本文主要研究内容
作者王秋菊（2019）在《泰山松花粉多糖抗急性致瘤性ALV-J及相关肿瘤作用机制的初步研究》一文中研究指出：J亚群禽白血病病毒（Subgroup J avian leucosis virus,ALV-J）是危害养鸡业的重要病毒之一,感染鸡发生免疫抑制、恶性肿瘤等,严重妨碍了养鸡业的健康发展,造成了巨大经济损失。近年来,由携带v-fps肿瘤基因的急性致瘤性ALV-J病毒感染、诱发的急性纤维肉瘤日趋流行,给养鸡业带来了新的挑战。泰山松花粉多糖（Taishan pinus Massoniana pollen polysaccharide,TPPPS）是一种天然植物大分子,前期研究发现TPPPS具有良好的免疫调节和抗病毒活性。本论文对TPPPS抗急性致瘤性ALV-J及相关肿瘤的作用机制进行了研究,以急性致瘤性ALV-J的Fu-J（SDAU1005）株为研究对象,分别建立体外和体内研究模型,检测分析TPPPS对Fu-J（SDAU1005）复制和肿瘤生长的抑制作用,以及对脾脏淋巴细胞的免疫调节活性,探讨TPPPS免疫调节及抗病毒和抗肿瘤作用机制。1.TPPPS体外抗病毒活性研究本研究首先分别将50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL的TPPPS作用于接种Fu-J（SDAU1005）的DF-1细胞,采用ELISA和qRT-PCR方法检测病毒含量,分析TPPPS对Fu-J（SDAU1005）的抑制作用。结果表明,不同浓度TPPPS均具有抑病毒作用,且具有剂量依赖性,200μg/mL作用效果最为显著,但与100μg/mL差异不显著。进一步,将100μg/mL的TPPPS作用于接种Fu-J（SDAU1005）的DF-1细胞,采用qRT-PCR和IFA检测细胞中Fu-J和SDAU1005病毒的含量,分析TPPPS在Fu-J（SDAU1005）感染DF-1细胞不同时期的抑病毒作用,探讨TPPPS对病毒感染DF-1细胞生长和迁移的作用。结果表明,TPPPS可以通过影响病毒的吸附与释放而发挥抑病毒作用,并且抑制病毒感染的DF-1细胞生长和迁移。2.TPPPS对脾脏淋巴细胞免疫调节活性研究为研究TPPPS对脾脏淋巴细胞的免疫调节活性,选取不同浓度TPPPS和Fu-J（SDAU1005）同时作用于脾脏淋巴细胞,采用MTT法、流式细胞术和ELISA方法,检测分析脾脏淋巴增殖、细胞亚群以及细胞内第二信使Ca2+、cAMP、cGMP、PKC、PKA、Calcineurin和NFAT等细胞内转导信号含量。结果显示,与病毒组和对照组相比,TPPPS能促进脾脏T、B淋巴细胞增殖,CD4+/CD8+比值升高,CD3+、CD4+、CD8+、IL-2、IL-4、IFN-γ、IgG、Ca2+、cAMP、cGMP、PKC、PKA、Calcineurin和NFAT的含量增加。结果表明,TPPPS能够激活脾脏淋巴细胞NO-cGMP、cAMP-PKA、Ca2+-PKC-Calcineurin-NFAT等信号转导通路,对脾脏淋巴细胞具有良好的免疫调节活性。3.TPPPS体内抗病毒和抗肿瘤活性研究为研究TPPPS对病毒复制和肿瘤生长的抑制作用,首先将100只1日龄SPF雏鸡随机分为5组,每组20只鸡,1-4组在每天分别口服1mg、3 mg、5 mg和10 mg TPPPS,5组作为对照组每天口服200μL的PBS,7日龄时各组腿部皮下接种104TCID50病毒液。接毒后每天观察、检测实验动物的临床症状和组织病理变化,持续观察检测20 d。结果表明,不同浓度的TPPPS在体内均具有抗肿瘤作用,且成剂量依赖性,10 mg TPPPS对肿瘤抑制效果最佳,但与5 mg差异不显著。进一步研究,将90只1日龄SPF鸡随机分为3组,V-TPPPS组、V-PBS组和PBS组,每组30只。V-TPPPS组每天口服5 mg TPPPS,V-PBS组和对照组每天口服200μL PBS,V-TPPPS组和V组在7日龄时分别经腿部皮下注射接种104TCID50 Fu-J（SDAU1005）,PBS组接种等体积的PBS。攻毒后每隔5 d采集肿瘤组织、肝脏、胸腺、法氏囊、脾脏和血液,采用qRT-PCR,检测肿瘤组织和血浆中Fu-J和SDAU1005病毒含量,HE染色检测各器官的病理组织学变化。结果显示,与V-PBS组相比V-TPPPS组肿瘤组织和血浆中的病毒含量显著降低,病理组织损伤程度减轻。结果表明,TPPPS体内具有显著的抗病毒和抗肿瘤作用,并可以减轻病毒对组织器官的损伤。4.TPPPS体内抗病毒和抗肿瘤作用转录组学分析采用高通量测序技术,对攻毒后第10 d V-TPPPS组和V-PBS组的腿部肿瘤组织和PBS组实验动物的腿部肌肉组织进行转录组测序,分析比较差异表达mRNA和miRNA及相关信号通路。分析结果,与PBS组相比V-PBS组有6201个DEGs发生了2倍以上的差异表达,其中3183个上调表达,3018个下调表达,DEGs主要富集在P13K-AKT信号通路、MAPK信号通路、P53信号通路、Rap1信号通路、NF-κB信号通路催产素信号通路和粘着斑信号通路等病毒的致病性有关通路。与V-PBS组相比V-TPPPS组有560个DEGs差异倍数在1.5倍以上,其中321个上调表达,239个下调表达,免疫相关基因主要为上调表达,肿瘤相关基因主要为下调表达。DEGs参与调节的信号通路包括T细胞受体信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用、趋化因子信号通路、MAPK信号通路、雌激素信号通路、P13K-Akt信号通路、Ras信号通路、JAK-STAT信号通路、NF-κB信号通路和内质网中的蛋白质加工等免疫调节和肿瘤调节相关通路。与V-PBS组相比V-TPPPS组只有2个差异miRNA,1个上调表达和1个下调表达。V-PBS组与PBS组相比有149个差异miRNA,其中82个上调表达,49个下调表达。差异miRNA靶基因预测与mRNA富集通路结果基本一致。结果表明,TPPPS在体内可以升高免疫相关基因的表达,下调肿瘤相关基因的表达,参与免疫调节相关和肿瘤相关信号通路的调节。miRNA参与了病毒的致病性调节,但是TPPPS在体内几乎不参与miRNA调控。选取13个免疫调节相关和9肿瘤调节相关的DEGs在肿瘤组织和细胞上进行进一步的验证。结果表明,TPPPS在体内和体外均可促进TLR2、TLR3、TLR4和CLEC2D受体基因以及PRF1、GZMA和CCL5等免疫相关基因的表达,下调HSP2、BAG3和DNAJN4等肿瘤基因的表达。通过以上研究分析,初步确定TPPPS在体内通过与受体结合激活免疫相关信号通路,抑制肿瘤相关的信号通路,从而发挥抗病毒和抗肿瘤作用。但是,对于他们之间的具体调控关系和相互作用机制还需要通过基因敲除、小RNA干扰、过表达和免疫共沉淀等进行进一步的验证。
Abstract
Jya qun qin bai xie bing bing du （Subgroup J avian leucosis virus,ALV-J）shi wei hai yang ji ye de chong yao bing du zhi yi ,gan ran ji fa sheng mian yi yi zhi 、e xing zhong liu deng ,yan chong fang ai le yang ji ye de jian kang fa zhan ,zao cheng le ju da jing ji sun shi 。jin nian lai ,you xie dai v-fpszhong liu ji yin de ji xing zhi liu xing ALV-Jbing du gan ran 、you fa de ji xing qian wei rou liu ri qu liu hang ,gei yang ji ye dai lai le xin de tiao zhan 。tai shan song hua fen duo tang （Taishan pinus Massoniana pollen polysaccharide,TPPPS）shi yi chong tian ran zhi wu da fen zi ,qian ji yan jiu fa xian TPPPSju you liang hao de mian yi diao jie he kang bing du huo xing 。ben lun wen dui TPPPSkang ji xing zhi liu xing ALV-Jji xiang guan zhong liu de zuo yong ji zhi jin hang le yan jiu ,yi ji xing zhi liu xing ALV-Jde Fu-J（SDAU1005）zhu wei yan jiu dui xiang ,fen bie jian li ti wai he ti nei yan jiu mo xing ,jian ce fen xi TPPPSdui Fu-J（SDAU1005）fu zhi he zhong liu sheng chang de yi zhi zuo yong ,yi ji dui pi zang lin ba xi bao de mian yi diao jie huo xing ,tan tao TPPPSmian yi diao jie ji kang bing du he kang zhong liu zuo yong ji zhi 。1.TPPPSti wai kang bing du huo xing yan jiu ben yan jiu shou xian fen bie jiang 50μg/mL、100μg/mLhe 200μg/mLde TPPPSzuo yong yu jie chong Fu-J（SDAU1005）de DF-1xi bao ,cai yong ELISAhe qRT-PCRfang fa jian ce bing du han liang ,fen xi TPPPSdui Fu-J（SDAU1005）de yi zhi zuo yong 。jie guo biao ming ,bu tong nong du TPPPSjun ju you yi bing du zuo yong ,ju ju you ji liang yi lai xing ,200μg/mLzuo yong xiao guo zui wei xian zhe ,dan yu 100μg/mLcha yi bu xian zhe 。jin yi bu ,jiang 100μg/mLde TPPPSzuo yong yu jie chong Fu-J（SDAU1005）de DF-1xi bao ,cai yong qRT-PCRhe IFAjian ce xi bao zhong Fu-Jhe SDAU1005bing du de han liang ,fen xi TPPPSzai Fu-J（SDAU1005）gan ran DF-1xi bao bu tong shi ji de yi bing du zuo yong ,tan tao TPPPSdui bing du gan ran DF-1xi bao sheng chang he qian yi de zuo yong 。jie guo biao ming ,TPPPSke yi tong guo ying xiang bing du de xi fu yu shi fang er fa hui yi bing du zuo yong ,bing ju yi zhi bing du gan ran de DF-1xi bao sheng chang he qian yi 。2.TPPPSdui pi zang lin ba xi bao mian yi diao jie huo xing yan jiu wei yan jiu TPPPSdui pi zang lin ba xi bao de mian yi diao jie huo xing ,shua qu bu tong nong du TPPPShe Fu-J（SDAU1005）tong shi zuo yong yu pi zang lin ba xi bao ,cai yong MTTfa 、liu shi xi bao shu he ELISAfang fa ,jian ce fen xi pi zang lin ba zeng shi 、xi bao ya qun yi ji xi bao nei di er xin shi Ca2+、cAMP、cGMP、PKC、PKA、Calcineurinhe NFATdeng xi bao nei zhuai dao xin hao han liang 。jie guo xian shi ,yu bing du zu he dui zhao zu xiang bi ,TPPPSneng cu jin pi zang T、Blin ba xi bao zeng shi ,CD4+/CD8+bi zhi sheng gao ,CD3+、CD4+、CD8+、IL-2、IL-4、IFN-γ、IgG、Ca2+、cAMP、cGMP、PKC、PKA、Calcineurinhe NFATde han liang zeng jia 。jie guo biao ming ,TPPPSneng gou ji huo pi zang lin ba xi bao NO-cGMP、cAMP-PKA、Ca2+-PKC-Calcineurin-NFATdeng xin hao zhuai dao tong lu ,dui pi zang lin ba xi bao ju you liang hao de mian yi diao jie huo xing 。3.TPPPSti nei kang bing du he kang zhong liu huo xing yan jiu wei yan jiu TPPPSdui bing du fu zhi he zhong liu sheng chang de yi zhi zuo yong ,shou xian jiang 100zhi 1ri ling SPFchu ji sui ji fen wei 5zu ,mei zu 20zhi ji ,1-4zu zai mei tian fen bie kou fu 1mg、3 mg、5 mghe 10 mg TPPPS,5zu zuo wei dui zhao zu mei tian kou fu 200μLde PBS,7ri ling shi ge zu tui bu pi xia jie chong 104TCID50bing du ye 。jie du hou mei tian guan cha 、jian ce shi yan dong wu de lin chuang zheng zhuang he zu zhi bing li bian hua ,chi xu guan cha jian ce 20 d。jie guo biao ming ,bu tong nong du de TPPPSzai ti nei jun ju you kang zhong liu zuo yong ,ju cheng ji liang yi lai xing ,10 mg TPPPSdui zhong liu yi zhi xiao guo zui jia ,dan yu 5 mgcha yi bu xian zhe 。jin yi bu yan jiu ,jiang 90zhi 1ri ling SPFji sui ji fen wei 3zu ,V-TPPPSzu 、V-PBSzu he PBSzu ,mei zu 30zhi 。V-TPPPSzu mei tian kou fu 5 mg TPPPS,V-PBSzu he dui zhao zu mei tian kou fu 200μL PBS,V-TPPPSzu he Vzu zai 7ri ling shi fen bie jing tui bu pi xia zhu she jie chong 104TCID50 Fu-J（SDAU1005）,PBSzu jie chong deng ti ji de PBS。gong du hou mei ge 5 dcai ji zhong liu zu zhi 、gan zang 、xiong xian 、fa shi nang 、pi zang he xie ye ,cai yong qRT-PCR,jian ce zhong liu zu zhi he xie jiang zhong Fu-Jhe SDAU1005bing du han liang ,HEran se jian ce ge qi guan de bing li zu zhi xue bian hua 。jie guo xian shi ,yu V-PBSzu xiang bi V-TPPPSzu zhong liu zu zhi he xie jiang zhong de bing du han liang xian zhe jiang di ,bing li zu zhi sun shang cheng du jian qing 。jie guo biao ming ,TPPPSti nei ju you xian zhe de kang bing du he kang zhong liu zuo yong ,bing ke yi jian qing bing du dui zu zhi qi guan de sun shang 。4.TPPPSti nei kang bing du he kang zhong liu zuo yong zhuai lu zu xue fen xi cai yong gao tong liang ce xu ji shu ,dui gong du hou di 10 d V-TPPPSzu he V-PBSzu de tui bu zhong liu zu zhi he PBSzu shi yan dong wu de tui bu ji rou zu zhi jin hang zhuai lu zu ce xu ,fen xi bi jiao cha yi biao da mRNAhe miRNAji xiang guan xin hao tong lu 。fen xi jie guo ,yu PBSzu xiang bi V-PBSzu you 6201ge DEGsfa sheng le 2bei yi shang de cha yi biao da ,ji zhong 3183ge shang diao biao da ,3018ge xia diao biao da ,DEGszhu yao fu ji zai P13K-AKTxin hao tong lu 、MAPKxin hao tong lu 、P53xin hao tong lu 、Rap1xin hao tong lu 、NF-κBxin hao tong lu cui chan su xin hao tong lu he nian zhao ban xin hao tong lu deng bing du de zhi bing xing you guan tong lu 。yu V-PBSzu xiang bi V-TPPPSzu you 560ge DEGscha yi bei shu zai 1.5bei yi shang ,ji zhong 321ge shang diao biao da ,239ge xia diao biao da ,mian yi xiang guan ji yin zhu yao wei shang diao biao da ,zhong liu xiang guan ji yin zhu yao wei xia diao biao da 。DEGscan yu diao jie de xin hao tong lu bao gua Txi bao shou ti xin hao tong lu 、xi bao yin zi -xi bao yin zi shou ti xiang hu zuo yong 、qu hua yin zi xin hao tong lu 、MAPKxin hao tong lu 、ci ji su xin hao tong lu 、P13K-Aktxin hao tong lu 、Rasxin hao tong lu 、JAK-STATxin hao tong lu 、NF-κBxin hao tong lu he nei zhi wang zhong de dan bai zhi jia gong deng mian yi diao jie he zhong liu diao jie xiang guan tong lu 。yu V-PBSzu xiang bi V-TPPPSzu zhi you 2ge cha yi miRNA,1ge shang diao biao da he 1ge xia diao biao da 。V-PBSzu yu PBSzu xiang bi you 149ge cha yi miRNA,ji zhong 82ge shang diao biao da ,49ge xia diao biao da 。cha yi miRNAba ji yin yu ce yu mRNAfu ji tong lu jie guo ji ben yi zhi 。jie guo biao ming ,TPPPSzai ti nei ke yi sheng gao mian yi xiang guan ji yin de biao da ,xia diao zhong liu xiang guan ji yin de biao da ,can yu mian yi diao jie xiang guan he zhong liu xiang guan xin hao tong lu de diao jie 。miRNAcan yu le bing du de zhi bing xing diao jie ,dan shi TPPPSzai ti nei ji hu bu can yu miRNAdiao kong 。shua qu 13ge mian yi diao jie xiang guan he 9zhong liu diao jie xiang guan de DEGszai zhong liu zu zhi he xi bao shang jin hang jin yi bu de yan zheng 。jie guo biao ming ,TPPPSzai ti nei he ti wai jun ke cu jin TLR2、TLR3、TLR4he CLEC2Dshou ti ji yin yi ji PRF1、GZMAhe CCL5deng mian yi xiang guan ji yin de biao da ,xia diao HSP2、BAG3he DNAJN4deng zhong liu ji yin de biao da 。tong guo yi shang yan jiu fen xi ,chu bu que ding TPPPSzai ti nei tong guo yu shou ti jie ge ji huo mian yi xiang guan xin hao tong lu ,yi zhi zhong liu xiang guan de xin hao tong lu ,cong er fa hui kang bing du he kang zhong liu zuo yong 。dan shi ,dui yu ta men zhi jian de ju ti diao kong guan ji he xiang hu zuo yong ji zhi hai xu yao tong guo ji yin qiao chu 、xiao RNAgan rao 、guo biao da he mian yi gong chen dian deng jin hang jin yi bu de yan zheng 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自山东农业大学的王秋菊，发表于刊物山东农业大学2019-07-08论文，是一篇关于多糖论文,转录组论文,免疫调节论文,信号通路论文,抗肿瘤论文,山东农业大学2019-07-08论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自山东农业大学2019-07-08论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。