导读:本文包含了嵌合型猪圆环病毒论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:猪圆环病毒2型,分离鉴定,嵌合型PCV1-2活疫苗,TaqMan荧光定量PCR
嵌合型猪圆环病毒论文文献综述
田汝亮[1]（2019）在《江苏部分地区猪圆环病毒2型的分离鉴定及嵌合型PCV1-2活疫苗免疫持续期的初步研究》一文中研究指出猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)是引起猪圆环病毒病(porcine circovirus associated diseases,PCVAD)的主要病原,自1997年被首次分离以来,已成为继猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)后又一致猪免疫抑制的病毒,呈出全球流行,给养猪业造成了巨大损失。2000年我国出现了 PCV2的相关报道,此后PCV2所引发的感染和疾病一直高居不下,对该病的诊断和防治具有重要的意义。本文通过对江苏部分地区病死猪的病料进行PCV2的检测,为该地区PCVAD流行病学提供参考。当前对PCVAD的防制手段主要是接种疫苗,但疫苗并不能阻止PCV2在猪群中的感染和传播,现有商品化疫苗均为灭活疫苗,存在灭活疫苗常见不足。嵌合型PCV1-2活疫苗副作用小、只需要单剂量接种,相对而言更节省成本,并可克服灭活疫苗的不足。通过本实验室构建的嵌合型PCV1-2活疫苗免疫商品猪,并对免疫猪进行PCV2攻毒,通过对免疫攻毒猪进行抗体、增重、病毒载量以及病理组织学研究,评价PCV1-2活疫苗对商品猪的免疫保护效力。1猪圆环病毒2型的分离鉴定于2017-2018年在扬州大学动物医院和某规模化屠宰场(屠宰猪来自江苏部分地区)进行采样,以PCR方法检测样品中的PCV2 DNA,并对单纯感染PCV2样品处理后接种Dulac细胞进行PCV2分离,得到11个PCV2分离株,并对其进行全基因组序列测定。经全基因组测序,11个PCV2分离株中,5株为PCV2b基因型,6株为PCV2d基因型,11个分离株的核苷酸序列同源性为96.7-99.9%。结果表明,PCV2b和PCV2d两种基因型是目前江苏地区PCV2毒株的流行基因型,为江苏部分地区PCVAD的流行病学提供参考,同时,为探索PCV2的进化规律等提供了材料。2嵌合型PCV1-2活疫苗免疫持续期的初步研究应用本实验室构建的嵌合型PCV1-2活疫苗单倍剂量免疫商品猪,并以商品化灭活疫苗免疫组作对照,初步探讨该活疫苗的免疫持续期。将14头商品猪随机分为四组,嵌合型PCV1-2活疫苗组和商品化灭活苗组各4头猪。第一组试验猪颈部肌肉注射嵌合型PCV1-2活疫苗2×105.3 TCID50/头;第二组试验猪颈部肌肉免疫商品化灭活疫苗2 ml/头;第叁组4头猪不免疫作为攻毒对照组;第四组2头猪为健康对照组,每周称重并采集各组试验猪血清检测抗体。免疫后63天对除健康对照组外的所有试验猪攻毒PCV2,攻毒剂量为2×106.0TCID50/头,每周称重并采集各组试验猪血清检测抗体,攻毒后21天,扑杀所有试验猪,采集血清和组织脏器。结果表明:免疫组试验猪免疫后均可刺激机体产生较高水平血清荧光抗体和中和抗体,而活疫苗免疫组试验猪产生抗体时间更早,且抗体水平更高,维持高水平抗体时间更长。荧光定量PCR检测发现,免疫组试验猪均可减轻PCV2病毒血症、降低淋巴结及肺脏PCV2病毒载量。病理组织学观察结果显示,攻毒对照组试验猪肺脏及淋巴结等脏器出现明显病变,而免疫组试验猪损伤轻微。由此可见,PCV1-2活疫苗免疫后可对猪体产生免疫保护,降低攻毒猪体内PCV2病毒载量,减轻PCV2造成的病理损伤。疫苗免疫后至少2个月内可提供高水平免疫保护。(本文来源于《扬州大学》期刊2019-06-01）
沈克飞,杨柳,杨睿,周雪,张素辉[2]（2019）在《猪圆环病毒2型ORF2与猪繁殖及呼吸综合征病毒ORF5嵌合抗原表位在乳酸乳球菌中的表达》一文中研究指出目的乳酸乳球菌中表达猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)ORF2与猪繁殖及呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)ORF5的嵌合抗原表位。方法按乳酸乳球菌密码子使用偏好设计并合成PCV2 ORF2及PRRSV ORF5的串联抗原表位基因,插入至乳酸菌表达质粒p NZ8148,构建重组表达质粒,转化乳酸乳球菌NZ9000中,经乳酸菌素(nisin)诱导表达嵌合蛋白,采用Ni-NTA亲和层析纯化,进行12%SDS-PAGE分析。结果重组表达质粒经双酶切鉴定,构建正确。嵌合蛋白相对分子质量约25 000,在乳酸乳球菌中主要以可溶性形式表达,纯化后纯度达96%以上,浓度约1 mg/m L,产量可达60 mg/L细菌培养物。结论 PCV2ORF2与PRRSV ORF5的嵌合抗原表位在乳酸乳球菌中得到高效可溶性表达。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年01期）
张素姣,王东亮,李萌,蒋一凡,湛洋[3]（2019）在《Loop EF区嵌合猪细小病毒B细胞表位对猪圆环病毒2型病毒样颗粒组装的影响》一文中研究指出Loop EF是猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的重要Loop结构,然而它在PCV2组装过程中的作用仍不清楚。本研究通过模拟PCV2病毒样颗粒(VLPs)3D结构,比较分析PCV2和PCV1、PCV3的氨基酸序列以及预测Loop EF的突变位点,筛选出PCV2 Loop EF中可供外源表位替换或插入的capsid表面位点,即第133位丙氨酸。探索性地针对该位点设计3个突变体,分别为猪细小病毒1型(PPV1)B细胞线性表位(228QQITDA233)插入PCV2 Cap第132和133位氨基酸、第133和134位氨基酸之间及替换第133位氨基酸。利用over-lap PCR等技术构建上述3个突变体的重组质粒,在大肠杆菌(BL21/DE3)中表达,并利用镍柱亲和层析纯化3个突变体蛋白,最后在体外进行VLPs组装,电镜结果显示3个突变体蛋白均可体外组装成完整的VLPs。结果表明,Loop EF中第133位丙氨酸的替换或插入外源表位突变不影响VLPs组装,提示PCV2 VLPs Loop EF展示外源抗原表位具有可行性。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年02期）
樊铭玉,程清如,张学斌,高清清,高崧[4]（2017）在《热应激对嵌合猪圆环病毒1-2在PK-15细胞中增殖的影响》一文中研究指出为提高表达猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因的重组猪圆环病毒1型(PCV1)疫苗株(嵌合猪圆环病毒1-2,PCV1-2)在细胞内的增殖水平,本研究采用PK-15细胞,应用活细胞计数、间接免疫荧光及Taq Man荧光定量PCR等方法测定不同热应激温度和持续时间处理后细胞生长和病毒增殖的情况。结果显示,PK-15细胞可耐受41℃和43℃的培养环境,并且与常规培养方法相比43℃条件下热应激处理12 h可显着促进PCV1-2在细胞内的增殖,其病毒效价可达10~(6.0)TCID(_50)/m L以上。另外,热应激处理后病毒核酸拷贝数的动态变化表明,热应激对PCV1-2复制的影响主要在接毒后24 h至48 h内显现。本研究确定了促进PCV1-2增殖的热应激条件,为提高PCV1-2疫苗产量提供了方法。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2017年07期）
张飞鹏[5]（2016）在《带KT3标签嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2-KT3)的构建及其生物学特性的研究》一文中研究指出猪圆环病毒2型(PCV2)是猪圆环病毒相关疾病(Porcine circovirus associated disease,PCVAD)的主要病原,感染后会引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS)、猪皮炎肾病综合征(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome, PDNS)、猪呼吸道疾病综合征(Porcine respiratory disease complex, PRDC)、生殖系统疾病和其他疾病。其在世界范围内广泛流行,引起养猪业巨大的经济损失。疫苗接种是预防PCV2感染的有效手段,而PCV2在猪群中多为亚临床感染,带有其他抗原表位的重组疫苗免疫猪群后,可通过血清学等方法有效区分自然感染和疫苗免疫,鉴定猪群是否产生有效的免疫应答。本研究构建出带有KT3标签的感染性克隆,拯救出重组活病毒,并初步研究其安全性和免疫原性。1.嵌合型猪圆环病毒1-2 KT3感染性克隆的构建本研究通过重迭延伸PCR,将KT3标签重组至PCV1-2的Cap蛋白C末端,构建出单拷贝质粒pBSK(+)-PCV1-2 KT3 Kpn I,并构建出单拷贝质粒T-PCV1-2 KT3 BstE Ⅱ、具有2个完整的PCV复制起始区的感染性克隆pBSK(+)-PCV1-2 KT3 EKS (EKS)以及具有1个完整的PCV复制起始区感染性克隆pBKS(+)-PCV1-2 KT3 PEK (PEK)。分别将EKS、PEK和环化DNA转染细胞,并将2个单拷贝质粒以共转染方式电转至细胞中。结果表明四种方法虽然拯救效率有差异,但均能拯救出PCV1-2KT3活病毒,病毒滴度能达到104.8-1050TCID50/mL。2.嵌合型PCV1-2KT3活病毒作为标签疫苗的初步研究应用本室构建的嵌合型PCVl-2 KT3活病毒与PCV1-2病毒接种PCV2抗原抗体阴性商品猪。将8头猪随机分成3组,第一组3头接种105.0TCID50/头 PCV1-2 KT3,第二组3头接种105.0TCID50/头PCV1-2,第叁组2头为健康对照组。每周采集血液、鼻腔、直肠棉拭子,接种后49 d剖杀所有试验猪。研究结果表明嵌合型PCV1-2 KT3病毒在猪体内可以产生较高水平的荧光抗体和中和抗体,其诱导的抗KT3标签的抗体趋势与前二者相似。其在猪体内有限繁殖,并不会引起病理损伤。表明其具有良好的安全性和免疫原性,初步证明其作为标签疫苗应用的可行性。(本文来源于《扬州大学》期刊2016-06-01）
邵小雪,杨倩,孟凡伟,于红欣,周双海[6]（2016）在《嵌合猪圆环病毒的构建》一文中研究指出【目的】为了构建猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)的嵌合病毒,并为PCV2疫苗研究奠定基础。【方法】以PCV1基因组为骨架,将其衣壳基因替换为PCV2衣壳基因,来构建嵌合猪圆环病毒(PCV1-2)DNA克隆,将PCV1-2DNA克隆转染PK-15细胞以获得拯救病毒PCV1-2,并测定PCV1-2在PK-15细胞中的增殖特性。【结果】酶切和序列测定显示成功构建出PCV1-2DNA克隆;免疫荧光试验和PCR检测显示成功获得拯救病毒PCV1-2,其效价达到106.0 TCID50/mL以上;一步生长曲线显示PCV1-2在PK-15细胞中的增殖特性与其亲本病毒近似。【结论】成功构建了1种具有较高体外增殖能力的嵌合猪圆环病毒。(本文来源于《北京农学院学报》期刊2016年01期）
李基棕[7]（2015）在《嵌合型猪圆环病毒1-2b转染方法优化及PCV1-2b 1B和1C疫苗免疫保护效力研究》一文中研究指出猪圆环病毒(Porcine circovirus, PCV)为圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus)成员,包括PCV1 (Porcine circovirus type 1, PCV1)和PCV2 (Porcine circovirus type 2, PCV2)两种血清型。PCV1是猪肾细胞系的一种污染物,对猪无致病性；PCV2是断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS)及其他猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原。PCV2主要分为PCV2a和PCV2b两个基因型,PCV2a包括2A-2E五个亚型；PCV2b包括1A、1B和1C叁个亚型,其中1A、1B亚型的ORF2基因序列基本一致,进一步区分需比较ORF1序列。1C亚型的ORF2基因与1A、1B相比有较大差异,其Cap蛋白C末端出现一个赖氨酸(K)的延伸。PCV2已在全世界猪群蔓延,给养猪业带来巨大的经济损失。疫苗接种是预防PCV2感染的有效手段。然而疫苗免疫不能完全阻断PCV2的感染和传播,而且商品化的疫苗价格普遍居高,制约着PCV2疫苗的广泛使用。因此研发安全、高效、低价的疫苗产品是今后研究的主要方向。本研究使用电穿孔转染法证实Dulac细胞能显着提高嵌合型PCV1-2b拯救效率,突破病毒增殖的瓶颈；大量制备嵌合型PCV1-2b舌病毒,动物试验评估嵌合型PCV1-2b灭活疫苗和活疫苗的断奶仔猪主动免疫及新生仔猪被动免疫保护效果。1. Dulac细胞拯救嵌合型PCV1-2b的转染方法优化本研究通过优化脂质体转染法和电穿孔转染法,将本室保存的pSK-dPCV1-2b重组质粒分别转染Dulac细胞和PK-15细胞,旨在提高嵌合型猪圆环病毒PCV1-2b的拯救效率,为疫苗生产奠定基础。结果显示,Dulac刚包转染后的病毒滴度为PK-15细胞的100倍；Dulac细胞电转染的优化参数为250 V、400μs、6μg质粒DNA、电击3次,各因素对转染效率的影响依次为电场强度、电击次数、脉冲时间及质粒DNA含量。Dulac细胞脂质体转染优化结果为：在质粒DNA与转染试剂比例为1：3时,转染效率最高。流式细胞术检测Dulac细胞电转染和脂质体转染的感染率,结果阳性细胞数分别占55.6%和44.2%,提示两种方法转染Dulac细胞的效率均较高。分别将拯救的病毒在Dulac细胞和PK-15细胞上进行连续传代,结果病毒滴度随着传代数呈上升趋势,但Dulac细胞病毒滴度(10444-105.32)显着高于PK-15细胞(101.90-103.38)。因此,嵌合型PCV1-2b在Dulac细胞中增殖滴度更高,优化脂质体转染法和电穿孔转染法均能有效提高Dulac细胞的病毒拯救效率。2.嵌合型PCV1-2b灭活疫苗和活疫苗免疫保护效力比较根据PCV2 ORF1的保守序列,设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立PCV2 TaqMan荧光定量PCR检测方法,并评价其敏感性、特异性和重复性。结果显示,标准曲线的斜率为-3.55,相关系数R2为0.999,扩增效率为96.4%,具有良好的线性关系；该方法的敏感性为5.0 copies/μL;检测的PCV1-2、PCV1、CSFV、PRRSV、PRV、PPV基因组DNA或cDNA均无扩增曲线；8份阳性样品的变异系数在0.98%-1.03%之间。因此,本研究建立的PCV2 TaqMan荧光定量PCR检测方法特异性强,敏感性高,重复性良好,为嵌合型PCV1-2b疫苗免疫保护效力评估提供了科学有效方法。用抗原含量为2×105.0TCID50/mL的嵌合型PCV1-2b灭活疫苗和2×104.0TCID50/mL的嵌合型PCV1-2b活疫苗分别免疫商品猪,并以商品化PCV2b全病毒灭活疫苗作对照,评估两种疫苗的免疫保护效力。结果显示,免疫组试验猪均能迅速产生体液免疫反应,活疫苗免疫猪血清抗体和中和抗体产生更早,高水平抗体维持时间更长。TaqMan荧光定量PCR检测攻毒后血清和腹股沟淋巴结PCV2 DNA拷贝数,结果攻毒对照试验猪血清和腹股沟淋巴结检测到大量的PCV2核酸载量,活疫苗组攻毒后21d能完全消除PCV2增殖,而灭活疫苗组有1头猪血清样品检测到PCV2核酸(105.55copies/mL);灭活疫苗和活疫苗组均有2头试验猪腹股沟淋巴结检测到PCV2 DNA载量(108.28、107.50 copies/g和105.93、105.57copies/g),嵌合型PCV1-2b活疫苗组低于灭活疫苗组,但差异不显着(P>0.05)。病理组织学观察结果显示,攻毒对照猪可见严重的间质性支气管肺炎病变,淋巴结出现淋巴细胞缺失和组织细胞浸润等病理损伤,IHC检测呈PCV2抗原阳性,而免疫组病变比攻毒对照组轻微。PCV2可通过口、鼻、粪尿等排泄物进行传播,将病毒液接种试验猪后发现,攻毒对照猪鼻拭子和肛拭子样品中PCV2核酸载量显着高于免疫组试验猪(P<0.05)。因此,嵌合型PCV1-2b灭活疫苗和活疫苗能够诱导机体产生有效的免疫保护,降低PCV2水平传播的风险,可作为防控PCV2感染的候选疫苗。3.嵌合型PCV1-2b灭活疫苗免疫母猪对所产仔猪免疫保护作用嵌合型PCV1-2b灭活疫苗对断奶仔猪的免疫保护效力已经在第二章得到证实,本研究将制备的嵌合型PCV1-2b灭活疫苗免疫妊娠母猪,对其所产14日龄,28日龄和42日龄仔猪进行攻毒,评价新生仔猪的被动免疫保护效力。结果显示14日龄仔猪攻毒前母源抗体滴度最高,平均值为1：300,28日龄和42日龄仔猪血清抗体水平逐渐下降,平均值分别为1：133和1：70,至49日龄时血清中几乎无母源抗体。14日龄仔猪仅在攻毒后]4 d有1头猪血清中检测到低拷贝数的病毒载量(104.90copies/mL),淋巴结观察到轻微的淋巴细胞缺失,IHC检测为阴性；28日龄仔猪母源抗体较低,PCV2攻毒后14 d和21 d分别有2头猪出现不同程度的病毒血症(分别为105.36copies/mL、106.39copies/mL和107.84 copies/mL、107.90 copies/mL)；42日龄仔猪攻毒后,PCV2在体内的增殖得不到有效抑制,攻毒后7d血清中有1头猪检测到PCV2核酸拷贝数,21 d的血清和淋巴结病毒载量接近攻毒组水平,平均值分别达10631 copies/mL和1010.77copies/g,组织病理学发现淋巴细胞流失严重并伴有巨噬细胞浸润,IHC检测到棕黄色阳性细胞。因此,本研究证明了嵌合型PCV1-2b灭活疫苗免疫妊娠母猪,14日龄仔猪获得良好的保护效力,28和42日龄仔猪被动免疫保护降低：将仔猪的首免日期定在28日龄左右。4.嵌合型PCV1-2b 1B和1C亚型灭活疫苗免疫保护效力比较本研究以本室保存的pSK-sPCV1-2b 1C重组质粒为骨架,构建pSK-dPCV1-2b 1B感染性克隆,电穿孔转染法拯救嵌合型PCV1-2b 1B病毒,动物试验评价两种嵌合型PCV1-2b灭活疫苗免疫保护效力的差异。生长动力学显示,两株嵌合型PCV1-2b呈现相似的增殖特性。试验猪免疫后产生快速的体液免疫应答,能显着降低机体PCV2病毒载量,但免疫组之间无显着差异(P>0.05)。嵌合型PCV1-2b 1B灭活疫苗诱导的荧光抗体和中和抗体略高,血清病毒含量较低,在攻毒后14 d和21d能完全抑制PCV2b曾殖,腹股沟淋巴结不携带PCV2b核酸,IHC检测呈阴性；嵌合型PCV1-2b 1C灭活疫苗组攻毒后21 d不能完全抑制病毒增殖,1头猪血清中检测到病毒载量(105.75copies/mL);腹股沟淋巴结亦有1头猪可检测到PCV2b核酸(108.16copies/g), IHC检测呈弱阳性,并出现轻微的病理损伤。鼻拭子和肛拭子病毒含量显示攻毒猪排毒量与血清中病毒核酸载量呈正相关,免疫组PCV2b病毒核酸载量显着低于攻毒对照组(P<0.05)。因此,不同的Cap蛋白对嵌合病毒的增殖特性无明显影响,断奶仔猪接种嵌合型PCV1-2b 1B和1C灭活疫苗获得的免疫保护效力无显着差异。(本文来源于《扬州大学》期刊2015-09-01）
李基棕,俞天奇,周金柱,张飞鹏,高崧[8]（2014）在《Dulac细胞和PK-15细胞拯救嵌合型猪圆环病毒PCV1-2的转染方法优化》一文中研究指出引言猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)等相关疾病的重要病原。1991年该病在加拿大猪场暴发,我国于2000年证实有该病存在,自2004年PCV2灭活疫苗上市以来,疫苗防控猪圆环病毒相关疾病取得了巨大成就~([1,2])。本研究通过优化脂质体转染法和电穿孔转染法,将实验室构建的重组pSK-dPCV1-2质粒分别转染Dulac细胞和PK-15细胞,旨在提高嵌合型猪圆环病毒(本文来源于《中国畜牧兽医学会2014年学术年会论文集》期刊2014-11-08）
闫若潜,王东方,吴志明,李桂喜,刘淑敏[9]（2014）在《猪圆环病毒2型ORF2/猪白介素2嵌合表达质粒在猪体内诱导的保护性免疫反应》一文中研究指出为探讨猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2/猪白介素-2(PoIL-2)嵌合重组表达质粒(rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2)在猪体内的免疫效果和免疫保护效果进而研制高效PCV2核酸疫苗,将35只10日龄健康仔猪平均分成7组分别以rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2重组表达质粒或PCV2ORF2基因原核表达的rCap蛋白进行免疫及免疫保护试验。共进行4次肌肉注射免疫,每次间隔2周;于第4次免疫后3周通过口腔和鼻腔途径感染PCV2细胞强毒。分别于第4次免疫后和攻毒后不同时间通过检测免疫猪血清抗体水平和外周血T淋巴细胞增殖活性、辅助性T细胞(Th)和细胞毒性T细胞(Tc)亚群的百分含量、排毒率和病毒血症阳性维持时间等指标以评价其免疫和免疫保护效果。结果表明,各免疫组猪均产生了抗PCV2特异性ELISA免疫抗体,但rCap蛋白免疫组猪抗体水平较低;rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒对猪体的免疫和免疫保护效果显着优于rpcDNA3.1/ORF2质粒;在rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒或rpcDNA3.1/ORF2质粒中添加rCap蛋白对重组质粒免疫及免疫保护效果无明显影响。因此,选取rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒为下一步研制PCV2核酸疫苗的主要成分。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2014年02期）
汪正亮,周金柱,王小波,李基棕,高杏[10]（2013）在《嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)灭活苗对商品猪免疫保护效力的研究》一文中研究指出运用多功能细胞电穿孔仪将本实验室构建的重组pSK-dPCV1-2质粒转染Dulac细胞,传代培养后获得具有稳定感染细胞的重组嵌合型猪圆环病毒PCV1-2。将该重组病毒灭活后与ISA 206VG佐剂乳化制成灭活苗,通过免疫效力试验来评价该疫苗的免疫保护效力。将42日龄PCV2母源抗体水平较低的20头商品猪随机分成4组,另外2头作为健康对照组。分2次免疫,通过检测不同时间的间接免疫荧光抗体滴度、中和抗体滴度、平均日增重、攻毒后病毒血症以及解剖后病理变化和组织中的病毒载量等各项指标评价疫苗的免疫保护效果。结果显示:二免后14d,所有免疫组试验猪都表现为PCV2血清学阳性,且中和抗体水平在1/15~1/20。在猪的增重方面,免疫组猪和健康对照组猪的体重都有增加,而攻毒对照组猪的体重没有增加,且3个免疫组和攻毒对照组之间平均日增重差异显着(P<0.05)。攻毒后21d扑杀试验猪,免疫组猪的淋巴结和各脏器的大体和显微病变都比攻毒对照组轻微。攻毒对照组的淋巴结出现多核巨细胞和嗜酸性粒细胞,且有多量的淋巴细胞缺失,免疫组未见多核巨细胞,淋巴细胞缺失也较少。淋巴结中PCV2病毒载量的log10在攻毒对照组为5.566±0.432,在104.0、105.0、106.0 TCID50·mL-1免疫组分别为4.469±1.023、4.434±0.716、3.521±0.958,其中105.0、106.0 TCID50·mL-1免疫组与攻毒对照组差异显着(P<0.05),但是,试验期间各试验组和健康对照组均未观察到明显的类似PMWS的临床症状。断奶仔猪免疫105.0 TCID50·mL-1以上嵌合型猪圆环病毒PCV1-2灭活苗可以有效地抵抗PCV2b/1B/Jiangsu/Jingjiang/2012/11/08病毒感染。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2013年12期）
嵌合型猪圆环病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的乳酸乳球菌中表达猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)ORF2与猪繁殖及呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)ORF5的嵌合抗原表位。方法按乳酸乳球菌密码子使用偏好设计并合成PCV2 ORF2及PRRSV ORF5的串联抗原表位基因,插入至乳酸菌表达质粒p NZ8148,构建重组表达质粒,转化乳酸乳球菌NZ9000中,经乳酸菌素(nisin)诱导表达嵌合蛋白,采用Ni-NTA亲和层析纯化,进行12%SDS-PAGE分析。结果重组表达质粒经双酶切鉴定,构建正确。嵌合蛋白相对分子质量约25 000,在乳酸乳球菌中主要以可溶性形式表达,纯化后纯度达96%以上,浓度约1 mg/m L,产量可达60 mg/L细菌培养物。结论 PCV2ORF2与PRRSV ORF5的嵌合抗原表位在乳酸乳球菌中得到高效可溶性表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
嵌合型猪圆环病毒论文参考文献
[1].田汝亮.江苏部分地区猪圆环病毒2型的分离鉴定及嵌合型PCV1-2活疫苗免疫持续期的初步研究[D].扬州大学.2019
[2].沈克飞,杨柳,杨睿,周雪,张素辉.猪圆环病毒2型ORF2与猪繁殖及呼吸综合征病毒ORF5嵌合抗原表位在乳酸乳球菌中的表达[J].中国生物制品学杂志.2019
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标签：猪圆环病毒2型; 分离鉴定; 嵌合型PCV1-2活疫苗; TaqMan荧光定量PCR;