一、健脑安对血管性痴呆大鼠海马区IL-1β和CRF蛋白异常表达的影响（论文文献综述）
王靖怡,李军,陈恒文,惠小珊,白京,王阶[1]（2021）在《血栓心脉宁“血脉双治”组方探讨及研究进展》文中研究指明血栓心脉宁以"血脉双治"理论为基础,配伍遵循《素问·至真要大论篇》"君二臣四"之制,由丹参、川芎等10味中药组成,共奏益气活血,开窍止痛之功。相关研究显示血栓心脉宁作用机制涉及保护血管内皮、促进血管再生、抗血小板聚集与改善血液流变学、抑制炎症反应等,临床广泛应用于心脑血管疾病治疗中。
千雪梅[2]（2021）在《朝医清心山药汤对血管性痴呆大鼠认知功能改善作用的实验研究》文中认为目的:探讨朝医清心山药汤对血管性痴呆（vascular dementia,VD）大鼠认知功能改善作用的实验研究。方法:随机将50只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、喜得镇组、清心山药汤低剂量组、清心山药汤高剂量组,共5组,每组10只。除假手术组之外,其余实验组均采用“两血管阻断+硝普钠降压法”建立VD大鼠模型。清心山药汤高剂量组给予1.5 g/kg的清心山药汤溶液、清心山药汤低剂量组给予0.375 g/kg的清心山药汤溶液、喜得镇组给予0.6 mg/kg、模型组与假手术组分别给予等量生理盐水。上述实验组均以灌胃给药4周,最后4天使用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,采用HE染色观察VD大鼠海马组织病理形态学变化,使用酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清中乙酰胆碱酯酶（Ach E）、5-羟色胺（5-HT）含量,一氧化氮测试盒检测大鼠脑组织中一氧化氮（NO）含量,免疫组化染色观察大鼠脑源性神经营养因子（BDNF）的表达。结果:1.Morris水迷宫实验结果:模型组较假手术组上台潜伏期明显延长,其中第3和第4天差异显着（P<0.01）。清心山药汤组和喜得镇组较模型组上台潜伏期明显缩短。清心山药汤高剂量组在第3天明显缩短（P<0.05）,其中第四天潜伏期缩短差异显着（P<0.01）。2.大鼠海马区病理改变:假手术组大鼠脑海马病理切片显示神经细胞排列整齐,其细胞核完整;模型组病理切片显示大鼠脑海马区神经细胞排列紊乱且数量减少,少部分细胞固缩碎裂甚至坏死;清心山药汤高剂量组、清心山药汤低剂量组和喜得镇组相对于模型组,海马组织神经细胞数量增加,结构完整。3.ELISA检测结果:模型组较假手术组相比,大鼠血清Ach E含量显着上升（P<0.01）、5-HT含量显着下降（P<0.01）;相比模型组,清心山药汤高剂量组与喜得镇组大鼠血清中Ach E含量均显着下降（P<0.01）;与模型组相比较,清心山药汤高剂量组、低剂量组、喜得镇组5-HT含量显着升高（P<0.01）。4.一氧化氮测试盒检测结果:与假手术组比较,模型组大鼠脑组织中NO含量显着升高（P<0.01）;与模型组比较,清心山药汤低剂量组大鼠脑组织中NO含量降低（P<0.05）;与模型组比较,清心山药汤高剂量组与喜得镇组大鼠脑组织中NO含量显着降低（P<0.01）。5.免疫组化染色结果:与假手术组比较,VD模型组BDNF表达量显着减少,与VD模型组比较,治疗各组能够促进BDNF表达。结论:清心山药汤可提高VD大鼠的学习与记忆功能,可改善VD大鼠海马区神经细胞的数量和形态。清心山药汤可通过抑制VD大鼠血清Ach E活性,提高5-HT含量,降低大鼠脑组织NO含量,促进BDNF表达,进而保护VD大鼠大脑,且改善学习记忆等认知功能。
朱晓婷[3]（2021）在《解毒益智方对阿尔茨海默病双转基因小鼠行为学及大脑皮层内β-淀粉样蛋白沉积及BACE1表达影响的研究》文中指出选题依据:阿尔茨海默病（AD）致残、致死率高,发病机制复杂,大脑内Aβ异常沉积是AD发生发展的重要病理变化及核心环节,前期研究已证实了解毒益智方具有抑制AD线虫头部Aβ斑块沉积及相关基因表达的作用,随之开展的随机对照临床研究证实解毒益智方应用6个月后MMSE、MoCA、ADL评分变化明显优于口服尼莫地平片的对照组。黄连为解毒益智方中的君药,为该方的主要成分,在本方中发挥“解毒”的重要功效。经查阅国内外文献发现黄连中发挥“解毒”作用的主要物质为黄连多糖（CCP）,因此设计体外细胞实验探究解毒益智方中的君药黄连的主要有效成分CCP对Aβ25-35损伤PC12的保护作用,为“毒损”的病机及“解毒”的治法提供理论依据,为后续研究提供研究基础。因前期开展的研究均是以单基因单细胞的生物为研究对象,不能很好地模拟AD的疾病特点,因此选用APP/PS1双转基因小鼠作为研究对象,该小鼠很好的模拟了中枢神经系统Aβ异常沉积的状态,通过对小鼠的行为学研究及分子生物学研究,进一步评价解毒益智方的治疗作用。目的:通过体外细胞实验探讨基于“补肾益髓、活血化痰解毒”法形成的解毒益智方其中君药的有效成分CCP对Aβ25-35损伤PC12的保护作用。通过行为学、分子生物学等研究手段,对APP/PS1小鼠的认知功能、Aβ沉积、BACE1表达的相关蛋白、基因等方面进行检测和分析,探讨解毒益智方对APP/PS1小鼠的作用机制,为中药治疗AD的推广应用提供可靠的研究证据。方法:1.本研究分别从体外实验、动物实验探究解毒益智方的作用机制。体外实验部分采用MTT还原法、Hoechst33258荧光染色等方法对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤模型进行线粒体活性、细胞活力、细胞凋亡的测定,探究CCP对PC12细胞的保护作用。动物实验部分选用APP/PS1双转基因小鼠为研究对象,随机分为5组,分别是模型组（APP/PS1组）、盐酸多奈哌齐组（Donepezil组）、解毒益智方低剂量组（JDYZFL组）、解毒益智方中剂量组（JDYZFM组）、解毒益智方高剂量组（JDYZFH组）,每组16只小鼠,另选用16只C57小鼠作为正常对照组（Control组）,于每日早晨8:30进行灌胃治疗,各组每日灌胃药物及剂量分别是,正常组和模型组0.5%CMC溶液0.20g·kg-1·d-1;阳性对照组:盐酸多奈哌齐溶液0.30g·kg-1·d-1;解毒益智方高、中、低剂量组药物浓度依次为0.60g·kg-1·d-1,0.3g·kg-1·d-1,0.15g·kg-1·d-1。持续6个月治疗结束。2.以Aβ25-35损伤的PC12细胞为研究对象,通过测定细胞活力、LDH释放率、细胞凋亡率、和线粒体膜电位的水平等评价CCP的神经保护作用。3.通过水迷宫实验,记录解毒益智方对APP/PS1小鼠学习记忆能力的影响。4.通过ELISE及免疫荧光法检测APP/PS1小鼠脑内Aβ水平的变化,观察解毒益智方对APP/PS1小鼠脑内Aβ沉积的影响。5.采用PCR方法检测脑组织SIRT1、NF-κB、BACE1基因量变化,并进一步采用Western blot方法检测大脑皮层内SIRT1、BACE1、NF-κB蛋白的变化,观察解毒益智方对APP/PS1小鼠脑内AMPK/SIRT1-PPARγ-PGC1α-BACE1转运蛋白通路SIRT1、BACE1、NF-κB的影响。结果:1.通过体外研究观察CCP对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的影响PC12细胞活力测定结果显示:PC12细胞经过浓度为5-50μM的Aβ25–35处理24h后,细胞活力随着Aβ25–35浓度的增加从24%下降至61%。当Aβ25–35在浓度范围为5至50μM时引起PC12细胞中LDH释放增加至对照组的约130-160%。在用不同浓度的CCP（5至200μg/ml）处理PC12细胞24h后,未观察到显着的细胞损失。通过Hoechst33258染色及FCM测定细胞凋亡结果显示:细胞核在荧光显微镜下具有显着的浓缩核和凋亡的细胞形成。与在未处理的PC12细胞中观察到的完整,圆形和相对大的细胞核相比,暴露于50μMAβ25–35 24h的细胞显示出典型的细胞凋亡特征,包括染色质浓缩,核碎裂和凋亡小体的出现。用CCP不同浓度（5,25,50,100,200μg/ml）处理后可有效逆转细胞凋亡,其中100μg/ml效果最明显,FCM分析显示单独暴露于50μMAβ25–35 24h导致58.88±6.12%的凋亡率,这与正常对照组中的7.21±0.82%的值显着不同（P<0.01）。加入100μg/ml的CCP后,细胞凋亡下降至12.51±1.32%。通过JC-1红色荧光与JC-1绿色荧光的比率的变化来检测Aβ诱导的线粒体功能障碍结果显示:当PC12细胞暴露于50μM的Aβ25–35中24h后,与正常对照组相比,显着减弱了JC-1的红色荧光比例,提高了JC-1绿色荧光比例（P<0.01）。用CCP（100μg/ml）预处理Aβ25–35处理的PC12细胞显着抵消了Aβ25–35损伤引起的膜电位损失,JC-1从Aβ25–35处理的PC12细胞中的22.1%变为绿色荧光至84.3%,与正常对照组相近（P>0.05）。通过蛋白质印迹法检测细胞色素C结果显示:经50μMAβ25–35处理PC12细胞24h后细胞色素C在细胞质中的蛋白质表达增加,而预先用CCP（100μg/ml）处理的PC12细胞显着减弱线粒体释放的胞质细胞色素C。2.观察JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的影响。水迷宫实验结果显示:随着实验天数的后移,各组小鼠潜伏期、路径长度、游泳距离均有所缩短,表明随着训练次数的增加各组小鼠对象限平台的定位记忆能力随之有所提升。与Control组相比,APP/PS1组逃避潜伏期、路径长度、游泳距离均明显延长,差异显着（P<0.01）。首次到达平台的时间明显延长,目标停留次数明显减少,差异显着（P<0.01）。与APP/PS1组相比,Donepezil组、JDYZFL组、JDYZFM组逃避潜伏期、路径长度、游泳距离有所缩短,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。首次到达平台的时间缩短,目标停留次数增多,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。与Donepezil组相比,JDYZFL组作用与其相当,JDYZFM组略优于Donepezil组,差异有统计学意义（P<0.05）。干预治疗6个月的12月龄小鼠的定位航行实验及空间搜索实验结果优于干预治疗3个月的9月龄小鼠,差异有统计学意义（P<0.05）。3.观察JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠脑内Aβ沉积的影响。各组小鼠结果如下:与Control组比较,APP/PS1组大脑皮层内可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42沉积极数量明显增多,具有极显着统计学意义（P<0.01）。与APP/PS1组相比,JDYZFL组、JDYZFM组及Donepezil组大脑皮层内可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42沉积数量不同程度降低,具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。与Donepezil组比较,JDYZFM组大脑皮层内可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42沉积数量有所降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。通过免疫荧光法测得小鼠大脑皮层内Aβ表达发现,Control组只产生微量Aβ,而APP/PS1组Aβ表达量明显增高,经过用药干预后,12月龄干预组小鼠可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42沉积数量较9月龄小鼠明显减少,免疫荧光标记从宏观上可以发现干预组Aβ沉积明显减少,APP/PS1组Aβ沉积明显增多。4.调控BACE1表达的相关因子结果（1）PCR检测结果各组小鼠进行的PCR检测结果显示:与Control组相比,APP/PS1组小鼠大脑皮层内BACE1/GAPDH、NF-κB/GAPDH表达含量明显增高,SIRT1/GAPDH明显降低,差异有显着统计学意义(（P<0.01）。与APP/PS1组相比,Donepezil组、JDYZFL组及JDYZFM组小鼠海马体内BACE1/GAPDH、NF-κB/GAPDH表达含量不同程度降低,SIRT1/GAPDH表达含量不同程度增高,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。JDYZFH组在NF-κB/GAPDH表达上无统计学差异。与Donepezil组相比,JDYZFL组及JDYZFM组BACE1/GAPDH、NF-κB/GAPDH表达含量不同程度降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。PCR结果证实药物干预组可通过提高SIRT1mRNA的含量降低NF-κBmRNA、BACE1mRNA的表达,从而抑制Aβ的产生而起到神经保护的作用。各治疗组大脑皮层Aβ的表达均有所降低。连续灌胃6个月的各组小鼠与连续灌胃3个月的小鼠相比,除APP/PS1组及Control组,其他各组SIRT1mRNA的表达均有所提高,NF-κBmRNA、BACE1mRNA的表达均有所降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。（2）Westorn blot检测结果各组小鼠的Western blot检测结果显示:与Control组相比,APP/PS1组小鼠大脑皮层SIRT1的蛋白表达明显降低,NF-κB、BACE1蛋白表达显着升高（P<0.01）。与APP/PS1相比,Donepezil组、JDYZFL组、JDYZFM组BACE1、NF-κB表达降低,SIRT1蛋白表达增高差异有统计学意义（P<0.05）。与Donepezil比较,JDYZFL组、JDYZFM组NF-κB蛋白表达有所降低,差异有统计学意义（P<0.05）。JDYZFL组SIRT1、BACE1蛋白表达无显着差异,JDYZFM组SIRT1表达有所提高,BACE1蛋白表达量略有降低,差异有统计学意义（P<0.05）。经过为期3个月及6个月的干预后,各治疗组大脑皮层Aβ的表达均有所降低。连续灌胃6个月的各组小鼠与连续灌胃3个月的小鼠相比,除APP/PS1组及Control组,其他各组SIRT1的蛋白表达均有所提高,NF-κB、BACE1蛋白的表达均有所降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1 CCP能够保护Aβ25-35损伤的PC12细胞,其机制可能与提高细胞活力、抑制细胞凋亡、减少LDH释放、阻断膜电位的丧失,并阻止线粒体细胞色素C释放,修复线粒体功能障碍有关。2 JDYZF各剂量组可不同程度提高APP/PS1双转基因小鼠定位航行实验及空间搜索实验的成绩,说明JDYZF可改善小鼠空间学习及记忆能力。3 JDYZF可不同程度降低APP/PS1双转基因小鼠大脑皮层内Aβ的异常沉积。4 JDYZF抑制BACE1的异常表达,其作用机制可能是通过调控大脑内AMPK/SIRT1-PPARγ-PGC1α-BACE1信号通路的相关因子表达实现的。
刘玥欣[4]（2021）在《基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽改善轻度认知功能障碍的作用机制研究》文中指出目的:本研究基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽（Velvet antler peptide,VAP）对神经元修复及保护作用,阐释VAP改善轻度认知功能障碍（Mild Cognitive Impairment,MCI）作用机制,为临床鹿茸防治MCI提供依据。方法:本研究利用体内、体外实验,探讨VAP通过调控PI3K/AKT信号通路改善MCI作用机制。1 VAP鉴定及检测利用双缩脲法鉴定VAP理化性质;利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验（SDSPolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）测定VAP分子量;利用柱前衍生化-高效液相色谱法（Precolumn derivatization-High performance liquid chromatography,PD-HPLC）测定VAP不同成分含量。2基于网络药理学探讨鹿茸改善MCI的作用机制利用TCMID数据库、Pubchem数据库筛选鹿茸活性成分及靶点;利用OMIM数据库、Disgenet数据库、Genecards数据库筛选MCI作用靶点;利用Venny 2.1在线作图工具平台筛选鹿茸-MCI作用靶点;利用STRING 11.0蛋白质互作平台构建蛋白-蛋白相互作用（Protein-protein interaction,PPI）网络,利用Cytoscape 3.8.0网络拓扑属性分析软件,基于拓扑分析、聚类分析筛选PPI网络核心靶点;利用Cytoscape 3.8.0网络拓扑属性分析软件构建“中药-成分-靶点-疾病”网络模型,分析核心成分;利用R语言及Bioconductor生物信息软件,进行基因本体论（Gene ontology,GO）富集分析以及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）富集分析,对共同靶点所涉及的生物学过程、主要代谢通路等进行归纳。3基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP改善不同MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制采用腹腔注射东莨菪碱法、单侧颈总动脉结扎法分别诱导不同MCI大鼠模型。利用旷场实验、Morris水迷宫实验观察VAP对不同MCI模型大鼠行为学变化的影响;利用苏木精-伊红染色法（Hematoxylin-eosin staining,HE）观察VAP对不同MCI模型大鼠海马区病理学变化的影响;利用ELISA检测VAP对不同MCI模型大鼠血清中SOD、MDA、脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor,BDNF）、神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）、血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）、睾酮（Testosterone,T）、皮质醇（Cortisol）含量变化的影响;利用Western Blot检测VAP对不同MCI模型大鼠海马区PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响。4基于代谢组学分析VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制利用超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间二级质谱联用（UPLC-Q/TOF-MS）代谢组学技术对由腹腔注射东莨菪碱法复制的MCI模型大鼠脑组织、肾脏进行检测,分析各组间差异代谢物、代谢通路动态变化情况。5基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP拮抗由冈田酸（Okadaic acid,OA）诱导的受损HT22细胞的作用机制利用OA诱导HT22细胞损伤建立模型,给药后,利用CCK-8法检测HT22细胞活性,WST-1法、可分光光度法检测HT22细胞中超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-PX）活力或含量变化的影响,Western Blot检测HT22细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平。结果:1 VAP鉴定及检测实验中选用的VAP理化性质为蛋白质,分子量约为3.2k Da,由17种氨基酸组成,其中必须氨基酸共有7种,含量为393.39±1.65g/kg,氨基酸总含量为826.55±10.75g/kg,不同成分含量稳定,可用于本实验研究。2基于网络药理学探讨鹿茸改善MCI的作用机制鹿茸中多数活性成分为VAP中的重要构建物质,利用交互网络发现鹿茸活性成分可能通过PI3K/AKT信号通路发挥改善MCI作用,作用机制可能与调控体内神经信号转导、神经元损伤、氧化应激过程、性激素类作用等途径相关,为本研究探讨VAP对MCI的改善作用提供方法与思路。3基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP改善不同MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制VAP能够提高不同MCI模型大鼠学习、记忆能力,改善海马区固缩现象,增加不同MCI模型大鼠血清中SOD、BDNF、NGF、VEGF、T、Cortisol含量（P<0.05或P<0.01）,减少MDA含量（P<0.05或P<0.01）,升高Bcl-2、m TOR表达水平（P<0.05或P<0.01）,降低Bad、Bax、Caspase-3蛋白表达水平（P<0.05或P<0.01）,上调PI3K/AKT信号通路的表达（P<0.05或P<0.01）。4基于代谢组学分析VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍作用机制可能与调控脑内叶酸及脂质代谢、环磷酸腺苷能量循环、氨基酸生物合成,以及肾脏中性激素分泌等多种途径相关。5基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP拮抗由冈田酸（Okadaic acid,OA）诱导的受损HT22细胞的作用机制VAP能够提高受损HT22细胞存活率（P<0.01）,增强受损HT22细胞中SOD、GSH-PX活力（P<0.01）,减少MDA含量（P<0.01）,降低Bad、Bax、Caspase-3蛋白表达水平（P<0.01）,上调PI3K/AKT信号通路的表达（P<0.01）。结论:VAP可能通过“填精补髓”作用调控PI3K/AKT信号通路,拮抗由OA诱导的受损HT22细胞,并提高不同MCI模型大鼠学习、记忆能力,调节肾脏功能、促进神经元细胞生长、增殖与分化,保护中枢神经系统,作用机制可能与调控脑内叶酸及脂质代谢、环磷酸腺苷能量循环、氨基酸生物合成,以及肾脏中性激素分泌等多种途径相关。
王添全[5]（2021）在《戟天健脑方调节低糖低氧下大鼠海马神经细胞突触可塑性的机制研究》文中指出背景:血管性痴呆（Vasculardementia,VD）是指因脑血管病和缺血性或出血性脑损伤而产生认知障碍的一类疾病。患者在脑血管疾病影响下,脑内缺血缺氧时神经元突触可塑性发生改变甚至死亡。VD发病机制较为复杂,目前的研究表明,VD的相关发病机制包括胆碱能传导通路受损、突触可塑性的改变、氧化应激和炎性反应、遗传机制等。VD的临床症状主要是脑内血氧不足引起的神经元细胞损伤导致的。对于血管性痴呆的防治目前仍缺乏根本性的方法,除了针对血管性痴呆危险因素的有效控制外,主要以改善患者脑血管代谢如使用尼莫地平片或者改善患者认知功能如使用胆碱酯酶抑制剂为主要治疗手段,临床观察显示出一定疗效,但仍需大规模临床验证。中医学对VD的治疗着重于整体调节、辨证论治的理念,取得了一定的效果。VD属于中医“痴呆”、“呆病”等范畴,其主要发病机制是肾精亏虚、脑脉不充。中医治疗VD治则治法主要以“补”为主,脑为元神之府、髓之海,脑神失养而致痴呆,故治痴呆应补先天之精、养后天之气。戟天健脑方补肾祛湿,安神定智,治疗轻度VD疗效确切,能显着改善患者的认知能力和日常生活活动能力。新近发现微小RNA-132（miR-132）可以作为调控突触可塑性的重要因子,能与多种靶基因及相关蛋白相互作用,形成信号网络,调节突触形态变化和可塑性过程。本研究旨在应用低糖低氧条件诱导大鼠海马神经元细胞模拟VD患者脑部神经元的损伤,观察戟天健脑方及miR-132对大鼠海马神经元细胞损伤模型的保护作用及机制。目的:分析戟天健脑方与miR-132介导的信号网络对低糖低氧诱导大鼠海马神经元突触可塑性调节中的干预作用及其靶点机制。方法:SD大鼠分为五组给予戟天健脑方水煎剂高、中、低剂量,尼莫地平溶液及生理盐水,灌胃7天后制备含药血清。离体原代培养乳鼠海马神经元细胞,收集神经细胞以每孔4×105个接种于24孔板中,完全培养基（高糖）培养。实验分为10组:空白组,模型组,阳性组,戟天健脑方高、中、低剂量组,miR-132 增强组,miR-132 抑制组,miR-132 阳性对照组,miR-132 阴性对照组,转染组使用脂质体转染相应RNA片段。待细胞在培养至70%-80%时利用微管相关蛋白（Microtubule-associatedprotein2,MAP-2）进行细胞鉴定。鉴定完成后开始造模,空白组使用空白含药培养基（高糖）培养,阳性组,戟天健脑方高、中、低剂量组使用各自含药培养基（低糖）,剩余模型组,miR-132转染组使用空白含药培养基（低糖）。低氧条件下培养6小时后取出,正常氧条件下恢复20小时。免疫组化法检测突触后膜致密物质95（PSD-95）、甲基CpG结合蛋白2（MecP2）、三磷酸鸟苷酶活化蛋白（p250GAP）的表达,免疫荧光法观察突触特异性指标突触生长相关蛋白43（GAP-43）、突触素（Syn）蛋白表达位点,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞中环磷酸腺苷应答元件结合蛋白（CREB）、脑源性神经营养因子（BDNF）的含量。结果:与空白组相比,模型组中海马神经元细胞PSD-95、MecP2、GAP-43、Syn表达明显减少,p250GAP表达明显增加,CREB、BDNF含量明显减少（P<0.05或P<0.01）;与模型组相比,阳性组及戟天健脑方高、中、低剂量组中PSD-95、MecP2、GAP-43、Syn 表达明显增加,p250GAP 表达明显减少,CREB、BDNF含量明显增加（P<0.05或P<0.01）。与模型组相比,miR-132阳性对照组中GAP-43、Syn表达明显增加,CREB含量明显增加（P<0.05或P<0.01）,miR-132增强组中GAP-43、Syn表达明显增加（P<0.05或P<0.01）,-miR-132抑制组中GAP-43表达明显减少（P<0.05）。结论:戟天健脑方可能通过调节MecP2、p250GAP等蛋白介导miR-132信号网络表达,增加CREB、BDNF含量,从而增强PSD-95、GAP-43、Syn表达,促进突触重塑,保护大鼠海马神经元细胞。
程越[6]（2021）在《补脾醒神益智法对脾虚认知功能障碍大鼠TREM2/NF-κb信号通路作用机制的研究》文中提出目的:以“脾脑相关”理论为指导,系统论述认知功能障碍与脾脏的相关性,并采取病证结合方式,建立脾虚认知功能障碍大鼠模型,探究补脾醒神益智方对脾虚认知功能障碍的疗效及作用机制,为临床防治认知功能障碍提供理论及实验依据。材料与方法:第一部分:理论研究通过对古籍文献的整理以及相关理论的分析,梳理认知功能障碍的病名及病因病机,从脾与脑、脾与认知功能、脾与衰老等多方面论述脾与认知功能障碍的密切关系,探究补脾醒神益智法作为防治认知功能障碍治法的优势及补脾醒神益智方广阔的应用前景。第二部分:实验研究将60只SPF级SD大鼠,雌雄各半,随机分为正常组、认知功能障碍组、脾虚认知功能障碍组、安理申组、补脾醒神益智方组,共5组,每组12只,适应性喂养1周。采用复合因素、病证结合以及海马注射Aβ1-42的方法建立脾虚认知功能障碍模型,即第2、3周进行脾虚模型的建立,第4周进行海马CA1区Aβ1-42注射后进入灌胃治疗阶段,正常组、认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组治疗期间予0.9%生理盐水灌胃,剩余两组予对应药物灌胃,治疗周期为4周。于灌胃第四周依序开始进行水迷宫适应性训练、定位航行以及空间探索实验,评价不同组别之间大鼠的学习记忆能力。最后一次灌胃结束后,禁食24h后麻醉取材,采用HE染色法观察和分析各组大鼠脑组织神经元形态的变化,ELISA法检测各组别大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,运用RT-PCR及Western blot法检测脑组织中Aβ、NF-κB、TREM2、DAP12、IκB、ERK1/2的mRNA及蛋白的表达情况,从炎症反应的角度观察和探讨补脾醒神益智方改善脾虚认知功能障碍大鼠学习记忆障碍的可能机制。结果:第一部分:理论研究1 通过对古籍中认知功能障碍相关内容的梳理,其相关病名的描述多以“忘”及“呆”为主,并呈现出一定病情严重程度上的递进关系。2 脾虚是老年人群也是认知功能障碍患者的常见证候,脾脏与脑经络相连,气血相通,脾虚则脑髓失养,脾失健运则痰浊内生,因虚致瘀,痰瘀阻窍,从而导致认知功能障碍的发生,故认知功能障碍的防治可从“脾脑相关”理论立论。3 补脾醒神益智法可通过补脾而益气生血,从根本上阻断痰瘀内生,达到益智醒神开窍的作用,是防治认知功能障碍的有效治法。第二部分:实验研究1 大鼠的一般状态结果:在治疗阶段结束后,与正常组相比,认知功能障碍组以及脾虚认知功能障碍组呈现不同程度精神萎靡,毛发粗糙,缺乏光泽,大便溏稀,并伴随出现眯眼及嗜睡等症状,与两模型组相比,各治疗组一般状态均有所好转,补脾醒神益智方组大鼠好转程度优于安理申组。2 行为学实验结果2.1 定位航行实验:与正常组相比,认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组的逃避潜伏期明显增加（P<0.01）,与两模型组相比,各治疗组逃避潜伏期均明显改善（P<0.01）,两治疗组逃避潜伏期比较无明显差异（P>0.05）。2.2 空间探索实验:与正常组相比,认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组首次穿越目标区域所需时间明显延长,穿越该区域的次数明显减少,目标象限停留时间缩短（P<0.01）,脾虚认知功能障碍组首次穿越目标区域所需时间较认知功能障碍组延长（P<0.05）。中药组及西药组均可以在一定程度上改善痴呆大鼠的记忆能力,与模型组相比,各治疗组首次穿越目标区域所需时间,穿越次数及目标象限的停留时间均优于模型组。在空间探索实验中,正常组行进轨迹较为简单,并存在多次反复折返探索的行为,痴呆组及脾虚痴呆组整体行进轨迹较杂乱无章,在各象限停留时间较为均衡。3形态学结果:与正常组比较,认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组,海马区及海马区周围皮质神经元数目明显减少,排列稀疏,细胞体积增大,核仁固缩,细胞核染色加深,锥体细胞数目减少,排列紊乱,出现空泡样变性。安理申组及补脾醒神益智方组海马区及海马周围皮质神经元数目与模型组相比明显增多,但仍低于正常组,细胞形态较为规则,锥体细胞的树突数量与各模型组相比明显上升,空泡变性及细胞的固缩坏死数量减少。4 ELISA结果:与正常组比较,认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组IL-1β、IL-6以及TNF-α表达含量明显上升（P<0.01）,且脾虚认知功能障碍组的增高幅度明显高于认知功能障碍组,具有统计学意义,与两模型组相比,安理申组及补脾醒神益智方组与模型组相比IL-1β、IL-6以及TNF-α表达明显下降（P<0-01）,且补脾醒神益智方组对其下调作用更显着。5 RT-PCR结果:与正常组比较,认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组NF-κBmRNA的相对表达量明显上调（P<0.01）,IκBmRNA的相对表达量明显下调（P<0.01）,与认知功能障碍组比较,安理申组及补脾醒神益智方组NF-κBmRNA相对表达量明显下调,IκBmRNA的相对表达量上调,组间相对表达量无明显差异。与正常组比较,认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组TREM2mRNA、DAP12mRNA的相对表达量明显下调（P<0.01）,与两模型组比较,安理申组及补脾醒神益智方组均可上调TREM2mRNA的相对表达量（P<0.01）,且补脾醒神益智方对二者的上调作用优于安理申组。与正常组比较,认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组ERK1、ERK2mRNA的相对表达量明显上调（P<0.01）,与模型组比较,两治疗组ERK1、ERK2mRNA的相对表达量明显下调,但两治疗组组间比较无统计学意义。6 Western Blot结果:与正常组相比较,认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组海马组织中Aβ、NF-κB、ERK1/2的蛋白表达量明显上升（P<0.01）,IκB、TREM2以及DAP12的蛋白表达含量明显下降（P<0.01）,两治疗组与脾虚认知功能障碍组相比,Aβ、NF-κB、ERK1/2的蛋白表达明显下降（P<0.01）,IκB、TREM2以及DAP12的mRNA表达含量明显上升（P<0.01）。且补脾醒神益智方组对TREM2的上调以及Aβ的下调幅度高于安理申组,两者具有统计学意义（P<0.05）。结论:1 脾虚是认知功能障碍发病的关键病机,且与认知功能障碍的主要病理产物痰浊、血瘀关系密切。补脾醒神益智法及其方药从“脾脑相关”理论出发,通过补脾益气,促进气血运行,进而充养脑髓,气血调和,醒神开窍,对于认知功能障碍的防治具有充分的理论依据及广泛应用前景。2 脾虚复合因素造模方法结合Aβ1-42海马注射可成功构建脾虚认知功能障碍模型,出现学习记忆能力减退以及炎症损伤,较为贴切复制了临床中认知功能障碍患者的症状特点。3 补脾醒神益智方可明显改善脾虚认知功能障碍大鼠的便溏、毛发粗糙、精神萎靡等脾虚证候表现,同时提高模型大鼠定位巡航以及空间探索能力,恢复其学习记忆能力。4 补脾醒神益智方可改善认知功能的作用机制与TREM2/NF-κB信号通路有关,通过上调TREM2及其配体DAP12的mRNA及蛋白的表达,同时抑制NF-κB炎性通路的激活,降低脑组织中Aβ及炎性因子的含量,从而发挥对认知功能障碍的防治作用。
刘慧慧[7]（2021）在《基于Nrf2-ARE信号通路研究针刺对血管性认知功能障碍大鼠的神经保护作用机制》文中研究说明目的:观察针刺疗法对VCI大鼠脑组织抗氧化物质的影响,分析针刺是否可以调控Nrf2-ARE信号通路,从而对VCI大鼠神经细胞起到保护作用,为针刺治疗VCI提供理论依据。方法:实验一:针刺对VCI大鼠行为学及海马形态学的影响选取雄性SD大鼠80只,将其随机分为假手术组、模型组、头针组、项针组、头针+项针组,假手术组仅暴露双侧颈动脉,模型组制备VCI大鼠模型,头针组在模型制备成功基础上给予头针治疗,项针组在模型制备成功基础上给予项针作为干预手段,头针+项针组于模型制备成功基础上给予头针+项针治疗。采用Morris水迷宫行为学实验作为行为学检测指标;采用HE染色分析其形态学变化。实验二:针刺对Nrf2-ARE信号通路相关因子表达的影响将80只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、头针组、项针组、头针+项针组。假手术组仅暴露颈动脉;模型组制备大鼠VCI模型;头针组于模型制备成功基础上给予头针治疗,项针组于模型制备成功基础上给予项针治疗,头针+项针组于模型制备成功基础上给予头针+项针治疗;Elsia法检测大鼠MDA、GSH、SOD含量;Western blot检测大鼠海马 CytC、cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-2、Nrf2、HO-1 与 NQO1 蛋白表达情况;RT-PCR法检测大鼠海马Nrf2mRNA、HO-1 mRNA和NQO1 mRNA的表达情况。结果:1.水迷宫实验评分比较:模型组逃避次数、潜伏期与假手术组相比,均具有显着差异（P<0.01）,提示造模成功;针刺组逃避次数、潜伏期中与模型组相比,均具有显着差异（P<0.01）;针刺组中头针+项针组逃避次数、潜伏期与其他针刺组相比,有显着差异（P<0.01）;头针组与逃避次数、潜伏期中与项针组相比,两组无明显差异（P>0.05）。2.HE染色结果:假手术组大鼠海马组织神经元结构完整,层次清晰,形态规则,排列致密整齐,分布均匀,细胞核大而规则,无明显的神经元丢失现象;模型组大鼠海马组织神经元层次较差,形态不规则,排列疏松紊乱,细胞间质水肿,细胞核固缩深染,神经元与周围组织间隙增大变宽,神经元丢失明显;头针组和项针组大鼠海马组织神经元结构欠佳,排列不规则,细胞间质水肿,细胞核固缩,深染程度低,神经元与周围组织间隙变小,神经元丢失;头针+项针组大鼠海马组织神经元结构相对完整,排列比较均匀,细胞间质水肿明显减轻,细胞核固缩减少,深染程度降低,神经元与周围组织间隙变小,神经元少量丢失。3.Elsia 结果:与假手术组比较,模型组、针刺组大鼠海马组织中MDA表达明显增加（P<0.01）,GSH、SOD表达明显下降（P<0.01）;与模型组相比,针刺组大鼠海马组织中MDA表达减少（P<0.01）,GSH、SOD表达明显增加（P<0.01）;针刺组中头针+项针组大鼠海马组织中MDA表达减少,GSH、SOD表达明显增加,与其他针刺组相比,有显着差异（P<0.01）;与头针组相比,项针组大鼠海马组织中各物质表达量相近,无明显差异（P>0.05）。4.Western blot 检测结果:与假手术组比较,模型组大鼠海马组织中CytC、cleaved Caspase-3、Bax表达明显增加（P<0.01）,Bcl-2表达减少（P<0.01）;与模型组相比,针刺组大鼠海马组织中CytC、cleaved Caspase-3、Bax表达明显减少（P<0.01）,Bcl-2表达明显增加（P<0.01）;与头针组、项针组相比,头针+项针组大鼠海马组织中CytC、cleaved Caspase-3、Bax表达减少（P<0.01）,Bcl-2表达明显增加（P<0.01）;与头针组相比,项针组大鼠海马组织中各物质表达量相近,无明显差异（P>0.05）;与假手术组比较,模型组大鼠海马组织中Nrf2、HO-1与NQO1表达明显降低（P<0.01）;与模型组相比,针刺组大鼠海马组织中Nrf2、H0-1与NQ01表达明显增多（P<0.01）;与头针组、项针组相比,头针+项针组大鼠海马组织中Nrf2、HO-1与NQO1表达增多（P<0.01）;与头针组相比,项针组大鼠海马组织中Nrf2、HO-1与NQO1表达量相近,二者无明显差别（P>0.05）。5.RT-PCR检测结果:模型组、针刺组大鼠Nrf2mRNA、HO-1mRNA、NQO1mRNA表达较假手术组明显增加（P<0.01）;针刺组大鼠Nrf2mRNA、HO-1mRNA、NQO1mRNA表达较模型组明显增多（P<0.01）;头针+项针组大鼠Nrf2mRNA、HO-1mRNA、NQO1mRNA表达较其他针刺组明显增多（P<0.01）;项针组大鼠 Nrf2mRNA、HO-1mRNA、NQO1mRNA 表达量与头针组相近,无明显差异（P>0.05）。结论:1.针刺能够改善VCI大鼠认知功能,并能减轻VCI大鼠海马组织中神经元损伤,头针联合项针治疗效果最佳。2.针刺能够促进VCI大鼠海马组织抗氧化应激反应,增加抗氧化物的表达,减少MDA的合成。3.针刺能够抑制Cytc、cleaved Caspase-3、Bax的表达,增加BCL-2的表达,减少细胞凋亡的产生。4.针刺可能通过调控Nrf2-ARE信号通路,引起下游HO-1、NQO1合成增加,并激活抗氧化物GSH、SOD的产生,降低脂质过氧化物MDA的含量,并且减少细胞凋亡的产生,从而对大鼠海马组织起到保护作用,进而改善大鼠认知功能。
郑晓燕[8]（2021）在《“智三针”激活TFEB介导的自噬改善5×FAD小鼠认知功能障碍的研究》文中提出目的:阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease,AD）患者迫切需要有效的新疗法,然而目前许多在研药物在临床试验中的效果并不理想。β-淀粉样蛋白（β-amyloid protein,Aβ）在胞外聚集形成的老年斑,以及过度磷酸化的tau蛋白在胞内聚集形成的神经纤维缠结仍然是AD诊断的两个典型的病理特征。自噬-溶酶体通路（autophagy-lysosomal pathway,ALP）障碍导致的蛋白质错误折叠与聚集是AD病理发生、发展的重要因素。其中,转录因子EB（transcription factor EB,TFEB）是一种正向调控ALP的调节因子,被证明是治疗AD的潜在靶标。“靳三针”是靳瑞教授集历代针灸名家临证经验之精华,其中“智三针”在改善记忆、提高智力方面,有临床疗效好,无副作用,方法简便易行等优点。课题组前期动物实验发现,“智三针”具有提高AD模型大鼠相关脑区的葡萄糖代谢,改善痴呆样大鼠学习记忆的作用,而“智三针”改善AD认知功能的获效机制是否与调节ALP有关尚未阐明。本研究旨在探索“智三针”能否通过调控TFEB介导的自噬和溶酶体生物合成来发挥其在5×FAD小鼠中的神经保护作用。方法:实验一:将5×FAD小鼠随机分为野生型（WT）组、模型组、电针组、假电针组。（1）采用水迷宫（MWM）、条件恐惧（FC）行为学观察“智三针”对5×FAD小鼠认知功能的影响;（2）采用Western blot检测前额叶皮层和海马组织淀粉样蛋白前体蛋白（APP）、淀粉样蛋白前体蛋白C端片段（CTFs）、β-分泌酶1（BACE1）的蛋白水平;（3）采用免疫荧光观察前额叶皮层和海马小胶质细胞（AIF1标记）,星形胶质细胞（GFAP标记）与Aβ（6E10标记）荧光共定位的情况;（4）采用Western blot检测前额叶皮层和海马自噬关键通路LC3B、SQSTM1、LAMP1、CTSD、TFEB、MTORC1、AKT和MAPK1的蛋白水平,同时采用免疫荧光双标（LC3B/CTSD、LC3B/Aβ42、SQSTM1/6E10、LAMP1/6E10）观察小鼠脑内自噬流的变化。实验二:加用自噬抑制剂氯喹（chloroquine,CQ）,将5×FAD小鼠随机分为模型组、电针组、模型+CQ组、电针+CQ组。（1）采用水迷宫、条件恐惧行为学观察在CQ作用下,“智三针”对5×FAD小鼠认知功能的影响;（2）采用Western blot检测LC3B、SQSTM1、LAMP1蛋白表达,观察在CQ作用下,“智三针”对5×FAD模型小鼠自噬和溶酶体生物发生的影响。实验三:运用AAV-sh-Tfeb在5×FAD小鼠海马区干扰TFEB蛋白表达,观察其对“智三针”诱导的APP/Aβ自噬性降解和认知功能的影响。将5×FAD小鼠随机分为四组,分别为5×FAD+空载组、电针+空载组、5×FAD+sh-Tfeb组、电针+sh-Tfeb组,通过水迷宫观察认知功能,Western blot观察海马APP-CTFs蛋白的变化。结果:1.“智三针”改善5×FAD小鼠空间学习记忆及条件恐惧行为学5.5月龄的雄性5×FAD小鼠经“智三针”电针或假电针治疗4周,使用水迷宫和条件恐惧来评估空间学习记忆和恐惧记忆。在MWM中,从训练第2天到第5天,与WT相比,5×FAD小鼠的逃避潜伏期显着增加。从训练的第2天到第5天,“智三针”处理显着减少了 5×FAD小鼠的逃避潜伏期。训练的第6天,“智三针”处理显着提高了小鼠在目标象限中的时间和穿越平台的次数。在条件恐惧测试中,“智三针”治疗可显着改善5×FAD小鼠的情境恐惧记忆。2.“智三针”促进5×FAD小鼠脑区APP/Aβ的降解并减轻神经炎症反应（1）“智三针”促进5×FAD小鼠前额叶皮层和海马APP及CTFs的降解:Western blot结果显示,5×FAD组前额叶和海马组织中Fl-APP和CTFs蛋白的表达较WT组显着增加。“智三针”显着降低了前额叶皮层（PFC）中Fl-APP和CTFs的蛋白水平,海马组织（HI）Fl-APP表达无明显差异,CTFs显着降低。值得注意的是,“智三针”并不影响PFC和HI中BACE1的表达,这提示“智三针”可以促进APP和CTF的降解,而不影响合成Aβ的合成。（2）“智三针”促进5×FAD小鼠前额叶皮层和海马Aβ降解并抑制小胶质细胞的激活:“智三针”治疗不但减少小鼠PFC及HI中Aβ斑块,同时也显着减少了Aβ斑块周围激活的小胶质细胞（用AIF标记）的数量及荧光强度;然而,“智三针”治疗对Aβ斑块周围的星形胶质细胞（用GFAP标记）荧光强度没有明显作用。该结果提示“智三针”治疗能促进Aβ降解并抑制PFC及HI中小胶质细胞的激活。3.“智三针”激活TFEB调控自噬和溶酶体生物发生,促进APP/Aβ的降解（1）“智三针”促进5×FAD小鼠前额叶皮层及海马组织中的自噬流:Western blot结果提示“智三针”处理后不可溶性自噬体标志物LC3B-Ⅱ的表达降低,自噬底物SQSTM1的降解增加。说明“智三针”促进5×FAD小鼠自噬流的形成。通过加用溶酶体抑制剂CQ,观察其对“智三针”诱导5×FAD小鼠自噬流的变化。电针+CQ联合处理,与单用CQ组相比,LC3B-Ⅱ蛋白表达水平没有升高,说明“智三针”不会影响自噬的诱导（起始端）。通过双荧光共定位分析,我们发现与正常WT小鼠比较,5×FAD小鼠PFC和HI中与LC3B共定位的CTSD的面积显着减少,而经“智三针”治疗的5×FAD小鼠PFC和HI中与LC3B共定位的CTSD的面积显着增加,该结果表明,在5×FAD小鼠的大脑中,自噬体到自噬溶酶体的转化（自噬流）存在障碍,而“智三针”可以恢复自噬流。（2）“智三针”增加溶酶体的生成,增强溶酶体活性:Western blot显示“智三针”处理后较模型组相比PFC及HI中溶酶体膜蛋白LAMP1、组织蛋白酶CTSD蛋白表达显着增加。WT组前额叶皮层和海马中LAMP1成散点分布,而模型组斑块（APP标记）周围聚集了大量的LAMP1。而经“智三针”治疗的5×FAD小鼠与LAMP1相关的斑块面积减少。说明“智三针”促进了溶酶体的生成,减少有缺陷的与Aβ斑块相关的溶酶体,从而降解APP和Aβ等。（3）“智三针”激活5×FAD小鼠前额叶皮层及海马组织中的TFEB:为了验证“智三针”促进自噬流是否与激活TFEB有关,分离PFC及HI胞质胞核组织并检测TFEB的水平,Western blot结果显示“智三针”显着提高了 PFC及HI组织细胞核中TFEB的水平;同时,“智三针”电针显着减少了 S142位点磷酸化的TFEB,提示“智三针”促进了 TFEB的去磷酸化与核转运。4.“智三针”促进5×FAD小鼠APP降解及改善认知功能依赖于TFEB（1）“智三针”增强自噬体对自噬底物的特异性识别:通过免疫荧光共定位Aβ1-42与LC3B观察“智三针”对自噬小体的影响,经“智三针”治疗的5×FAD小鼠PFC和HI组织Aβ1-42与LC3共标的黄色荧光区域面积显着增加。同时,“智三针”治疗的5×FAD小鼠PFC和HI中SQSTM1相关的斑块面积（APP标记）面积显着缩小。该结果表明,“智三针”可恢复自噬体对自噬货物或底物的识别,并增强对它们的降解。（2）“智三针”促进5×FAD小鼠APP降解及改善认知功能依赖于TFEB及溶酶体活性:为了明确“智三针”对APP/Aβ降解和改善认知的特定作用。首先通过加用溶酶体抑制CQ,证明“智三针”对海马组织中Fl-APP的降解作用,以及对水迷宫空间学习记忆及条件恐惧行为学认知功能的改善被溶酶体抑制剂CQ阻断;再者,将AAV-sh-Tfeb注射到5×FAD小鼠海马CA1区,有效干扰TFEB的表达后,“智三针”对海马中CTFs的降解作用,以及对认知功能的改善也被阻断。这些结果表明“智三针”对5×FAD小鼠认知功能的改善依赖于TFEB及溶酶体活性。5.AKT-MAPK1-MTORC1信号通路是“智三针”诱导自噬的关键通路Western blot结果提示“智三针”处理后,5×FAD前额叶皮层和海马TFEB通路上游激酶MTORC1活性及磷酸化水平显着降低。在海马区MAPK1磷酸化激活受到抑制,但AKT并没有受到明显影响,而在前额叶皮层则刚好相反。说明“智三针”通过抑制激酶MTORC1,MAPK1,AKT的活性,激活TFEB的磷酸化及其核转运。结论:“智三针”可显着改善表达Aβ的5×FAD转基因小鼠的空间学习记忆能力和情境恐惧记忆能力;在分子水平,“智三针”显着降低了前额叶皮层和海马中的APP、CTFs及Aβ斑块,并抑制了神经小胶质细胞的异常激活;深入的机制研究揭示“智三针”通过抑制激酶MTORC1,MAPK1,AKT的活性,促进TFEB发生去磷酸化与核转运,增强溶酶体活性,从而促进APP/Aβ的降解,改善5×FAD小鼠认知功能。
刘静[9]（2021）在《探讨运动针刺干预激活PI3K-AKT信号通路对VaD神经元保护及Caspase-3表达影响的研究》文中进行了进一步梳理目的:观察运动针刺对Va D大鼠认知功能、海马组织中PI3K-AKT信号通路关键蛋白的表达及下游凋亡蛋白Caspase-3在血清中表达水平的影响,在动物实验的基础上进一步探讨运动针刺联合西医常规治疗对Va D患者的临床疗效、安全性能及其对血清中Caspase-3蛋白水平的影响。从而了解运动针刺治疗Va D的作用机制及疗效,可为运行针刺治疗Va D提供客观有效的依据。方法:1、动物实验研究:本实验以健康雄性SD大鼠为研究对象,采用Olsson法建立Va D动物模型,将造模术后存活的大鼠予以水迷宫行为学测试以检验造模是否成功,然后将造模成功的Va D大鼠随机分为4组,分别是模型组、头针丛刺组、运动训练组及运动针刺组,每组各8只。然后另外随机选取8只进行分离未结扎颈总动脉的大鼠作为假手术组和8只健康雄性SD大鼠作为正常组。分组完成后即可开始治疗,头针丛刺组予以皮内针针刺百会穴及左右旁开2mm三个穴位,运动训练组予以运动康复训练,运动针刺组即予以头针丛刺联合运动训练治疗,持续治疗时间为2周,治疗结束后开始进行Morris水迷宫训练,第1-5天进行定向航行实验,第6天撤掉逃生平台后开始空间探索实验,通过定位航行实验和空间探索实验分析运动针刺对Va D大鼠学习和记忆功能等认知功能的影响。水迷宫实验结束后,先采集各组实验大鼠全血标本,再断头剥离出各组大鼠海马组织,运用Western-Blot法检测PI3K-AKT信号通路中通路蛋白PI3K、AKT蛋白在各组实验大鼠海马组织中的表达情况,同时运用ELISA定量法检验各组实验大鼠血清中Caspase-3蛋白表达情况。2、临床实验研究:选取符合纳入标准的60例Va D患者作为实验研究对象,随机分为2组,分别为治疗组及对照组,每组各30例,对照组Va D患者给与盐酸多奈哌齐等基础西药常规治疗,而治疗组是在对照组的基础上加用运动针刺治疗,运动针刺是针刺百会及左右四神聪两穴的同时予以运动康复训练,治疗周期为4周,分别在治疗前后对Va D患者进行相关痴呆量表评分（MMSE、HDS、ADL）及血标本的采集,运用ELISA法检测Va D患者治疗前后血清中Caspase-3蛋白表达水平,并对Va D患者在治疗期间进行安全性能评估。结果:1、行为学检测结果显示:在定位航行实验结果中,模型组与正常组和假手术组相比,模型组大鼠的逃避潜伏期时间明显延长（P<0.05）;与模型组相比,运动针刺组、头针丛刺组及运动训练组大鼠逃避潜伏期时间不同程度缩短（P<0.05）,其中以运动针刺组干预效果最为明显;在空间探索实验中,模型组与正常组和假手术组相比,模型组大鼠的首次到达逃生平台时间明显延长及目标象限停留时间明显缩短（P<0.05）;与模型组相比,运动针刺组、头针丛刺组及运动训练组大鼠首次到达逃生平台时间不同程度缩短及目标象限停留时间不同程度延长（P<0.05）,其中以运动针刺组干预效果最为明显。2、Western-Blot及ELISA结果显示:模型组与正常组和假手术组相比,模型组大鼠海马组织中PI3K、AKT蛋白明显降低,血清中Caspase-3水平明显升高（P<0.05）;与模型组相比,运动针刺组、头针丛刺组及运动训练组大鼠海马组织中PI3K、AKT蛋白呈不同程度升高,血清中Caspase-3水平不同程度降低（P<0.05）。其中以运动针刺组干预效果最为明显。3、临床实验结果显示:治疗前对照组与治疗组Va D患者血清中Caspase-3水平无明显差异（P>0.05）,经运动针刺联合西医常规治疗后,可发现Va D患者血清中Caspase-3表达量低于对照组（P<0.05）。组内比较发现,两组Va D患者血清中Caspase-3水平均较治疗前降低（P<0.05）。且治疗后Va D患者的学习记忆功能力及独立生活能力较治疗前均有不同程度的改善,且以治疗组最为明显。结论:1、动物和临床实验研究发现Caspase-3在Va D患者及大鼠血清中含量升高,表明Caspase-3表达异常与血管性痴呆疾病的发生发展有一定的相关性。2、运动针刺防治Va D作用机制可能是通过激活PI3K-AKT细胞信号通路,并下调Caspase-3蛋白的表达。
王小燕[10]（2021）在《基于小胶质细胞极化、树突棘稳定探讨加减薯蓣丸改善APP/PS1小鼠学习记忆能力的作用机制》文中指出目的本文理论部分通过总结中医古今医家对痴呆的认识,探讨从健脾补肾、化痰祛瘀论治阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）的理论可行性;实验部分通过对AD模型小鼠的行为学、海马病理形态的观察,探讨加减薯蓣丸（Modified Shuyu Pills,MSP）对改善AD模型小鼠的学习记忆能力治疗作用,并从小胶质细胞表型转化Nlrp3/ASC/Caspase-1通路和树突棘稳定BDNF/Rac1/Cofilin通路等方面,探讨加减薯蓣丸改善APP/PS1小鼠学习记忆的作用机制。方法1理论部分:通过查阅古代医籍和检索现代数据库,梳理古今医家对痴呆病机的认识,从脾肾亏虚、痰瘀互结方面探讨治疗AD的可行性,并结合团队的前期研究基础和现代药理学结果,为进一步探讨加减薯蓣丸治疗AD的作用机制提供理论依据。2实验部分:将APP/PS1小鼠随机分为3组,分别为模型组,多奈哌齐组、加减薯蓣丸组,每组10只,C57BL/6J小鼠设为正常组。加减薯蓣丸组给药剂量为每日14 g/kg,盐酸多奈哌齐组给药剂量为每日1 mg/kg,每日灌胃量为0.2ml/10g,连续35 d灌胃。正常组和模型组给予同等体积的生理盐水。灌胃结束后用Morris水迷宫观察各组小鼠的学习记忆能力;旷场实验观察小鼠焦虑抑郁情况。行为学检测后,取固定脑组织,采用Nissl染色法观察各小鼠海马神经元病理改变;免疫组化法观察各组小鼠海马Aβ1-42沉积情况、SYN、PSD-95蛋白表达情况;高尔基染色观察各组小鼠树突棘变化情况;免疫荧光法检测Iba1、i NOS共表达和Iba1、CD36共表达情况。行为学检测过后,取新鲜脑组织,用Western blot检测Nlrp3、ASC、Caspase-1、IL-1β、BDNF、Trk B、Rac1、p-LIMK1、LIMK1、p-Cofilin、Cofilin蛋白表达情况;用qPCR检测Nlrp3、IL-1β、TNFα、IL-18、IL-4、IL-10、BDNF、LIMK mRNA相对表达量。结果1 Morris水迷宫空间探索实验结果:与正常组比较,模型组小鼠的逃避潜伏期显着延长（P<0.01）;与模型组比较,多奈哌齐组、加减薯蓣丸组小鼠的逃避潜伏期缩短（P<0.05）;多奈哌齐组与加减薯蓣丸相比,不具有统计学差异。定航实验结果,与正常组比较,模型组小鼠的穿越平台次数显着减少,目标象限运动距离百分比和目标象限停留时间缩短（P<0.01）;与模型组比较,多奈哌齐组、加减薯蓣丸组小鼠穿越平台次数和目标象限运动距离百分比和目标象限停留时间增加（P<0.05）;多奈哌齐组与加减薯蓣丸组相比,不具有统计学差异。2旷场实验结果:与正常组比较,模型组小鼠总的运动距离、中央区运动距离百分比和中央区停留时间百分比明显降低（P<0.01）;与模型组比较,多奈哌齐组、加减薯蓣丸组小鼠的总运动距离、中央区运动距离百分比和中央区停留时间百分比增加（P<0.05）;与多奈哌齐组比较,加减薯蓣丸组小鼠总运动距离增加（P<0.05）,中央区运动距离百分比、中央区停留时间百分比,差异没有统计学意义。3 Nissl染色结果:海马CA1区Nissl染色显示,正常组小鼠海马神经元尼氏体丰富,细胞膜完整,着色明显。与正常组比较,模型组小鼠海马神经元细胞数量明显减少,细胞膜破裂,着色较浅,尼氏体数量减少。与模型组比较,多奈哌齐组、加减薯蓣丸组小鼠海马神经元数量增加,尼氏体增多,着色加深。4免疫组化结果:海马区Aβ1-42免疫组化显示,与正常组比较,模型组小鼠海马CA1区Aβ1-42沉积升高（P<0.01）;与模型组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马CA1区Aβ1-42降低（P<0.05）;与多奈哌齐组相比,加减薯蓣丸组小鼠海马CA1区Aβ1-42降低（P<0.05）。与正常组比较,模型组小鼠海马CA1区SYN、PSD-95蛋白表达明显降低（P<0.01）;与模型组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马CA1区SYN、PSD-95蛋白表达明显升高（P<0.01）,与多奈哌齐组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马CA1区SYN、PSD-95蛋白表达明显升高（P<0.05）。5高尔基染色结果:海马高尔基病理染色能够评估树突棘形态,结果显示,与正常组比较,模型组小鼠海马区树突棘密度明显减少（P<0.01）;与模型组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马区树突棘密度增加（P<0.05）;与多奈哌齐组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马区树突棘密度增加（P<0.05）。6免疫荧光结果:与正常组比较,模型组小鼠海马区Iba1/i NOS的共表达增多,Iba1/CD36共表达减少;与模型组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马Iba1/i NOS共表达减少,Iba1/CD36共表达增多;与多奈哌齐组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马Iba1/i NOS共表达减少,Iba1/CD36共表达增多。7 WB结果:与正常组比较,模型组小鼠海马Nlrp3、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白的表达显着增加,BDNF、Arg-1、Trk B、Rac1蛋白表达显着降低（P<0.01）,p-LIMK/LIMK、P-Cofilin/Cofilin比值显着降低（P<0.01）;与模型组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马Nlrp3、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白表达降低,BDNF、Arg-1、Trk B、Rac1蛋白表达升高（P<0.05）,p-LIMK/LIMK、P-Cofilin/Cofilin比值升高（P<0.05）;与多奈哌齐组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马Nlrp3、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白表达降低,BDNF、Arg-1、Trk B、Rac1蛋白表达升高（P<0.05）,p-LIMK/LIMK、P-Cofilin/Cofilin比值升高（P<0.05）。8 qPCR结果:与正常组比较,模型组小鼠海马Nlrp3、IL-1β、TNFα、IL-18 mRNA的相对表达量升高,IL-4、IL-10、BDNF、LIMK mRNA的相对表达量降低（P<0.05）。与模型组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马Nlrp3、IL-1β、TNFα、IL-18 mRNA相对表达量降低,IL-4、IL-10、BDNF、LIMK mRNA的相对表达量升高（P<0.05）;与多奈哌齐组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马Nlrp3、IL-1β、TNFα、IL-18 mRNA相对表达量降低,IL-4、IL-10、BDNF、LIMK mRNA的相对表达量升高（P<0.05）。结论1脾肾亏虚,痰瘀互结是AD的基本病机,健脾补肾、化痰祛瘀是AD有效的治疗方法;2加减薯蓣丸能够改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力和抑郁情况;3加减薯蓣丸能够抑制Nlrp3/ASC/Caspase-1通路促进小胶质细胞向M2表型转化,增加神经营养和修复功能;4加减薯蓣丸能够通过BDNF/Rac1/LIMK/Cofilin通路促进树突棘稳定,改善学习记忆障碍。
二、健脑安对血管性痴呆大鼠海马区IL-1β和CRF蛋白异常表达的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、健脑安对血管性痴呆大鼠海马区IL-1β和CRF蛋白异常表达的影响（论文提纲范文）
（1）血栓心脉宁“血脉双治”组方探讨及研究进展（论文提纲范文）
| 1 遵循“血脉双治”理论构建血脉病整体认识 |
| 2 组方传承创新凸显中医学特色 |
| 3 复杂作用机制发挥多重保护效应 |
| 3.1 保护血管内皮 |
| 3.2 促进血管再生 |
| 3.3 抗血小板聚集与改善血液流变学 |
| 3.4 抑制炎症反应 |
| 4 临床运用 |
| 4.1 冠心病心绞痛与急性心肌梗死 |
| 4.2 高脂血症 |
| 4.3 心律失常 |
| 4.4 脑梗死 |
| 4.5 短暂性脑缺血发作 |
| 4.6 血管性痴呆 |
| 4.7 其他疾病 |
| 5 展 望 |
（2）朝医清心山药汤对血管性痴呆大鼠认知功能改善作用的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 血管性痴呆的研究进展 |
| 1.1.1 中医对VD的认识 |
| 1.1.2 中医治疗VD |
| 1.1.3 VD的危险因素、发病机制、西医治疗方法 |
| 1.2 总结 |
| 第二章 实验材料及方法 |
| 2.1 实验药品及试剂 |
| 2.2 实验动物 |
| 2.3 实验器材 |
| 2.4 实验试剂溶液配制 |
| 2.5 实验方法 |
| 2.5.1 实验动物分组 |
| 2.5.2 提取物的配制 |
| 2.5.3 动物模型的制备 |
| 2.5.4 体重测定 |
| 2.5.5 Morris 水迷宫实验 |
| 2.5.6 血清的采集与取大鼠脑组织中的海马 |
| 2.5.7 石蜡包埋和切片 |
| 2.5.8 HE染色 |
| 2.5.9 酶联免疫吸附法(ELISA) |
| 2.5.10 检测VD大鼠脑组织中NO含量 |
| 2.5.11 检测 VD 大鼠脑 BDNF 表达 |
| 2.5.12 统计学方法 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 清心山药汤对大鼠体重的影响 |
| 3.2 清心山药汤对VD大鼠学习记忆功能的影响 |
| 3.3 清心山药汤对 VD 大鼠海马组织病理形态学变化的影响（HE染色） |
| 3.4 清心山药汤对VD大鼠血清中Ach E、5-HT含量的影响 |
| 3.4.1 清心山药汤对VD大鼠血清中Ach E含量的影响 |
| 3.4.2 清心山药汤对VD大鼠血清中5-HT含量的影响 |
| 3.5 清心山药汤对VD大鼠脑组织中NO含量的影响 |
| 3.6 清心山药汤对VD大鼠脑BDNF表达的影响 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（3）解毒益智方对阿尔茨海默病双转基因小鼠行为学及大脑皮层内β-淀粉样蛋白沉积及BACE1表达影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 综述一 AD的病因病机及治疗进展 |
| 1 中医学对痴呆的系统认识及研究进展 |
| 1.1 中医学对痴呆病名由来及发展的认识 |
| 1.2 中医学对痴呆病因病机的古代认识 |
| 1.3 中医学对痴呆辨证论治及相关研究的认识 |
| 1.4 中医学对痴呆治疗的古今认识 |
| 综述二 西医学对AD的发病机制及治疗进展研究 |
| 1 现代医学对AD的认识及研究进展 |
| 1.1 AD的概述及流行病学 |
| 1.2 现代医学对AD发病因素的认识及研究 |
| 1.3 现代医学对AD发病相关机制的认识 |
| 2 现代医学对AD治疗的认识 |
| 2.1 乙酰胆碱酯酶抑制剂(AchEIs) |
| 2.2 兴奋性氨基酸受体拮抗剂 |
| 2.3 甘露特纳胶囊 |
| 2.4 其他非药物治疗 |
| 3 问题与展望 |
| 综述三 Aβ在脑内异常沉积的机制 |
| 1.Aβ的产生、分布与清除、传递与运输的研究进展 |
| 1.1 Aβ的产生 |
| 2 Aβ的清除 |
| 2.1 细胞的清除作用 |
| 2.2 Aβ被降解酶的清除作用 |
| 2.3 中枢Aβ的清除途径 |
| 2.4 血液成分介导的Aβ清除 |
| 综述四 解毒益智方在阿尔茨海默病中的应用 |
| 1 解毒益智方的创立 |
| 1.1 脑髓理论 |
| 1.2 髓虚毒损 |
| 1.3 补肾益髓,活血化痰解毒法 |
| 2 解毒益智方通过调节SIRT1/AMPK通路抑制BACE1表达改善Aβ的沉积 |
| 3 解毒益智方对阿尔茨海默病的临床应用 |
| 实验研究 |
| 第一章 CCP对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤保护性的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠行为学的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠脑内Aβ水平变化的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠脑内BACE1表达的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（4）基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽改善轻度认知功能障碍的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 第一章 VAP鉴定及检测 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 基于网路药理学探讨鹿茸改善MCI的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP改善不同MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第四章 基于代谢组学分析VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 数据处理 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第五章 基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP拮抗由OA诱导的受损HT22细胞的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（5）戟天健脑方调节低糖低氧下大鼠海马神经细胞突触可塑性的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 文献综述一 血管性痴呆的危险因素及病理机制 |
| 1 VD的危险因素 |
| 1.1 动脉粥样硬化性疾病或血管危险 |
| 1.2 其他因素 |
| 2 VD的病理机制 |
| 2.1 胆碱能神经系统 |
| 2.2 突触可塑性的改变 |
| 2.3 氧化应激和炎性反应 |
| 2.4 遗传机制 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 血管性痴呆的中西医治疗进展 |
| 1 中药治疗 |
| 1.1 中药复方 |
| 1.2 中药单味药 |
| 1.3 传统特色治疗 |
| 2 西药治疗 |
| 3 中西医结合 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 1 材料与仪器 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 药物与试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 1.4 试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 大鼠海马神经元细胞原代培养 |
| 2.2 细胞鉴定 |
| 2.3 大鼠海马神经元细胞低糖低氧模型建立及干预方法 |
| 2.4 戟天健脑方对各组细胞造模前后形态影响 |
| 2.5 戟天健脑方对各组细胞PSD-95、MecP2、p250GAP蛋白表达的影响 |
| 2.6 miR-132基因转染及造模干预 |
| 2.7 戟天健脑方及miR-132相关转染对各组细胞GAP-43、Syn蛋白荧光表达的影响 |
| 2.8 戟天健脑方及miR-132相关转染对各组细胞CREB、BDNF含量的影响 |
| 2.9 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 细胞鉴定结果 |
| 3.2 戟天健脑方对各组细胞形态影响 |
| 3.3 戟天健脑方对各组细胞PSD-95、MecP2、p250GAP蛋白表达的影响 |
| 3.4 戟天健脑方及miR-132相关转染对各组细胞GAP-43、Syn蛋白荧光表达的影响 |
| 3.5 戟天健脑方及miR-132相关转染对各组细胞中CREB、BDNF含量影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 海马神经元细胞低糖低氧模型的建立 |
| 4.2 戟天健脑方组方分析 |
| 4.3 戟天健脑方对miR-132相关网络的干预作用 |
| 4.4 戟天健脑方和miR-132对突触可塑性的调节 |
| 5 结论 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（6）补脾醒神益智法对脾虚认知功能障碍大鼠TREM2/NF-κb信号通路作用机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 从脾论治认知功能障碍中医相关理论探讨 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一: 补脾醒神益智方对脾虚认知功能障碍模型大鼠学习记忆能力的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验二: 补脾醒神益智方对Aβ诱导的脾虚认知功能障碍大鼠形态学及血清IL-1β、IL-6以及TNF-α表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验三: 补脾醒神益智方对脾虚认知功能障碍大鼠脑组织的TREM2/NF-κB信号通路的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 中医药防治认知功能障碍研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（7）基于Nrf2-ARE信号通路研究针刺对血管性认知功能障碍大鼠的神经保护作用机制（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 1 中医对血管性认知功能障碍的认识及治疗 |
| 1.1 血管性认知功能障碍病名归类 |
| 1.2 血管性认知功能障碍的病因病机 |
| 1.3 中医治疗 |
| 2 西医对血管性认知功能障碍的认识及治疗 |
| 2.1 VCI的危险因素 |
| 2.2 VCI的病理机制 |
| 2.3 西医治疗VCI |
| 实验部分 |
| 实验一 针刺对VCI大鼠行为学及海马形态学的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 各组大鼠Morris水迷宫行为学实验评分 |
| 4.2 大鼠海马组织形态学观察 |
| 实验二 针刺对VCI大鼠海马组织Nrf2-ARE信号通路相关因子的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 ELsia法检测大鼠MDA、GSH、SOD含量 |
| 4.2 Western blot检测大鼠海马CytC、cleaved Caspase-3、Bax、Bc1-2、Nrf2、HO-1与NQO1蛋白表达情况 |
| 4.3 RT-PCR法检测大鼠海马Nrf2mRNA、HO-1mRNA和NQO1mRNA的表达情况 |
| 讨论 |
| 1 针刺治疗血管性认知功能障碍的理论依据 |
| 2 探讨Nrf2-ARE信号通路在血管性认知功能障碍中的作用 |
| 3 针刺对血管性认知功能障碍大鼠行为学及形态学的影响 |
| 4 针刺对血管性认知功能障碍后氧化应激的影响 |
| 5 针刺对血管性认知功能障碍后细胞凋亡的影响 |
| 6. 针刺通过调控Nrf2-ARE信号通路保护VCI海马组织 |
| 结论 |
| 创新点与不足说明 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
| 个人简历 |
（8）“智三针”激活TFEB介导的自噬改善5×FAD小鼠认知功能障碍的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 阿尔茨海默病概述 |
| 1.1.1 阿尔茨海默病的流行病学特征 |
| 1.1.2 阿尔茨海默病的致病机制 |
| 1.2 自噬和转录因子EB |
| 1.2.1 自噬的概述和过程 |
| 1.2.2 TFEB的功能和核转运过程 |
| 1.2.3 ALP和TFEB在AD中的作用 |
| 1.3 “智三针”治疗阿尔茨海默病的理论基础和获效机理 |
| 1.3.1 “智三针”治疗阿尔茨海默病的中医经典理论 |
| 1.3.2 “智三针”治疗阿尔茨海默病的研究进展 |
| 1.3.3 针刺调节自噬治疗阿尔茨海默病相关机制研究 |
| 第二章 实验研究 |
| 2.1 实验一“智三针”促进APP/Aβ降解改善5×FAD小鼠认知功能障碍 |
| 2.1.1 实验材料与方法 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.1.3 实验结果 |
| 2.1.4 实验讨论 |
| 2.2 实验二“智三针”增强5×FAD小鼠自噬溶酶体通路 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.3 实验结果 |
| 2.2.4 实验讨论 |
| 2.3 实验三“智三针”通过激活TFEB调控溶酶体功能和自噬发生,促进APP-CTFs和Aβ的降解 |
| 2.3.1 实验材料与方法 |
| 2.3.2 实验结果 |
| 2.3.3 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况、参与课题与获奖情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（9）探讨运动针刺干预激活PI3K-AKT信号通路对VaD神经元保护及Caspase-3表达影响的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 动物实验研究 |
| 1 实验材料及方法 |
| 1.1 实验动物及喂养标准 |
| 1.2 实验仪器和试剂 |
| 1.3 VaD大鼠模型制备 |
| 1.4 动物分组 |
| 1.5 实验干预方法 |
| 1.6 Morris水迷宫行为学检测 |
| 1.7 实验标本取材及保存 |
| 1.8 检测方法及实验步骤 |
| 1.8.1 Western-Blot法检测PI3K、AKT表达的实验操作 |
| 1.8.2 ELISA定量法检测Caspase-3 表达的实验操作 |
| 1.9 统计学处理 |
| 2 研究结果分析 |
| 2.1 定位航行实验结果分析 |
| 2.2 空间探索实验结果分析 |
| 2.3 PI3K及 AKT在海马组织中蛋白表达结果 |
| 2.4 Caspase-3 蛋白表达结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 VaD动物模型的制备方法及行为学检测 |
| 3.2 血管性痴呆与海马区神经元凋亡的关系 |
| 3.3 血管性痴呆与PI3K-AKT通路的关系 |
| 4 小结 |
| 第二部分 临床实验研究 |
| 1 实验材料及方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 血管性痴呆诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 退出标准 |
| 1.6 治疗方法 |
| 1.7 观察指标 |
| 1.8 实验过程 |
| 1.9 ELISA 定量法检测 Caspase-3 表达的实验操作 |
| 1.10 统计学处理 |
| 2 研究结果分析 |
| 2.1 两组VaD患者基线资料比较 |
| 2.2 两组VaD患者治疗前后MMSE、ADL评分比较 |
| 2.3 两组VaD患者治疗前后HDS评分比较 |
| 2.4 两组VaD患者血清中Caspase-3 表达比较 |
| 2.5 两组VaD患者临床疗效比较 |
| 2.6 安全性指标及不良事件的比较 |
| 3 讨论 |
| 3.1 现代医学对血管性痴呆的相关认识 |
| 3.2 中医学对血管性痴呆的认识 |
| 3.3 讨论头针丛刺法治疗VaD选穴处方理论依据 |
| 3.4 运动针刺法治疗血管性痴呆的关系 |
| 3.5 西医基础抗痴呆药物的临床应用与分析 |
| 3.6 Caspase-3与VaD神经元凋亡的关系 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 缩略词表 |
| 综述 针灸治疗血管性痴呆研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（10）基于小胶质细胞极化、树突棘稳定探讨加减薯蓣丸改善APP/PS1小鼠学习记忆能力的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 理论探讨 |
| 1 中医对AD的认识 |
| 2 脾肾亏虚,痰瘀互结是AD的基本病机 |
| 3 从补肾健脾,化痰祛瘀论治AD |
| 4 加减薯蓣丸组方分析及现代药理学研究 |
| 实验一 观察加减薯蓣丸对APP/PS1 小鼠学习记忆能力及抑郁行为的影响 |
| 1 实验材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验二 观察加减薯蓣丸对APP/PS1 小鼠海马神经元病理变化及Aβ_(1-42)沉积的影响 |
| 1 实验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验三 观察加减薯蓣丸对APP/PS1 小鼠海马小胶质细胞表型转化的影响 |
| 1 实验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验四 观察加减薯蓣丸对APP/PS1小鼠海马Nlrp3/ASC/Caspase-1炎症小体激活的影响 |
| 1 实验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验五 观察加减薯蓣丸对APP/PS1 小鼠树突棘密度和突触蛋白的影响 |
| 1 实验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验六 观察加减薯蓣丸对APP/PS1 小鼠海马BDNF/Rac1/Cofilin通路的影响 |
| 1 实验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 一 结论 |
| 二 本研究的创新点 |
| 三 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一 综述 中医药治疗阿尔茨海默病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录二 博士期间发表的论文情况 |
| 致谢 |
四、健脑安对血管性痴呆大鼠海马区IL-1β和CRF蛋白异常表达的影响（论文参考文献）
- [1]血栓心脉宁“血脉双治”组方探讨及研究进展[J]. 王靖怡,李军,陈恒文,惠小珊,白京,王阶. 世界中西医结合杂志, 2021
- [2]朝医清心山药汤对血管性痴呆大鼠认知功能改善作用的实验研究[D]. 千雪梅. 延边大学, 2021
- [3]解毒益智方对阿尔茨海默病双转基因小鼠行为学及大脑皮层内β-淀粉样蛋白沉积及BACE1表达影响的研究[D]. 朱晓婷. 长春中医药大学, 2021(01)
- [4]基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽改善轻度认知功能障碍的作用机制研究[D]. 刘玥欣. 长春中医药大学, 2021(01)
- [5]戟天健脑方调节低糖低氧下大鼠海马神经细胞突触可塑性的机制研究[D]. 王添全. 北京中医药大学, 2021
- [6]补脾醒神益智法对脾虚认知功能障碍大鼠TREM2/NF-κb信号通路作用机制的研究[D]. 程越. 辽宁中医药大学, 2021
- [7]基于Nrf2-ARE信号通路研究针刺对血管性认知功能障碍大鼠的神经保护作用机制[D]. 刘慧慧. 黑龙江中医药大学, 2021(01)
- [8]“智三针”激活TFEB介导的自噬改善5×FAD小鼠认知功能障碍的研究[D]. 郑晓燕. 广州中医药大学, 2021
- [9]探讨运动针刺干预激活PI3K-AKT信号通路对VaD神经元保护及Caspase-3表达影响的研究[D]. 刘静. 广西中医药大学, 2021
- [10]基于小胶质细胞极化、树突棘稳定探讨加减薯蓣丸改善APP/PS1小鼠学习记忆能力的作用机制[D]. 王小燕. 湖北中医药大学, 2021(01)