导读:本文包含了人胚胎神经干细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:神经干细胞,条件培养液,雪旺细胞,增殖
人胚胎神经干细胞论文文献综述
纪贤严[1]（2018）在《人胚胎干细胞源神经干细胞条件培养液对雪旺细胞生物学特性研究》一文中研究指出研究背景多年以来神经损伤后的修复一直是医学难题,迄今为止,神经的自体移植仍然是神经断端治疗的“金标准”,但是此种方式存在供体不足的缺点。为此,人们寻找各种替代材料,如壳聚糖、蚕丝蛋白、纤维导管等,这些材料对于神经功能的修复,虽然取得一定的进展,但是仍然不能令人满意。神经损伤后包裹轴突的髓鞘细胞-雪旺细胞起着主要的修复作用,对轴突的再生修复起着支持和引导的作用,并能分泌多种细胞因子营养支持轴突的再生并能吞噬细胞炎症过程中产生的细胞碎片。我们前期研究发现间充质干细胞能修复SD大鼠坐骨神经的压榨伤,具有使神经功能得到改善的作用。胚胎干细胞是全能干细胞,具有向各个方向分化的潜能,经适当的微环境诱导可以向特定的细胞群分化,具有广阔的临床应用前景和价值,同时人胚胎干细胞及其诱导产物,在进一步的临床应用中避免了异种移植带来的免疫排斥反应,人胚胎干细胞源神经干细胞在神经损伤的修复中可能提供各种营养因子和信号帮助修复,是潜在的神经修复组织功程材料。研究目的探讨人胚胎干细胞源神经干细胞的诱导分化及神经干细胞条件培养液(human embryonic stem cell-derived neural stem cells conditioned medium,h ESCN-CM)对大鼠坐骨神经雪旺细胞的生物学作用,为周围神经损伤修复提供新的思路。研究方法(1)人胚胎干细胞源神经干细胞诱导分化及神经球培养;(2)流式细胞术、免疫荧光鉴定神经干细胞;(3)SD大鼠原代雪旺细胞的分离纯化;(4)h ESCN-CM制备;(5)CCK-8实验检测雪旺细胞的增殖;(6)划痕实验和Transwell实验检测雪旺细胞的迁移;(7)RT-q PCR检测雪旺细胞的基因表达。研究结果(1)人胚胎干细胞经诱导分化后,呈现典型的玫瑰花环结构,人胚胎干细胞源神经干细胞膜表面不表达Nestin、βⅢTubulin,细胞质内表达Nestin、βⅢTubulin,双阳性细胞高达98.14%。(2)大鼠雪旺细胞经纯化后高表达S100、MBP阳性率分别为99.0%和94.6%。(3)50%h ESCN-CM能促进雪旺细胞的增殖,100%h ESCN-CM为抑制增殖。50%h ESCN-CM和100%h ESCN-CM均能促进RSC96的增殖。(4)h ESCN-CM能促进雪旺细胞的迁移。(5)在50%h ESCN-CM作用下4 h,NT3、VEGF、b FGF、NGF的表达增高,IGF-1变化不明显。研究结论(1)体外成功诱导人胚胎干细胞分化为神经干细胞。(2)h ESCN-CM在适当浓度可以促进雪旺细胞的增殖和迁移。(3)h ESCN-CM在适当浓度能促进雪旺细胞NT3、VEGF、b FGF、NGF基因表达。(本文来源于《江苏大学》期刊2018-11-12）
赵海霞,任丽伊,李云竹,左璇,李淑蓉[2]（2018）在《Foxp1在胚胎神经干细胞分化过程中的表达及其过表达对神经干细胞分化的影响》一文中研究指出目的利用胚胎小鼠神经干细胞体外培养和分化模型过表达转录因子Foxp1,探讨Foxp1在胚胎神经干细胞分化过程中的表达及其过表达后对神经干细胞向神经元和星形胶质细胞分化的影响。方法从E12. 5d的胎鼠皮层分离培养神经干细胞并诱导分化3 d和7 d,经RT-PCR、Western blot检测Foxp1在神经干细胞分化过程中的表达;脂质体转染法在神经干细胞中过表Foxp1,免疫荧光及RT-PCR鉴定Map2阳性的神经元和GFAP阳性的星形胶质细胞分化; RT-PCR检测Jak/Stat信号通路相关分子Jak1和Stat1、Stat3、gp130的表达。结果 Foxp1在神经干细胞诱导分化3 d和7 d其mRNA和蛋白表达水平都显着升高(P <0. 05),且在分化3 d时表达水平最高;与对照组相比,在神经干细胞中过表达Foxp1提高了Map2阳性的神经元的分化比例及相应的Map2表达(P <0. 01),并降低了GFAP阳性的星形胶质细胞比例及GFAP的表达(P <0. 05);过表达Foxp1抑制了Jak1和Stat1、Stat3、gp130的表达(P <0. 01)。结论 Foxp1在神经干细胞向神经元分化过程表达水平升高,其过表达可促进神经干细胞向神经元方向的分化,并通过调节Jak/Stat信号通路抑制星形胶质细胞的产生。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2018年23期）
李敏,钱智勇,管彤,何宁,张大龙[3]（2018）在《不同粒径纳米硒化铅对大鼠胚胎神经干细胞的氧化损伤作用》一文中研究指出目的探讨不同粒径纳米硒化铅(Pb Se)对大鼠胚胎神经干细胞(NSCs)的氧化损伤作用。方法将处于对数生长期的NSCs暴露于终浓度分别为0(对照)、6.25、12.5、25、50、75、100、200μg/ml两种粒径(8、25 nm)的纳米Pb Se悬液24 h,采用MTT法检测细胞存活率,采用乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞膜损伤情况。将处于对数生长期的NSCs暴露于终浓度分别为0(对照)、60、80、100μg/ml两种粒径的纳米Pb Se悬液24 h,检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物还原酶(GSH-Px)活力及谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量,采用ELISA法检测细胞培养液中8-羟基-2'-脱氧鸟嘌呤核苷(8-OH-d G)的含量。结果与对照组相比,不同浓度的两种粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞的存活率均降低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着两种粒径纳米Pb Se暴露浓度的升高,NSCs细胞的存活率均呈下降趋势。当纳米Pb Se暴露浓度≥50μg/ml时,8 nm粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞的存活率均低于25 nm粒径纳米Pb Se暴露组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,不同浓度两种粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞培养液中的LDH活力均升高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着两种粒径纳米Pb Se暴露浓度的升高,NSCs细胞培养液中的LDH活力均呈上升趋势。在相同浓度下,8 nm粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞培养液中LDH的活力均高于25 nm粒径纳米Pb Se暴露组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,不同浓度两种粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞上清液中SOD、GSH-Px活力和GSH含量均降低,而MDA含量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着两种粒径纳米Pb Se暴露浓度的升高,NSCs细胞上清液中SOD、GSH-Px活力和GSH含量均呈下降趋势,而MDA含量均呈上升趋势。与相同浓度25 nm粒径纳米Pb Se暴露组比较,各浓度8 nm粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞上清液中SOD、GSH-Px活力和GSH含量均降低,而MDA含量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,不同浓度两种粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞培养基中8-OHd G的含量均升高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着两种粒径纳米Pb Se暴露浓度的升高,NSCs细胞培养基中8-OHd G的含量均呈上升趋势。与相同浓度25 nm粒径纳米Pb Se暴露组比较,80、100μg/ml的8 nm粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞培养基中8-OH-d G含量均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论纳米Pb Se引起NSCs细胞的氧化损伤可能是导致其产生细胞毒性的主要原因。(本文来源于《环境与健康杂志》期刊2018年05期）
陈湘[4]（2018）在《人胚胎干细胞的神经干细胞诱导分化及神经干细胞分泌的微囊泡对坐骨神经缺损性损伤的修复作用研究》一文中研究指出研究背景:由于地震、车祸等灾难的发生,坐骨神经等周围神经的损伤是临床的常见疾病。目前,自体神经移植仍然是修复周围神经损伤的主要方法,但是自体神经移植法具有供体来源有限、增加供区创伤以及残留供区感觉功能障碍等缺陷。周围神经再生是现阶段神经生物学领域的研究重点,组织工程领域的一些新发现为长节段缺损性损伤提供了新手段。神经干细胞(neural stem cells,NSCs)可分化为各种类型的神经细胞,将其移植到损伤处可促进轴突再生以及髓鞘形成。课题组此前通过培养人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)发现胚胎干细胞可以自发分化形成神经干细胞。由此我们推测这种人胚胎干细胞能够在特定条件下定向诱导分化成纯度较高的神经干细胞(human embryonic stem cell derived-neural stem cells,hESC-NSCs)。由于神经干细胞来源的局限性,从hESCs分化而来的NSCs显得尤为重要。能否高纯度、高产量的获得NSCs是其能否应用到临床细胞治疗的关键问题。我们猜测,hESC-NSCs同胎脑来源的NSCs具有同样促进轴突再生的作用,对此后续的研究表明,hESC-NSCs确实可以通过间接作用促进轴突再生。现在越来越多的研究表明NSCs发挥修复神经损伤的作用不是通过细胞直接整合而是通过分泌因子发挥作用,并且由于NSCs是有核的活细胞,具有形成肿瘤的风险。微囊泡(microvesicles,MVs)是从细胞条件培养基中分离得到的活性有形成分,是细胞同周围细胞或环境进行信息和物质传递的一种物质。并且我们组之前已经研究证明过间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)来源的微囊泡(MSCs-MVs)可以促进坐骨神经压榨性损伤后的再生修复。因此,我们猜测人胚胎干细胞源神经干细胞分泌的微囊泡(microvesicles released from human embryonic stem cell derived-neural stem cells,hESC-NSC-MVs)与MSCs-MVs具有类似的促进轴突再生的功能,并对其展开进一步的研究。研究目的:研究人胚胎干细胞的神经干细胞诱导分化及胚胎干细胞源神经干细胞分泌的微囊泡对大鼠坐骨神经5mm缺损性损伤的修复作用。研究方法:(1)将无饲养层培养的hESCs定向诱导为神经干细胞,并利用细胞形态学、免疫荧光、PCR的方法进行鉴定。(2)利用PCR和流式细胞术对神经干细胞经过贴壁-球转化(AST)后提高干性进行说明。(3)收集hESC-NSCs的无血清培养基(条件培养基),运用超速离心法提取微囊泡。(4)将hESC-NSC-MVs与背根神经节共培养,测定轴突的长度。(5)建立SD大鼠坐骨神经缺损性损伤模型,应用坐骨神经功能指数(sciatic nerve functional index,SFI)、HE染色、Masson染色等方法评价hESC-NSC-MVs对大鼠坐骨神经损伤修复作用。研究结果:(1)hESCs可以分化为神经干细胞,并且神经干细胞相关标志Nestin,Pax6等在P8 NSCs附近表达最高。(2)神经干细胞经过AST,神经干细胞相关标志Nestin,Pax6等表达升高,干性增强。(3)hESC-NSC-MVs与背根神经节共培养的再生轴突长度优于PBS组。(4)成功的构建出大鼠坐骨神经缺损性损伤模型。神经损伤后12周,hESC-NSC-MVs组受损侧后肢形态学恢复和再生轴突的增加都较hESC-NSCs组和PBS组明显。结论:(1)hESC可以分化为NSCs,hESC-NSCs表达神经干细胞标志。(2)hESC-NSCs可以通过贴壁-球转化提高神经干细胞标志的表达以及增强干性。(3)hESC-NSC-MVs对坐骨神经缺损性损伤具有修复作用。(本文来源于《江苏大学》期刊2018-04-19）
王博雅,刘波,李俊峰,罗艳玲[5]（2017）在《莫诺苷对慢病毒载体转染抑制人胚胎神经干细胞增殖能力的影响》一文中研究指出目的人胚胎神经干细胞(Human embryonic neural stem cell,he NSC)具有自我更新能力和多向分化潜能,莫诺苷具有促进脑缺血再灌注损伤神经功能恢复的作用,但其对he NSC的研究未见报道。方法本研究建立慢病毒载体转染he NSC模型,给予100μmol/L莫诺苷作用48 h,观察对干细胞增殖的影响。结果与正常细胞比较,转染慢病毒载体后,he NSC Ki67+细胞数量以及Brd U+细胞数量均显着下降(P<0.01,P<0.001);而与莫诺苷共孵育后,转染慢病毒载体的he NSC Ki67+细胞数量以及Brd U+细胞数量均显着增加(P<0.05,P<0.001)。结论慢病毒载体转染能抑制he NSC增殖能力,而莫诺苷能显着改善慢病毒载体引起的细胞增殖能力下降。(本文来源于《实验动物科学》期刊2017年06期）
张凤兰[6]（2017）在《TAG1/APP通过调控miR-218-5p抑制胚胎神经干细胞分化为神经元及机制研究》一文中研究指出[目的]目前,阿尔兹海默病(Alzheimer's disease,AD)是全球医疗保健的研究热点,但是其致病原因仍不清楚。研究表明淀粉样前体蛋白(Amyloid precursor protein,APP)的 C 末端胞内结构域(APP intracellular C-termial domain,AICD)具有转录因子活性,可以调控多种基因表达,且AICD转基因小鼠具有阿尔兹海默病症状,因此AICD逐渐成为阿尔兹海默病的研究新热点。前期研究发现TAG1是APP的功能性配体,能促进APP剪切出AICD,抑制胚胎神经干细胞(embryonic neural stem cells,eNSC)向神经元方向分化。己知阿尔兹海默病的病理学特点之一是神经元减少,因此TAG1-APP信号通路可能与阿尔兹海默病的发生、发展具有相关性,也可能是将来治疗阿尔兹海默病的潜在药物靶点。但是TAG1/APP结合后产生的AICD分子调控eNSC分化的具体机制目前仍不清楚。已知microRNA(miRNA)能够调控神经干细胞的增殖、分化、凋亡等多个过程。故推测在TAG1-APP信号通路中,AICD可能是通过调控miRNA的表达从而抑制了 eNSC向神经元方向的分化。另外,己知miRNA是通过调控下游靶基因mRNA表达发挥功能,因此我们将进一步筛选和验证TAG1-APP信号通路中miRNA的下游功能靶基因。[方法]首先,通过细胞免疫荧光实验和实时荧光定量PCR实验(realtime PCR)检测最佳胎鼠取材年龄和部位,分离培养eNSC。然后,通过分析SH-SY5Y细胞系中AICD ChIP-Seq实验结果、TAG1 KO和APPKO成体小鼠SVZ组织中miRNA microarray实验结果筛选出与AICD、TAG1和APP相关miRNA作为初筛miRNA。再通过real time PCR检测初筛miRNA中在分离培养的eNSC里同时受AICD、TAG1和APP调控的miRNA,将其作为候选miRNA。接着主要通过real time PCR、细胞免疫荧光实验和细胞计数分析检测候选miRNA在神经系统中的表达情况,在eNSC增殖、分化、凋亡过程中的功能以及其能否有效逆转AICD、TAG1和APP对eNSC分化为神经元的影响。最后,主要通过mRNA microarray实验、生物信息学预测和real time PCR实验筛选受AICD和候选miRNA调控的下游靶基因,并通过双荧光素酶实验确定候选miRNA和下游靶基因的靶向关系。再通过real time PCR实验、免疫荧光实验检测靶基因的mRNA-和蛋白质在神经系统的表达情况。进一步通过细胞免疫荧光实验和细胞计数分析检测靶基因对eNSC分化为神经元的影响以及其能否有效逆转候选miRNA对eNSC分化为神经元的作用。[结果]研究发现分离胎龄14天(E14)小鼠的前脑组织能培养出纯度为98%左右的具有增殖和分化能力的优质NSC用于后期实验。通过分析AICD ChIP-Seq实验和miRNA microarray实验共筛选出10个与AICD、TAG1和APP有关miRNA。进一步通过real time PCR实验发现在eNSC中只有miR-218-5p的表达同时受AICD、TAG1和APP的调控。随后,通过real-time PCR实验、细胞免疫荧光实验和细胞计数分析发现miR-218-5p在小鼠神经系统中的表达具有时空特异性和细胞特异性,并具有促进eNSC增殖、抑制eNSC向神经元分化的功能,但它对eNSC和诱导分化的eNSC的凋亡没有影响。另外还发现miR-218-5p能有效逆转AICD、TAG1和APP对eNSC分化为神经元的影响。最后通过mRNA microarray实验、生物信息学预测、real time PCR实验以及双荧光素酶报告实验发现Phc3是miR-218-5p的下游靶基因。并且发现Phc3 mRNA在神经系统中的表达具有时间特异性、Phc3蛋白在神经系统中的表达具有细胞亚结构特异性、Phc3 siRNA抑制eNSC向神经元方向的分化,还能有效逆转miR-218-5p inhibitor对eNSC分为神经元的上调作用。[结论]本课题主要发现TAG1/APP结合产生AICD后主要通过调控miR-218-5p的表达抑制体外分离培养的eNSC向神经元方向的分化,而在此过程中miR-218-5p可以通过调控Phc3的表达来完成此功能。本课题详细研究了TAG1-APP信号通路的具体过程,为进一步深入研究此信号通路在阿尔兹海默病发生、发展过程中的作用及其潜在治疗价值提供前期研究基础。(本文来源于《昆明医科大学》期刊2017-09-01）
杨骐昌,宋晓峰,韩平[7]（2017）在《小鼠胚胎神经干细胞的分离及贴壁培养方法》一文中研究指出目的探索一种改进的贴壁培养神经干细胞的方法。方法从胚胎期为15.5d的胎鼠大脑皮层中提取神经干细胞,在PO/FN(Poly-L-ornithine hydrochloride/Fibronectin)包被处理后的培养瓶中进行贴壁培养并传代,在倒置显微镜下观察神经干细胞的细胞形态,并通过免疫荧光法鉴定神经干细胞及其子代细胞进行分化操作之后的情况。结果原代神经干细胞细胞形态清晰,免疫荧光标记物明显。结论相对于传统神经球悬浮培养法该法处理简便,传代损耗低,容易观察到细胞形态和分化阶段,更有助于神经干细胞的培养和存储。(本文来源于《华中科技大学学报(医学版)》期刊2017年03期）
王文,刘婷婷,孙芳玲,魏仁平,艾厚喜[8]（2017）在《EphB4信号通路对人胚胎神经干细胞自我更新、增殖、分化和凋亡的影响》一文中研究指出目的本实验旨在研究EphB4是否参与调节了人胚胎神经干细胞的增殖、分化、凋亡活动,并探索其下游信号通路。方法培养原代人胚胎神经干细胞,使用沉默慢病毒与过表达慢病毒转染细胞,分别下调和上调EphB4蛋白表达水平。检测EphB4对细胞增殖、分化、凋亡的影响并探索其下游信号通路。结果 EphB4基因沉默后,抑制细胞增殖及向神经元分化,促进细胞向胶质细胞分化,对细胞凋亡无影响。EphB4基因过表达后,促进细胞增殖及向神经元分化,抑制细胞向胶质细胞分化,对细胞凋亡无影响。EphB4是通过下游信号通路Abl-Cyclin D1调节细胞增殖,此信号通路不参与EphB4在细胞分化方面的调节。结论 EphB4参与调节神经干细胞增殖,而且是决定神经干细胞向神经元分化还是向胶质细胞分化的开关,是调节干细胞增殖、迁移和分化的新信号通路,其很可能成为脑卒中后神经元修复的有效治疗靶点。(本文来源于《中国药理学与毒理学杂志》期刊2017年05期）
刘婷婷[9]（2017）在《EphB4信号通路调节人胚胎神经干细胞增殖、分化、凋亡的作用机制研究》一文中研究指出目的缺血性脑卒中是一种严重损害神经功能的疾病,其具有很高的发病率和死亡率。缺血性脑损伤后期的神经再生与修复是脑卒中治疗的关键环节。脑卒中后可以诱发内源性神经干细胞增殖、分化并向损伤区域迁移,其中多条信号通路参与调节神经干细胞的活动。通过调节特异性的分子机制,可以增强脑损伤诱导的内源性神经干细胞的增殖与分化过程。目前,参与调节神经干细胞增殖与分化的经典信号通路有四条,即Wnt信号通路、Notch信号通路、Shh(Sonic Hedgehog,Shh)信号通路与骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)信号通路。在前期我们研究Wnt信号通路时发现,β-catenin做为Wnt信号通路的关键调节因子,同时也是Eph信号通路的下游蛋白之一。因此,我们关注到了Eph/ephrin这条信号通路。Eph受体是具有最多成员的受体酪氨酸激酶家族,其与配体ephrin结合后可以诱发双向传导过程。近年来研究表明Eph受体与ephrin配体参与调节神经干细胞的增殖、分化、存活与迁移活动。但对于EphB4的研究都集中在肿瘤方面,其对神经干细胞的调节作用却未见报道。而肿瘤细胞中存在少部分肿瘤激活细胞,这些细胞与干细胞有着共同的特性,肿瘤可以从正常组织干细胞转化而来。我们猜想EphB4是否在神经干细胞的增殖与分化方面也起到重要作用。本实验旨在研究EphB4是否参与调节了人胚胎神经干细胞的增殖、分化、凋亡活动,并探索其下游信号通路与调节机制,为脑卒中治疗提供新的靶点。方法(1)人胚胎神经干细胞的鉴定:培养原代人胚胎神经干细胞,正常培养3天后进行Nestin免疫荧光染色标记巢蛋白;分化培养10天后进行βⅢ-tubulin与胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫荧光染色分别标记神经元与星形胶质细胞;分化培养16天后进行半乳糖脑苷脂(galactocerebroside,Galc)免疫荧光染色标记少突胶质细胞,进行人胚胎神经干细胞鉴定。(2)EphB4信号通路的机制研究:培养原代人胚胎神经干细胞,使用沉默慢病毒与过表达慢病毒转染细胞,分别下调和上调EphB4基因水平及其蛋白表达水平,分为EphB4基因沉默对照组(Scrambled-sh RNA)、EphB4基因沉默组(EphB4-sh RNA)、EphB4基因过表达对照组(EphB4-control)、EphB4基因过表达组(EphB4-OE)。然后通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测EphB4的基因表达水平,Western blot检测EphB4的蛋白表达水平来确定沉默及过表达效率。通过克隆分析、Brd U免疫荧光染色观察EphB4对细胞自我更新与增殖的影响;通过Dcx、βⅢ-tubulin、GFAP、NG2免疫荧光染色及RT-PCR检测Dcx、βⅢ-tubulin、GFAP、NG2基因水平,Western blot检测Mash1蛋白表达水平观察EphB4对人胚胎神经干细胞分化的影响;通过Cleaved-caspase3、caspase8免疫荧光染色,Western blot检测活性caspase8的表达水平、AnnexinⅤ-PE/7-AAD流式试剂盒分析观察EphB4对人胚胎神经干细胞凋亡的影响;通过细胞周期分析及使用Cyclin D1/CDK4抑制剂FAS、Abl抑制剂Gleevec、Abl激动剂DPH抑制和激活蛋白表达水平探索EphB4下游信号通路。结果(1)我们培养的人胚胎神经干细胞,Nestin~+细胞的比例为77.37%,并且可以成功分化为βⅢ-tubulin~+神经元、GFAP~+星形胶质细胞与Galc~+少突胶质细胞。(2)与对照组相比,转染EphB4沉默慢病毒可以显着降低EphB4的m RNA水平与蛋白表达水平,转染EphB4过表达慢病毒可以显着提高EphB4的m RNA水平与蛋白表达水平,人胚胎神经干细胞EphB4基因沉默及过表达模型成功建立。(3)克隆分析与免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,EphB4基因沉默显着降低了神经球直径、神经球个数与Brd U阳性细胞数,抑制了细胞增殖;EphB4过表达显着增加了神经球的直径、神经球个数与Brd U阳性细胞数,促进了细胞增殖。(4)免疫荧光染色、RT-PCR分析与Western blot结果显示,与对照组相比,EphB4基因沉默显着降低了Dcx、βⅢ-tubulin阳性细胞数及其m RNA水平、Mash1蛋白表达水平,显着增加了GFAP、NG2阳性细胞数及其m RNA水平,抑制细胞向神经元分化,促进细胞向胶质细胞分化;EphB4基因过表达显着增加了Dcx、βⅢ-tubulin阳性细胞数及其m RNA水平、Mash1蛋白表达水平,显着降低了GFAP、NG2阳性细胞数及其m RNA水平,促进细胞向神经元分化,抑制细胞向胶质细胞分化。(5)免疫荧光染色、Western blot及细胞流式结果显示,与对照组相比,EphB4沉默组与过表达组Cleaved-caspase3、caspase8阳性细胞数、活性caspase8蛋白表达水平及AnnexinⅤ-PE~+/7-AAD-标记的细胞数量无显着变化,EphB4基因沉默及过表达对细胞凋亡无影响。(6)细胞周期检测结果显示,与对照组相比,EphB4基因沉默可以显着增加G0/G1期细胞数量,相对的减少S期与G2/M期的细胞数量;EphB4基因过表达可以显着减少G0/G1期细胞数量,相对的增加S期与G2/M期的细胞数量。EphB4基因沉默及过表达可以影响G1期调节蛋白Cyclin D1、CDK4的表达水平,使用Cyclin D1/CDK4抑制剂FAS抑制蛋白活性后消除了EphB4过表达促进细胞增殖的作用。结果表明Cyclin D1/CDK4介导了EphB4蛋白对人胚胎神经干细胞增殖的调节作用。(7)Western blot结果显示,EphB4基因沉默及过表达可以影响Abl的表达水平,使用Abl抑制剂Gleevec与激动剂DPH抑制与激活Abl蛋白可以影响Cyclin D1、CDK4的表达水平,并且在Abl蛋白活性被抑制后可以消除EphB4过表达促进细胞增殖的作用。结果表明,Abl作为EphB4的下游蛋白介导了EphB4调控Cyclin D1/CDK4影响细胞增殖的作用。(8)使用Abl抑制剂Gleevec与Cyclin D1/CDK4抑制剂FAS抑制蛋白活性并未影响EphB4过表达促进细胞向神经元方向分化,抑制细胞向胶质细胞分化的作用。结果表明,Abl-Cyclin D1/CDK4信号通路并未参与调节EphB4对细胞分化的作用。结论:EphB4基因沉默后,抑制体外培养人胚胎神经干细胞的增殖及细胞向神经元分化,促进细胞向胶质细胞分化,对细胞凋亡无影响。EphB4基因过表达后,促进体外培养人胚胎神经干细胞的增殖及细胞向神经元的分化,抑制细胞向胶质细胞分化,对细胞凋亡无影响。EphB4是通过下游信号通路Abl-Cyclin D1调节细胞增殖,此信号通路不参与EphB4在细胞分化方面的调节。EphB4参与调节神经干细胞增殖,而且是决定神经干细胞向神经元分化还是向胶质细胞分化的开关,其很可能成为脑损伤后神经元修复的有效治疗靶点。(本文来源于《首都医科大学》期刊2017-05-15）
蔡倩,郭慕真,朱晨笛,李宏辉,黄敏[10]（2017）在《PKC/ERK信号通路在百草枯致人胚胎神经干细胞增殖过程中的作用》一文中研究指出[目的]探讨蛋白激酶C(PKC)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在百草枯(PQ)调控人胚胎神经干细胞增殖中的作用。[方法]以永生化的人胚胎神经干细胞系(Re Ncell CX)为细胞模型,以终浓度为0、5、25、50、100μmol/L的百草枯处理细胞24 h,采用间接免疫荧光法检测巢蛋白(Nestin)、β-微管蛋白III(β-tubulin III)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP);采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率;分光光度法检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性;5-溴-2-脱氧尿嘧啶(Brd U)掺入法检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测荧光强度,以此反映细胞内钙离子浓度,免疫印迹法检测细胞膜PKCα和细胞p ERK1/2蛋白表达。[结果]与对照组比较,25、50、100μmol/L百草枯染毒组的细胞活力出现明显抑制作用,且细胞存活率与百草枯浓度对数值呈负相关(r=-0.96,P<0.05);50、100μmol/L百草枯染毒组的细胞上清中LDH水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);免疫荧光染色显示,随着百草枯染毒浓度的增加,Brd U阳性细胞数逐渐减少。其中25、50、100μmol/L百草枯染毒能明显抑制神经干细胞的增殖(P<0.05);流式细胞仪检测细胞内Ca~(2+)荧光强度,25、50、100μmol/L百草枯染毒组细胞的峰值钙离子浓度明显降低,随染毒浓度增加,Ca~(2+)荧光强度降低(r=-0.97,P<0.05);各浓度百草枯染毒均能够下调人神经干细胞的PKCα、p ERK1/2蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]百草枯通过降低细胞内钙离子浓度,进而抑制Ca~(2+)依赖的PKCα活性,减少细胞ERK1/2的磷酸化。Ca~(2+)/PKCα/ERK1/2信号通路可能是介导百草枯抑制神经干细胞增殖的途径之一。(本文来源于《环境与职业医学》期刊2017年01期）
人胚胎神经干细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的利用胚胎小鼠神经干细胞体外培养和分化模型过表达转录因子Foxp1,探讨Foxp1在胚胎神经干细胞分化过程中的表达及其过表达后对神经干细胞向神经元和星形胶质细胞分化的影响。方法从E12. 5d的胎鼠皮层分离培养神经干细胞并诱导分化3 d和7 d,经RT-PCR、Western blot检测Foxp1在神经干细胞分化过程中的表达;脂质体转染法在神经干细胞中过表Foxp1,免疫荧光及RT-PCR鉴定Map2阳性的神经元和GFAP阳性的星形胶质细胞分化; RT-PCR检测Jak/Stat信号通路相关分子Jak1和Stat1、Stat3、gp130的表达。结果 Foxp1在神经干细胞诱导分化3 d和7 d其mRNA和蛋白表达水平都显着升高(P <0. 05),且在分化3 d时表达水平最高;与对照组相比,在神经干细胞中过表达Foxp1提高了Map2阳性的神经元的分化比例及相应的Map2表达(P <0. 01),并降低了GFAP阳性的星形胶质细胞比例及GFAP的表达(P <0. 05);过表达Foxp1抑制了Jak1和Stat1、Stat3、gp130的表达(P <0. 01)。结论 Foxp1在神经干细胞向神经元分化过程表达水平升高,其过表达可促进神经干细胞向神经元方向的分化,并通过调节Jak/Stat信号通路抑制星形胶质细胞的产生。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人胚胎神经干细胞论文参考文献
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