导读:本文包含了稳定转染细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:长链非编码RNA,MIR31HG,PC9细胞,细胞增殖
稳定转染细胞论文文献综述
代娟娟,杨丽娟,杜静,苗双,席思川[1]（2019）在《人LncRNA MIR31HG基因稳定转染PC9细胞系的构建及其对细胞增殖和迁移的影响》一文中研究指出目的:检测过表达人MIR31HG基因对PC9细胞增殖和迁移的影响,阐明促癌基因MIR31HG的作用机制。方法:通过RT-PCR法扩增长链非编码RNA (LncRNA) MIR31HG全长序列,分子克隆至pcDNA3.1(―)真核表达载体,将pcDNA3.1-MIR31HG过表达质粒和对照质粒pcDNA3.1分别转染人肺癌PC9细胞。采用酶切鉴定法检测MIR31HG过表达载体的构建情况。通过G418药物筛选建立稳定过表达MIR31HG的PC9细胞系(PC9-pcDNA3.1-MIR31HG,稳定转染组)和对照细胞系(PC9-pcDNA3.1,空载体组)。采用RT-PCR法检测稳定转染细胞系中MIR31HG基因表达水平,采用CCK-8法和划痕愈合实验检测PC9细胞增殖活性和迁移能力。结果:琼脂糖凝胶电泳,成功扩增得到了MIR31HG的特异基因片段;MIR31HG真核表达载体经双酶切后分别产生目的基因和载体2个片段。RT-PCR法检测,稳定转染组细胞中MIR31HG mRNA表达水平明显高于空载体组(P<0.05)。CCK-8检测,在培养24、36和48h时,稳定转染组细胞增殖活性明显高于空载体组(P<0.01)。划痕愈合实验,在培养48h时,稳定转染组细胞划痕愈合率明显高于空载体组(P<0.05)。结论:成功构建了人LncRNA MIR31HG基因的真核过表达载体和过表达MIR31HG的稳定转染PC9细胞系,且MIR31HG过表达能够促进肺癌PC9细胞增殖和迁移。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2019年04期）
穆继宏,张浩,杨玲,余雷,吴宣树[2]（2019）在《GDF5基因真核表达载体的构建及稳定转染HEK293细胞系的建立》一文中研究指出目的构建pEGFP-N1-GDF5真核表达载体,建立稳定转染的HEK293细胞系并检测其表达情况。方法以Genbank中人GDF5序列为模板,通过PCR扩增GDF5序列,插入pEGFP-N1空载体,构建pEGFP-N1-GDF5真核表达载体,进行双酶切图谱分析和DNA测序鉴定。将pEGFP-N1-GDF5真核表达载体转染HEK293细胞,然后通过荧光显微镜、Real-time PCR和Western blot技术检测GDF5的表达情况。结果双酶切鉴定结果显示,重组质粒pEGFP-N1-GDF5经NHEL和HindⅢ双酶切后得到同样的2个条带,目的条带的长度与GDF5cDNA长度相符。重组质粒pEGFPN1-GDF5插入片段的DNA序列与GDF5基因序列一致。pEGFP-N1-GDF5真核表达载体转染HEK293细胞后48 h荧光显微镜下可见多数细胞发出绿色荧光。Real-time PCR检测与Western blot检测GDF5基因在HEK293细胞中的mRNA与蛋白水平存在较高表达。结论 pEGFP-N1-GDF5真核表达载体构建成功,为进一步研究GDF5基因功能奠定了基础。(本文来源于《中国骨与关节损伤杂志》期刊2019年07期）
韩辉,代兴亮,程宏伟,兰青[3]（2019）在《稳定转染红色荧光蛋白基因的人脑胶质瘤起始细胞可自发融合宿主骨髓间充质干细胞并诱导恶性转化》一文中研究指出背景:异种移植瘤中宿主来源间质细胞恶性转化已有报道,但是对恶变的机制知之甚少。目的:旨在使用双色荧光示踪的体内模型研究宿主来源肿瘤间质细胞的恶性转化,并探讨可能的机制。方法:将稳定转染红色荧光蛋白基因的人脑胶质瘤起始细胞(glioma-initiatingcellstransfectedwithred fluorescent protein gene,GICs-RFP)接种到表达绿光荧光蛋白的裸鼠体内,建立具有2种荧光的动物模型;通过激光共聚焦观察移植瘤的荧光表达;流式细胞仪检测和分选各种荧光细胞,包括绿色荧光蛋白细胞、红色荧光蛋白细胞和表达这2种荧光的融合细胞;体外亚克隆得到具有恶性肿瘤细胞特征的同时表达绿色荧光蛋白/红色荧光蛋白两种荧光的融合细胞;体外鉴定细胞来源、表面标记物和恶性特征,裸鼠皮下移植验证融合细胞致瘤特性。实验经苏州大学动物实验伦理委员会批准,批准号为ECSU-201800090。结果与结论:GICs-RFP在绿色荧光蛋白裸小鼠的体内致瘤率均为100%(14/14);动物移植瘤模型中均可观察到融合细胞,分选、克隆到的融合细胞不仅共表达绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白,而且共表达GICs-RFP标记物Nestin和骨髓间充质干细胞标记物CD44、CD105和CD29;融合细胞在体外表现出高度增殖活性,较GICs-RFP更具侵袭和迁移特征;融合细胞(1×105个/只)在无胸腺裸小鼠的致瘤率为100%(4/4)。提示GICs-RFP自发融合宿主骨髓间充质干细胞并诱导恶性转化,为肿瘤异质性的细胞来源提供了新的双色荧光示踪的证据。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年25期）
李慧[4]（2019）在《hIFN-λ基因稳定转染细胞系的建立及其体外抗HBV机制研究》一文中研究指出目的克隆hIFN-λ基因,建立IFN-λ基因稳定表达细胞系,并对其生物学活性进行检测,探讨hIFN-λ体外抗HBV机制。方法构建双顺反子表达载体pIRSE2-EGFP-hIFN-λ;将表达载体pIRSE2-EGFP-hIFN-λ转染BHK细胞,建立hIFN-λ稳定真核表达细胞系;收集稳转细胞系上清进行生物学活性检测。流式细胞术检测hIFN-λ干预HepG2215细胞1h、4h、12h、24h、48h、72h后对细胞内STAT1/STAT2磷酸化水平的影响。ELISA检测hIFN-λ干预HepG2215细胞1h、4h、12h、24h、48h、72h后其HBVDNA、HBsAg、HBeAg分泌水平的差异。RT-PCR检测hIFN-λ干预HepG2215细胞1h、4h、12h、24h、48h、72h后其PD-L1、IRF3、IRF7、IRF9、ISG15、APOBEC3G、USP18、MXA基因表达情况差异。结果成功建立具有生物学活性的hIFN-λ稳定表达细胞系;hIFN-λ干预可以有效抑制HBVDNA、HBsAg、HBeAg的表达,且其STAT1/STAT2磷酸化时间较IFN-α延长,而各效应分子的基因表达较IFN-α也存在延后。结论IFN-λ能有效抑制HBV-DNA复制和HBsAg、HBeAg分泌。IFN-λ抗HBV作用时间较IFN-α长,而PD-L1基因表达未见明显上调同时ISG15基因表达上调更为明显,这可能是hIFN-λ与IFN-α抗HBV的优势所在。(本文来源于《第十届全国疑难及重症肝病大会论文汇编》期刊2019-05-16）
李琦,邹志余,杨瑞泽,邓洪利,张蕊[5]（2019）在《慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白筛选稳定转染的兔骨髓间充质干细胞》一文中研究指出目的分离、培养并鉴定兔骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs),探讨慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, eGFP)感染兔BMSCs的最佳条件,筛选稳定转染的兔BMSCs。方法通过全骨髓贴壁法获得兔BMSCs;茜素红、甲苯胺蓝及油红O染色对BMSCs成骨、成软骨及成脂分化进行鉴定;免疫荧光组化染色检测CD44及CD90的表达;不同浓度嘌呤霉素筛选BMSCs的最小致死浓度;以感染复数(multiplicity of infection, MOI)为50、100、150、200的慢病毒载体介导eGFP转染BMSCs,倒置显微镜下观察荧光表达,并用嘌呤霉素筛出稳定转染系。结果当MOI为150,慢病毒载体介导eGFP感染兔BMSCs效率最高;嘌呤霉素筛选稳定转染兔BMSCs的最适质量浓度是1.0μg/mL。结论成功培养了兔BMSCs,用慢病毒介导的GFP标记了兔BMSCs并筛选出了稳定转染的兔BMSCs,建立了一个简便有效的干细胞标记方法,为BMSCs在动物体内实验标记示踪奠定了基础。(本文来源于《西安交通大学学报(医学版)》期刊2019年04期）
于文慧,展西振,丰艳妮,曹荣峰,姜忠玲[6]（2018）在《稳定转染HSP72奶牛乳腺上皮细胞系建立与表达鉴定》一文中研究指出为了构建HSP72慢病毒表达载体,建立稳定表达HSP72的牛乳腺上皮细胞系。以牛HSP72基因序列为模板,设计并合成引物,PCR扩增目的基因,连接到慢病毒表达质粒中,用包装获得的慢病毒感染牛乳腺上皮细胞,经一定浓度的嘌呤霉素筛选,Hochest33342法对细胞核定位,倒置荧光显微镜下观察转染效率,用免疫组化和Western Blot方法验证感染细胞是否稳定表达HSP72。结果显示,携带HSP72基因的慢病毒滴度约为1. 0×109TU/m L;确定嘌呤霉素的最佳筛选浓度为2μg/m L;牛HSP72慢病毒感染细胞表达HSP72,感染的奶牛乳腺上皮细胞在倒置荧光显微镜下可看到绿色荧光,转染效率可达90%以上;免疫组化结果表明,正常细胞和空载体感染细胞,HSP72呈现低表达,转染携带HSP72目的基因载体细胞,HSP72高表达,呈现颜色较深的棕色; Western Blot方法检测证实与正常转染细胞相比,慢病毒空载体转染的奶牛乳腺上皮细胞HSP72表达稍有降低,但无统计学差异,而携带HSP72基因的慢病毒载体转染的细胞HSP72呈现高表达,且差异极显着(P <0. 01),与慢病毒空载体转染的奶牛乳腺上皮细胞相比,携带HSP72基因的慢病毒载体转染的细胞HSP72呈现高表达,且差异极显着(P <0. 01)。成功建立稳定表达HSP72的牛乳腺上皮细胞系,可为研究奶牛乳腺炎分子调控机制以及抗性分子药物筛选提供新的理论依据和工作基础。(本文来源于《华北农学报》期刊2018年06期）
李里,宫亮,吴玉斌[7]（2018）在《沉默WNT4基因对稳定转染PAX2基因大鼠肾小管上皮细胞迁移和侵袭能力的影响》一文中研究指出目的:探讨沉默WNT4基因对稳定转染配对盒基因2 (PAX2)大鼠肾小管上皮细胞迁移和侵袭能力的影响,阐明PAX2基因是否通过WNT4基因调控细胞生物学活性。方法:选取对数生长期的PAX2基因稳转细胞系,分为稳转组和对照组。稳转组细胞分为稳转对照组(不应用WNT siRNA沉默)和沉默72h组(应用WNT siRNA沉默72h)。Western blotting法检测稳转组和对照组大鼠肾小管上皮细胞中PAX2和WNT4蛋白的相对表达量,Real time PCR法检测稳转对照组和沉默72h组大鼠肾小管上皮细胞中WNT4mRNA相对表达量,细胞划痕实验检测稳转对照组和沉默72h组大鼠肾小管上皮细胞的细胞迁移率,Transwell实验检测稳转对照组和沉默72h组大鼠肾小管上皮细胞的穿膜细胞数。结果:Western blotting法检测,稳转组大鼠肾小管上皮细胞中PAX2和WNT4蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05)。Real-time PCR法检测,沉默72h组大鼠肾小管上皮细胞中WNT4mRNA相对表达量低于稳转对照组(P<0.05)。细胞划痕实验10h后,沉默72h组大鼠肾小管上皮细胞的细胞迁移率低于稳转对照组,但组间比较差异无统计学意义(P>0.05);细胞划痕实验18h后,沉默72h组大鼠肾小管上皮细胞的细胞迁移率低于稳转对照组(P>0.05)。Transwwell实验,沉默72h组大鼠肾小管上皮细胞的穿膜细胞数低于稳转对照组(P<0.05)。结论:PAX2基因可能通过WNT4基因调控细胞的生物学活性。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2018年06期）
王燕,王宇暄,刘亚敏,张桂强,苏文洲[8]（2018）在《利用Tet-on诱导基因表达系统构建EID3基因真核表达载体及稳定转染细胞株的建立》一文中研究指出目的构建类E1A细胞分化抑制因子3(EID3)真核表达载体,并转染人乳腺癌细胞(MCF-7),建立Tet-on诱导表达的目的基因EID3的稳定转染细胞系。方法应用PCR技术,得到目的基因EID3的c DNA,通过双酶切、胶回收方法纯化目的片段EID3。DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体p LVuTight-Puro,经菌落酶切、电泳以及测序鉴定。将真核表达质粒p LVu-Tight-Puro-EID3和p LVX-Tet-On Advanced Vector转染MCF-7细胞,分别通过G418和嘌呤霉素选择培养,建立由四环素(doxycycline,DOX)诱导表达的稳定转染细胞系,RT-PCR、Western Blot分别检测目的基因EID3在DOX诱导下mRNA以及蛋白的表达。结果成功构建了p LVu-Tight-Puro-EID3表达质粒,并建立了由DOX诱导表达的稳定转染细胞系,可在DOX诱导下稳定表达EID3基因的mRNA及蛋白。结论人EID3稳定表达细胞系为研究EID3基因在肿瘤辐射敏感性及药物敏感性的作用提供实验基础。(本文来源于《广东医学》期刊2018年18期）
金子奇,雷蕾,林丹丹,胡博,刘海燕[9]（2018）在《IL-33亚型肝癌稳定转染细胞系的构建及体外生物学功能检测》一文中研究指出目的构建小鼠全长IL-33、分泌型IL-33、入核型IL-33肝癌细胞的稳转细胞系并检测其对肝癌细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响。方法通过PCR的方法克隆小鼠全长IL-33、分泌型IL-33、入核型IL-33基因并将其连接到慢病毒载体pRRL-Venus中。利用293T细胞包装慢病毒并分别感染小鼠肝癌细胞系hepa1-6,经流式分选单个YFP阳性细胞,培养得到稳定表达全长、分泌型、入核型IL-33的hepa1-6稳转细胞系。通过一系列体外实验研究小鼠全长,分泌型,入核型IL-33对hepa1-6细胞生物学功能的作用。包括CCK8检测细胞增殖,Annexin V和7AAD的流式染色检测细胞凋亡,PI流式染色检测细胞周期。结果成功克隆了小鼠全长IL-33、分泌型IL-33、入核型IL-33基因并成功构建了hepa1-6稳转细胞系;全长IL-33促进肝癌细胞增殖,分泌型和入核型IL-33抑制肝癌细胞增殖;全长IL-33能够抑制早期和晚期细胞凋亡,分泌型IL-33对细胞凋亡无明显影响,入核型IL-33对早期的细胞凋亡没有作用,但是能够抑制晚期的细胞凋亡。分泌型IL-33稳转hepa1-6细胞的细胞周期G1期比例增加,而小鼠全长IL-33和入核型IL-33对hepa1-6稳转细胞的细胞周期均无明显作用。结论成功构建了小鼠全长IL-33、分泌型IL-33、入核型IL-33 hepa1-6稳转细胞系;小鼠全长IL-33促进肝癌细胞生长,抑制肝癌细胞的凋亡;分泌型和入核型IL-33均能抑制肝癌细胞的增殖;分泌型IL-33稳转细胞增加G1期细胞比例,入核型IL-33抑制晚期细胞凋亡。这些结果为进一步研究全长IL-33、分泌型IL-33、入核型IL-33在肝细胞肝癌发展中的作用及其机制奠定了基础。(本文来源于《免疫学杂志》期刊2018年09期）
邬成业,轩伟霞,杨会珍,张群成,李玉光[10]（2018）在《人TCF21基因真核表达载体的构建及稳定转染肺腺癌顺铂耐药细胞系A549/DDP的建立》一文中研究指出目的建立稳定高表达人转录因子21(TCF21)基因的肺腺癌顺铂耐药细胞系(A549/DDP)。方法从人肝癌细胞Hep G2中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得人TCF21基因的c DNA,并构建p EGFP-N1-TCF21真核表达载体;用脂质体转染A549/DDP细胞,经G418筛选获得稳定表达人TCF21基因的细胞系;运用RT-PCR、Western-Blot技术对细胞系进行鉴定。结果成功构建了人TCF21基因真核表达载体,建立了能够稳定高效表达人TCF21基因的A549/DDP细胞系。结论 TCF21基因真核表达载体的构建及稳定转染A549/DDP细胞系的建立为探究其逆转人肺腺癌细胞耐药的作用及其分子机制奠定了坚实的实验基础。(本文来源于《现代预防医学》期刊2018年14期）
稳定转染细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建pEGFP-N1-GDF5真核表达载体,建立稳定转染的HEK293细胞系并检测其表达情况。方法以Genbank中人GDF5序列为模板,通过PCR扩增GDF5序列,插入pEGFP-N1空载体,构建pEGFP-N1-GDF5真核表达载体,进行双酶切图谱分析和DNA测序鉴定。将pEGFP-N1-GDF5真核表达载体转染HEK293细胞,然后通过荧光显微镜、Real-time PCR和Western blot技术检测GDF5的表达情况。结果双酶切鉴定结果显示,重组质粒pEGFP-N1-GDF5经NHEL和HindⅢ双酶切后得到同样的2个条带,目的条带的长度与GDF5cDNA长度相符。重组质粒pEGFPN1-GDF5插入片段的DNA序列与GDF5基因序列一致。pEGFP-N1-GDF5真核表达载体转染HEK293细胞后48 h荧光显微镜下可见多数细胞发出绿色荧光。Real-time PCR检测与Western blot检测GDF5基因在HEK293细胞中的mRNA与蛋白水平存在较高表达。结论 pEGFP-N1-GDF5真核表达载体构建成功,为进一步研究GDF5基因功能奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
稳定转染细胞论文参考文献
[1].代娟娟,杨丽娟,杜静,苗双,席思川.人LncRNAMIR31HG基因稳定转染PC9细胞系的构建及其对细胞增殖和迁移的影响[J].吉林大学学报(医学版).2019
[2].穆继宏,张浩,杨玲,余雷,吴宣树.GDF5基因真核表达载体的构建及稳定转染HEK293细胞系的建立[J].中国骨与关节损伤杂志.2019
[3].韩辉,代兴亮,程宏伟,兰青.稳定转染红色荧光蛋白基因的人脑胶质瘤起始细胞可自发融合宿主骨髓间充质干细胞并诱导恶性转化[J].中国组织工程研究.2019
[4].李慧.hIFN-λ基因稳定转染细胞系的建立及其体外抗HBV机制研究[C].第十届全国疑难及重症肝病大会论文汇编.2019
[5].李琦,邹志余,杨瑞泽,邓洪利,张蕊.慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白筛选稳定转染的兔骨髓间充质干细胞[J].西安交通大学学报(医学版).2019
[6].于文慧,展西振,丰艳妮,曹荣峰,姜忠玲.稳定转染HSP72奶牛乳腺上皮细胞系建立与表达鉴定[J].华北农学报.2018
[7].李里,宫亮,吴玉斌.沉默WNT4基因对稳定转染PAX2基因大鼠肾小管上皮细胞迁移和侵袭能力的影响[J].吉林大学学报(医学版).2018
[8].王燕,王宇暄,刘亚敏,张桂强,苏文洲.利用Tet-on诱导基因表达系统构建EID3基因真核表达载体及稳定转染细胞株的建立[J].广东医学.2018
[9].金子奇,雷蕾,林丹丹,胡博,刘海燕.IL-33亚型肝癌稳定转染细胞系的构建及体外生物学功能检测[J].免疫学杂志.2018
[10].邬成业,轩伟霞,杨会珍,张群成,李玉光.人TCF21基因真核表达载体的构建及稳定转染肺腺癌顺铂耐药细胞系A549/DDP的建立[J].现代预防医学.2018