导读:本文包含了活体诱导论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:骨质疏松,斑马鱼,光学相干成像
活体诱导论文文献综述
向湘,林燕萍,高楚丹,王俐梅,阳范文[1]（2019）在《光学相干层析术高分辨率活体成像泼尼松龙诱导的骨质疏松斑马鱼模型》一文中研究指出本研究利用光学相干层析术OCT对泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型进行活体成像,并结合电镜能谱技术定量分析斑马鱼模型骨质的钙磷元素含量及分布情况,共同探讨OCT方法在基于斑马鱼模型开展的骨质疏松研究中的使用价值。选取40条3月龄野生型斑马鱼暴露于50μmol/L泼尼松龙溶液和含0. 5%DMSO的溶液中(对照组),28. 5℃下培养,分别于第5、10、20天取出浸药组和对照组进行OCT活体成像,比较两者光散射特征。在每个时间点的成像之后,将浸药组的5条斑马鱼处死,然后取颅骨进行元素含量电镜扫描能谱分析。本研究利用50μmol/L泼尼松龙溶液培养斑马鱼至第20天,成功构建了斑马鱼骨质疏松模型。与对照组相比,模型组活体OCT成像显示骨组织光散射减弱,光子量明显减少,呈不均匀分布。能谱元素检查结果说明颅骨内所含钙、磷比例明显下降,证实骨质疏松发生,骨量减少。OCT成像方法在对斑马鱼骨质疏松模型进行活体、实时、无创等研究方面具有重要价值,本试验也为骨质疏松疾病的研究和药物筛选等方面提供了新的有效的方法。(本文来源于《激光生物学报》期刊2019年01期）
唐鹤文[2]（2018）在《缺氧诱导因子-1α调控乳腺癌血管生成的活体、纵向、多模态影像学研究》一文中研究指出目的:建立缺氧诱导的绿色荧光蛋白表达乳腺癌细胞模型,以作为HIF-1α活体成像报告系统。方法:选取5HRE/GFP质粒,转染小鼠乳腺癌细胞Ca761,加药物筛选,通过极限稀释法获取单克隆细胞株,加100μM CoCl2模拟缺氧条件处理24h,荧光显微镜下选取荧光最强的细胞株,扩大培养并冻存。缺氧预处理后,荧光显微镜观察传代细胞的绿色荧光,同时用Western Blot方法检测细胞内HIF-1 α的表达,以验证细胞内绿色荧光蛋白和HIF-1 α的表达。将2×106个细胞(0.1ml)接种于615系小鼠皮下,观察细胞成瘤情况,并使用荧光成像平台观察移植瘤的荧光信号。结果:经质粒转染及药物筛选后的细胞命名为Ca761-gre-gfp,该细胞经模拟缺氧预处理后能够在荧光显微镜下观察到绿色荧光,且Western Blot能够检测到HIF-1α蛋白的表达,而无模拟缺氧预处理的细胞则无上述荧光信号及蛋白表达。Ca761-gre-gfp接种615系小鼠皮下后,可见肿瘤生长,并且肿瘤内可观察到荧光信号。结论:成功建立了缺氧诱导的绿色荧光蛋白表达的乳腺癌细胞模型,可以作为HIF-1 α活体成像报告系统,适用于细胞及动物实验研究。目的:探讨多模态影像学在纵向研究HIF-1 α调控乳腺癌血管生成中的应用。方法:缺氧诱导绿色荧光蛋白表达的乳腺癌细胞株Ca761-hif-gfp,接种于雌性615系小鼠左臀部皮下,建立乳腺癌同种移植瘤模型,选择接种后第4天、9天、15天、19天进行实验,每个时间点对小鼠分别进行常规超声、超声造影及活体荧光成像检查,每次检查后随机处死3只小鼠获取病理标本,进行CD34和HIF-1α免疫组织化学染色,计数微血管密度(microvesseldensity,MVD),评估HIF-1α染色评级。分析超声造影定量参数、荧光成像光子数、MVD值及HIF-1 α染色评级随时间的变化趋势及相互间的关系。结果:建立12只小鼠低氧诱导绿色荧光蛋白表达的乳腺癌模型,成瘤率100%。接种肿瘤细胞后第4天、9天、15天和19天,平均肿瘤体积分别为0.06±0.02 cm3、0.23±0.11 cm3、1.33±0.72 cm3和2.23±0.18cm3,平均超声造影峰值强度分别为55.60±2.43、68.80±7.20、70.57±5.51 和47.9(p=0.018),平均荧光光子数分别为 1.02±0.82ph/s、2.13± 1.09ph/s、4.01±0.57ph/s和1.1ph/s(p=0.04),平均MVD值分别为49.3±7.5/200HPF,37.1±2.9/200HPF,36.8±1.7/200HPF和44.1±5.5/200HPF(p= 0.040),HIF-1α染色评价接种后第4天全部为1级(+),第9天的全部为2级(++),第15天2个肿瘤为3级(+++),1只为2级(++),第19天的全部为2级(++)(p = 0.021)。Pearson相关性分析,CEUS峰值强度与荧光成像光子数具有显着相关性(r= 0.803,p = 0.005),CD34标记的MVD值与CEUS峰值强度间不具有相关性(r =-0.430,p = 0.215)。Spearman相关性分析,HIF-1 α的表达与FLI光子数具有相关性(r=0.688,p = 0.019)。结论:成功建立了活体乳腺癌肿瘤多模态影像学研究平台,可纵向研究、动态评估肿瘤HIF-1 α活性及新生血管情况。本研究证实了随着肿瘤生长,乳腺癌新生血管与HIF-1 α活性具有相同的变化规律。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2018-05-08）
吴波,罗永忠,张磊,梁晓松,姜晓玲[3]（2017）在《BMP诱导活体内肌腱组织成骨化的研究》一文中研究指出[目的]探讨活体内BMP诱导肌腱组织成骨化的效果。[方法]30只新西兰兔建立活体内肌腱组织诱导成骨模型,一侧为rh BMP-2处理、对侧为空白对照。术后4、8及12周时采用X线片检测肌腱组织钙化情况,术后12周时对肌腱组织进行大体解剖、组织形态及免疫组化检测分析。[结果]术后4、8及12周时X线片检测发现BMP处理侧各时间点上肌腱组织内可见钙化区域,成骨化范围随时间增加逐渐增大(5.51 mm2、9.44 mm2及20.26mm2,P<0.05),钙化区域IOD值亦随时间增加而增高(1 178.56、2 135.26及4 726.72,P<0.05)。大体解剖可见BMP处理组肌腱组织增粗、质地变硬,H.E及Masson染色检测见肌腱纤维内细胞浸润,局部区域骨样组织形成,并有osteonectin阳性表达细胞分布。此外,肌腱纤维及骨化区域内均可见软骨样细胞形成。[结论]BMP能够诱导活体内肌腱组织发生成骨化,可能与软骨内成骨途径有关。(本文来源于《中国矫形外科杂志》期刊2017年17期）
Pelton,K,Coticchia,C,M,Curatolo,A,S,魏建国,许春伟[4]（2014）在《高胆固醇血症诱导血管生成并加速活体内乳腺肿瘤的生长》一文中研究指出肥胖和代谢综合征可增加绝经后妇女乳腺癌的患病率。肥胖、代谢综合征和西方富于饱和脂肪酸的饮食习惯,这叁者共同的特征是高水平的胆固醇循环。流行病学报道关于高水平的胆固醇循环、降胆固醇药物与乳腺癌之间的关系仍有争议,因此我们通过控制饮食和等热量饮食建立临床前动物模型模拟这一复杂状况。通过低脂肪/无胆固醇饮食喂养雌性SCID裸鼠,然后随机分成4组等热量饮食组:低脂肪/(本文来源于《临床与实验病理学杂志》期刊2014年10期）
杨晓[5]（2014）在《自体脂肪源性干细胞对由放射诱导的猪的慢性创面的效果以及电离辐射对活体内脂肪源性干细胞的影响》一文中研究指出研究背景慢性创面在临床上比较棘手。过去已经进行了大量的工作以促进慢性创面的愈合。但是,由于缺乏与人类病理生理学相似的前期的动物模型,慢性创面的新治疗方法的研究进展受到阻碍。为了研究各种实验治疗因素的潜在效应,既往已经成立了各种慢性创面的动物模型。由于猪和人类的解剖学和生物学的相似性,甚至是对电离辐射的时间和剂量依赖性的反应的相似性,因此猪是慢性创面模型的最佳实验动物对象。既往已经有用约克郡猪和尤卡坦猪制作慢性创面模型的相关文献。但不足之处在于如果猪的生长速度太快,将影响实验治疗因素的研究结果,因为不同年龄的猪全厚创面愈合的速度和细胞因子的水平是不同的。另外,放射后选择什么时候作为制作慢性创面模型更为合适呢?既往的文献报道了体外实验中,低剂量的激光辐射能对人脂肪干细胞产生积极的影响。众多文献记录了诸如神经干细胞,间质干细胞,造血干细胞等人类干细胞对电离辐射的反应和特征变化。人骨髓源性干细胞能够保持它们的干细胞特征。然而,这些实验基本上都是在体外以及低剂量的辐射条件下(<10Gy)进行的,很少有在体内实验以及高剂量的电离辐射条件下进行的实验报道。因此,我们的第二个实验假想是,在电离辐射后的不同时期,比较活体内的放射损伤脂肪干细胞与正常的脂肪干细胞的不同。脂肪干细胞分泌许多潜在的有利于创面愈合的生长因子和细胞因子。本实验中,我们通过放射依据放射后的不同时间在小型猪身上制作慢性创面模型,然后在慢性创面进行自体脂肪干细胞移植,比较自体脂肪干细胞和空白对照液对慢性创面愈合的效果。目的1、采用小型猪,通过放射即电离辐射,根据放射后的不同时间点,分别比较放射后2周、4周和6周的情况,来创建一个标准化的慢性创面模型,以利于对慢性创面愈合的实验研究。2、比较放射后2周、4周和6周分离获取的活体内放射损伤的脂肪干细胞(r-ADSCs)和正常脂肪干细胞(n-ADSCs)两者的增殖能力、分化能力以及免疫分型,了解大剂量的电离辐射对活体内脂肪干细胞的影响。3、在由放射诱导的慢性创面,使用自体脂肪源性干细胞的局部注射移植,检验单一使用自体脂肪干细胞对慢性创面模型的效应。方法一、小型猪背部的放射的实施及其优化实验经过替来他明-唑拉西泮注射液(Zoletil(?); Virbac Laboratories, Carros, France)和盐酸甲苯噻嗪注射液(Rompun(?); Bayer, Lerverkusen, Germany)的注射,麻醉起效后,将猪运送至肿瘤放射治疗科。在每一头猪的背上选取叁个大小为18×8cm的区域,暴露于直线加速器下,每一个区域接受剂量为18Gy的单次照射。照射完毕后,将实验动物猪运送到动物实验中心,并在标准条件下饲养两周。二、正常脂肪干细胞(n-ADSCs)和放射损伤脂肪干细胞(r-ADSCs)的准备在建立创面模型时,在脊柱旁的非放射区域和放射区域,从切除的组织获取皮下脂肪组织,分别用以分离培养正常脂肪干细胞(n-ADSCs)和放射损伤脂肪干细胞(r-ADSCs).将切下来的脂肪组织清洗,剁碎,Ⅰ型胶原蛋白酶消化,离心,细胞团悬浮,过滤,再次离心,最后将细胞种植在100(?)的培养皿中,置于37℃并含有5%CO2的培养箱内。定期更换细胞培养液。第一代的脂肪干细胞冻存备用。培养至第叁代的自体脂肪干细胞用于干细胞移植以治疗创面。依据创面建立的时间,放射损伤脂肪干细胞(r-ADSCs)分为叁个组：(1)放射后2周获取的放射损伤脂肪干细胞组(2R组),(2)放射后4周获取的放射损伤脂肪干细胞组(4R组),(3)放射后6周获取的放射损伤脂肪干细胞组(6R组)。类似的,正常脂肪干细胞(n-ADSCs)也分为叁个组：(1)放射后2周获取的正常脂肪干细胞组(2N组),(2)放射后4周获取的正常脂肪干细胞组(4N组),(3)放射后6周获取的正常脂肪干细胞组(6N组)。叁、放射损伤脂肪干细胞(r-ADSCs)和正常脂肪干细胞(n-ADSCs)的分析比较对放射2周组(2R组),放射4周组(4R组),放射6周组(6R组),正常2周组(2N组),正常4周组(4N组),正常6周组(6N组)的脂肪干细胞进行以下比较分析：1.采用CCK-8细胞计数试剂盒进行细胞增殖能力的分析比较,并通过细胞计数仪描记结果以绘出细胞生长曲线；2.β-牛乳糖关联的细胞老化分析(Senescence-associated β-galactosidase);3.细胞菌落集成分析(Colony Forming Units-Fs分析)；4.免疫表型分析,包括CD31,CD45,CD29,CD90;5.脂肪分化能力和成骨分化能力的分析。四、创面模型的建立和自体脂肪干细胞的在实验组创面的注射移植每一只小型猪总共有3次创面模型的建立,即分别在：(1)电离放射后2周,(2)电离放射后4周,(3)电离放射后6周。即是说,依据创面建立的时间,创面分为叁个大组：(1)放射后2周建立的放射创面和放射后2周建立的正常创面,(2)放射后4周建立的放射创面和放射后4周建立的正常创面,(3)放射后6周建立的放射创面和放射后6周建立的正常创面。每一次创面模型的建立,每一只猪有叁个创面形成,其中包括两个放射创面和一个正常创面。前者,即两个放射创面将在后续的实验中被随机分成未接受自体脂肪干细胞注射移植的阳性对照组和接受自体脂肪干细胞注射移植的实验组。每一个创面的大小为边长4cm的正方形,创面边缘距离放射区域的边界为2cm,两个创面间隔为6cm。标记于脊柱另一侧的非放射区域的正常的创面为阴性对照组。建立创面时,切除的组织包括皮肤和浅层脂肪组织,不包括深层脂肪组织,创面的深度大约为1.5至2.0cmm。总共有18个创面,其中6个正常创面,12个放射创面。从12个放射创面中再随机选择出一半接受脂肪干细胞移植的放射创面,以接受自体脂肪源性干细胞的注射移植。注射部位位于距离创面边缘大约5mm的真皮和浅层脂肪层之间的皮下区域,所有接受自体脂肪干细胞移植的创面分别在创面建立后4周和6周各接受干细胞移植一次。每一次接受注射移植的细胞数量大约为10×106个/2ml DMEM (1×106-2×106cells/1cm2创面)。为了测试各个创面组的愈合速度,在建立创面后开始每周用数码相机对每个创面进行拍照。然后将相片上传至计算机,用Visitrak创面分析仪(Smith&Nephew, Australia)进行数据分析。在脂肪干细胞移植治疗前,对建立于放射后第2,4,6周的放射创面和正常创面,在创面建立后0,2,4周分别取活组织检查。最后在创面建立后9周,对未接受自体脂肪干细胞移植的放射创面组,接受自体脂肪干细胞移植的放射创面组,正常创面组进行活组织检查。切片用苏木精和曙红(H&E)染色,以进行常规的组织学分析。五、统计方法实验数据采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析,计量资料的数据采用(x±s)表示。关于电离辐射对脂肪干细胞的影响的分析采用one-way ANOVA方法进行多样本均数比较,先做方差齐性检验,若方差齐,各组间存在差异,则采用LSD法和Bonferroni法检验法进行组间多重比较；方差不齐,采用Welch检验,若各组间存在差异,采用Dunnett T3检验法进行组间多重比较,以P<0.05示差异有统计学意义。关于创面的数据分析采用重复测量法(Repeated Measures)进行统计学分析。若有交互效应则进一步进行单独效应分析,即固定时间点,组间比较采用单因素方差分析,多重比较采用LSD方法；固定组别,不同时间点之间的比较采用重复测量方差分析,多重比较采用LSD方法。P值<0.05时认为有统计学差异。结果一、放射损伤脂肪干细胞(r-ADSCs)和正常脂肪干细胞(n-ADSCs)的分析比较1、细胞增殖能力结晶紫染色后,放射6周组(6R)的细胞形态不均一且明显变小,而放射2周组(2R)、放射4周组(4R)、正常2周组(2N)、正常4周组(4N)、正常6周组(6N)之间相似(图2-1.A)。从细胞的生长曲线上看,放射2周组(2R)和放射4周组(4R)的细胞生长速度相似。仅在培养后第9天(F=13.545,P=0.002)和第15天(F=339.589,P=0.000),放射4周组(4R)的细胞生长显着慢于正常组和放射2周组(2R)(第9天：P=0.022和P=0.036,第15天：P=0.006和P=0.002),在第21,27,30天,放射4周组与正常组和放射2周组组间无显着差异。在第21天时(F=12.003,P=0.002),放射6周组(6R)的细胞生长速度与正常组、放射2周组(2R)、放射4周组(4R)相比较显着性的减弱(P=0.000,P=0.020和P=0.001)。在第27天时(F=1.953,P=0.200),放射6周组(6R)的细胞生长速度与正常组、放射2周组(2R)、放射4周组(4R)相比较显着性的减弱(P=0.004,P=0.039和P==0.048)。在第30天时(F=0.579,P=0.645),放射6周组(6R)的细胞生长速度与正常组、放射2周组(2R)、放射4周组(4R)相比较显着性的减弱(P=0.000,P=0.000和P=0.001)(图2-1.E,表1)。CCK-8分析结果显示,在含10%胎牛血清的细胞培养液中,正常组的脂肪干细胞在培养第5天(F=1.623,P=0.229)的增殖速度显着快于放射2周组(2R)、放射4周组(4R)和放射6周组(6R)(P=0.032,P=0.013和P=0.026)；正常组的脂肪干细胞在培养第7天(F=1.104,P=0.380)的增殖速度显着快于放射2周组(2R)、放射4周组(4R)和放射6周组(6R)(P=0.009,P=0.001和P==0.000)；正常组的脂肪干细胞在培养第9天(F=2.208,P=0.124)的增殖速度显着快于放射2周组(2R)、放射4周组(4R)和放射6周组(6R)(P=0.018,P=0.028和P=0.000)；正常组的脂肪干细胞在培养第11天(F=0.577,P=0.640)的增殖速度显着快于放射2周组(2R)、放射4周组(4R)和放射6周组(6R)(P=0.000,P=0.013和P=0.000)(图2-1.F,表2)。在放射2周组(2R)、放射4周组(4R)和放射6周组(6R)叁者之间在培养第5,7,9,11天的增殖速度无统计学差异。同时,在用含1%胎牛血清的细胞培养液作为细胞压力测试的过程中,放射6周组的细胞增殖速度则显着快于正常组、放射2周组、放射4周组：放射6周组(6R)的脂肪干细胞在培养第1天(F=1.044,P=0.404)的增殖速度显着快于正常组(N)、放射2周组(2R)和放射4周组(4R)(P=0.000, P=0.000和P=0.001)；放射6周组(6R)的脂肪干细胞在培养第3天(F=0.858,P=0.485)的增殖速度显着快于正常组(N)、放射2周组(2R)和放射4周组(4R)(P=0.000,P=0.000和P=0.000)；放射6周组(6R)的脂肪干细胞在培养第5天(F=1.049,P=0.402)的增殖速度显着快于正常组(N)、放射2周组(2R)和放射4周组(4R)(P=0.000,P=0.000和P=0.000)；放射6周组(6R)的脂肪干细胞在培养第7天(F=0.964,P=0.437)的增殖速度显着快于正常组(N)、放射2周组(2R)和放射4周组(4R)(P=0.000,P=0.000和P=0.000)；放射6周组(6R)的脂肪干细胞在培养第9天(F=4.696,P=0.018)的增殖速度显着快于正常组(N)、放射2周组(2R)和放射4周组(4R)(P=0.000,P=0.001和P=0.001)；放射6周组(6R)的脂肪干细胞在培养第11天(F=23.895,P=0.000)的增殖速度显着快于正常组(N)、放射2周组(2R)和放射4周组(4R)(P=0.011,P=0.011和P=0.011)(图2-1.G,表3)。有可能是因为放射6周组的细胞能够耐受1%胎牛血清的细胞压力测试环境。在正常2周组、正常4周组、正常6周组,β-牛乳糖关联的细胞老化分析的免疫染色阳性物质较少见,但在放射6周组显得更常见(图2-1.B)。四组之间(F=49.517,P=0.002),但与正常组相比较,放射6周组的脂肪干细胞集落形成显着减少(P=0.013)。而正常组、放射2周组、放射4周组之间无显着差异(图2-1.C,D,表4)。2、免疫分型用流式细胞仪对放射损伤脂肪干细胞(r-ADSCs)和正常脂肪干细胞(n-ADSCs)的免疫分型进行分析。结果显示放射损伤脂肪干细胞和正常脂肪干细胞都表达CD29和CD90表面抗原,而不表达造血系和内皮系标志物即CD31和CD45。3、细胞分化能力用脂肪细胞分化诱导培养液培养后,正常组脂肪干细胞被诱导分化为脂肪细胞系,在诱导后第14,20天被油红O染色证实(图2-3.D,E)。这个脂肪细胞分化现象同样可见于放射2周组和放射4周组细胞,但脂肪细胞分化能力依次减弱。在诱导后第14天,正常组、放射2周组、放射4周组、放射6周组之间脂滴形成无显着差异(F=2.950,P=0.222)。在诱导后第20天(F=12.370,P=0.009),放射6周组内几乎看不见脂滴的形成,放射6周组与正常组、放射2周组均有显着差异(P=0.012,P=0.047)。正常组与放射2周组、放射4周组之间均无显着差异(图2-3.F,表5)。同样的,用成骨分化诱导培养液培养后,脂肪干细胞被诱导分化为成骨细胞,在诱导后第7,14,20天被碱性磷酸酶(AP)(图2-4.D,E,F)和茜素红S染色证实(图2-4.G.H.I)。作为早期的成骨分化标志物,在诱导后第7天所有的组内均可见碱性磷酸酶的活性表达。在诱导后第14天,所有组内碱性磷酸酶活性表达受到抑制,然而此时在所有组均可观察到骨样结节(bone-like nodules)的形成。在诱导后第18天,所有组内碱性磷酸酶活性表达增强,同时所有组均形成的骨样结节变得更大,颜色也更深。有趣的是,在放射2周组由对硝基苯基磷酸酯(pNPP)检测的表达碱性磷酸酶活性的物质含量最高,但是正常组、放射2周组、放射4周组、放射6周组四个组之间无显着差异(F=27.247,P=-0.000)(图2-4.J,表6)。在诱导后7天,所有组均可观察到由茜素红S染色显示的矿物质的沉积现象。在第14天和第18天则整体逐渐增强。在诱导后第18天,与AP活性测定结果一样,放射2周组茜素红S染色在四个组内最为强烈,但各组间无显着差异(F=1.594,P=0.247)(图2-4.K,表7)。另外,在正常组和放射组之间,可以观察到细胞集落群的形态是有所不同的。在正常组,细胞集落群的分布显得更均匀。二、创面愈合1、创面愈合速度对正常组创面来讲,创面的肉芽组织更新鲜,生长的速度也更快,在创面建立后1周即可见到明显的创面缩小。但对于放射组,创面的肉芽组织呈现为灰色,生长缓慢。与放射后2周组的放射创面相比较,放射后4周组的放射创面形成更明显的质地坚硬的痂皮。而放射后6周组的放射创面则更严重。本实验中,创面愈合速度的评定主要是依据大体标本创面的上皮化形成来进行分析。创面建立后每周一次对创面进行数码相机拍照。对正常组创面来讲,创面的肉芽组织更新鲜,生长的速度也更快,在创面建立后1周即可见到明显的创面缩小。但对于放射组,创面的肉芽组织呈现为灰色,生长缓慢。与放射后2周组的放射创面相比较,放射后4周组的放射创面形成更明显的质地坚硬的痂皮。而放射后6周组的放射创面则更严重。本实验中,创面愈合速度的评定主要是依据大体标本创面的上皮化形成来进行分析。创面建立后每周一次对创面进行数码相机拍照(图3-2A)。对于放射后叁个时间点即放射后2周、放射后4周以及放射后6周分别建立创面对建立慢性创面的效果评价,叁个重复测量因素分别为：位点group(不接受放射的位点0即正常组创面,放射位点1即未接受脂肪干细胞注射移植的创面,和放射位点2即接受脂肪干细胞注射移植的创面)、放射后开始造模时间因素model(放射后2周、放射后4周和放射后6周)、造模后观测时间因素time(创面建立后1周、2周、3周和4周),效应中,group*model*time效应有统计学意义(F=3.181, P=0.028), group*time效应有统计学意义(F=25.307, P=0.001), time效应有统计学意义(F=248.009,P=0.000)其他效应均无统计学意义(P>0.05)。因此,分别分析不同造模时间点下的,group和time两个重复测量因素的方差分析,在造模时间点为2周和4周,只有时间效应有统计学意义(F时间=33.250,P时间=0.008和F时间=339.381,P时间=0.000),只针对时间因素进行单独效应的分析；在造模时间点为6周,交互效应有统计学意义(F时间×位点=30.954,P时间×位点=0.000)。针对位点和时间均进行单独效应分析,结果如表8所示(图3-2.C,表8)。即是说放射2周组内,未接受脂肪干细胞移植的放射创面和接受脂肪干细胞移植的放射创面与正常创面的愈合速度在造模后早期4周内无显着差异。同样的,放射4周组内,未接受脂肪干细胞移植的放射创面和接受脂肪干细胞移植的放射创面与正常创面的愈合速度在造模后早期4周内也无显着差异。但是放射6周组内,未接受脂肪干细胞移植的放射创面和接受脂肪干细胞移植的放射创面与正常创面的愈合速度在造模后第2、3、4周均有显着差异(F=127.416, P=0.008; F=346.649, P=0.003;和F=70.636,P=0.014)。该统计结果提示在造模后放射2周组、放射4周组和放射6周组各组内未接受脂肪干细胞移植的放射组和接受脂肪干细胞移植的放射组之间创面分别无统计学差异,从而为后续的脂肪注射移植建立了良好的创面前提条件。同时,提示了放射2周组、放射4周组和放射6周组的放射创面叁组相比较,放射6周组的放射创面更适合于作为慢性创面模型。对于自体脂肪干细胞注射移植对放射创面的效果评价(图3-2.B,表9),叁个重复测量因素分别为：放射开始造模时间因素model(放射后2周、放射后4周和放射后6周)、分组group(未接受脂肪干细胞移植的放射组和接受脂肪干细胞移植的放射组)、造模后观测时间因素time(创面建立后第5周、6周、7周、8周和9周),但是由于开始造模即放射后4周组,只有一个实验对象(其中一个对象由于注射后创面出现不可预计情况无法纳入统计),因此同时结合实际情况和探究目的(关注分组对治愈情况的影响),分别分析2周开始造模和6周开始造模情况下,group和time两个重复测量因素的方差分析,分组因素均无统计学意义(F分组=1.483,P分组=0.438；F分组=1.114,P分组=0.792),只有time效应有统计学意义(F时间=32.438,P时间=0.003；F时间=251.096,P时间=0.000)。对于放射2周组,未接受脂肪干细胞移植的放射组(此处简称放射组)和接受脂肪干细胞移植的放射组(此处简称移植组),时间效应有统计学意义(F时间=32.438,P时间=0.003)。对于放射6周组,未接受脂肪干细胞移植的放射组(此处简称放射组)和接受脂肪干细胞移植的放射组(此处简称移植组),时间效应有统计学意义(F时间=251.096,P时间=0.000)。该统计结果提示未接受脂肪干细胞移植的放射组和接受脂肪干细胞移植的放射组的创面愈合速度无统计学差异。2、创面组织学分析创面建立当日,在所有的正常创面和放射创面,没有观察到炎症反应。在创面建立后2周,所有正常组创面可见完整的上皮形成。关于急性炎症反应和慢性炎症反应,放射后4周组和放射后6周组的严重程度明显比放射后2周组增加。所有的放射组创面上皮化不完全。在创面建立后4周,所有正常组创面未观察到急性炎症反应。在所有的放射组创面,急性炎症反应较创面建立后2周时的情况有所减轻。尽管如此,仍然可以观察到急性炎症反应。在所有的放射组创面,慢性炎症反应明显减弱,然而放射后6周组的慢性炎症反应最为明显。所有的放射组创面上皮化不完全。在创面建立后9周,所有正常组创面未观察到急性炎症反应,仍可见轻度的慢性炎症反应。未接受脂肪干细胞移植的放射组和接受脂肪干细胞移植的放射组两组之间则较为相似,即在所有的放射创面慢性炎症反应明显减轻。未接受脂肪干细胞移植的放射组,慢性炎症反应较接受脂肪干细胞移植的放射组稍严重。但未接受脂肪干细胞移植的放射组和接受脂肪干细胞移植的放射组两组之间病例结果比较无显着性差异。所有组的创面完全上皮化。结论一、我们的结果显示在电离辐射诱导的慢性创面中,放射后6周建立创面模型更为合适。本实验中,与非放射区域的正常创面在5周完全愈合相比较,所有的放射创面的愈合明显推迟了大约4周。所有放射组创面的慢性炎症反应比正常创面明显。这提示剂量为18-Gy单次电离辐射对创面的愈合有抑制作用,并延迟了创面愈合这一过程。在创面建立后第4周,干细胞移植前,放射6周组的创面愈合速度与放射2周组和放射4周组的创面愈合速度相比,比正常组显着延迟。病理结果分析证实,在创面建立后第4周,放射6周组的创面慢性炎症反应的程度最严重。二、既往关于放射对干细胞的影响的研究主要是在体外实验中进行,或者是研究低剂量的放射所造成的影响,而本实验中我们小型猪背部接受放射损伤的区域直接分离培养脂肪源性干细胞进行分析。本实验研究了18Gy单剂量的电离辐射在实验动物原位组织损伤进程中放射后第2,4,6周分别对脂肪源性干细胞所造成的影响。我们的数据显示小型猪皮肤软组织暴露于18Gy单剂量的电离辐射后,放射损伤脂肪源性干细胞(r-ADSCs)和正常脂肪源性干细胞一样,仍然表达表面抗原标志物即CD29和CD90,而不表达造血和内皮系标志物CD31和CD45。与放射2周组和放射4周组相比,放射6周组的脂肪源性干细胞(r-ADSCs)的增殖能力和脂肪分化能力显着减弱。我们的数据有趣地显示了在诱导培养14天时,放射2周组放射损伤的脂肪干细胞的矿物质形成能力增强,放射6周组放射损伤的脂肪干细胞的矿物质形成能力减弱。然而正常组、放射2周组、放射4周组、放射6周组之间的有碱性磷酸酶活性测定显示的成骨分化能力组间在诱导后第7、14、18天均无显着差异。在诱导后第18天,正常组、放射2周组、放射4周组、放射6周组之间的由茜素红S染色显示的矿物质形成能力均无显着差异。这也许提示在电离辐射后的早期,活体内的脂肪干细胞的矿物质形成能力有短暂性的增强。就本实验中的慢性创面模型的下一步研究展望是揭示放射诱导损伤的脂肪源性干细胞的修复过程或者是放射损伤对脂肪源性干细胞的损伤的持续性。叁、在术后即创面建立后4周和6周分别进行自体脂肪源性干细胞注射移植。在创面建立后4周,自体脂肪干细胞或是单纯的细胞培养液被注射在放射诱导的慢性创面。未接受脂肪干细胞注射移植的放射创面,其慢性炎症反应比较接受脂肪干细胞注射移植的放射创面轻度的增加。在创面建立后6周,即第一次脂肪干细胞注射移植后2周,接受脂肪干细胞注射移植的放射创面,其创面愈合速度稍快于未接受脂肪干细胞注射移植的放射创面。然而,接受脂肪干细胞注射移植的放射创面与未接受脂肪干细胞注射移植的放射创面两组之间的创面愈合速度无统计学差异。接受脂肪干细胞注射移植的放射创面与未接受脂肪干细胞注射移植的放射创面两组之间的组织学无明显差异。未来将进一步研究在慢性创面的治疗中怎样使用自体脂肪干细胞能达到更好疗效。(本文来源于《南方医科大学》期刊2014-05-20）
薛小艳[6]（2014）在《利用大蒜离体鳞芽和活体花苞诱导四倍体的研究》一文中研究指出大蒜(Allium sativum L.)有性杂交困难,自然变异有限,多倍体育种成为无性繁殖大蒜作物改良品种的有效途径之一。本文采用大蒜离体鳞芽和活体花苞为试验材料,通过秋水仙素浸泡鳞芽和注射花苞腔的方法,进行四倍体诱导。建立了大蒜离体鳞芽和气生鳞茎不定芽途径再生体系,同时研究了秋水仙素对鳞芽、花苞及其生长发育的影响,并对再生苗进行了倍性鉴定和移栽驯化,以期获得四倍体大蒜植株。主要研究结果如下：1首先用正交设计法研究NAA、6-BA、KT和鳞芽厚度对金蒜3号离体鳞芽单芽诱导的影响,并用得到的最优组合对用0.10%,0.15%和0.20%浓度秋水仙素浸泡24h,48h和72h的金蒜3号离体鳞芽进行培养,当再生试管苗形成后,对根尖进行倍性鉴定。结果表明,在离体鳞芽单芽诱导影响中,鳞芽厚度影响最大,6-BA和KT次之,NAA最小；得到的最优外源激素组合为0.05mg·L-1NAA+2mg·L-1KT和最优鳞芽切取的厚度为6.0mm,且在最优组合下培养鳞芽,单芽诱导率达100%。秋水仙素处理前,在添加有0.05mg·L-1NAA和2mg·L-1KT的MS培养基中培养6.0mm离体鳞芽1d后有再生单芽萌动；秋水仙素处理后,将其转接在加有0.05mg·L-1NAA和2mg·L-1KT的MS培养基中培养经30d后部分鳞芽生根成苞(图6-b)和部分鳞芽生根成苗。且在同一浓度下,随着秋水仙素浸泡时间的延长,鳞芽成苞率和成苗率随之降低；在同一浸泡时间下,随着秋水仙素浓度的增大,鳞芽成苞率和成苗率也随之降低。在获得的76颗试管苗中,鉴定发现有14颗是四倍体试管苗,经驯化移栽成活了2颗。2用0.05%,0.10%,0.15%和0.20%的秋水仙素注射苍山糙蒜品种和金蒜3号品种的花苞,并在不同生长调节剂组合的MS培养基下培养花苞内形成的气生鳞茎,当再生体系建立后,对根尖进行倍性鉴定。结果表明,MS基本培养基添加0.05mg·L-1NAA和2.0mg·L-1KT能诱导较多的气生鳞茎萌发,4-5mm直径的气生鳞茎萌发率最高,且苍山糙蒜气生鳞茎的萌发率整体比金蒜3号高。秋水仙素注射花苞后,金蒜3号的花苞死亡率远远高于苍山糙蒜。随着秋水仙素浓度增大,花苞内形成气生鳞茎数及大小均有所降低,染色体加倍率升高。苍山糙蒜以0.20%秋水仙素浓度下四倍体诱导率最高,为7.69%；金蒜3号以0.15%秋水仙素浓度下四倍体诱导率最高,为11.76%。再生试管苗经驯化移栽成活了3颗。(本文来源于《山东农业大学》期刊2014-05-20）
刘俊[7]（2014）在《光诱导视网膜变性猪模型移植治疗中活体鉴定的初步研究》一文中研究指出目的：用可见光诱导的方法建立广西巴马小型猪视网膜变性(Retinal Degeneration，RD)模型，探索活体对猪形态和功能学进行检测的方法并与离体组织学检测手段一起对该模型进行鉴定。然后，初步探索将人胚胎干细胞(human Embryonic Stem Cell，hESC)诱导分化的视网膜色素上皮细胞(Retinal Pigment Epithelium，RPE)移植到光诱导视网膜变性猪视网膜下腔的手术方法，通过活体检测方法观察细胞移植术后的安全性、移植细胞和猪视网膜的形态和功能学变化，为干细胞移植治疗视网膜变性疾病最终进入临床奠定基础。方法：1.光诱导广西巴马小型猪视网膜变性模型的建立与鉴定采用白色荧光灯持续间断光照猪3个月以上，诱导猪发生视网膜变性，运用活体形态检测方法-视网膜光学相干断层扫描(Optical Coherence Tomography，OCT)以及活体功能学检测技术-全视野视网膜电图(full-field Eletroretinography，fERG)和多焦视网膜电图(multifocal Electroretinography，mfERG)，对猪视网膜进行鉴定，并与视网膜组织切片HE染色和视网膜透射电镜进行比较分析。2.初步探索光变性猪行hESC来源的RPE细胞视网膜下腔移植的手术方法、及光变性猪术后的活体形态和功能学检测探索改良hESC-RPE细胞悬液视网膜下腔移植的手术方法，在术后利用活体检测方法如检眼镜、视网膜B超、视网膜OCT、fERG、mfERG、等手段观察移植细胞在光诱导视网膜变性猪视网膜下腔的存活、迁移、整合能力和术后猪视网膜功能的变化。结果：1.光诱导广西巴马小型猪视网膜变性模型的建立与鉴定与光照前相比，持续间断光照2-4月龄小型猪3-6月后，视网膜OCT检查可见光变性猪视网膜全层(内界膜Inner Limiting Membrane至RPE层)厚度显着变薄；fERG检测发现光变性猪在暗适应最大混合反应的a、b波振幅和ops波振幅显着下降，明适应反应的b波及p1波振幅也有显着下降；mfERG检测发现光变性猪视条纹区P1波平均振幅密度显着降低。这都提示视网膜结构和功能发生了明显改变。视网膜OCT显示的外核层(Outer nuclear layer，ONL)厚度与离体视网膜石蜡切片HE染色显示的外核层厚度均明显变薄，说明了视网膜感光细胞发生了损伤，活体OCT结果与离体组织检测结果一致；视网膜透射电镜发现感光细胞内节线粒体肿胀、嵴断裂、空泡样变，外节膜盘结构破坏，视网膜色素上皮细胞微绒毛结构破坏，进一步表明视网膜感光细胞发生了损伤，从超微结构层面验证了活体检测方法的准确性。2.光变性猪行hESC-RPE细胞视网膜下腔移植手术、及光变性猪术后的活体形态和功能学检测在本研究中，共对4头光诱导视网膜变性猪探索进行了hESC-RPE细胞悬液视网膜下腔移植术。第1批移植了1头猪，在术后2周行检眼镜和视网膜B超检查示并发性白内障。换用手术显微镜及移植器械、改变手术方法后在第2批移植了3头猪；术后2周行检眼镜、B超检查示无白内障、视网膜脱离等并发症出现；术后1月时的视网膜OCT检查示hESC-RPE细胞进入光变性猪视网膜下腔，移植细胞能够存活，未见排斥反应；术后1月的fERG检查示视网膜整体功能无明显变化；术后1月mfERG检查示0号猪移植区平均振幅密度高于对侧伪手术眼，1号猪移植区平均振幅密度与对侧伪手术眼无明显差异，2号猪移植区平均振幅密度高于对侧未手术眼。结论：1.与光照前相比，可见光光照广西巴马小型猪3个月以上，通过活体形态学检测(OCT)、功能学(fERG、mfERG)检测和离体组织学检测(石蜡切片、透射电镜)发现猪视网膜形态和功能均有显着变化，表明光诱导视网膜变性小型猪模型建立成功。2.构建了活体对大动物进行形态和功能学检测的平台，通过对比活体OCT与离体组织切片对光变性猪进行形态学分析，均提示外核层变薄，说明活体OCT与离体组织学结果一致，利用活体OCT对组织学进行观测具有可靠性；同时发现活体OCT对光变性猪的形态学检测结果与活体fERG和mfERG的功能学检测结果是一致的，表明其具有一定的相关性。3.探索建立了hESC-RPE细胞悬液移植到猪视网膜下腔的手术方法，改进手术设备和方法后的3头猪移植术后早期无并发症发生，安全性较好。4.光诱导视网膜变性猪行hESC-RPE细胞视网膜下腔移植术后1月时,活体形态学检测(OCT)显示移植细胞在变性猪视网膜下腔存活，无明显的排斥反应发生；活体功能学(fERG、mfERG)检测显示hESC-RPE视网膜下腔移植术后早期对猪视网膜整体功能无明显影响，但是在移植区局部有2头猪出现多焦视网膜功能的提高。表明手术对光变性猪视网膜整体功能无明显影响，hESC-RPE细胞移植可能会改善移植区局部视网膜功能。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2014-05-01）
孟宇[8]（2014）在《外磁场诱导下SPIO、hNIS、EGFP共标记人脐带间充质干细胞的靶向迁移及活体示踪》一文中研究指出目的：采用纳米磁性靶向技术和细胞生物学等技术，将人钠/碘同向转运体（hNIS）报告基因、增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因和超顺磁氧化铁颗粒（SPIO）对人脐带间充质干细胞共标记，建立间充质干细胞活体单光子发射计算机断层成像(SPECT)、核磁共振成像（MRI）、活体小动物荧光拟合成像活体示踪系统，利用多模式显像机理，精确区分局部器官干细胞聚集量；外加磁场使干细胞在获得靶向移动能力的同时，用MRI及SPECT99mTc显像、活体小动物荧光拟合成像进行示踪，探讨建立干细胞靶向迁移能力与示踪的多模式分子影像技术的可行性。方法：1.共标记干细胞系的建立：分离鉴定人脐带间充质干细胞，选择EGFP报告基因来间接反应目的基因hNIS的表达，PCR扩增后将目的基因hNIS克隆到pcDNA3.1中，再将EGFP连接到hNIS的下游，然后与入门载体通过BP反应同源重组得到入门克隆,最后将入门克隆与表达载体同源重组产生表达克隆,经酶切、PCR及测序证实成功构建重组质粒pCMV-NIS-EF1-GFP-PGK-puro,再感染人脐带间充质干细胞。获得稳定表达hNIS及EGFP的干细胞系后，进行125I内流及125I外流实验鉴定hNIS蛋白功能。将适当浓度的SPIO与细胞系孵育获得hNIS及EGFP、SPIO共同标记的干细胞，并验证其活性及干性。2.不同外磁场暴露时间筛选的体外研究：对照组为未标记的hUCMSCs，实验组为SPIO-hNIS-EGFP-hUCMSCs细胞并在培养板下方放置磁场（200mT）连续3天，按每天接受的磁场暴露时间分为1小时组、6小时组、12小时组、24小时组。台盼兰染色检测细胞活力，MTT法进行细胞增殖能力测试，Transwell实验测磁场干预下的迁移能力、成脂成骨诱导分化实验测分化能力，Western blot测BCL-1、Bax、Caspase-3、Caspase-9等凋亡因子的表达的影响，筛选合适的暴露时间为活体体内研究提供依据。3.外磁场作用下干细胞的靶向迁移及活体示踪：建立全层皮肤缺损裸鼠模型，在细胞移植后0小时、24小时、48小时及7天进行核磁共振显像外磁场MRI、SPECT、活体小动物荧光成像示踪。分别测量MRI图像参数原位干细胞团的面积减少率、信噪比、载噪比、细胞团位移。普鲁士蓝染色及冰冻荧光染色鉴定皮肤创面干细胞数量。比较两组间皮肤创面愈合时间。结果：1.成功分离培养人脐带间充质干细胞，并鉴定其分化增殖能力及干性。第叁代慢病毒包装系统介导下完成构建包含目的基因hNIS的真核质粒并获得稳定表达的hNIS-EGFP-hUCMSCs细胞系，经Western blot鉴定hNIS表达良好。hNIS-EGFP-hUCMSCs实验组细胞摄取125I活性125I内流实验及外流实验证实人脐带间充质干细胞表达hNIS后的功能良好。成功建立SPIO、hNIS EGFP共标记的人脐带间充质干细胞系命名为SPIO-hNIS-EGFP-hUCMSCs，普鲁士蓝染色证实SPIO进入细胞内,细胞标记率达98%。SPIO-hNIS-EGFP-hUCMSCs在生物活性、细胞干性、增殖活性、分化能力与原始hUCMSCs无显着差别，可以作为动物模型的治疗细胞，并为下一步SPECT、MRI、活体小动物荧光显像示踪干细胞做好准备。2.表面磁力200mT的永磁铁作用下，连续叁天每天磁场暴露时间6小时在细胞活性，增殖能力，分化能力方面与空白对照组无差异，磁场暴露时间达12小时以上细胞生物活性及分化能力得到全面抑制。Transwell细胞迁移实验证明磁场暴露时间达到6小时后，SPIO-hNIS-EGFP-hUCMSCs细胞迁移能力不会随着暴露时间发生进一步增加。外磁场暴露时间不超过6小时/天，不会诱发过多的促凋亡基因表达。磁场暴露时间达12小时以上可能会诱发SPIO-hNIS-EGFP-hUCMSCs程序性死亡。3.MRI示踪显像获得较高质量的图像，SPIO-hNIS-EGFP-hUCMSCs成功受到植入磁体产生磁场梯度的影响，由磁场引导干细胞在皮下区域向皮肤缺损部位快速迁移，此效应在外磁场作用后的第一个24小时最为明显。SPECT显像示标记干细胞在在0小时、24小时、48小时、7天的检测与MRI显像示踪移植干细胞趋势相符，但空间分辨率较MRI低。活体小动物荧光成像在0小时，24小时和48小时的外部磁场促进SPIO-hNIS-EGFP-hUCMSCs与MRI显示一致的趋势，但第7天的活体荧光成像细胞移植的示踪呈阴性，考虑单位细胞浓度过小。普鲁士蓝与冰冻荧光切片显示外磁场组具有较多的干细胞进入皮肤创面附近。结论：首次运用慢病毒转染系统成功建立SPIO-hNIS-EGFP-hUCMSCs细胞系，并在生物活性、细胞干性、增殖活性、分化能力与原始hUCMSCs无显着差别；外磁场暴露时间对干细胞生物特性造成较大影响，每天暴露时间6小时是最佳时间；首次将外磁场应用于皮下干细胞移植治疗以增加干细胞的归巢，MRI与基于hNIS报告基因SPECT显像相结合，可以更为精确的示踪干细胞，提高敏感度，减少假阳性。(本文来源于《暨南大学》期刊2014-04-20）
刘鹏宇,张姿丽,蒲浩杰,邓文峰,余水松[9]（2013）在《玉米活体诱导单倍体的加倍方法研究进展》一文中研究指出单倍体育种可缩短年限,加速育种进程。在玉米中最常用的是活体诱导单倍体再加倍的方法,文中介绍了活体诱导单倍体的技术,重点综述了单倍体加倍的方法,并在最后简要介绍了玉米单倍体的意义及运用,旨在为今后玉米单倍体育种的进一步发展提供基础资料。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2013年34期）
潘光辉,陈正,朱景辉,徐璐,马俊杰[10]（2013）在《自体骨髓MSCs联合低剂量免疫抑制剂诱导亲属活体供肾移植免疫耐受的临床研究》一文中研究指出目的通过对亲属活体肾移植受者输注自体骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)并联合低剂量FK506行免疫诱导,探讨BM-MSCs在诱导移植免疫耐受中的作用和机制。方法选取2009.9-2012.9在我中心拟行亲属活体供肾移植的患者,随机分为输注自体BM-MSCs的实验组(n=13)和不输注自体BM-MSCs的对照组(n=13)。实验组在术前1月行自体BM-MSCs制备,并分别在术中、术后1周、1月共3次输注自体BM-MSCs。第一次在术中经移植肾动脉输注,细胞数5×10~6个/次;术后第2、3次经外周静脉输注,细胞数均为1×10~6个/次。实验组FKS06初始剂量为0.04-0.05 mg.kg~(-1).d~(-1),对照组FK506初始剂量为0.06-0.08 mg.kg~(-1).d~(-1),吗替麦考酚和强的松用量两组相同。观察术后可能发生的并发症、急性排斥反应等;监测24小时尿蛋白等临床指标;检测两组(本文来源于《2013中国器官移植大会论文汇编》期刊2013-11-01）
活体诱导论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:建立缺氧诱导的绿色荧光蛋白表达乳腺癌细胞模型,以作为HIF-1α活体成像报告系统。方法:选取5HRE/GFP质粒,转染小鼠乳腺癌细胞Ca761,加药物筛选,通过极限稀释法获取单克隆细胞株,加100μM CoCl2模拟缺氧条件处理24h,荧光显微镜下选取荧光最强的细胞株,扩大培养并冻存。缺氧预处理后,荧光显微镜观察传代细胞的绿色荧光,同时用Western Blot方法检测细胞内HIF-1 α的表达,以验证细胞内绿色荧光蛋白和HIF-1 α的表达。将2×106个细胞(0.1ml)接种于615系小鼠皮下,观察细胞成瘤情况,并使用荧光成像平台观察移植瘤的荧光信号。结果:经质粒转染及药物筛选后的细胞命名为Ca761-gre-gfp,该细胞经模拟缺氧预处理后能够在荧光显微镜下观察到绿色荧光,且Western Blot能够检测到HIF-1α蛋白的表达,而无模拟缺氧预处理的细胞则无上述荧光信号及蛋白表达。Ca761-gre-gfp接种615系小鼠皮下后,可见肿瘤生长,并且肿瘤内可观察到荧光信号。结论:成功建立了缺氧诱导的绿色荧光蛋白表达的乳腺癌细胞模型,可以作为HIF-1 α活体成像报告系统,适用于细胞及动物实验研究。目的:探讨多模态影像学在纵向研究HIF-1 α调控乳腺癌血管生成中的应用。方法:缺氧诱导绿色荧光蛋白表达的乳腺癌细胞株Ca761-hif-gfp,接种于雌性615系小鼠左臀部皮下,建立乳腺癌同种移植瘤模型,选择接种后第4天、9天、15天、19天进行实验,每个时间点对小鼠分别进行常规超声、超声造影及活体荧光成像检查,每次检查后随机处死3只小鼠获取病理标本,进行CD34和HIF-1α免疫组织化学染色,计数微血管密度(microvesseldensity,MVD),评估HIF-1α染色评级。分析超声造影定量参数、荧光成像光子数、MVD值及HIF-1 α染色评级随时间的变化趋势及相互间的关系。结果:建立12只小鼠低氧诱导绿色荧光蛋白表达的乳腺癌模型,成瘤率100%。接种肿瘤细胞后第4天、9天、15天和19天,平均肿瘤体积分别为0.06±0.02 cm3、0.23±0.11 cm3、1.33±0.72 cm3和2.23±0.18cm3,平均超声造影峰值强度分别为55.60±2.43、68.80±7.20、70.57±5.51 和47.9(p=0.018),平均荧光光子数分别为 1.02±0.82ph/s、2.13± 1.09ph/s、4.01±0.57ph/s和1.1ph/s(p=0.04),平均MVD值分别为49.3±7.5/200HPF,37.1±2.9/200HPF,36.8±1.7/200HPF和44.1±5.5/200HPF(p= 0.040),HIF-1α染色评价接种后第4天全部为1级(+),第9天的全部为2级(++),第15天2个肿瘤为3级(+++),1只为2级(++),第19天的全部为2级(++)(p = 0.021)。Pearson相关性分析,CEUS峰值强度与荧光成像光子数具有显着相关性(r= 0.803,p = 0.005),CD34标记的MVD值与CEUS峰值强度间不具有相关性(r =-0.430,p = 0.215)。Spearman相关性分析,HIF-1 α的表达与FLI光子数具有相关性(r=0.688,p = 0.019)。结论:成功建立了活体乳腺癌肿瘤多模态影像学研究平台,可纵向研究、动态评估肿瘤HIF-1 α活性及新生血管情况。本研究证实了随着肿瘤生长,乳腺癌新生血管与HIF-1 α活性具有相同的变化规律。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
活体诱导论文参考文献
[1].向湘,林燕萍,高楚丹,王俐梅,阳范文.光学相干层析术高分辨率活体成像泼尼松龙诱导的骨质疏松斑马鱼模型[J].激光生物学报.2019
[2].唐鹤文.缺氧诱导因子-1α调控乳腺癌血管生成的活体、纵向、多模态影像学研究[D].北京协和医学院.2018
[3].吴波,罗永忠,张磊,梁晓松,姜晓玲.BMP诱导活体内肌腱组织成骨化的研究[J].中国矫形外科杂志.2017
[4].Pelton,K,Coticchia,C,M,Curatolo,A,S,魏建国,许春伟.高胆固醇血症诱导血管生成并加速活体内乳腺肿瘤的生长[J].临床与实验病理学杂志.2014
[5].杨晓.自体脂肪源性干细胞对由放射诱导的猪的慢性创面的效果以及电离辐射对活体内脂肪源性干细胞的影响[D].南方医科大学.2014
[6].薛小艳.利用大蒜离体鳞芽和活体花苞诱导四倍体的研究[D].山东农业大学.2014
[7].刘俊.光诱导视网膜变性猪模型移植治疗中活体鉴定的初步研究[D].第叁军医大学.2014
[8].孟宇.外磁场诱导下SPIO、hNIS、EGFP共标记人脐带间充质干细胞的靶向迁移及活体示踪[D].暨南大学.2014
[9].刘鹏宇,张姿丽,蒲浩杰,邓文峰,余水松.玉米活体诱导单倍体的加倍方法研究进展[J].安徽农业科学.2013
[10].潘光辉,陈正,朱景辉,徐璐,马俊杰.自体骨髓MSCs联合低剂量免疫抑制剂诱导亲属活体供肾移植免疫耐受的临床研究[C].2013中国器官移植大会论文汇编.2013