导读:本文包含了抗体的制备与鉴定论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:密码子优化,VEGF单克隆抗体,纯化,生物活性
抗体的制备与鉴定论文文献综述
董雪,徐雨昕,郭晶,龚忠阔,夏霖亚[1]（2019）在《重组人源抗血管内皮生长因子单克隆抗体的制备及鉴定》一文中研究指出通过优化密码子获得带有信号肽的人源抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体的重链和轻链DNA序列,分别构建表达载体pcDNA-VEGFH和pcDNA-VEGFV,将表达载体共转染HEK-293细胞后,与C6胶质瘤细胞共培养,并将所得蛋白进行分离纯化.实验结果表明:pcDNA-VEGFH和pcDNA-VEGFV共转染HEK-293F细胞,可显着抑制C6细胞增殖(P<0.01);转染24～144h后的细胞培养上清液中均有蛋白表达;所得纯化蛋白和标准品一致;纯化所得抗体蛋白能明显抑制C6细胞增殖(P<0.05～0.01),与标准品抑制效果相似.(本文来源于《吉林大学学报(理学版)》期刊2019年06期）
李言言,刘阿华,王毅,宁梦夏,马文涛[2]（2019）在《山羊乳酪蛋白单克隆抗体的制备与鉴定》一文中研究指出制备山羊乳酪蛋白单克隆抗体可以为检测乳品中山羊乳成分提供免疫学检测手段。以山羊酪蛋白免疫Balb/c小鼠,应用细胞融合技术,制备特异性识别山羊乳酪蛋白的单克隆抗体,对获得的阳性杂交瘤细胞进行连续传代和反复冻存以测定其稳定性,并对其分泌的单克隆抗体应用ELISA进行抗体特异性分析,对特异性识别山羊乳酪蛋白的单克隆抗体进行抗体亚型鉴定和染色体组型分析。最终,成功的筛选出可以分泌特异性识别山羊乳酪蛋白的单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,被命名为7H。经染色体组型分析,染色体数目为102条;单克隆抗体7H类别为IGg1,轻链为κ;经连续传代和反复冻存,ELISA检测细胞上清抗体发现其OD450nm值无显着性差异。(本文来源于《动物医学进展》期刊2019年11期）
李旭,魏德强[3]（2019）在《以烟草花叶病毒为载体的μE_3单克隆抗体的制备及鉴定》一文中研究指出目的:获得半抗原雌叁醇(μE_3)高特异性和高亲和力的单克隆抗体。方法:本研究利用烟草花叶病毒(TMV)作为抗原的载体,通过化学方法与半抗原雌叁醇(μE_3)连接形成TMV-EPMK-μE_3复合体,利用该复合体免疫小鼠,再通过杂交瘤筛选技术来获得具有高亲和力的μE_3单克隆抗体。结果:TMV-EPMK-μE_3免疫的小鼠血清效价达到1∶100 000,通过细胞融合及筛选获得4株分泌抗体效价较高的杂交瘤细胞,然后进行了亚克隆,分别命名为TE1-1、TE2-1、TE3-1和TE 4-1。抗体的效价均在10~(-8)左右,最低检测限约为1 ng。SDS-PAGE电泳结果显示4株抗体分别在25 kD和50 kD处各有一条清晰的条带,纯度都在95%以上。获得的4株抗体通过罗氏亚型鉴定试剂盒测定轻链类型均为κ;TE2-1和TE4-1单抗重链为IgG2a、 TE1-1和TE3-1单抗重链为IgG2b。TE1-1和TE3-1为TMV-EPMK-μE_3的特异性抗体。结论:利用烟草花叶病毒(TMV)作为抗原载体,提高了半抗原μE_3免疫原性,进而使μE_3能够刺激机体产生有效免疫应答。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2019年20期）
吴忠香,张雪梅,徐婧雯,宋杰,李慧[4]（2019）在《抗树鼩CD4单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定》一文中研究指出目的制备鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法将重组质粒p GEX-5X-1-CD4和pET30a(+)-CD4分别转化感受态E. coli BL21和BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并通过Glutathione Sepharose 4 Fast Flow亲和层析柱纯化重组蛋白GST-CD4和His-CD4。以His-CD4蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术筛选出能分泌抗树鼩CD4的杂交瘤细胞株,制备小鼠腹水单克隆抗体,间接ELISA法检测效价,并通过Protein A亲和层析柱纯化获得鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,Western blot及FACS法分析其生物学特性。结果筛选出3株能稳定分泌抗树鼩CD4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为37D2、38E1、39F2,腹水单克隆抗体效价分别为1∶204 800、1∶204 800、1∶3 200。经HRP标记的38E1单克隆抗体可与树鼩PBMC总蛋白发生特异性结合,经PECy5. 5标记的38E1单克隆抗体能特异性识别树鼩PBMC。结论成功制备了鼠抗树鼩CD4的单克隆抗体,为进一步对树鼩作为动物模型的研究及应用奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年10期）
王婷婷,索倩,孙晓燕,马跃敏,刘凯于[5]（2019）在《棉铃虫激活增强子结合蛋白AP-4基因的原核表达、多克隆抗体制备、表达谱分析及功能鉴定》一文中研究指出【目的】激活增强子结合蛋白4(activating enhancer binding protein 4, AP-4)是近年来备受关注的一类功能广泛的转录因子,参与Wnt/β-catenin信号通路的调控。本研究旨在研究棉铃虫Helicoverpa armigera HaAP-4基因的原核表达并制备多克隆抗体,明确HaAP-4基因的时空表达谱,初步探究HaAP-4对棉铃虫胆固醇载体蛋白2(sterol carrier protein-2, SCP-2)基因(HaSCP-2)表达的调控作用。【方法】通过PCR扩增棉铃虫HaAP-4基因片段,将其克隆至pET-28a原核表达载体,转化至大肠杆菌Escherichia coli BL21,经IPTG诱导表达,采用镍柱纯化重组蛋白,免疫新西兰兔制备多克隆抗体。运用RT-qPCR检测HaAP-4基因在棉铃虫不同发育阶段(卵、幼虫、预蛹、蛹和成虫)以及5龄幼虫和预蛹不同组织(中肠、脂肪体、头和表皮)中的表达水平。设计并合成HaAP-4 siRNA,转染棉铃虫Ha细胞,通过RT-qPCR检测和分析使用HaAP-4 siRNA进行RNA干扰后Ha细胞中HaAP-4和HaSCP-2基因mRNA的表达情况。【结果】成功构建pET-28a-HaAP-4重组表达质粒,在大肠杆菌细胞中获得高效表达的可溶性蛋白,目的蛋白大小约为55 kD,经纯化获得了纯度较高的重组蛋白,免疫新西兰兔成功制备了多克隆抗体,通过Western blotting检测显示抗体具有较好的特异性,ELISA分析表明抗体效价较高。发育阶段特异性表达结果显示,HaAP-4基因在棉铃虫不同发育阶段均有表达,其中在卵期、5龄幼虫期和预蛹期的表达量较高。组织表达结果表明,HaAP-4基因在5龄幼虫和预蛹不同组织中均有表达,且在中肠和头部具有高表达,而在表皮和脂肪体中表达量较低。RNA干扰实验发现,HaAP-4基因的敲降对HaSCP-2基因转录有显着影响,HaSCP-2基因mRNA表达水平下降了约55%。【结论】利用pET-28a原核表达系统能有效地在体外表达可溶性的HaAP-4,并制备了较好的多克隆抗体。RNAi实验结果提示,在中肠内高表达的HaAP-4基因能促进HaSCP-2基因的转录表达,在棉铃虫脂质生理代谢过程中发挥作用。本研究为进一步深入阐明棉铃虫HaAP-4的潜在功能打下了基础。(本文来源于《昆虫学报》期刊2019年09期）
刘爽,张泽林,李丽婷,胡永超,许永斌[6]（2019）在《基于AhsA蛋白的嗜水气单胞菌特异性抗体的制备与鉴定》一文中研究指出选取嗜水气单胞菌表面特异性抗原蛋白AhsA,构建了pET-28a(+)-AhsA表达载体,并在大肠杆菌BL21中进行表达,利用Ni-NTA亲和层析、凝胶过滤层析等蛋白纯化方法进行纯化。重组蛋白表达效果较好,浓度可达10 mg·mL~(-1),纯度可达90%以上,符合制备多克隆抗体的免疫原标准。利用Western Blot技术将AhsA抗体特定识别免疫原蛋白,结果表明该抗体能够特异性识别免疫原蛋白AhsA,而对于牛血清蛋白却不能发生免疫应答,表明该抗体具有一定的特异性且AhsA蛋白具有很好的免疫原性。同时通过检测验证了AhsA蛋白抗体能够特异性检测嗜水气单胞菌,将为水产品质量控制及临床检测嗜水气单胞菌可提供新的技术。(本文来源于《大连民族大学学报》期刊2019年05期）
范素菊,李嘉,李森,杨兴东[7]（2019）在《金刚烷胺单克隆抗体的制备和鉴定》一文中研究指出为制备金刚烷胺(AMD)的单克隆抗体(mAb),改造AMD的半抗原,采用EDC/NHS法合成人工免疫原AMD-BSA和检测抗原AMD-OVA,经紫外扫描和凝胶电泳进行鉴定,AMD与载体蛋白[牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵白蛋白(OVA)]成功偶联;用被免疫原(AMD-BSA)免疫BALBC/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,获得AMD杂交瘤细胞株,腹腔注射小鼠后,得到抗AMD的mAb。小鼠免疫后的多抗血清的效价均在6.4×10~3以上,所制得的杂交瘤细胞上清液的效价为3.6×10~2～1.0×10~3,2D5细胞株的腹水效价为5.12×10~5,对AMD的IC_(50)值为1.02μg/L,除与金刚乙胺的交叉反应率为9.82%,与其他结构类似物无交叉反应性。表明获得了高价、敏感和特异的抗AMD的单克隆抗体,为进一步的免疫学快速检测提供了技术支持。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年15期）
牛夏忆,李淼,张倩,陈云雨,刘晓平[8]（2019）在《大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定》一文中研究指出目的:原核表达和分离纯化人β-catenin(138-781 aa)蛋白并制备特异性大鼠抗人β-catenin多克隆抗体。方法:利用PCR扩增β-catenin基因片段并克隆至pET-30a(+)表达载体构建重组质粒。将重组质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中,经原核表达优化后,诱导β-catenin蛋白表达,以SDS-PAGE和Western blot实验进行鉴定。采用亲和层析方法分离纯化β-catenin蛋白,以荧光偏振实验进行生物学活性鉴定。用β-catenin蛋白为抗原免疫大鼠制备多克隆抗体,随后采用ELISA和Western blot实验检测多克隆抗体的效价和抗原特异性。结果:成功进行了β-catenin蛋白的原核表达与分离纯化。荧光偏振实验表明纯化的β-catenin蛋白具有良好的生物学活性。ELISA实验表明抗人β-catenin多克隆抗体效价可达1∶128 000。Western blot实验证实抗人β-catenin多克隆抗体具有良好的抗原特异性。结论:成功进行了大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定,为深入研究β-catenin的生物学功能奠定了实验基础。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2019年16期）
黄新喜,吕葆真,李丹,赵锋,欧阳森[9]（2019）在《生长抑素抗独特型卵黄抗体的制备与鉴定》一文中研究指出目的在成功制备中和性生长抑素(SS)单克隆抗体的基础上,制备了SS抗独特型卵黄抗体Ab2,鉴定其生物学特性,探讨其在促进动物生长方面的应用。方法用对SS具有免疫中和性的单克隆抗体2E7免疫产蛋鸡,筛选并收集有高效价抗独特型卵黄抗体的鸡蛋,分离蛋黄,破碎蛋黄组织,用稀释和酸化沉淀法除脂蛋白,用冷酒精沉淀法纯化抗独特型卵黄抗体Ab2。用间接ELISA检测卵黄Ab2的特异性、效价和浓度,用竞争抑制和动物免疫检测卵黄Ab2β,用动物实验检测卵黄Ab2β促进鸡生长的效力。结果该SS抗独特型卵黄抗体Ab2效价为10~(-5),含量为8 mg/mL。且与兔抗SS抗体发生免疫反应,不与兔抗生长激素抗体、兔抗胰岛素抗体、兔抗胃泌素抗体发生免疫反应。该SS卵黄Ab2能和异种动物兔产生的SS抗体发生免疫反应,该免疫反应能被SS竞争抑制,该SS卵黄Ab2能诱导小鼠产生SS Ab3,该SS Ab3能和SS发生免疫反应,说明它是SS卵黄Ab2β。用其作疫苗,以0.8μg/只和3.2μg/只分别皮下注射免疫小鼠,以0.8μg/羽和3.2μg/羽分别肌肉注射免疫鸡,以3.2μg/尾浸泡免疫多宝鱼。一个月后,实验小鼠平均体质量比对照组分别增加33.5%和37.9%,实验鸡平均体质量比对照组分别增加25.6%和34.1%,实验鱼平均体质量比对照组增加24.8%。结论成功制备了特异性强、效价高的SS卵黄抗体Ab2β,以其作疫苗免疫动物,以较小剂量一次性免疫即可产生显着的促鸡和多宝鱼生长效果。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2019年08期）
孙伟伟,钱晶,王晶宇,欧阳伟,夏兴霞[10]（2019）在《犬瘟热病毒H蛋白单克隆抗体的制备与鉴定》一文中研究指出为制备犬瘟热病毒(CDV)H蛋白单克隆抗体,采用蔗糖密度梯度离心法提纯CDV-Ondetstepoort株,利用RT-PCR方法扩增其H基因截短片段(H1、H2、H3),克隆至pET-28a (+)载体并转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞中进行原核表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化3种截短H蛋白;以纯化病毒为抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA、间接免疫荧光法(IFA)和病毒中和试验分析杂交瘤细胞的生物学特性。结果表明,纯化的截短H蛋白表达正确,以此筛选到7株能稳定分泌犬瘟热病毒和重组H2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3B1、3B5、3C5、3D5、5A6、4G12和7B2),抗体亚类鉴定均为Ig G1κ;IFA检测均为阳性,表明7种单克隆抗体特异性好;病毒中和试验测定其培养上清的抗体中和效价为24～28,诱生BALB/c小鼠腹水的抗体中和效价为1×102～1×106;间接ELISA迭加试验显示,3B5、4G12、5A6、7B2之间的迭加系数均在50%以上,表明这4种单克隆抗体识别不同抗原表位;另外,3B5、4G12、5A6、7B2还能中和当前流行的Asia 1型CDV毒株,具有较好的广谱中和活性。本研究为后续CDV感染的免疫治疗和CDV检测方法的建立提供了材料基础。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年11期）
抗体的制备与鉴定论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
制备山羊乳酪蛋白单克隆抗体可以为检测乳品中山羊乳成分提供免疫学检测手段。以山羊酪蛋白免疫Balb/c小鼠,应用细胞融合技术,制备特异性识别山羊乳酪蛋白的单克隆抗体,对获得的阳性杂交瘤细胞进行连续传代和反复冻存以测定其稳定性,并对其分泌的单克隆抗体应用ELISA进行抗体特异性分析,对特异性识别山羊乳酪蛋白的单克隆抗体进行抗体亚型鉴定和染色体组型分析。最终,成功的筛选出可以分泌特异性识别山羊乳酪蛋白的单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,被命名为7H。经染色体组型分析,染色体数目为102条;单克隆抗体7H类别为IGg1,轻链为κ;经连续传代和反复冻存,ELISA检测细胞上清抗体发现其OD450nm值无显着性差异。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗体的制备与鉴定论文参考文献
[1].董雪,徐雨昕,郭晶,龚忠阔,夏霖亚.重组人源抗血管内皮生长因子单克隆抗体的制备及鉴定[J].吉林大学学报(理学版).2019
[2].李言言,刘阿华,王毅,宁梦夏,马文涛.山羊乳酪蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J].动物医学进展.2019
[3].李旭,魏德强.以烟草花叶病毒为载体的μE_3单克隆抗体的制备及鉴定[J].中国免疫学杂志.2019
[4].吴忠香,张雪梅,徐婧雯,宋杰,李慧.抗树鼩CD4单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定[J].中国生物制品学杂志.2019
[5].王婷婷,索倩,孙晓燕,马跃敏,刘凯于.棉铃虫激活增强子结合蛋白AP-4基因的原核表达、多克隆抗体制备、表达谱分析及功能鉴定[J].昆虫学报.2019
[6].刘爽,张泽林,李丽婷,胡永超,许永斌.基于AhsA蛋白的嗜水气单胞菌特异性抗体的制备与鉴定[J].大连民族大学学报.2019
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[8].牛夏忆,李淼,张倩,陈云雨,刘晓平.大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定[J].中国免疫学杂志.2019
[9].黄新喜,吕葆真,李丹,赵锋,欧阳森.生长抑素抗独特型卵黄抗体的制备与鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志.2019
[10].孙伟伟,钱晶,王晶宇,欧阳伟,夏兴霞.犬瘟热病毒H蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J].中国兽医科学.2019