一、脊髓损伤患者的免疫功能变化及意义（论文文献综述）
韩梦雨[1]（2021）在《中西医协同治疗视神经脊髓炎相关性视神经炎的应用研究》文中研究指明(一)视神经脊髓炎相关性视神经炎患者临床特点及疗效分析目的:分析视神经脊髓炎相关性视神经炎（NMO-ON）患者的临床特点及针药联合改善NMO所致视神经萎缩的疗效。方法:对2016年1月至2019年12月就诊于中日友好医院的72例以ON为首发临床表现的NMO患者进行回顾性分析总结,包括一般资料、发病特点、病程进展、合并疾病、免疫学检验、治疗反应及预后等。结果:1.一般资料:72例NMO-ON患者,发病年龄中位数33岁;女性61例（84.72%）,男女比约为1:5.54;病程中位数67月,病程以“复发-缓解”为主,单相与复发比约1:5.8。2.临床特点:66例（91.67%）单独ON起病,ON累及单眼者59例（81.94%）;主要症状为急性或亚急性视力下降,可伴转动痛、视野缺损及色觉异常等;14例（19.44%）伴诱因,最常见为上呼吸道感染;11例（15.28%）伴系统性免疫性病,最常伴发干燥综合征及甲状腺疾病;59眼（75.64%）首发视力小于0.1,AQP4-IgG状态（P=0.032,OR=2.55）和发病年龄（P=0.037,OR=3.93）是影响患者首发视力的独立危险因素;整个病程中,44例（61.11%）双眼先后累及,ON发病次数中位数为2次,ON二次发作时间中位数是3月;1年、3年复发率分别约0.56（40/72）和0.74（53/72）;至末次随访时间,单侧致盲率约48.61%,致患者单侧致盲ON发作中位数为2次;53例（73.61%）出现其他神经系统的累及,脊髓（61.1 1%）是最常见的复发部位。3.实验室结果:80%（48/60）患者血清AQP4-IgG抗体阳性;25%（3/12）患者MOG-IgG阳性;18例（25%）伴其他系统性免疫性抗体,最常见伴ANA抗体阳性;4.影像学特点:NMO-ON多累及后视路,病变长度>1/2视神经;45例（84.91%）脊髓MRI病变≥3个锥体;47.17%（25/53）患者同时或相继发生颈髓和胸髓病变。5.针药联合改善NMO所致视神经萎缩:24眼治疗4周有8只眼视力提高≥2行,总有效率91.67%;动态视野平均缺损度（MD）及平均敏感度（MS）较前改善,但与治疗前相比,差异均无统计学意义（P>0.05）;治疗8周有12眼视力提高≥2行,总有效率100%;视野MD显着下降（P<0.05）,MS明显提高（P<0.05）。结论:1.NMO-ON患者首次发病多ON单独起病,单侧累及,女性中青年高发,AQP4-IgG阴性患者更趋年轻化,急性期对患者视功能威胁巨大,恢复期多遗留较差的视力预后;最常见诱因为上呼吸道感染,漫长的病程多见双侧视神经受累及多次复发,脊髓是除视神经外最常见的复发部位;AQP4-IgG状态和发病年龄是影响NMO患者首次发病视功能的独立危险因素;2.大多数（80%）NMO-ON患者AQP4-IgG血清阳性,部分患者伴发以干燥综合征和甲状腺疾病为代表的系统性免疫性疾病,最常见伴有的血清学免疫性抗体是抗ANA抗体;3.NMO-ON患者视神经多累及后视路,病变长度>1/2视神经,脊髓损伤多为连续长节段,约一半患者同时或相继发生颈髓和胸髓病变;4.针药联合可显着提高NMO所致视神经萎缩患者的视功能,明显提高患者视力和动态视野MS,降低患者MD。（二）视神经脊髓炎相关视神经炎（NMO-ON）大鼠模型的构建与评价目的:通过将患者AQP4-IgG强阳性血清显微注射至大鼠视神经周围蛛网膜下腔,诱导视神经NMO样病变,从活体与病理、视神经及脊髓、大脑等多维度评价该模型,为探究药物防治NMO-ON提供模型基础。方法:SD雄性大鼠30只根据血清样本类型随机分为模型组、假手术组,上结膜入路暴露视神经后选择球后2mm处分别将AQP4-IgG强阳性血清和健康人血清缓慢注射到蛛网膜下腔。术后第3天免疫荧光法检测视神经AQP4-IgG表达;术前1天（第0天）、术后第7、14天分别行闪光视觉诱发电位（F-VEP）及瞳孔对光反射（PLR）检测;术后第14天分别处死两组大鼠行视网膜、视神经、大脑及脊髓等组织制片和病理学观察。结果:术后第3天模型组视神经AQP4-IgG强表达,假手术组未见表达（P<0.001）;与假手术组相比,AQP4和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）在AQP4-IgG沉积区域表达也显着降低（P<0.001）;模型组N1-P1波振幅和PLR第7天、14天均明显降低,与假手术组相比差异均有统计学意义（P<0.001）;组织病理学观察:与假手术组相比,模型组视神经HE染色肿胀水肿、着色明显加深,轴突数量显着减少伴有不规则空洞化,其间见大量炎症细胞浸润等;RGCs水肿显着,数量明显减少,且大小不一,核仁不清晰;视神经LFB髓鞘染色,模型组可见到蓝色区域显着减少;模型组大鼠视神经电镜则可见到轴突数量明显减少且排列紊乱、横断面形态不规则,微管微丝大量溶解,髓鞘严重分层、结构不完整,且大多数髓鞘松解或者脱失、塌陷,甚至无髓鞘;免疫荧光染色发现,与假手术组相比,模型组神经丝蛋白L（NFL）表达量明显下降（P<0.001）及CD68表达显着升高（P<0.001）;脊髓组织HE发现,假手术组和模型组均未见到脊髓白质炎症浸润、轴突及髓鞘损伤等病理变化;脊髓组织LFB染色可见假手术组和模型组髓鞘染色成蓝色且均匀一致,未见到染色区域减少及白色未着色区等。大脑组织HE和LFB染色也未发现炎症浸润及脱髓鞘等病理损伤;结论:1.我们通过在大鼠视神经蛛网膜下腔显微注射人类AQP4-IgG阳性血清成功构建了NMO-ON大鼠模型,该模型显示NMO-ON的特征性病理变化,包括星形胶质细胞破坏、炎症浸润、轴突损伤及脱髓鞘等;2.大鼠视神经蛛网膜下腔显微注射人类AQP4-IgG阳性血清构建NMO-ON模型,仅能启动局部视神经周围免疫,对脊髓及大脑等其他神经系统未产生病理损伤。（三）调肝活络法防治视神经脊髓炎相关性视神经炎（NMO-ON）的疗效及机制探究目的:通过动物模型的体内研究,观察调肝活络法的干预效果,并深入挖掘方药发挥作用的分子机制,为NMO-ON的临床治疗提供中西医协同的解决方案。方法:SD雄性大鼠60只随机分为模型组、假手术组、中药组、激素组、中药+激素组,显微注射法构建NMO-ON大鼠模型,分别给予无菌蒸馏水、中药、激素及中药+激素等灌胃干预21天,术前1天（第0天）、术后7天、14天及21天分别行F-VEP、PLR检测;第21天处死所有大鼠,制备视网膜、视神经切片,进行HE染色及超微电镜观察;免疫组织化学染色检测RGCs中Brn3a表达;免疫荧光染色检测GFAP、NFL、髓鞘碱性蛋白（MBP）和CD68表达;Western-blotting检测视神经IL-6、IL-10、TNF-α、p-NF-κB p65 蛋白表达。结果:1.视神经功能学评价:与同时间点模型组和激素组相比,中药组和中药+激素组在第7、14和21天均可显着提高视神经F-VEP的N1P1振幅（P<0.001）;在第21天,中药组、中药+激素组与模型组和激素组相比,PLR收缩程度也显着增加（P<0.001）;2.组织病理学评价:与模型组和激素组相比,中药组和中药+激素组视神经HE染色均可见轴突损伤减轻、视神经水肿消退及未见到明显炎症细胞浸润;电镜发现中药组轴突数量明显增加,神经纤维束状形态可循,可见微丝微管结构,髓鞘损伤也较之减轻;与激素组相比,中药+激素组见到更完整的神经轴突、髓鞘结构;免疫组化发现,与模型组和激素组相比,中药组和中药联合激素组RGCs的Brn3a表达量较之均显着升高（P<0.001）;视神经免疫荧光提示中药组及中药+激素组GFAP、MBP和NFL表达量较模型组表达量升高（P<0.001）。CD68视神经染色也发现,与模型组相比,中药组及中药+激素组可见到CD68表达显着降低（P<0.001）;3.Western Blotting:与假手术组相比,模型组大鼠视神经内p-NF-κB p65、TNF-α和IL-6显着升高（P<0.001）;与模型组相比,中药组、激素及中药+激素组均可见到p-NF-κB p65、TNF-α和IL-6降低（P<0.001）;与假手术组相比,模型组大鼠视神经内IL-10显着降低（P<0.001）;与模型组相比,中药组、激素及中药+激素组均可见到 IL-10 升高（P<0.001）。结论:1.调肝活络复方中药可以减轻NMO-ON大鼠模型视神经轴突丢失、髓鞘损伤及炎症浸润,进而提升和改善视觉诱发电位N1P1振幅及瞳孔对光反射收缩能力。2.调肝活络复方中药对NMO-ON视神经及视网膜发挥神经保护和治疗作用可能与其能抑制视神经内NF-κB蛋白磷酸化及调控相关炎症介质（IL-6、TNF-α及IL-10）的产生有关。
赵浩森[2]（2021）在《白藜芦醇/骨髓间充质干细胞联合治疗大鼠脊髓损伤的作用与机制研究》文中研究指明脊髓损伤是一种严重的中枢神经系统创伤,因为其高致残性,多数患者在脊髓损伤后丧失运动及自理能力,常常给患者家庭及社会带来严重的负担。脊髓损伤后随着脊髓微环境变化而引发一系列病理生理变化所致使的继发性损伤脊髓损伤常常引起“瀑布”样效应,造成灾难性后果,给脊髓损伤的治疗带来困难和障碍。干细胞因为其多种生理学特性,例如可增殖性、多向分化性、自我更新性等,是近年来脊髓损伤治疗的研究热点,其中骨髓间充质干细胞因其容易获得性及免疫学特性和伦理合理性更是被广泛用于研究。然而脊髓损伤后局部微环境中的病理生理反应例如炎症、凋亡、氧化应激等,常常造成干细胞移植存活率的下降,最终导致神经保护功能的减退,造成脊髓损伤治疗效果不佳。白藜芦醇因为“法国悖论”的发现,其卓越的抗炎、抗衰老、抗氧化应激等功效被广泛地研究,其中白藜芦醇被证实能够上调Sirt-1信号通路与其所产生的的相关功效有关联。NF-κB是激活炎症的重要信号通路中的一员,而Sirt-1作为NF-κB上游通路,Sirt-1与脊髓损伤后炎症变化及白藜芦醇能否对炎症环境的骨髓间充质干细胞起到保护作用及其作用机制尚无相关研究,白藜芦醇能否与骨髓间充质干细胞联合治疗提升脊髓损伤治疗效果也无相关研究。因此本研究将通过以下三部分进行研究验证白藜芦醇与骨髓间充质干细胞联合治疗大鼠脊髓损伤的作用与机制:1.大鼠脊髓损伤后Sirt-1表达的变化及其与脊髓损伤后炎症反应变化之间的关系2.体外培养原代大鼠骨髓间充质干细胞,制作炎症模型,探究证实白藜芦醇对大鼠骨髓间充质细胞炎症模型中的作用及作用机制3.通过大鼠脊髓损伤模型来验证评估白藜芦醇/骨髓间充质干细胞联合治疗脊髓损伤的作用及机制。目的:通过探究脊髓损伤后Sirt-1信号通路与炎症的变化、骨髓间充质干细胞在炎症环境中反应机制、白藜芦醇对骨髓间充质干细胞炎症模型的作用及作用机理、脊髓损伤后白藜芦醇和骨髓间充质干细胞联合移植治疗的作用及作用机制等问题进行了探究分析,为指导白藜芦醇与骨髓间充质干细胞移植在脊髓损伤临床中的应用提供理论基础与实验学依据,为脊髓损伤的治疗提供新方法和新思路。研究方法:第一部分:将6-8周龄重约200-220 g雌性健康SD大鼠随机分为Sham组（假手术组）和脊髓损伤组,其中脊髓损伤组按照脊髓损伤后时间设定,细分为脊髓损伤后1 d、3 d、5 d、7 d、14 d,5个亚组,参照Allen’s法制作大鼠脊髓损伤打击模型,其中Sham组仅咬除相应椎体椎板,不进行打击操作。运用Western Blot方法检测各组脊髓组织之间Sirt-1蛋白表达变化。运用Elisa法检测各组脊髓组织中炎症因子IL-1β和IL-6表达的变化。运用免疫荧光染色法检测Sham组和脊髓损伤3d组中Sirt-1和TNF-α在脊髓组织中表达的变化。第二部分:利用大鼠乳鼠体外培养骨髓间充质干细胞并于光学显微镜下观察细胞生长形态。运用流式细胞术对原代细胞表面CD34/CD45/CD29/CD90抗原表达情况进行检验验证。运用MTT检测验证TNF-α（20 ng/m L）诱导骨髓间充质干细胞炎症模型中细胞存活率随时间变化的变化趋势,选取适宜诱导时常。运用MTT检测检验TNF-α（20 ng/m L）诱导骨髓间充质干细胞炎症模型中,不同浓度白藜芦醇干预对细胞存活率的影响,选取适宜白藜芦醇浓度。将骨髓间充质干细胞随机分为三组:Control组、TNF-α组、TNF-α+白藜芦醇组,运用Elisa法检测各组细胞上清液中炎症因子IL-1β和IL-6表达的变化。运用Western Blot检验三组中Sirt-1和NF-κB蛋白表达的变化。运用Western Blot检验三组中凋亡标志性蛋白Cleaved Caspase-3和Caspase-9表达的变化。再将骨髓间充质干细胞随机分为二组:TNF-α+白藜芦醇组、TNF-α+白藜芦醇+EX527组,运用Real-Time PCR检验两组中Sirt-1和NF-κB基因表达的变化。运用Elisa法检验两组中IL-1β和IL-6表达的变化。运用流式细胞术（Annexin V-FITC-PI）检验两组组中细胞凋亡的变化。第三部分:将6-8周龄重约200-220 g雌性健康SD大鼠随机分为Sham组、脊髓损伤组、脊髓损伤+骨髓间充质干细胞移植组、脊髓损伤+骨髓间充质干细胞+白藜芦醇移植组共四组,参照Allen’s法制作大鼠脊髓损伤打击模型,其中Sham组仅咬除相应椎体椎板,不进行打击操作。运用BBB评分检测四组大鼠随时间变化运动功能变化情况。运用Nissl染色检测各组脊髓前角神经元数量的变化。运用Western Blot检测各组脊髓组织中Sirt-1/NF-κB及炎症因子IL-1β/IL-6蛋白表达的变化和凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3/Caspase-9表达的变化。运用荧光显微镜检测脊髓损伤+骨髓间充质干细胞移植组、脊髓损伤+骨髓间充质干细胞+白藜芦醇移植组脊髓组织中的PKH26和Neu N阳性细胞比率的差异。运用Elisa法检测四组各组脊髓组织中BDNF含量的变化。结果:第一部分:Western Blot检测结果显示随着脊髓损伤后时间变化,Sirt-1的表达也随之变化,脊髓损伤后1天其表达即比假手术组明显增高,约3天时Sirt-1的表达达到最高,随之出现逐渐下降并趋于稳定。Elisa检测结果显炎症因子（IL-1β、IL-6）表达也随着脊髓损伤后时间变化而变化,脊髓损伤后1天其表达即比假手术组明显增高,约3天时炎症因子的表达达到最高,随之出现逐渐下降并趋于稳定。Sham组和SCI 3 d组免疫荧光双染结果可见,损伤后脊髓组织中Sirt-1和TNF-α表达均上调。第二部分:光学显微镜下观察原代提取培养的大鼠骨髓间充质干细胞体外培养增殖3天形态呈长梭形或多角形,呈现纤维细胞样集落生长趋势。流式细胞术检测结果证实所培养细胞具有CD34（-）CD45（-）CD29（+）CD90（+）的表面抗原特性,证实培养的原代骨髓间充质干细胞具有干细胞表型。MTT检测结果可见,随着炎症诱导时间延长,骨髓间充质干细胞细胞存活率呈现逐渐下降趋势,炎症环境可影响骨髓间充质干细胞的存活。其中在12 h与Control组存在统计学意义,时间继续增加,细胞存活率降低趋势逐渐变缓。不同浓度白藜芦醇干预骨髓间充质干细胞炎症模型,细胞生存率变化不同。细胞生存率在1μmmol/L诱导组比炎症组明显提高。Elisa检验结果可见,炎症刺激后,BMSC的炎症因子的表达比Control组明显提升;而白藜芦醇干预组和炎症模型组相比,炎症因子均显着下降。Western Blot检验结果可见,炎症刺激后骨髓间充质干细胞的Sirt-1和NF-κB的表达比Control组提升;而TNF-α+白藜芦醇组和TNF-α组相比,Sirt-1表达显着提升,而相应的NF-κB表达显着下降;炎症刺激后,骨髓间充质干细胞凋亡标志性蛋白Cleaved Caspase-3/Caspase-9的表达比Control组提升;而TNF-α+白藜芦醇组和TNF-α组相比,凋亡蛋白的表达显着下降。Real-Time PCR结果可见,TNF-α+白藜芦醇+EX527组与TNF-α+白藜芦醇组相比,Sirt-1表达明显降低,而相应的,NF-κB表达明显增高。Elisa检验结果可见,TNF-α+白藜芦醇+EX527组与TNF-α+白藜芦醇组相比,炎症因子的表达明显增加。流式细胞术（Annexin V-FITC-PI）检验结果可见,TNF-α+白藜芦醇+EX527组与TNF-α+白藜芦醇组相比,细胞凋亡明显增加。第三部分:BBB评分结果证实,脊髓损伤后,大鼠出现明显运动功能障碍;移植和骨髓间充质干细胞+白藜芦醇联合移植治疗,均表现出对大鼠运动功能的恢复促进作用;其中骨髓间充质干细胞+白藜芦醇联合移植组BBB评分高于单纯骨髓间充质干细胞移植组。Nissl染色检测结果证实,脊髓损伤后,大鼠脊髓前角神经元数量比假手术组明显下降;骨髓间充质干细胞移植和骨髓间充质干细胞+白藜芦醇联合移植治疗,均提升了脊髓前角神经元数量;其中骨髓间充质干细胞+白藜芦醇联合移植组前角神经元计数平均值高于单纯骨髓间充质干细胞移植组,但两组之间并无明显统计学差异。Western Blot检测结果证实,脊髓损伤后,Sirt-1、NF-κB和炎症因子表达均比Sham组明显增高;骨髓间充质干细胞移植组中与SCI组相比,相应的指标变化无明显统计学差异;而白藜芦醇+骨髓间充质干细胞联合移植与SCI组和骨髓间充质干细胞移植组相比,Sirt-1表达明显增高,相应的NF-κB和炎症因子均明显降低。与此同时,脊髓损伤后,凋亡蛋白Cleaved Caspase-3/Caspase-9表达均比Sham组明显增高;骨髓间充质干细胞移植组中与SCI组相比,相应的指标变化无明显统计学差异;而白藜芦醇+骨髓间充质干细胞联合移植与SCI组和骨髓间充质干细胞移植组相比,凋亡蛋白表达明显降低。荧光显微镜检测结果证实,脊髓损伤后,白藜芦醇+骨髓间充质干细胞联合移植与骨髓间充质干细胞移植组相比,PKH26阳性比率和Neu N阳性比率明显增高。Elisa检测结果证实,脊髓损伤后骨髓间充质干细胞移植组和白藜芦醇+骨髓间充质干细胞联合移植组均能显着上调BDNF的表达,而白藜芦醇+骨髓间充质干细胞联合移植与骨髓间充质干细胞移植组相比BDNF表达的均值稍高,但两者间并无明显统计学差异。结论:第一部分:脊髓损伤后Sirt-1的表达随时间变化,和炎症因子表达的变化趋势呈现一致性。而且脊髓损伤后Sirt-1和炎症因子表达变化相关,Sirt-1可能参与脊髓损伤后炎症反应。第二部分:炎症环境可影响骨髓间充质干细胞的存活。适当浓度的白藜芦醇可增加骨髓间充质干细胞在炎症环境中的细胞存活率,起保护作用。白藜芦醇可通过上调Sirt-1的表达,抑制NF-κB,抑制炎症反应,减少骨髓间充质干细胞炎症环境中的细胞凋亡,实现对骨髓间充质干细胞在炎症环境中的保护作用。第三部分:脊髓损伤后白藜芦醇和骨髓间充质干细胞联合移植对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复作用优于单纯骨髓间充质干细胞移植。白藜芦醇和骨髓间充质干细胞联合移植可以通过上调Sirt-1表达,抑制NF-κB表达和炎症反应,从而抑制脊髓组织细胞凋亡;而骨髓间充质干细胞移植并无明显此作用。白藜芦醇和骨髓间充质干细胞联合移植能增加骨髓间充质干细胞移植后的存活,能增加脊髓中神经元数量。骨髓间充质干细胞移植或白藜芦醇和骨髓间充质干细胞联合移植均能显着增加BDNF表达量。
杜凯然[3]（2021）在《陇中消肿止痛合剂对继发性脊髓损伤的保护作用及LncRNAMALAT1-ERKp38MAPK-AQP4轴的表达》文中指出目的:通过成功构建大鼠脊髓损伤模型,探讨陇中消肿止痛合剂对大鼠脊髓损伤的保护作用,及对lnc RNA MALAT1-ERK/p38MAPK-AQP-4轴表达变化的影响。方法:1.选取成年雄性清洁级SD大鼠175只,按照Allen’s法建立脊髓损伤大鼠模型。2.SD大鼠脊髓损伤模型建立后,将其随机分为7组,分别为对照组25只,假损伤组25只,模型组25只,七叶皂苷钠组25只和陇中消肿止痛合剂干预组75只,陇中消肿止痛合剂干预组（75只）按给药剂量随机分为陇中消肿止痛合剂高剂量组25只,陇中消肿止痛合剂中剂量组25只和陇中消肿止痛合剂低剂量组25只。采取灌胃给药的方式,根据BBB（Basso,Beattie&Bresnahan locomotor rating scale,BBBscal）评分标准,每隔3d观察评分,并记录,总计观察15d。利用干湿法测定脊髓含水量,及Belayev法血-脊髓屏障（blood spinal cord barrier,BSCB）破坏定量分析。3.在上述7组随机分别选取SD大鼠15只,提取损伤脊髓样本,分别进行RT-PCR、Western Blot、免疫组织化学染色检测AQP-4、ERK、p38MAPK,得出相关数据及结果,进行统计分析。结果:1.陇中消肿止痛合剂能够有效治疗SD大鼠继发性脊髓损伤（Secondary spinal cord injury,SSCI）后肢体功能;与七叶皂苷钠比较,陇中消肿高剂量对于治疗SSCI效果优于七叶皂苷钠以及陇中消肿止痛合剂中、低剂量组。2.陇中消肿止痛合剂能够有效的减轻脊髓水肿,SD大鼠的双下肢功能逐渐的恢复。3.SSCI后,脊髓组织中AQP-4、ERK、MALAT1、p38MAPK表达均升高,与脊髓损伤程度呈正相关。陇中消肿止痛合剂通过抑制AQP-4、ERK、MALAT1、p38MAPK在脊髓组织表达含量,以此减轻脊髓水肿。4.陇中消肿止痛合剂通过降低AQP-4、MALAT1、ERK、p38MAPK在脊髓组织中的表达,从而减轻脊髓水肿,促进神经功能恢复。结论:1.陇中消肿止痛合剂具有防治SSCI的作用,主要作用机制是通过减轻脊髓水肿对神经的压迫,恢复SD大鼠双下肢肢体功能。2.SSCI后血-脊髓屏障被破坏,AQP-4、ERK、MALAT1、p38MAPK的表达量升高则脊髓损伤加重,降低AQP-4、ERK、MALAT1、p38MAPK基因表达则脊髓水肿减轻,肢体功能恢复。3.陇中消肿止痛合剂能够抑制lnc RNA MALAT1-ERK/p38MAPK-AQP-4轴的表达变化。通过药物干预降低AQP-4、ERK、MALAT1、p38MAPK基因在脊髓组织中表达量,减轻脊髓水肿及部分神经功能及恢复血脊髓屏障的功能。4.SSCI后,七叶皂苷钠与陇中消肿止痛合剂都具有防治SSCI的疗效。通过两者药物间比较,陇中消肿止痛合剂利水消肿的作用及降低AQP-4、MALAT1、ERK、p38MAPK的表达要优于七叶皂苷钠。
周晓华[4]（2020）在《减重步行训练对脊髓损伤雄鼠精子质量影响的研究》文中研究表明背景:脊髓损伤（SCI）严重影响患者的生理、心理和社会健康。SCI多发生在处于生育高峰的年轻男性,其中90%存在生殖功能障碍,精子质量下降是重要原因之一。SCI男性患者具有独特的精液特征,即浓度正常,而活力、活率下降,形态异常。但损伤后精子质量开始下降的确切时间点、慢性期精子质量是否会随时间持续下降及精子质量特征性变化的原因尚不完全清楚。运动训练是SCI患者不可替代的康复手段。有研究表明,运动训练能够减轻非SCI男性不育症患者精液中促炎性细胞因子和氧化标志物水平,增强抗氧化防御系统,提高精液质量和精子DNA完整性。而运动训练对SCI男性患者精子质量的影响未见研究。运动训练是否对SCI这一特殊男性群体精子质量也有改善作用?不同强度运动训练作用效果如何?以上问题的解决可以帮助临床康复护理人员更全面的了解SCI患者的生理变化,明晰精子质量的时间变化特征及影响因素;进一步认识运动训练对SCI男性患者的康复影响;对康复护理人员为有生育需求的SCI男性患者开展全面评估,选择有针对性的干预措施及更好地制订康复策略,促进患者全面康复具有重要临床意义。精子的发生、成熟涉及到多个器官、组织,过程复杂,受到取材等因素的限制,本研究选择以雄鼠为研究对象,对SCI及SCI运动训练引起的精子质量变化及影响因素做深入探讨。目的:建立规范的SCI大鼠模型,明确SCI后雄鼠精子质量的时间变化特征,分析其影响因素;在此基础上研究不同强度减重步行训练（BWSTT）对SCI雄鼠精子质量的影响。方法:1.大鼠建模方法的研究设计一种新型椎板移除辅助器（LAD）,并进行应用效果评估。雄鼠24只,随机均分为N组（正常对照）、CONV组（常规椎板移除）、LAD组（LAD椎板移除）。从切口大小、成功率、手术时长、体重、运动功能（BBB评分、RRMPS步态分析）、脊髓神经功能（tce MEPs）、机体氧化应激（ELISA方法测定血清SOD活力、MDA含量）方面评估LAD的应用效果。2.LAD椎板移除对雄鼠精子质量影响的评估雄鼠12只,随机均分为N组（正常对照）、LAD组（LAD椎板移除）。于术后1周使用血细胞计数板测定附睾精子质量;ELISA方法测定血清FSH、LH、T水平,睾丸组织匀浆SOD活力、MDA含量,精浆IL-1β、IL-6、TNF-α浓度;HE染色观察睾丸组织结构;TUNEL染色观察睾丸生精细胞凋亡。3.SCI雄鼠精子质量的时间变化特征及影响因素雄鼠60只,随机均分为Sham组（只开椎板,不打击脊髓）、SCI组（打击脊髓）。两组大鼠分别于SCI后1、2、3、4、5周各处死6只,测定指标及方法同“方法2”。4.不同强度BWSTT对SCI雄鼠精子质量的影响雄鼠30只,随机均分为Sham组（只开椎板,不打击脊髓）、Sedentary组（打击脊髓,但不进行运动训练）、BWSTT-A组（低强度,7cm/s）、BWSTT-B组（中强度,15cm/s）、BWSTT-C组（高强度,21cm/s）。BWSTT于SCI后14天开始,为期3周。测量指标及方法同“方法2”,此外增加大鼠后肢功能BBB评分及下丘脑Gn RH蛋白表达测定（免疫组化染色法）。结果:1.大鼠建模方法的研究（1）一般情况:与CONV组相比,LAD组手术切口小（1.3cm vs.2.2cm）、操作时间短（4.82±0.67min vs.14.64±1.62min）、成功率高（100%vs.88.89%）。（2）体重:术后1周,CONV组和LAD组体重增长幅度差异无统计学意义,但均低于N组（均有P<0.01）。术后2周、3周,三组大鼠体重增长幅度差异均无统计学意义。（3）后肢运动功能:手术当天麻醉清醒后,与N组相比,CONV组步高降低（左:P<0.01,右:P<0.05）,LAD组无显着变化;三组大鼠步长差异无统计学意义。术后1周,三组大鼠步高、步长差异均无统计学意义。（4）脊髓神经传导功能:术后1天、1周,三组大鼠脊髓神经传导潜伏期、波幅差异均无统计学意义。（5）血清SOD活力、MDA含量:术后1周,与N组相比,CONV组、LAD组SOD活力均降低（均有P<0.01）;CONV组MDA含量升高（P<0.05）,LAD组无显着变化。术后2周、3周,三组大鼠SOD活力、MDA含量差异均无统计学意义。2.LAD椎板移除对雄鼠精子质量影响的评估（1）精子质量:LAD组、N组精子计数、活率、快速前向运动率及异常形态发生率差异均无统计学意义。（2）下丘脑-垂体-睾丸（HPT）轴功能:LAD组、N组血清LH、FSH、T水平差异均无统计学意义。（3）睾丸组织结构、生精细胞凋亡:LAD组、N组睾丸组织生精小管结构均完整,细胞排列有序;生精细胞凋亡指数（AI）差异无统计学意义。（4）睾丸氧化损伤、精浆炎症反应:LAD组、N组睾丸SOD活力、MDA含量,精浆IL-1β、IL-6、TNF-α浓度差异均无统计学意义。3.SCI雄鼠精子质量的时间变化特征及影响因素（1）精子质量:SCI后精子计数无显着变化;活率、快速前向运动率于损伤后1周开始下降,2周下降至最低水平（均有P<0.01）;异常形态发生率在损伤后1周无显着改变,2周升高（P<0.01）;损伤3周及以后,精子各参数略有好转并保持稳定,但均较Sham组差。（2）HPT轴功能:血清T水平于SCI后1周（P<0.05）、2周（P<0.01）显着降低,3周基本恢复正常,之后保持稳定;血清LH、FSH水平无显着变化。（3）睾丸组织结构、生精细胞凋亡:SCI后1周,可见部分睾丸组织生精小管结构破坏,生精细胞AI升高（P<0.01）,损伤后2周变化最明显（P<0.001）,3周及以后略有好转并保持稳定,但均较Sham差（均有P<0.01）。（4）睾丸氧化损伤、精浆炎症反应:SCI后睾丸SOD活力显着降低,MDA含量显着升高;精浆IL-1β、IL-6、TNF-α浓度均显着升高,以损伤后1周变化最明显,之后略有好转并保持稳定,但与Sham组相比均存在统计学差异。4.不同强度BWSTT对SCI雄鼠精子质量的影响（1）后肢BBB评分:BWSTT-A组高于Sedentary组（P<0.05）;BWSTT-B组、BWSTT-C组又高于BWSTT-A组（均有P<0.05）。（2）精子质量:与Sedentary组相比,BWSTT-A组计数、活率、快速前向运动率均无显着变化,异常形态发生率显着升高（P<0.05）;BWST-B组、BWST-C组计数、活率均无显着变化,快速前向运动率均显着降低（均有P<0.05）,异常形态发生率均显着升高（均有P<0.001）。BWST-C组异常形态发生率又高于BWSTT-A组（P<0.05）。（3）HPT轴功能:与Sedentary组相比,BWSTT-A组血清LH、FSH、T水平,下丘脑Gn RH蛋白表达均无显着变化;BWSTT-B组、BWSTT-C组血清FSH、T水平,下丘脑Gn RH蛋白表达均显着降低（均有P<0.05）;BWSTT-C组血清LH水平亦显着降低（P<0.05）。与BWSTT-A组相比,BWSTT-B组血清T水平显着降低（P<0.05）;BWSTT-C组血清FSH、T水平,下丘脑Gn RH蛋白表达均显着降低（均有P<0.05）。（4）睾丸组织结构、生精细胞凋亡:BWSTT-A组生精小管结构略差于Sedentary组;BWSTT-B组、BWSTT-C组睾丸组织结构破环明显,生精小管管腔内精子明显减少。BWSTT-A组生精细胞AI高于Sedentary组（P<0.001）;BWSTT-B组、BWSTT-C组又高于BWSTT-A组（P<0.001）。（5）睾丸氧化损伤、精浆炎症反应:与Sedentary组相比,BWST-A组睾丸SOD活力、MDA含量无显着变化;BWST-B组、BWST-C组SOD活力显着降低（均有P<0.05）,MDA含量显着升高（均有P<0.01）;BWST-B组、BWST-C组MDA含量又高于BWST-A组（均有P<0.05）。与Sedentary组相比,BWSTT-A组精浆IL-1β、IL-6、TNF-α浓度无显着变化;BWSTT-B组、BWSTT-C组TNF-α浓度均显着升高（均有P<0.05）;BWSTT-A组、BWSTT-B组、BWSTT-C组比较,精浆IL-1β、IL-6、TNF-α浓度差异均无统计学意义。结论:1.本研究设计了一种新型椎板移除辅助器（LAD）,与常规椎板移除方法相比,更适用于SCI建模过程中的椎板移除;亦适合用于精子质量研究的SCI大鼠模型的椎板移除。2.SCI大鼠精子质量的时间变化特征为:损伤后1周开始下降,2周下降至最低水平,慢性期略有好转并保持稳定,但始终低于正常水平。各参数特征为精子计数正常,而活率、快速前向运动率下降,形态异常。3.SCI后HPT轴功能出现短暂抑制,可能参与了SCI早期精子质量下降;SCI后睾丸组织持续存在氧化损伤,是睾丸精子发生异常的一个重要原因;SCI后精浆炎症反应持续存在,是精子质量低下的一个重要原因。4.BWSTT能够促进大鼠后肢运动功能康复,强度越高效果越好。然而,BWSTT却加重SCI大鼠精子质量下降,且强度越高精子质量下降越明显。5.BWSTT能够通过抑制HPT轴功能、增强睾丸组织氧化损伤,严重破坏精子生成和成熟的微环境;同时,BWSTT还能够增加精浆促炎性细胞因子的产生,在运动诱导的精子质量下降中起重要作用。
赵磊[5]（2020）在《Miro1在脊髓损伤中抑制神经元凋亡及其机制研究》文中提出第一部分脊髓损伤动物模型的建立及评价目的:1.建立合适的脊髓损伤（Spinal Cord Injury,SCI）大鼠模型;2.观察并验证神经元在SCI后的形态变化及凋亡情况。研究方法:1.将雄性SD大鼠54只（体重273-282g）,随机分成空白对照组（Blank,3只）、假手术组（Sham,18只）和脊髓损伤组（SCI,33只）。2.SCI大鼠的造模采用动脉瘤钳夹法（目标节段为T10,动脉瘤夹标定力量70 g,钳夹持续时间30s）。假手术组（Sham）大鼠手术显露T10脊髓节段后,旷置4分钟后缝合。Blank大鼠不予手术。3.对T10及周围脊髓组织取材:随机选取Sham组大鼠3只在手术后72h取材;SCI大鼠18只,在造模后6个时间点分别随机抽取3只大鼠取材（12h、24h、48h、72h、7d、14d）;Blank大鼠在体重=278±2g取材。将取材组织制作成冰冻切片。4.神经行为学评分:采用BBB评分;对脊髓损伤组和假手术组大鼠进行评分（SCI组15只;Sham组15只）,记录术前以及术后12h、24h、48h、72h、7d、14d共7个时间点的BBB评分。5.取不同组的大鼠脊髓冰冻切片进行尼氏染色（Nissl染色）,观察神经元的形态及尼氏小体的变化。进行TUNEL染色观察神经元凋亡情况。结果:大鼠在造模后即发生全瘫（BBB Score=0）,72h的BBB评分略微波动（0.43±0.40）,在7d出现明显的上升（8.03±0.53）;Sham组大鼠术后24h内BBB评分较正常略有下降（24h:20.33±0.61）,48h后恢复正常（BBB Score=21）。尼氏染色见脊髓损伤后神经元的尼氏小体逐渐减少,72h最少,之后稍有恢复。TUNEL染色见脊髓损伤大鼠在72h神经元凋亡数量最大。Sham组与Blank组切片,两种染色后的结果均接近。结论:本研究利用的动脉瘤夹钳夹法可成功制备急性脊髓损伤大鼠模型,是一种经济、可靠的建模方法。本组研究发现SCI后72h的神经元凋亡是峰值。第二部分Miro1在大鼠脊髓损伤不同时间段的变化目的:1.观察Miro1在SCI后的变化规律;2.明确Miro1变化与神经元凋亡的关系。研究方法:1.雄性SD大鼠54只（体重276-285g）,随机分成空白对照组（Blank,6只）、假手术组（Sham,9只）和脊髓损伤组（SCI,39只）。SCI造模、Sham组及Blank组处理同第一部分。2.随机选取Sham组大鼠6只、SCI组大鼠36只与6只Blank大鼠分别取材,提取脊髓的RNA及总蛋白。Sham组在空白手术后72h进行;SCI组在6个时间点进行（12h、24h、48h、72h、7d、14d）n=6×6;Blank组大鼠在体重=278±2g时取材。3.采用qRT-PCR定量检测SCI组6个不同时间点及Blank、Sham组大鼠的T10节段Miro1的基因表达情况（n=3）;采用Western-Blot法检测Miro1的表达量（n=3）。4.Sham组及SCI组在术后72h各取三只大鼠制作脊髓冰冻切片（n=3）,采用免疫荧光法对其Miro1表达阳性的神经元和星形胶质细胞观察和计数。结果:qRT-PCR:SCI后T10节段Miro1的基因表达量逐渐增高,在72h达峰,后有所回落,至14d仍高于对照组。Western-Blot:SCI后T10节段Miro1的表达量增高,72h达最大值。免疫荧光染色:神经元及星形胶质细胞中均可见Miro1的阳性表达;SCI-72h组脊髓节段Miro1表达阳性的神经元细胞占总神经元细胞的比率较Sham对照组明显增高（p<0.01）;星形胶质细胞增多,Miro1表达阳性的细胞亦增多（p<0.01）。结论:Miro1在脊髓损伤之后会出现反应性增高;其变化趋势与神经元凋亡趋势吻合,Miro1可能参与调控了大鼠脊髓损伤后神经细胞的凋亡过程。第三部分Miro1在脊髓损伤中对神经元凋亡的抑制及其机制探讨目的:1.抑制SCI后Miro1在脊髓中的表达并验证;2.观察神经元凋亡情况及脊髓功能的改变;3.观察与Miro1可能相作用的线粒体转运分子及凋亡相关分子表达的变化,并探索Miro1对SCI后神经元凋亡的影响机制。研究方法:1.雄性SD大鼠60只（体重273-282g）,随机分为空白对照组（Sham）、生理盐水对照组（NS）、溶剂对照组（MOCK）和实验组（Si RNA）四组。Sham组接受空白手术,同前两部分;其余三组显露T10节段:NS组在T10节段以微量注射泵推注生理盐水8μl;MOCK组推入转染试剂8μl;实验组推入含有Si RNA的转染复合物8μl。上述操作后将NS组、MOCK组及Si RNA组大鼠以动脉瘤夹钳夹造成脊髓损伤。2.每组选取6只大鼠,记录术前、术后12h、24h、48h、72h、7d和14d七个时间点的BBB评分并记录统计。3.实验取材均在手术后72h进行,进行RNA、脊髓总蛋白提取及冰冻切片制作。4.qRT-PCR检测不同组间脊髓节段Miro1的基因表达情况（n=3）;Western-Blot法检测不同组间Miro1的表达情况（n=3）。5.Western-Blot法检测驱动蛋白重链（Kinesin Heavy Chain,KHC）,驱动蛋白轻链1（Kinesin Light Chain 1,KLC-1）,动力蛋白中间链（Dynein Intermediate Chain,DIC）,线粒体锚定蛋白（Syntaphilin,SNPH）,凋亡相关基因蛋白BAX和B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,BCL-2）的表达情况。6.不同组间大鼠脊髓切片TUNEL染色观察凋亡情况（n=3）。结果:1.qRT-PCR及Western-Blot都提示在SCI后72h,Si RNA组Miro1的基因表达或蛋白表达量较MOCK组及NS组均下降。2.Si RNA组较MOCK组及NS组的KHC及SNPH表达明显下降,DIC及KLC-1无显着变化;Si RNA组的BAX表达增加,Bcl-2表达下降,BAX/Bcl-2增大。3.TUNEL染色:Si RNA组阳性细胞较MOCK组及NS组明显增多。4.BBB评分:SCI后Si RNA组的BBB评分（7d:6.5±0.45;14d:8.58±0.80）较MOCK的BBB评分（7d:7.67±0.75;14d:9.67±0.75）在7d和14d均有明显下降（7d:p<0.01;14d:p<0.05）。结论:Miro1通过与驱动蛋白（Kinesin）相结合和线粒体锚定蛋白（Syntaphilin）作用,参与调控的线粒体运动作用于脊髓损伤大鼠神经元的凋亡过程,并且在一定程度上保护神经元。且这一调控过程最可能是通过调节BAX/Bcl-2两种蛋白量的比例这一通路实现的。其中与驱动蛋白作用位点主要考虑为驱动蛋白重链（KHC）。第四部分慢病毒载体注射致Miro1过表达对改善脊髓损伤预后的探讨目的:1.利用慢病毒载体技术使Miro1在脊髓节段中过表达;2.观察并验证SCI后脊髓节段Miro1的表达量改变;3.观察神经元凋亡情况及脊髓功能的改变;4.进一步验证Miro1对SCI后神经元凋亡的影响机制。研究方法:1.依照Miro1基因（RHOT1）设计,对GV492-Miro1慢病毒载体进行构建与生产;2.将空载慢病毒（GV492）和过表达载体慢病毒（GV492-Miro1）调成1×109TU/ml的悬液。SD雄性大鼠6只（体重271-276g）并分成两组,在T10节段分别将8μl空载慢病毒悬液和Miro1过表达载体慢病毒悬液推入大鼠脊髓;术后第7天将两组大鼠处死及取材,制作冰冻切片,DAPI封片,共聚焦显微镜观察计数、统计。证实感染效率。3.60只雄性SD大鼠（体重278-287g）随机分成空白对照组（Sham）、生理盐水对照组（NS组）、空载慢病毒对照组（Lenti-Ctrl）和实验组（Lenti-Miro1）四组。各组大鼠进行两次手术:a.注射手术:NS组、Lenti-Ctrl组和Lenti-Miro1三组大鼠显露T10脊髓节段,分别缓慢将8μl生理盐水、空载慢病毒悬液和过表达载体慢病毒悬液推入脊髓T10。Sham组大鼠作为对照,仅暴露不注射,操作同第一部分实验Sham组大鼠相同。第一次术后大鼠饲养七天进行下一阶段。b.脊髓损伤手术:NS组、Lenti-Ctrl组和Lenti-Miro1三组大鼠再次显露T10脊髓节段并钳夹造模。Sham组大鼠接受二次手术作为对照,显露硬膜囊后暴露创面120s后缝合伤口。4.对四组大鼠均随机选取6只进行BBB评分,在第一次手术前和手术后的12h、24h、48h、72h、7d;第二次手术后的12h、24h、48h、72h、7d、14d观察大鼠的BBB评分。5.每组大鼠均在二次手术结束后72h处死进行取材,提取脊髓RNA或总蛋白。6.qRT-PCR检测不同组间Miro1的基因表达情况（n=3）;Western-Blot检测不同组间Miro1的表达情况（n=3）。7.Western-Blot法测定KHC、KLC-1、DIC、SNPH、BAX和BCL-2的表达情况（n=3）。8.不同组间大鼠脊髓节段TUNEL染色观察凋亡情况（n=3）。结果:1.大鼠T10节段在注射空载慢病毒（GV492）和过表达载体慢病毒（GV492-Miro1）后7d,共聚焦显微镜下可检测到病毒转染阳性神经元细胞,且两组阳性细胞数无显着差异。2.qRT-PCR及Western-Blot均提示在SCI-72h,Lenti-Miro1组Miro1的基因表达或蛋白表达量较Lenti-Ctrl组及NS组均上升;3.Lenti-Miro1组较Lenti-Ctrl组的KHC及SNPH表达亦明显上升,DIC及KLC-1无显着变化;Lenti-Miro1组的BAX表达变化不明显,Bcl-2表达升高,BAX/Bcl-2下降。4.TUNEL染色:Lenti-Miro1组阳性细胞较Lenti-Ctrl组及NS组减少。5.BBB评分:Lenti-Miro1组的BBB评分（SCI术后7d:8±0.45;14d:11.75±1.17）及Lenti-Ctrl组评分（7d:7.67±0.75;14d:9.75±0.52）,7d时两组差异不大（p>0.05）;14d显着增高（p<0.01）。结论:慢病毒载体使得脊髓局部过表达Miro1可改善脊髓损伤神经元的凋亡情况,保护神经元功能。进一步证实了Mrio1在脊髓损伤中通过与Kinesin及Syntaphilin作用,调控线粒体转运,进而抑制神经元的凋亡而对神经元起到保护作用。慢病毒载体局部注射使脊髓过表达Miro1,为生物治疗改善脊髓损伤对脊髓功能的损害提供一定的理论基础。
李建男[6]（2020）在《电针对SCI大鼠NGF、TrkA表达影响的实验研究》文中提出目的:研究电针刺激对脊髓损伤大鼠受损脊髓节段NGF、Trk A表达的影响。方法:采用大鼠脊髓半横断法复制脊髓损伤模型,在造模成功第3天后,随机将大鼠分为督脉电针组、足阳明胃经电针组和损伤对照组,分别运用电针刺激督脉穴位、足阳明胃经穴位治疗以及不使用电针治疗的对照组。采用BBB评分法对各组大鼠神经功能进行评价,治疗后14天将大鼠处死,取各组脊髓损伤大鼠受损脊髓节段,采用HE染色观察组织受损情况;免疫组织化学染色对比各组大鼠NGF及Trk A阳性细胞表达情况;q RT-PCR对比各组大鼠NGF及Trk A的m RNA表达情况。结果:各组大鼠的BBB功能评分在治疗前无明显着差异,治疗1周,治疗2周时BBB评分:阳明组>督脉组>损伤对照组;HE染色显示各组大鼠脊髓损伤情况与功能评分的表现相符;免疫组织化学染色结果显示,NGF的表达在电针干预第7天:阳明组>督脉组>损伤对照组,电针干预第14天:阳明组>督脉组>损伤对照组,阳明经组表达量:第7天>第14天,督脉穴组表达量:第7天>第14天,对照组表达量:第7天>第14天,Trk A的表达情况在第7天:阳明组>督脉组>损伤对照组,第14天:阳明组>督脉组>损伤对照组,阳明经组表达量:第7天>第14天,督脉穴组表达量:第7天>第14天,损伤对照组表达量:第7天>第14天;q RT-PCR结果显示,NGF的表达在电针干预第7天:阳明组>督脉组>损伤对照组,电针干预第14天:阳明组>督脉组>损伤对照组,阳明经组表达量:第7天>第14天,督脉穴组表达量:第7天>第14天,损伤对照组表达量:第7天>第14天,Trk A的表达情况在第7天:阳明组>督脉组>损伤对照组,第14天:阳明组>督脉组>损伤对照组,阳明经组表达量:第7天>第14天,督脉穴组表达量:第7天>第14天,损伤对照组表达量:第7天>第14天。结论:电针刺激通过提高脊髓损伤节段NGF、Trk A的蛋白和m RNA表达情况,可实现对SCI后功能障碍的恢复和干预。
邵阳[7]（2020）在《“脊髓康”治疗脊髓损伤的临床观察及其促进脊髓损伤后神经再生的实验研究》文中研究说明背景脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后神经再生困难是世界性难题。脊髓损伤后如何改善病损局部微环境、延缓继发性损伤进展、促进神经元再生修复是治疗关键点。胶质疤痕的过度增生被认为是损伤后神经轴突不能再生并穿越损伤处的主要原因之一。中药“脊髓康”为无锡市中医医院临床经验方,前期研究发现具有镇痛、抗炎、促进神经营养因子表达等作用。然而,“脊髓康”促进脊髓损伤修复的作用机制尚不完全清楚。基于此,我们设计临床研究、基础实验,评价“脊髓康”治疗脊髓损伤的疗效,探讨其抑制星形胶质细胞活化促进脊髓损伤修复的机制,为其治疗脊髓损伤提供科学依据。目的（1）分析“脊髓康”促进脊髓损伤患者神经功能康复的疗效,探讨影响脊髓损伤患者神经功能恢复的相关因素;（2）观察大鼠脊髓损伤后脊髓组织中星形胶质细胞的动态表达情况,探讨星形胶质细胞在神经再生过程中的作用和意义;（3）观察“脊髓康”对大鼠脊髓损伤后病损区域组织结构、大鼠肌力的影响,评价“脊髓康”促进大鼠神经功能再生的疗效;（4）观察“脊髓康”对大鼠脊髓损伤后星形胶质细胞形态、GFAP、CSPG蛋白表达的影响,探讨其促进脊髓损伤后神经再生的作用机制。方法（1）收集无锡市中医医院骨伤科收治的诊断为胸腰椎骨折伴不完全脊髓损伤的患者共68名,按照治疗方案不同分为对照组和观察组。对照组患者入院后行手术,配合缓解神经水肿、营养神经治疗;观察组患者在对照组治疗基础上加服中药“脊髓康”,观察两组患者临床疗效、感觉运动评分,并分析影响患者预后的相关因素;（2）将108只SD大鼠分成空白组、假手术组、模型组,分别在干预后第3d、7d、14d取样,以免疫组化及Western blot检测各组大鼠脊髓组织中GFAP蛋白的表达变化,以荧光定量PCR检测GFAP mRNA的表达变化;（3）将120只SD大鼠分为脊髓康高剂量组、脊髓康中剂量组、脊髓康低剂量组、强的松组、假手术组及模型组。观察各组大鼠在3d、7d、14d时间点的爬板评分、肌力,观察脊髓组织中尼氏体、神经元、神经胶质细胞的形态和数量变化;（4）将180只SD大鼠分为脊髓康高剂量组、脊髓康中剂量组、脊髓康低剂量组、强的松组、假手术组及模型组。各组大鼠在3d、7d、14d取样,以免疫组化及Westerm blot检测脊髓组织中GFAP、CSPG蛋白的表达变化,以荧光定量PCR检测GFAP mRNA、CSPG mRNA 的表达变化。结果（1）中药“脊髓康”促进神经再生的临床研究纳入研究的脊髓损伤患者68例,观察组治疗有效率94.3%,对照组90.9%。口服“脊髓康”、年龄是影响脊髓损伤预后的相关因素（P<0.05）,而性别与预后无关（P>0.05）;（2）星形胶质细胞在神经再生过程中的动态表达及意义与假手术组比较,SCI后3d模型组脊髓组织GFAP蛋白和mRNA表达升高,7d达到峰值后逐渐下降,但第14d仍高于假手术组,表明GFAP作为星形胶质细胞活化的代表产物,在受损脊髓组织中表达增加;（3）中药“脊髓康”促进神经再生的实验研究大鼠SCI后予中药“脊髓康”灌胃,大鼠的爬板数据和双后肢神经功能评分明显优于模型组,表明脊髓康能促进大鼠的神经功能恢复。HE染色显示,模型组大鼠造模3d出现明显脊髓组织结构破坏,神经元固缩、坏死,脊髓组织破坏严重,7d脊髓功能损害明显加重,同时出现胶质细胞浸润,14d胶质细胞浸润加重,同时炎症细胞开始出现。使用强的松组及“脊髓康”的大鼠在各节点检测到脊髓组织结构破坏程度均低于对照组;（4）中药“脊髓康”对脊髓损伤大鼠星形胶质细胞GFAP、CSPG表达的影响免疫组化、Westerm blot及荧光定量PCR显示,大鼠SCI后模型组GFAP、CSPG蛋白及mRNA表达量在各个时间点均明显高于强的松组及各剂量脊髓康组（P<0.05）。强的松组、脊髓康高、中、低剂量组在3d、7d和14d的GFAP、CSPG蛋白及mRNA表达量均呈动态变化,造模成功后3d表达上升,7d达到峰值,之后逐渐下降。结论1.“脊髓康”能促进脊髓损伤患者神经功能康复;2.SCI大鼠脊髓组织中GFAP、CSPG蛋白表达水平与大鼠脊髓损伤后神经功能恢复程度呈负相关,表明“脊髓康”通过抑制星形细胞活化代表产物GFAP、CSPG蛋白的表达促进脊髓损伤修复。
张保磊[8]（2020）在《督脉电针联合转轮跑步训练促进大鼠脊髓损伤后功能恢复的研究》文中进行了进一步梳理研究背景:随着科技的不断发展,社会的不断进步,人们生活节奏的越来越快,进而出现各种原因造成脊髓损伤（Spinal Cord Injury,SCI）的发病率越来越高。SCI是一种中枢神经上的严重的创伤,且有着极大的并发症和致残率,迄今为止还没有十分有效的治疗方式。因为其非常高的医治花费,给广大脊髓损伤病人、家庭及社会带来了很沉重的负担。脊髓损伤给患者带来最直接的就是损伤平面以下感觉运动功能的丧失,导致生活不能自理,全球将治疗的最终目的集中于这一功能改善上面,因此找到切实可行的、经济有效的脊髓损伤治疗方式是十分急迫的。随着中医治疗手段的推广和发展,越来越多的实例印证了督脉电针对于治疗脊髓损伤有着比较好的效果,但是其治疗机制尚且不是很明确。而且随着运动医学的发展,康复治疗也同样成为了一种治疗脊髓损伤比较好的方式,但是目前人们对于康复治疗采用的方式多种多样且无法提供确切的训练方案,且对于联合治疗的研究也相对较少。研究目的:明确电针联合转轮跑步训练治疗对脊髓损伤大鼠的功能是否有所改善,明确电针联合转轮跑步训练治疗是否要比单纯电针单纯转轮跑步训练效果好,明确电针联合转轮跑步训练治疗改善其功能的形态学依据,并探讨其调控机制以期待能够为脊髓损伤的临床治疗提供新的治疗靶点和方向。研究方法:实验选取SPF级成年雌性健康SD大鼠50只,体重250300g,随机分成5组,每组10只分组情况如下:假手术组（Sham组）、对照组（Control组）、电针组（EA组）、转轮组（Wheeled treadmill组）、电针转轮联合组（EA+Wheeled treadmill组）。正式试验开始前一周进行每天20分钟的转轮跑步适应训练,而后进行脊髓损伤模型制作。随后根据各分组情况进行连续7周的督脉电针、转轮跑步以及联合的治疗。期间每周六进行一次体重测量、尿量测量;BBB评分来检测脊髓损伤大鼠后肢的运动功能恢复情况;甩尾实验检测大鼠的感觉功能恢复情况;每两周进行一次斜板实验;治疗7周完成后进行核磁共振扫描检测大鼠脊髓损伤部位的各向异性分数,神经纤维的数量;治疗7周完成后进行PET-CT检测大鼠脊髓损伤部位、膀胱及后肢的能量代谢情况;治疗7周完成后进行电生理实验检测大鼠脊髓损伤修复后皮质运动区对后肢肌肉的控制能力以及大鼠后肢的肌电图;各种检测完成后取材大鼠的脊髓损伤部位进行尼氏染色和免疫荧光染色来观察大鼠脊髓损伤的恢复情况。研究结果:（1）大鼠的体重检测发现大鼠损伤后各组大鼠体重出现不同程度的下降而后随着治疗时间的延长不同组的大鼠体重又会出现不同程度的回升,其中假手术组的大鼠体重回升程度明显高于对照组及各治疗组,电针组、转轮组以及电针联合转轮组相比对照组体重明显回升;且相对单独治疗组,联合治疗组的回升趋势更加明显。（2）大鼠的尿量检测发现各组大鼠尿量随着治疗时间的延长都有着不同程度的减少,电针组、转轮组以及电针联合转轮组相比对照组尿量下降明显;且相对单独治疗组,电针联合转轮组的尿量减少趋势更加明显。（3）大鼠的BBB评分中,假手术组一直保持最高分21分,随着治疗时间的延长各组的BBB评分都有一个逐步上升的趋势,都有不同程度的恢复,其中电针组、转轮组以及电针联合转轮组BBB评分与相照组比对明显增加;且相对单独治疗组,电针联合转轮组的BBB评分增加更加明显。（4）在大鼠的甩尾实验中,假手术组的大鼠温痛觉阈值耐受能力明显高于对照组及各治疗组,随着治疗时间的延长,各组大鼠的温痛觉阈值耐受能力明显增加,其中电针组、转轮组以及电针联合转轮组的温痛觉阈值耐受能力相比对照组明显增加;且相对单独治疗组,电针联合转轮组温痛觉阈值耐受能力增加更加明显。（5）在大鼠的斜板实验测试中,假手术组的大鼠在斜板上停留最大的坡度明显高于对照组及各治疗组,随着治疗时间的增加,与对照组相比,各治疗组大鼠在斜板上的停留最大的坡度明显升高,且电针联合转轮组明显高于单独治疗组。（6）在大鼠的核磁试验中,大鼠的各向异性分数（Fractional Anisotropy,FA）指标中,假手术组的分数明显高于对照组和其他各治疗组,其中电针组、转轮组以及电针联合转轮组的分数相比对照组增加明显,;且相对单独治疗组,电针联合转轮组的分数增加较明显。（7）在大鼠的PET-CT实验中,假手术组的脊髓损伤位点、膀胱、后肢肌肉代谢能力明显高于对照组和个治疗组,其中电针组、转轮组以及电针联合转轮组的代谢能力明显高于对照组;且相对单独治疗组,电针联合转轮组的代谢能力明显较高。（8）在大鼠的电生理实验中,肌电图和运动诱发电位假手术组的波幅差值和面积明显高于对照组和其他各治疗组,其他各组的波幅差值和面积明显高于对照组,且电针联合转轮组的波幅差值和面积明显高于两个单独治疗组。（9）在大鼠的形态学检测实验中,尼氏染色显示假手术组的神经元尼氏体呈现正常状态,数量多,且尼氏体饱满;对照组的神经元尼氏体呈现非正常形态,神经元数量较少,且尼氏体可见水肿、空泡甚至碎裂;各治疗组相比对照组,神经元数量增加,且其形态明显改善,其中电针联合转轮训练组改善最为明显;免疫荧光实验结果显示假手术组的小胶质细胞数量明显低于对照组和其他各治疗组,其他各治疗组的小胶质细胞数量明显低于对照组,且电针联合转轮组的小胶质细胞数量明显低于两个单独治疗组。研究结论:（1）电针联合转轮跑步训练治疗对于脊髓损伤大鼠运动功能、感觉功能以及自主神经功能有明显改善,比单纯电针和单纯转轮跑步训练效果都好。（2）电针联合转轮跑步训练治疗可以改善脊髓损伤后的脊髓神经纤维束,修复其神经传导功能;同时加强了后肢肌肉的锻炼,减少后肢肌肉的萎缩,有利于运动功能的恢复。（3）电针联合转轮跑步训练治疗是通过修复神经元的结构和功能、抑制脊髓损伤大鼠损伤处小胶质细胞的活化,从而减少瘢痕的产生,来实现促进其运动功能的恢复。
李可[9]（2020）在《电针大椎穴、命门穴对脊髓损伤大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响》文中提出1研究目的与意义脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）是由创伤或非创伤事件导致脊柱骨折或脱位,患者长期的残疾对个人、家庭、社会都会带来严重的负担。脊髓损伤继原发性损伤后发生的一系列的继发性病理生理变化,包括细胞凋亡、炎症和神经变性,是影响脊髓损伤后神经再生和恢复的主要障碍。磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（phosphoinosmde-3-kinase/protein kinase B/the mammalian target of rapamycin,PI3K/AKT/mTOR）信号通路是调控细胞凋亡、自噬,参与机体免疫、代谢等重要机体活动的信号通路之一,对脊髓损伤的发展、治疗、预后至关重要。电针大椎穴、命门穴治疗脊髓损伤在临床上取得明确疗效,但相关机制尚未明确。本研究旨在阐明电针大椎穴、命门穴对脊髓损伤后PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响,进一步阐明电针改善脊髓损伤后病理损伤的机制,为临床电针治疗脊髓损伤提供科学依据。2研究方法本研究采用动物实验方法,将SD大鼠随机分为空白组、假手术组各18只,模型组、电针组各54只。模型组、电针组各54只大鼠随机分1天亚组、14天亚组、28天亚组各18只。模型组、电针组大鼠利用改良式Allen’s打击法复制T10脊髓损伤动物模型后。电针组大鼠每日于大椎穴、命门穴进行电针干预20分钟,空白组、假手术组、模型组大鼠不予电针刺激,仅每日相同时间、相同强度进行抓取、固定,以保证相同的处理条件。1天亚组、14天亚组、28天亚组大鼠分别再干预1天、14天、28天后进行取材、检测。采用Basso,Beattie&Bresnahan（BBB）运动功能评定量表对大鼠进行肢体运动功能评分,评价电针大椎穴、命门穴对脊髓损伤模型大鼠运动功能恢复的影响;采用磁共振成像（Magnetic Resonance Imaging,MRI）、苏木素-伊红染色（Hematoxylin-eosin,HE）染色观察大鼠脊髓组织,评价电针大椎穴、命门穴对脊髓损伤模型大鼠受损脊髓形态组织的影响;采用免疫组化、蛋白免疫印迹（Westernblot,WB）分析检测脊髓损伤模型大鼠受损脊髓组织PI3K/AKT/mTOR信号通路相关指标,包括PI3K、p-PI3K、AKT、mTOR、p-mTOR、p70 核糖体蛋白s6激酶（p70 Ribosomal Protein S6 Kinase,p70S6K）、p-p70S6K、10 号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋 白 同源物基因（phosphatase and tensinhomology deleted on chromosome ten,PTEN）论证电针大椎穴、命门穴对脊髓损伤模型大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响;WB检测脊髓损伤模型大鼠受损脊髓组织半胱氨酸蛋白酶 3（cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase 3）评价电针大椎穴、命门穴对脊髓损伤模型大鼠脊髓受损后细胞凋亡、自噬的影响。3研究成果3.1 BBB运动功能评定量表结果示:干预1天、14天、28天,模型组大鼠BBB运动功能评定量表评分分值均明显低于空白组、假手术组,差异具有统计学意义（P<0.01）,电针组大鼠BBB运动功能评定量表评分分值均明显高于模型组,差异具有统计学意义（P<0.01）,且随着电针干预大椎穴、命门穴干预时间越长,脊髓损伤大鼠肢体功能恢复越明显（P<0.01）。3.2 MRI结果示:空白组、假手术组大鼠脊髓无变形、脊髓信号无异常,模型组、电针组大鼠脊髓损伤、脊髓受损区域有高信号。随着时间的推移（1天、14天、28天）,模型组、电针组大鼠脊髓损伤模型大鼠脊髓炎症区面积逐渐减小（P<0.01）;电针组大鼠脊髓损伤炎症T2WI高强度区面积减小程度明显高于模型组,随着时间的推移（1天、14天、28天）,差异越明显（P<0.01）。3.3 HE染色结果示:空白组、假手术组大鼠脊髓组织、细胞结构完整,灰质呈蝴蝶状,白质排列致密,与灰质间界限清晰。模型组、电针组大鼠脊髓组织明显破坏,随着时间推移,受损脊髓组织有一定的自我恢复。总体来说,模型组大鼠脊髓损伤组织破坏严重,脊髓损伤部位脊髓灰质与白质分界不清、结构混乱,白质松散不规则,且有较多大的坏死空洞存在,血细胞和炎性细胞浸润。电针组和模型组相比,脊髓空洞腔小,且腔处组织较更紧密,细胞排列较整齐,炎性细胞浸润及血细胞明显减少。3.4免疫组化结果示:干预1天、14天、28天,模型组大鼠脊髓组织caspase 3、p-PI3K、p-mTOR的MOD值经统计学分析,均高于空白组、假手术组,差异具有统计学意义（P<0.01）;电针组大鼠脊髓组织caspase 3的MOD值低于模型组、高于空白组、假手术组,p-PI3K和p-mTOR的MOD值高于模型组,经统计学分析,有显着性差异（P<0.01）。3.5 WB结果示:空白组、假手术组、模型组、电针组大鼠脊髓组织p-mTOR的表达明显高于腹腔注射mTOR阻滞剂雷帕霉素后,经统计学分析具有显着性差异（P<0.01）,而电针组大鼠脊髓组织p-mTOR的表达明显高于模型组,差异具有统计学意义（P<0.01）;干预1天、14天、28天,与空白组、假手术组相比,脊髓损伤模型大鼠脊髓损伤组织中 p-PI3K/PI3K、p-mTOR/mTOR、p-p70S6/p70S6、AKT 水平明显降低,caspase3、PTEN的表达水平升高（P<0.01）,而电针组大鼠脊髓损伤组织中p-PI3K/PI3K、p-mTOR/mTOR、p-p70S6/p70S6、AKT 水平均明显高于模型组,caspase 3、PTEN 则低于模型组（P<0.01）。并且各指标与一天亚组相比,变化差值均有统计学意义（P<0.01）。4结论4.1电针大椎穴、命门穴能有效改善脊髓损伤模型大鼠下肢的运动功能恢复。4.2电针大椎穴、命门穴能对脊髓损伤模型大鼠受损脊髓部位的组织起到修复作用,且干预时间越长。4.3电针大椎穴、命门穴可能通过PI3K/AKT/mTOR信号通路干预脊髓损伤模型大鼠受损脊髓组织细胞凋亡、自噬。
周志东[10]（2020）在《miR-136-5p介导电针疗法修复脊髓针刺损伤的作用及机制研究》文中指出研究背景脊髓损伤主要分为外伤性脊髓损伤和非外伤性脊髓损伤,而外伤性脊髓损伤最为常见,它往往导致损伤节段以下肢体严重的功能障碍。脊髓损伤不仅会给患者本人带来身体和心理的严重伤害,还会对整个社会造成巨大的经济负担。针对脊髓损伤的预防、治疗和康复已成为当今医学界的一大课题。麻醉作为一种医疗干预手段,与手术患者的生命健康安全息息相关。随着人们教育背景的提升,健康观念的转变,手术的安全性和麻醉所带来的风险受到患者及家属的广泛关注。椎管内麻醉是常用的麻醉方法之一,主要通过穿刺技术将麻醉药物注入椎管的蛛网膜下腔或硬膜外腔,即神经根受到阻滞,使该神经根支配的相应区域产生麻醉作用,统称为椎管内麻醉。椎管内麻醉效果确切,对仪器设备要求低,可以为临床手术提供足够的镇痛作用,显着避免气道相关操作带来的呼吸系统并发症,并可在整个手术过程中保持与意识清醒的患者进行交流沟通,已广泛应用于外科手术中。不当的椎管内穿刺操作有可能使患者在一定时间内产生运动功能障碍,局部血管损害,最后造成局部微循环障碍,脊髓损伤病情也因上述因素而加重。电针疗法是一种有效的针灸方法,已成功用于治疗多种脊髓损伤相关疾病,它能有效恢复脊髓损伤中受损的中枢神经功能、抑制神经细胞的凋亡、改善损伤区微环境等。微小RNA（miRNA）是一类长约22nt的小非编码RNA。在大多数癌症中肿瘤原癌基因表达受到miRNA抑制作用影响,参与肿瘤细胞的各种生物过程,包括癌细胞代谢,增殖,侵袭和迁移以及诱导细胞自噬和细胞凋亡。脊髓损伤后的病理之一是神经元和轴突细胞的凋亡以及炎症反应。已有研究表明脊髓损伤所引发的病理生理变化受特定miRNA表达的严密调控,且脊髓损伤后,多种miRNA通过靶向调控抗炎细胞和促炎细胞因子的mRNA来调节脊髓损伤的炎症反应。然而电针疗法是否通过调控miRNA修复脊髓损伤我们尚不清楚。因此,本研究通过构建大鼠针刺造成的脊髓损伤模型,利用RNA测序技术,分析电针是否通过调控miRNA修复针刺造成的脊髓损伤并探讨其相关机制。第一部分电针治疗脊髓针刺损伤大鼠模型行为学和脊髓组织病理学形态观察目的检测电针疗法对脊髓针刺损伤的治疗效果。方法将18只SD大鼠分成假手术（Sham）组、穿刺损伤模型（SCI）组及穿刺损伤+电针治疗（SCI+EA）组（每组6只）。Sham组按手术步骤进行,无需其他操作;SCI组:做脊髓穿刺,但不做电针治疗;SCI+EA组:针刺损伤手术后三天开始每日电针刺激大椎穴、命门穴、夹脊穴进行治疗。各组的大鼠运动功能应用BBB评分法评价,并结合HE染色法对病理组织形态进行观察,脊髓组织中IL-1β和TNF-α的表达采用酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测。结果（1）BBB评分结果显示,大鼠脊髓针刺损伤7天后,SCI+EA组大鼠BBB评分（20.50±0.55）显着高于SCI组（19.17±0.75）,电针治疗21天后,SCI+EA组大鼠BBB评分（20.67±0.52）与Sham组（21.00±0.00）无显着差异,且显着高于SCI组（19.83±0.75）。电针治疗能明显改善脊髓针刺损伤大鼠运动功能。（2）观察脊髓病理形态学HE染色结果,发现电针治疗后,脊髓组织更加完整,细胞形态结构轮廓更加清晰,炎症相关细胞数目减少,正常神经细胞数量增加。（3）ELISA和qRT-PCR对炎症因子IL-1β和TNF-α进行检测,针刺脊髓损伤21天后,SCI+EA组TNF-α和IL-1β表达量分别为616.25 pg/mg和699.16pg/mg,明显低于SCI组（718.01 pg/mg,1360.62pg/mg）。表明电针治疗后,炎症因子在脊髓组织中表达下调,电针治疗可能通过减少炎症因子释放改善脊髓损伤。第二部分电针疗法修复脊髓针刺损伤功能的miRNA差异表达分析及功能注释目的利用小RNA（small RNA）测序技术筛选电针治疗脊髓损伤模型大鼠差异表达的miRNA。方法利用small RNA测序技术,确定SCI组和SCI+EA组大鼠miRNA表达谱;分析组间差异表达的miRNA,利用GO功能和KEGG代谢途径富集方法分析差异表达的miRNA;通过qRT-PCR检测5个随机挑选的miRNA的表达量,确定测序结果的可靠性。结果（1）利用small RNA测序技术,共筛选出168个差异表达miRNA,其中在SCI+EA组中,29个显着性上调,139个显着性下调。（2）综合多种数据库分析测序结果中差异表达miRNA的靶基因,最终预测到36336个靶基因。这些靶基因显着性富集在磷酸化、转录调控、DNA-模板化、蛋白质磷酸化等GO条目,并显着性富集在粘着力,胰岛素和轴突指导等信号通路。（3）qRT-PCR验证结果表明,与SCI组相比,SCI+EA组中rno-miR-219a-5p、rno-miR-128-3p、rno-miR-136-5p、rno-miR-7b表达下调,rno-miR-486表达上调,其中rno-miR-486和rno-miR-7b表达没有显着性。qRT-PCR结果与测序结果表达趋势相似,表明测序结果准确可信。第三部分miR-136-5p对大鼠小胶质细胞相关功能的影响目的进一步探讨在电针治疗修复针刺脊髓损伤修复过程中miR-136-5p调节小胶质细胞的功能。方法qRT-PCR检测小胶质细胞中转染miR-136-5p模拟物后3个靶基因的表达情况;用CCK-8法和流式细胞仪检测过表达miR-136-5p后,检测小胶质细胞的增殖和凋亡能力。结果（1）qRT-PCR验证3个靶基因结果显示,miR-136-5p mimics显着抑制Sema3a、Vangl2、Gng3表达,表明Sema3a、Vangl2、Gng3表达与miR-136-5p表达相关。（2）与对照组相比,小胶质细胞干扰miR-136-5p表达后,细胞增殖能力降低,细胞凋亡增多。结论本研究通过small RNA测序研究了电针疗法修复脊髓针刺损伤功能与未经电针治疗的miRNA差异表达谱,结果表明电针治疗后miR-136-5p表达下调。在体外小胶质细胞研究中发现,miR-136-5p促进小胶质细胞凋亡并抑制其细胞增殖能力;过表达miR-136-5p后显着抑制Sema3a、Vangl2、Gng3 mRNA表达,并且Vangl2蛋白表达。实验研究表明电针治疗通过下调miR-136-5p表达,抑制小胶质细胞增殖并促进其凋亡,并减少Vangl2蛋白表达,从而促进脊髓损伤恢复。
二、脊髓损伤患者的免疫功能变化及意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、脊髓损伤患者的免疫功能变化及意义（论文提纲范文）
（1）中西医协同治疗视神经脊髓炎相关性视神经炎的应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 视神经脊髓炎相关性视神经炎实验模型的建立及应用研究进展 |
| 1 前言 |
| 2 动物实验模型 |
| 3 离体组织实验模型 |
| 4 细胞实验模型 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 视神经脊髓炎谱系疾病发病相关抗体的研究进展 |
| 1 NMO概述 |
| 2 AQP4-IgG |
| 3 MOG-IgG |
| 4 GFAP抗体 |
| 5 AQP1-IgG |
| 6 其他相关性抗体 |
| 7 结语 |
| 参考文献 |
| 综述三 细胞因子与视神经脊髓炎谱系疾病 |
| 1 前言 |
| 2 Th17细胞相关的细胞因子 |
| 3 Th2细胞相关细胞因子 |
| 4 Treg细胞相关细胞因子 |
| 5 其他细胞因子 |
| 6 结语 |
| 参考文献 |
| 综述四 非侵入性电刺激在眼科应用的研究进展 |
| 1 前言 |
| 2 经角膜电刺激 |
| 3 经眼眶电刺激 |
| 4 经眼睑电刺激 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究视神经脊髓炎相关性视神经炎患者临床特点及疗效分析 |
| 研究背景 |
| (一) 视神经脊髓炎相关性视神经炎患者的临床特点分析 |
| 1 研究方案 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 临床评估 |
| 1.6 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 一般资料 |
| 2.2 临床特点 |
| 2.3 实验室检查 |
| 2.4 影像学特点 |
| (二) 针刺联合中药治疗NMO所致视神经萎缩的临床疗效 |
| 1 临床资料 |
| 1.1 视神经萎缩诊断标准 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 2 治疗方案 |
| 3 疗效指标 |
| 3.1 最佳矫正视力 |
| 3.2 动态视野 |
| 3.3 统计学分析 |
| 4 结果 |
| 4.1 NMO视神经萎缩患者一般资料 |
| 4.2 临床表现 |
| 4.3 治疗前后最佳矫正视力比较 |
| 4.4 针刺治疗前后动态视野变化 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 视神经脊髓炎相关视神经炎大鼠模型的构建与评价 |
| 研究背景 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验用动物及患者血清 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 实验方案 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 模型诱导后视神经内AQP4-IgG的沉积 |
| 2.2 大鼠视神经功能学变化 |
| 2.3 视神经光镜观察结果 |
| 2.4 视神经LFB染色结果 |
| 2.5 脊髓光镜观察结果 |
| 2.6 脊髓组织形态LFB染色结果 |
| 2.7 大脑光镜及HE染色观察结果 |
| 2.8 视网膜的光镜观察结果 |
| 2.9 视神经电镜超微结构观察 |
| 2.10 视神经NFL免疫荧光结果 |
| 2.11 视神经内CD68免疫荧光结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 NMO-ON动物模型构建国内外进展 |
| 3.2 本研究的主要结果与未来展望 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 实验研究 调肝活络法治疗视神经脊髓炎相关性视神经炎的疗效及机制探究 |
| 研究背景 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验用动物及血清 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 大鼠视神经F-VEP变化 |
| 2.2 大鼠视神经PLR变化 |
| 2.3 大鼠视网膜Brn3a变化 |
| 2.4 大鼠视神经形态学变化(HE染色) |
| 2.5 大鼠视神经超微结构变化(电镜) |
| 2.6 大鼠视神经组织免疫荧光染色结果 |
| 2.7 Western Blotting法检测视神经内目标蛋白阳性表达结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 NMO-ON的中西医防治现状 |
| 3.2 NMO-ON发病机制研究进展 |
| 3.3 调肝活络防治NMO-ON的疗效及潜在机制 |
| 4 结论 |
| 5 本研究主要创新、局限及未来展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间主要研究成果 |
（2）白藜芦醇/骨髓间充质干细胞联合治疗大鼠脊髓损伤的作用与机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:大鼠脊髓损伤后Sirt-1 表达变化与炎症的关系探究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂与仪器设备 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 研究对象和实验分组 |
| 2.2.2 大鼠脊髓损伤模型的建立 |
| 2.2.3 样品取材 |
| 2.2.4 组织灌流 |
| 2.2.5 Western Blot检测 |
| 2.2.6 Elisa检测 |
| 2.2.7 免疫荧光染色 |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 脊髓损伤后不同时间点Sirt-1 表达的变化 |
| 3.2 脊髓损伤后不同时间点炎症因子表达的变化 |
| 3.3 脊髓损伤后Sirt-1 和炎症因子表达变化呈相关性 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:白藜芦醇对大鼠骨髓间充质细胞炎症环境中的作用及作用机制 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂 |
| 2.2 主要仪器设备 |
| 2.3 大鼠骨髓间充质干细胞培养及细胞操作 |
| 2.3.1 细胞培养环境及细胞培养液的制备配方 |
| 2.3.2 大鼠骨髓间充质干细胞原代培养方法 |
| 2.3.3 细胞换液 |
| 2.3.4 细胞传代 |
| 2.3.5 细胞冻存 |
| 2.3.6 细胞复苏 |
| 2.4 流式细胞术抗体标记检测 |
| 2.5 MTT检测 |
| 2.5.1 MTT检测TNF-α不同处理时长细胞生存率 |
| 2.5.2 MTT检测不同白藜芦醇浓度对TNF-α诱导炎症模型细胞生存率作用 |
| 2.6 细胞分组及处理 |
| 2.7 Elisa检测 |
| 2.8 Western Blot检测 |
| 2.8.1 Western Blot样品收集及制备 |
| 2.8.2 Western Blot检测 |
| 2.9 Real-Time PCR检测 |
| 2.9.1 RNA提取 |
| 2.9.2 cDNA合成 |
| 2.9.3 Real-Time PCR反应 |
| 2.10 流式细胞术凋亡检测 |
| 2.11 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 原代培养大鼠骨髓间充质干细胞光学显微镜下形态观察 |
| 3.2 原代培养的大鼠骨髓间充质干细胞表面抗原分子检测 |
| 3.3 骨髓间充质干细胞在炎症模型中细胞存活率与时间变化的关系 |
| 3.4 骨髓间充质干细胞在炎症模型中不同浓度白藜芦醇干预对细胞生存率的影响 |
| 3.5 白藜芦醇干预对大鼠骨髓间充质干细胞炎症刺激环境中炎症因子表达的变化 |
| 3.6 白藜芦醇对大鼠骨髓间充质干细胞在炎症刺激环境Sirt-1/NF-κB表达的干预 |
| 3.7 白藜芦醇对大鼠骨髓间充质干细胞在炎症刺激环境中凋亡蛋白表达的干预 |
| 3.8 白藜芦醇对大鼠骨髓间充质干细胞在炎症刺激环境中作用与Sirt-1 的关系 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分:白藜芦醇/骨髓间充质干细胞联合治疗脊髓损伤的作用及机制 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂与仪器设备 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.2 研究对象和实验分组 |
| 2.3 大鼠脊髓损伤模型的建立 |
| 2.4 骨髓间充质干细胞显微注射移植 |
| 2.5 BBB评分 |
| 2.6 样品取材及组织灌流 |
| 2.7 Nissl染色 |
| 2.8 Western Blot检测 |
| 2.9 骨髓间充质干细胞荧光探针标记 |
| 2.10 免疫荧光染色 |
| 2.11 Elisa法检测 |
| 2.12 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 不同处理组大鼠脊髓损伤后运动功能的变化 |
| 3.2 不同处理组大鼠脊髓运动神经元的数量变化 |
| 3.3 不同处理组大鼠脊髓组织Sirt-1/NF-κB和炎症因子表达的变化 |
| 3.4 不同处理组大鼠脊髓组织凋亡相关蛋白表达的变化 |
| 3.5 白藜芦醇和骨髓间充质干细胞联合移植对骨髓间充质干细胞和神经元的作用 |
| 3.6 不同处理组大鼠脊髓组织BDNF表达的变化 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 白藜芦醇在脊髓损伤后的应用与机制 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）陇中消肿止痛合剂对继发性脊髓损伤的保护作用及LncRNAMALAT1-ERKp38MAPK-AQP4轴的表达（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 立题依据 |
| 1.SSCI发病机理及对BSCB水代谢机制的研究 |
| 1.1 SSCI的研究现状 |
| 1.2 中医对SSCI的认识 |
| 1.2.1 病因病机 |
| 1.2.2 治法治则 |
| 2.中医治疗SCI |
| 2.1 针灸治疗SCI |
| 2.2 中药治疗SSCI |
| 2.3 康复训练治疗SCI |
| 2.4 中医药调控基因表达治疗SSCI |
| 第二部分 实验研究 |
| 技术路线图 |
| 实验一 陇中消肿止痛合剂对SSCI的保护作用 |
| 1 实验对象及方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 主要试剂及实验设备 |
| 1.3 实验模型建立 |
| 1.4 术后护理 |
| 1.5 评判标准 |
| 1.5.1 模型评判标准 |
| 1.5.2 脊髓的提取 |
| 1.5.3 脊髓含水量的测定 |
| 1.5.4 BSCB完整性检测 |
| 2.统计分析 |
| 3.研究结果 |
| 3.1 治疗前后7 组SD大鼠BBB评分比较 |
| 3.2 干湿法测定脊髓含水量比较 |
| 3.3 BSCB完整性检测 |
| 实验二 陇中消肿止痛合剂对于lncRNAMALAT1-ERK/p38MAPK-AQP-4轴表达的影响 |
| 1.实验对象及方法 |
| 1.1 RT-PCR检测lncRNAMALAT1、ERK、p38MAPK、AQP-4在脊髓组织中的表达实验步骤 |
| 1.2 蛋白质印迹法检测脊髓组织AQP-4、ERK、p38MAPK蛋白表达 |
| 1.3 HE及免疫组织化学染色检测AQP-4、ERK、p38MAPK蛋白表达实验步骤 |
| 2.结果 |
| 2.1 RT-PCR检测lncRNAMALAT1、ERK、p38MAPK、AQP-4在脊髓组织中的表达 |
| 2.1.1 p38MAPK在脊髓组织的表达量 |
| 2.1.2 ERK在脊髓组织的表达量 |
| 2.1.3 MALAT1 在脊髓组织的表达量 |
| 2.1.4 AQP-4在脊髓组织的表达量 |
| 2.2 WB技术检测ERK/p38MAPK-AQP-4在脊髓组织表达 |
| 2.2.1 ERK在脊髓组织中相对表达量 |
| 2.2.2 p38MAKE在脊髓组织相对表达量 |
| 2.2.3 AQP-4脊髓组织相对表达量 |
| 3. |
| 3.1 HE染色及免疫组织化学染色检测AQP-4、ERK、p38MAPK蛋白表达 |
| 3.2 免疫组织化学染色检测AQP-4、ERK、p38MAPK蛋白表达 |
| 3.2.1 免疫组织化学染色检测p38MAPK蛋白表达 |
| 3.2.2 免疫组织化学染色检测ERK蛋白表达 |
| 3.2.3 免疫组织化学染色检测AQP-4 蛋白表达 |
| 第三部分 讨论 |
| 1.陇中消肿止痛合剂的组方分析 |
| 2.阳性对照药物的研究 |
| 3.研究结果分析 |
| 3.1 对于SD大鼠脊髓损伤模型给药后BBB评分结果分析 |
| 3.1.1 陇中消肿止痛合剂与模型组比较 |
| 3.1.2 陇中消肿止痛合剂高、中、低与七叶皂苷钠组BBB评分比较结果分析 |
| 3.1.3 陇中消肿止痛合剂组内比较 |
| 3.2 干湿法测定脊髓含水量数据比较 |
| 3.3 BSCB完整性检测数据比较 |
| 3.4 陇中消肿止痛合剂对于lncRNAMALAT1-ERK/p38MAPK-AQP-4轴表达的影响实验结果分析 |
| 3.4.1 RT-PCR技术检测lncRNAMALAT1、ERK、p38MAPK、AQP-4 在脊髓组织中的表达 |
| 3.4.2 Western Blot技术检测ERK、p38MAPK、AQP-4 在脊髓组织中的表达 |
| 3.5 HE染色 |
| 3.6 免疫组织化学染色检测AQP-4、ERK、p38MAPK蛋白表达 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 文献综述 继发性脊髓损伤中的发生机制及相关分子生物学机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 附录1 攻读硕士期间的成果 |
| 附录2 BBB评分(大鼠脊髓损伤)评分标准 |
（4）减重步行训练对脊髓损伤雄鼠精子质量影响的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.1.1 中青年男性是脊髓损伤高发人群 |
| 1.1.2 精子质量下降是男性脊髓损伤患者生殖功能障碍的重要原因之一 |
| 1.1.3 运动训练是世界公认的脊髓损伤患者功能康复的必要手段 |
| 1.1.4 运动训练对脊髓损伤患者精子质量的影响有待研究 |
| 1.2 研究目的及意义 |
| 1.3 研究内容 |
| 1.4 研究总体技术路线 |
| 第2章 文献综述 |
| 2.1 脊髓损伤后精子质量的变化及影响因素 |
| 2.1.1 脊髓损伤后精子质量的变化 |
| 2.1.2 脊髓损伤后精子质量变化的影响因素 |
| 2.2 运动训练对精子质量的作用及影响因素 |
| 2.2.1 运动训练对精子质量的作用 |
| 2.2.2 运动训练影响精子质量的因素 |
| 第3章 大鼠建模方法的研究及对精子质量影响的评估 |
| 3.1 大鼠建模方法的研究 |
| 3.1.1 研究目的与意义 |
| 3.1.2 研究内容 |
| 3.1.3 研究技术路线 |
| 3.1.4 LAD的设计 |
| 3.1.5 LAD应用效果评估 |
| 3.1.6 讨论 |
| 3.1.7 小结 |
| 3.2 LAD椎板移除对雄鼠精子质量影响的评估 |
| 3.2.1 研究目的与意义 |
| 3.2.2 研究内容 |
| 3.2.3 研究技术路线 |
| 3.2.4 材料与方法 |
| 3.2.5 结果 |
| 3.2.6 讨论 |
| 3.2.7 小结 |
| 第4章 脊髓损伤后雄鼠精子质量的时间变化特征及影响因素分析 |
| 4.1 研究目的与意义 |
| 4.2 研究内容 |
| 4.3 研究技术路线 |
| 4.4 材料与方法 |
| 4.4.1 实验动物 |
| 4.4.2 实验仪器、试剂及溶液 |
| 4.4.3 实验方法 |
| 4.4.4 统计分析方法 |
| 4.4.5 研究质量控制方法 |
| 4.5 结果 |
| 4.5.1 不同时间点大鼠精子质量变化 |
| 4.5.2 不同时间点大鼠HPT轴功能变化 |
| 4.5.3 不同时间点大鼠睾丸组织学指标变化 |
| 4.5.4 不同时间点大鼠精浆促炎性细胞因子变化 |
| 4.6 讨论 |
| 4.6.1 脊髓损伤后雄鼠精子质量的时间变化特征 |
| 4.6.2 脊髓损伤后精子质量变化的影响因素分析 |
| 4.7 小结 |
| 第5章 不同强度BWSTT对脊髓损伤雄鼠精子质量的影响 |
| 5.1 研究目的与意义 |
| 5.2 研究内容 |
| 5.3 研究技术路线 |
| 5.4 材料与方法 |
| 5.4.1 实验动物 |
| 5.4.2 实验仪器、试剂及溶液 |
| 5.4.3 实验方法 |
| 5.4.4 统计分析方法 |
| 5.4.5 研究质量控制方法 |
| 5.5 结果 |
| 5.5.1 各组大鼠后肢BBB评分比较 |
| 5.5.2 各组大鼠精子质量比较 |
| 5.5.3 各组大鼠HPT轴功能比较 |
| 5.5.4 各组大鼠睾丸组织学指标比较 |
| 5.5.5 各组大鼠精浆促炎性细胞因子比较 |
| 5.6 讨论 |
| 5.6.1 BWSTT起始时间点及运动强度选择 |
| 5.6.2 BWSTT促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能康复 |
| 5.6.3 BWSTT加重脊髓损伤大鼠精子质量下降 |
| 5.6.4 BWSTT加重脊髓损伤大鼠精子质量下降的影响因素分析 |
| 5.6.5 运动训练诱导脊髓损伤精子质量下降的对抗策略探讨 |
| 5.7 小结 |
| 第6章 本研究对脊髓损伤男性康复护理实践的启示 |
| 6.1 注重对脊髓损伤男性患者机体的全面评估 |
| 6.2 为脊髓损伤运动训练男性患者生育力保护提供指导 |
| 6.3 为脊髓损伤男性患者运动训练策略的制订提供参考 |
| 6.4 探索脊髓损伤运动训练精子保护方法 |
| 第7章 结论 |
| 7.1 研究结论 |
| 7.2 研究创新点 |
| 7.3 研究局限性与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（5）Miro1在脊髓损伤中抑制神经元凋亡及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 序言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 :脊髓损伤动物模型的建立及评价 |
| 一.引言 |
| 二.材料与方法 |
| 三.结果 |
| 四.讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 :Miro1在大鼠脊髓损伤不同时间段的变化 |
| 一.引言 |
| 二.材料与方法 |
| 三.结果 |
| 四.讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 :Miro1在脊髓损伤中对神经元凋亡的抑制及其机制探讨 |
| 一.引言 |
| 二.材料与方法 |
| 四.讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 :慢病毒载体注射致Miro1过表达对改善脊髓损伤预后的探讨 |
| 一.引言 |
| 二.材料与方法 |
| 三.结果 |
| 四.讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 综述 线粒体相关蛋白在神经元细胞凋亡中作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 英文缩略语及注释 |
| 攻读博士学位期间公开发表的论文及科研成果 |
| 致谢 |
（6）电针对SCI大鼠NGF、TrkA表达影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 动物实验 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验器械 |
| 1.1.3 实验试剂 |
| 1.1.4 实验仪器和设备 |
| 1.2 病理学实验 |
| 1.2.1 实验试剂 |
| 1.2.2 实验仪器和设备 |
| 1.3 免疫组织化学实验 |
| 1.3.1 实验试剂 |
| 1.3.2 实验仪器和设备 |
| 1.4 实时荧光定量PCR实验 |
| 1.4.1 实验试剂 |
| 1.4.2 实验仪器和设备 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 动物造模及干预 |
| 2.1.1 试剂配制 |
| 2.1.2 动物饲养及环境 |
| 2.1.3 脊髓损伤实验大鼠建模 |
| 2.1.4 脊髓损伤实验大鼠建立判定 |
| 2.1.5 脊髓损伤大鼠术后护理 |
| 2.1.6 脊髓损伤实验分组与电针干预 |
| 2.1.7 脊髓标本采集与处理 |
| 2.2 行为学评价指标 |
| 2.2.1 死亡率 |
| 2.2.2 大鼠行为学观察及运动功能(BBB)检测 |
| 2.3 病理学实验 |
| 2.3.1 石蜡切片的制备 |
| 2.3.2 石蜡脱蜡和水化 |
| 2.3.3 苏木素-伊红(HE)染色 |
| 2.3.4 脱水封片 |
| 2.3.5 镜下分析 |
| 2.4 免疫组织化学实验 |
| 2.4.1 试剂配制 |
| 2.4.2 免疫组化法检测 |
| 2.5 实时荧光定量PCR实验 |
| 2.5.1 组织总RNA的提取及逆转录 |
| 2.5.2 RNA浓度及纯度检测 |
| 2.5.3 去处基因组DNA的污染及逆转录 |
| 2.5.4 引物设计 |
| 2.5.5 实时荧光定量PCR |
| 2.5.6 PCR结果及数据分析 |
| 2.5.7 统计学方法 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 建模大鼠死亡率情况 |
| 3.2 大鼠运动功能BBB评分 |
| 3.3 病理学实验 |
| 3.4 免疫组织化学实验 |
| 3.5 实时荧光定量PCR实验 |
| 3.5.1 总RNA表达结果 |
| 3.5.2 实时荧光定量PCR性能评价 |
| 3.5.3 实时荧光定量PCR结果 |
| 4.讨论 |
| 4.1 选题依据 |
| 4.1.1 祖国传统医学对脊髓损伤的认识 |
| 4.1.2 现代医学对脊髓损伤的认识 |
| 4.1.3 电针可以促进脊髓损伤的修复 |
| 4.1.4 NGF及 Trk A对神经修复具有可塑性 |
| 4.2 实验方案选择 |
| 4.2.1 实验动物选择 |
| 4.2.2 造模选择的方式 |
| 4.2.3 脊髓损伤节段的选择 |
| 4.2.4 干预手段的依据 |
| 4.2.5 行为学指标的依据 |
| 4.2.6 取材时间点的选择 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 行为学功能评价 |
| 4.3.2 病理形态学实验结果分析 |
| 4.3.3 免疫组织化学结果分析 |
| 4.3.4 实时荧光定量PCR结果分析 |
| 4.3.5 免疫组织化学结果与实时荧光定量PCR结果分析 |
| 5.本研究不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 综述 髓损伤中医康复治疗研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介及攻读学位期间获得的科研成果 |
（7）“脊髓康”治疗脊髓损伤的临床观察及其促进脊髓损伤后神经再生的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1 祖国医学对脊髓损伤的认识 |
| 1.1 文献记载 |
| 1.2 病因病机的认识 |
| 1.3 中医药对脊髓损伤的治疗 |
| 2 现代医学对脊髓损伤的认识 |
| 2.1 脊髓损伤的病因及病理机制 |
| 2.2 脊髓损伤的治疗 |
| 3 星形胶质细胞的研究进展 |
| 3.1 星形胶质细胞生理功能 |
| 3.2 星形胶质细胞参与的病理反应 |
| 3.3 星形胶质细胞的修复功能 |
| 3.4 星形胶质细胞与脊髓损伤后修复的关系 |
| 参考文献 |
| 第二部分 “脊髓康”治疗脊髓损伤的临床观察 |
| 1 “脊髓康”促进脊髓损伤患者神经功能恢复的临床研究 |
| 1.1 临床资料 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 治疗方案 |
| 1.6 评价标准 |
| 1.7 安全指标检测 |
| 1.8 统计学处理 |
| 1.9 分组方法 |
| 1.10 结果 |
| 2 中医药治疗脊髓损伤的文献研究 |
| 2.1 资料与方法 |
| 2.2 主要治法及用药情况分析 |
| 2.3 主要治则及选取方药分析 |
| 2.4 辨证用药规律分析 |
| 2.5 药物分类组合情况 |
| 2.6 方剂中各类药物组合频率分析 |
| 2.7 治法运用规律分析 |
| 3 “脊髓康”的组方原则及处方分析 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 “脊髓康”促进神经再生的实验研究 |
| 实验一 星形胶质细胞在神经再生过程中的动态表达及意义 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 主要药物和试剂 |
| 1.4 动物分组 |
| 1.5 模型制备 |
| 1.6 标本采集 |
| 1.7 免疫组化法观察脊髓组织GFAP的蛋白表达 |
| 1.8 Western blottingting检测脊髓组织GFAP的蛋白表达 |
| 1.9 荧光定量PCR法测定脊髓组织GFAP mRNA表达 |
| 1.10 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 SCI术后大鼠脊髓标本HE染色及GFAP免疫组化表达对比 |
| 2.2 各组大鼠GFAP蛋白Western blot检测动态表达 |
| 2.3 各组大鼠GFAP mRNA动态表达 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二“脊髓康”治疗脊髓损伤的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 主要药物与试剂 |
| 1.4 中药“脊髓康”药液制备 |
| 1.5 0.3%强的松药液制备 |
| 1.6 动物分组及给药剂量 |
| 1.7 模型制备 |
| 1.8 标本采集 |
| 1.9 HE染色 |
| 1.10 Nissl染色 |
| 1.11 斜板实验、肌力检测评价 |
| 2 结果 |
| 2.1 大鼠脊髓组织HE染色 |
| 2.2 大鼠脊髓组织Nissl染色 |
| 2.3 “脊髓康”对脊髓损伤大鼠爬板实验的影响 |
| 2.4 “脊髓康”对脊髓损伤大鼠双后肢神经功能评分的影响 |
| 3 小结 |
| 实验三“脊髓康”对脊髓损伤大鼠星形胶质细胞GFAP、CSPG的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 主要药物与试剂 |
| 1.4 中药“脊髓康”药液制备 |
| 1.5 0.3%强的松药液制备 |
| 1.6 动物分组 |
| 1.7 模型制备 |
| 1.8 标本采集 |
| 1.9 免疫组化法观察脊髓组织GFAP、CSPG的蛋白表达 |
| 1.10 Western blottingting检测脊髓组织GFAP、CSPG的蛋白表达 |
| 1.11 荧光定量PCR法测定脊髓组织GFAP mRNA、CSPG mRNA表达 |
| 1.12 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组大鼠脊髓组织中GFAP蛋白的免疫组化表达 |
| 2.2 各组大鼠脊髓组织中CSPG蛋白的免疫组化表达 |
| 2.3 各组大鼠脊髓组织中GFAP蛋白的Western blottingting表达 |
| 2.4 各组大鼠脊髓组织中CSPG蛋白的Western blottingting表达 |
| 2.5 各组大鼠脊髓组织中GFAP mRNA表达 |
| 2.6 各组大鼠脊髓组织中CSPG mRNA表达 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 全文总结与展望 |
| 综述1 大鼠脊髄损伤造模研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述2 机器辅助训练对脊髓损伤(SCI)患者康复影响的Meta分析 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 中英文缩略词表 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（8）督脉电针联合转轮跑步训练促进大鼠脊髓损伤后功能恢复的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 选题的背景 |
| 1.1.1 脊髓损伤的概念 |
| 1.1.2 脊髓损伤的发病率 |
| 1.1.3 脊髓损伤带来的社会经济负担 |
| 1.1.4 脊髓损伤目前的治疗现状 |
| 1.2 研究的目的和意义 |
| 1.2.1 明确电针联合转轮跑步是否对脊髓损伤大鼠的功能有所改善 |
| 1.2.2 明确电针联合转轮跑步是否比单纯电针或转轮跑步对脊髓损伤大鼠的功能改善效果好 |
| 1.2.3 明确电针联合转轮跑步训练对脊髓损伤大鼠的功能改善效果的形态学依据 |
| 1.3 文献综述 |
| 1.3.1 脊髓损伤简述 |
| 1.3.2 脊髓损伤的病理变化 |
| 1.3.3 脊髓损伤的动物模型 |
| 1.3.4 脊髓损伤的治疗现状 |
| 1.4 研究对象和方法 |
| 1.4.1 实验动物及其分组 |
| 1.4.2 实验器材和试剂 |
| 1.4.3 大鼠脊髓损伤模型构建 |
| 1.4.4 术后护理 |
| 1.4.5 电针模型构建 |
| 1.4.6 转轮跑步机训练 |
| 1.4.7 体重、尿量测量 |
| 1.4.8 BBB(Basso-Beattie-Bresnahan)评分 |
| 1.4.9 温痛觉实验 |
| 1.4.10 斜板实验 |
| 1.4.11 核磁共振(MRI) |
| 1.4.12 正电子放射断层扫描(PET)/计算机断层成像(CT) |
| 1.4.13 电生理实验 |
| 1.4.14 实验取材 |
| 1.4.15 尼氏染色 |
| 1.4.16 免疫荧光染色 |
| 1.4.17 统计学方法 |
| 第2章 研究结果 |
| 2.1 脊髓损伤大鼠的体重和尿量变化结果 |
| 2.1.1 脊髓损伤大鼠的体重变化结果 |
| 2.1.2 脊髓损伤大鼠的尿量变化结果 |
| 2.2 脊髓损伤大鼠行为学实验结果 |
| 2.2.1 脊髓损伤大鼠BBB评分结果 |
| 2.2.2 脊髓损伤大鼠的斜板实验结果 |
| 2.3 脊髓损伤大鼠温痛觉功能实验结果 |
| 2.4 脊髓损伤大鼠影像学结果 |
| 2.4.1 脊髓损伤大鼠核磁共振结果 |
| 2.4.2 脊髓损伤大鼠PET-CT结果 |
| 2.5 脊髓损伤大鼠电生理结果 |
| 2.5.1 运动诱发电位 |
| 2.5.2 肌电图 |
| 2.6 脊髓损伤大鼠形态学结果 |
| 2.6.1 脊髓损伤大鼠尼氏染色结果 |
| 2.6.2 脊髓损伤大鼠免疫荧光染色结果 |
| 第3章 讨论与分析 |
| 3.1 脊髓损伤大鼠的体重和尿量变化结果讨论与分析 |
| 3.2 脊髓损伤大鼠的行为学变化结果讨论与分析 |
| 3.3 脊髓损伤大鼠的温痛觉功能变化结果讨论与分析 |
| 3.4 脊髓损伤大鼠的影像学变化结果讨论与分析 |
| 3.5 脊髓损伤大鼠的电生理实验变化结果讨论与分析 |
| 3.6 脊髓损伤大鼠的脊髓损伤处形态学变化结果讨论与分析 |
| 第4章 结论 |
| 研究不足与展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文与研究成果 |
| 致谢 |
（9）电针大椎穴、命门穴对脊髓损伤大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 大椎穴、命门穴临床治疗神经系统疾病研究进展 |
| 1 脑卒中 |
| 2 认知功能障碍 |
| 3 阿尔兹海默病 |
| 4 颈椎病 |
| 5 脊髓损伤 |
| 6 腰椎间盘突出症 |
| 7 小儿脑性瘫痪 |
| 8 其他 |
| 9 小结 |
| 综述二 人体神经系统PI3K/AKT/mTOR信号通路研究进展 |
| 1 PI3K/AKT/mTOR信号通路概况 |
| 2 PI3K/AKT/mTOR信号通路的调控作用 |
| 3 PI3K/AKT/mTOR信号通路与神经系统 |
| 4 小结 |
| 综述三 脊髓损伤临床治疗进展 |
| 1 手术 |
| 2 升高血压 |
| 3 干细胞移植 |
| 4 药理学治疗 |
| 5 中医药 |
| 6 运动训练 |
| 7 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 实验一 电针大椎穴、命门穴对脊髓损伤模型大鼠肢体功能的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 实验二 电针大椎穴、命门穴对脊髓损伤模型大鼠受损脊髓的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 实验三 电针大椎穴、命门穴对脊髓损伤模型大鼠mTOR的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 实验四 电针大椎穴、命门穴对脊髓损伤模型大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（10）miR-136-5p介导电针疗法修复脊髓针刺损伤的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 第一部分 引言 |
| 1.1 麻醉的概述 |
| 1.2 脊髓针刺损伤概述 |
| 1.2.1 脊髓损伤病理机理 |
| 1.2.2 脊髓损伤的治疗原理 |
| 1.3 电针在脊髓损伤中的应用 |
| 1.3.1 电针治疗脊髓损伤原理 |
| 1.4 miRNA在脊髓损伤中的研究 |
| 1.5 本课题研究的目的及意义 |
| 1.6 本课题研究的内容 |
| 第二部分 电针疗法修复脊髓针刺损伤大鼠模型行为学和组织病理学形态观察 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验分组 |
| 2.2.2 模型制备 |
| 2.2.3 实验干预方法 |
| 2.2.4 指标检测及方法 |
| 2.2.5 qRT-PCR检测基因表达 |
| 2.2.6 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 BBB评分法观察各组大鼠运动功能 |
| 2.3.2 HE染色观察各组大鼠脊髓组织病理形态学变化 |
| 2.3.3 ELISA法检测炎症因子 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三部分 电针疗法修复脊髓针刺损伤功能的miRNA差异表达分析及功能注释 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验材料及试剂 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 RNA抽提和质检 |
| 3.2.2 构建cDNA文库并测序 |
| 3.2.3 测序数据质量监控 |
| 3.2.4 miRNA分析 |
| 3.2.5 差异基因表达分析 |
| 3.2.6 差异表达miRNA靶基因预测 |
| 3.2.7 差异表达靶基因功能分析 |
| 3.2.8 qRT-PCR验证差异表达miRNA |
| 3.2.9 miRNA-mRNA-pathway网络构建 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 miRNA测序数据预处理和比对 |
| 3.3.2 差异表达的miRNA |
| 3.3.3 差异表达miRNA靶基因预测 |
| 3.3.4 差异表达的miRNA靶基因的GO/KEGG富集分析 |
| 3.3.5 qRT-PCR检测结果 |
| 3.3.6 miRNA-mRNA-pathway网络关系图 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四部分 miR-136-5p对小胶质细胞相关功能的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 细胞株 |
| 4.1.2 主要试剂及仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 细胞培养 |
| 4.2.2 细胞转染 |
| 4.2.3 qRT-PCR检测miR-136-5p靶基因的表达 |
| 4.2.4 细胞增殖实验 |
| 4.2.5 细胞凋亡实验 |
| 4.2.6 Western Blot检测Vangl2蛋白表达 |
| 4.2.7 数据处理 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 过表达miR-136-5p后其靶基因表达情况 |
| 4.3.2 过表达miR-136-5p对细胞增殖的影响 |
| 4.3.3 过表达miR-136-5p对细胞凋亡的影响 |
| 4.3.4 Vangl2蛋白表达水平 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五部分 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 论文综述 |
| 参考文献 |
四、脊髓损伤患者的免疫功能变化及意义（论文参考文献）
- [1]中西医协同治疗视神经脊髓炎相关性视神经炎的应用研究[D]. 韩梦雨. 北京中医药大学, 2021(01)
- [2]白藜芦醇/骨髓间充质干细胞联合治疗大鼠脊髓损伤的作用与机制研究[D]. 赵浩森. 中国医科大学, 2021(02)
- [3]陇中消肿止痛合剂对继发性脊髓损伤的保护作用及LncRNAMALAT1-ERKp38MAPK-AQP4轴的表达[D]. 杜凯然. 甘肃中医药大学, 2021(01)
- [4]减重步行训练对脊髓损伤雄鼠精子质量影响的研究[D]. 周晓华. 吉林大学, 2020(03)
- [5]Miro1在脊髓损伤中抑制神经元凋亡及其机制研究[D]. 赵磊. 苏州大学, 2020(06)
- [6]电针对SCI大鼠NGF、TrkA表达影响的实验研究[D]. 李建男. 广西中医药大学, 2020(02)
- [7]“脊髓康”治疗脊髓损伤的临床观察及其促进脊髓损伤后神经再生的实验研究[D]. 邵阳. 南京中医药大学, 2020(08)
- [8]督脉电针联合转轮跑步训练促进大鼠脊髓损伤后功能恢复的研究[D]. 张保磊. 云南师范大学, 2020(01)
- [9]电针大椎穴、命门穴对脊髓损伤大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响[D]. 李可. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]miR-136-5p介导电针疗法修复脊髓针刺损伤的作用及机制研究[D]. 周志东. 南昌大学, 2020(08)