本文主要研究内容
作者王奇奇（2019）在《洛克沙胂完全抗原的制备及其单克隆抗体的研制》一文中研究指出：洛克沙胂（Roxarsone,ROX）是有机砷制剂的一种,由于它具有抗球虫,促进生长等作用,被广泛应用于畜禽养殖中。但随着科学技术的发展,人们逐渐意识到了ROX带来的不良影响,欧盟、美国、中国都相继禁止ROX的使用或者规定了ROX的最低检测限,因此必须建立ROX的快速检测方法。目前检测ROX最常用的方法仍是仪器检测法,包括色谱法和质谱法等,但这些方法需要昂贵的仪器设备,且需专业人员进行操作;而免疫学快速检测方法具有快速,特异,且能大批量检测样品的特点,对ROX的现场快速筛查具有重要的意义。优质的抗体是建立免疫学快速检测方法的关键,目前针对ROX的免疫学快速检测方法主要是以多克隆抗体作为检测抗体,尚未有ROX单克隆抗体检测产品的相关报导。本研究旨在研制出高特异性、高灵敏度的抗体,为建立ROX免疫学快速检测方法打下基础。本研究以ROX的结构类似物3-氨基-4-羟基苯胂酸（HAPA）作为ROX的替代物,用碳二亚胺（EDC）将BSA与HAPA通过酰胺键相连,制备人工合成抗原HAPA-BSA;用戊二醛将OVA与HAPA的伯氨基相连,制备用于检验的包被抗原HAPA-OVA。用紫外扫描、SDS-PAGE鉴定合成的HAPA-BSA和HAPA-OVA,结果证明HAPA与BSA、OVA分别连接成功。用HAPA-BSA免疫3只小鼠,收集四次免疫后血清,测定效价为1:6.4×103,IC50值为63.533μg/mL。利用细胞融合技术制备杂交瘤细胞,有限稀释法对阳性细胞亚克隆,筛选出一株可以稳定分泌抗ROX抗体的杂交瘤细胞株,命名为3G12。收集3G12细胞株培养液,间接ELISA测定效价为1:5.12×102,IC50值为3.147μg/mL。随后以腹腔诱生腹水法大量制备单克隆抗体,收集腹水并用辛酸-硫酸铵法纯化,SDS-PAGE结果表明纯化后条带单一;间接ELISA测定纯化前后腹水效价,结果显示纯化前后腹水效价均可达到1:1.024×105,纯化后腹水的IC50值为1.433μg/mL。综上所述本研究成功研制得到了抗ROX的单克隆抗体,为建立ROX的免疫学快速检测方法奠定了基础。
Abstract
luo ke sha shen （Roxarsone,ROX）shi you ji shen zhi ji de yi chong ,you yu ta ju you kang qiu chong ,cu jin sheng chang deng zuo yong ,bei an fan ying yong yu chu qin yang shi zhong 。dan sui zhao ke xue ji shu de fa zhan ,ren men zhu jian yi shi dao le ROXdai lai de bu liang ying xiang ,ou meng 、mei guo 、zhong guo dou xiang ji jin zhi ROXde shi yong huo zhe gui ding le ROXde zui di jian ce xian ,yin ci bi xu jian li ROXde kuai su jian ce fang fa 。mu qian jian ce ROXzui chang yong de fang fa reng shi yi qi jian ce fa ,bao gua se pu fa he zhi pu fa deng ,dan zhe xie fang fa xu yao ang gui de yi qi she bei ,ju xu zhuan ye ren yuan jin hang cao zuo ;er mian yi xue kuai su jian ce fang fa ju you kuai su ,te yi ,ju neng da pi liang jian ce yang pin de te dian ,dui ROXde xian chang kuai su shai cha ju you chong yao de yi yi 。you zhi de kang ti shi jian li mian yi xue kuai su jian ce fang fa de guan jian ,mu qian zhen dui ROXde mian yi xue kuai su jian ce fang fa zhu yao shi yi duo ke long kang ti zuo wei jian ce kang ti ,shang wei you ROXchan ke long kang ti jian ce chan pin de xiang guan bao dao 。ben yan jiu zhi zai yan zhi chu gao te yi xing 、gao ling min du de kang ti ,wei jian li ROXmian yi xue kuai su jian ce fang fa da xia ji chu 。ben yan jiu yi ROXde jie gou lei shi wu 3-an ji -4-qiang ji ben shen suan （HAPA）zuo wei ROXde ti dai wu ,yong tan er ya an （EDC）jiang BSAyu HAPAtong guo xian an jian xiang lian ,zhi bei ren gong ge cheng kang yuan HAPA-BSA;yong wu er quan jiang OVAyu HAPAde bai an ji xiang lian ,zhi bei yong yu jian yan de bao bei kang yuan HAPA-OVA。yong zi wai sao miao 、SDS-PAGEjian ding ge cheng de HAPA-BSAhe HAPA-OVA,jie guo zheng ming HAPAyu BSA、OVAfen bie lian jie cheng gong 。yong HAPA-BSAmian yi 3zhi xiao shu ,shou ji si ci mian yi hou xie qing ,ce ding xiao jia wei 1:6.4×103,IC50zhi wei 63.533μg/mL。li yong xi bao rong ge ji shu zhi bei za jiao liu xi bao ,you xian xi shi fa dui yang xing xi bao ya ke long ,shai shua chu yi zhu ke yi wen ding fen bi kang ROXkang ti de za jiao liu xi bao zhu ,ming ming wei 3G12。shou ji 3G12xi bao zhu pei yang ye ,jian jie ELISAce ding xiao jia wei 1:5.12×102,IC50zhi wei 3.147μg/mL。sui hou yi fu qiang you sheng fu shui fa da liang zhi bei chan ke long kang ti ,shou ji fu shui bing yong xin suan -liu suan an fa chun hua ,SDS-PAGEjie guo biao ming chun hua hou tiao dai chan yi ;jian jie ELISAce ding chun hua qian hou fu shui xiao jia ,jie guo xian shi chun hua qian hou fu shui xiao jia jun ke da dao 1:1.024×105,chun hua hou fu shui de IC50zhi wei 1.433μg/mL。zeng shang suo shu ben yan jiu cheng gong yan zhi de dao le kang ROXde chan ke long kang ti ,wei jian li ROXde mian yi xue kuai su jian ce fang fa dian ding le ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自郑州大学的王奇奇，发表于刊物郑州大学2019-07-03论文，是一篇关于洛克沙胂论文,氨基羟基苯胂酸论文,人工完全抗原论文,单克隆抗体论文,郑州大学2019-07-03论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自郑州大学2019-07-03论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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