μg/mL,苦参碱为100μg/mL,沙利度胺为50μg/mL。每孔加每种药物100μL,每组设6个复孔。比较每组HMEC-1细胞增殖、黏附、迁移、体外血管形成能力。结果 5种不同中药组合中,藤黄酸+人参皂苷Rg3+斑蝥素组合抑制血管内皮细胞增殖、黏附、迁移、体外血管形成效果最好,其次是藤黄酸+人参皂苷Rg3+青蒿琥脂组合,第3是人参皂苷Rg3+斑蝥素+青蒿琥脂组合,第4是藤黄酸+人参皂苷Rg3组合,第5是藤黄酸+苦参碱组合,与生理盐水组比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论藤黄酸+人参皂苷Rg3+斑蝥素组合具有较强的抑制血管内皮细胞生物学活性的效果。(本文来源于《河南医学研究》期刊2019年01期）
陈芋丹,周红,何超,王婷,张贵婷[10]（2019）在《氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体复合物促进人脐静脉内皮细胞活性氧生成并诱导其凋亡》一文中研究指出目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/aβ2GPI)复合物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响以及ROS活性氧(ROS)在其中的作用。方法分别用β2GPI、 aβ2GPI、β2GPI/aβ2GPI复合物、 oxLDL、 oxLDL/β2GPI复合物、 oxLDL/β2GPI/兔IgG(R-IgG)复合物、 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物刺激HUVEC,利用Western blot法检测凋亡相关蛋白BAX、 Bcl2和裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白水平;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡率、二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)标记结合流式细胞术检测细胞ROS水平; CCK-8法检测各处理组对HUVEC活力的影响;采用抗氧化剂罗布麻宁(apocynin)或二苯基碘氯化物(DPI)预处理后观察ROS水平的改变以及对oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导的HUVEC凋亡的影响。结果 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物能显着降低HUVEC的活力,增加细胞BAX、 c-caspase-3蛋白水平,降低Bcl2蛋白水平,促进HUVEC凋亡; oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物引起细胞ROS水平升高,抗氧化剂处理后,细胞内ROS水平降低,细胞凋亡减少。结论 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物可以通过提高ROS来诱导HUVEC凋亡。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2019年03期）
内皮细胞活性论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:从分子生物学水平探讨强脉冲光和长脉宽1 064nmNd:YAG激光治疗血管瘤的机制。方法:使用不同能量强脉冲光和长脉宽1 064nmNd:YAG激光对婴儿血管瘤血管内皮细胞进行体外照射,照射后测量不同时间点细胞OD值,并进行比较。结果:强脉冲光组照射后,在同一时间点能量越高,体外培养血管瘤内皮细胞OD值越低,表明照射后存活细胞数减少,差异具有统计学意义(P<0.05),在所有测试时间点均呈现相同的改变趋势。Nd:YAG组照射后,在同一时间点,不同能量显示相同的变化趋势。在同一能量组,不同时间点的变化趋势有所不同。结论:强脉冲光和Nd:YAG激光对于血管瘤的抑制作用除了"选择性光热作用"外,还通过影响血管瘤内皮细胞的生长发挥抑制作用,并且影响程度在一定范围内受到能量和时间的影响。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
内皮细胞活性论文参考文献
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