本文主要研究内容
作者赵思捷,朱文琦,孙杰,侯俊,王友亮,李永利,李波,鲍春梅,张浩,李伯安（2019）在《一种具有G418抗性筛选标记的慢病毒RNA干扰表达载体的构建及应用》一文中研究指出：目的:构建具有新霉素抗性筛选标记的RNA干扰慢病毒表达载体,并检测它对乙型肝炎病毒x基因(HBx mRNA表达的抑制作用。方法:从pcDNA3.0载体中扩增新霉素抗性基因并插入删除嘌呤霉素编码序列的pLKO载体中;将改构的RNA干扰载体包装成慢病毒后感染肝癌细胞HepG2,并检测感染细胞对G418的抵抗作用;为验证改构RNA干扰载体的有效性,设计了2条针对HBx的RNA干扰序列以及针对编码萤光素酶cDNA的干扰序列并插入该载体,将含新霉素筛选标记的HBx的RNA干扰载体与辅助质粒在293T细胞中包装成慢病毒并感染过表达HBx的HepG2(嘌呤霉素抗性)细胞,运用G418筛选出稳定混合克隆,提取细胞总RNA,运用RT-qPCR检测其在HepG2细胞中对HBx RNA表达的抑制作用。结果:构建的载体与辅助质粒包装出的慢病毒感染肝癌细胞后,细胞获得G418抗性;HBx RNA干扰序列克隆入该载体可有效抑制肝癌细胞中过量表达的HBx mRNA。结论:构建了具有新霉素抗性筛选标记的RNA干扰慢病毒表达载体,运用该载体可有效筛选出抑制目的基因表达的G418抗性的稳定细胞株。
Abstract
mu de :gou jian ju you xin mei su kang xing shai shua biao ji de RNAgan rao man bing du biao da zai ti ,bing jian ce ta dui yi xing gan yan bing du xji yin (HBx mRNAbiao da de yi zhi zuo yong 。fang fa :cong pcDNA3.0zai ti zhong kuo zeng xin mei su kang xing ji yin bing cha ru shan chu piao ling mei su bian ma xu lie de pLKOzai ti zhong ;jiang gai gou de RNAgan rao zai ti bao zhuang cheng man bing du hou gan ran gan ai xi bao HepG2,bing jian ce gan ran xi bao dui G418de di kang zuo yong ;wei yan zheng gai gou RNAgan rao zai ti de you xiao xing ,she ji le 2tiao zhen dui HBxde RNAgan rao xu lie yi ji zhen dui bian ma ying guang su mei cDNAde gan rao xu lie bing cha ru gai zai ti ,jiang han xin mei su shai shua biao ji de HBxde RNAgan rao zai ti yu fu zhu zhi li zai 293Txi bao zhong bao zhuang cheng man bing du bing gan ran guo biao da HBxde HepG2(piao ling mei su kang xing )xi bao ,yun yong G418shai shua chu wen ding hun ge ke long ,di qu xi bao zong RNA,yun yong RT-qPCRjian ce ji zai HepG2xi bao zhong dui HBx RNAbiao da de yi zhi zuo yong 。jie guo :gou jian de zai ti yu fu zhu zhi li bao zhuang chu de man bing du gan ran gan ai xi bao hou ,xi bao huo de G418kang xing ;HBx RNAgan rao xu lie ke long ru gai zai ti ke you xiao yi zhi gan ai xi bao zhong guo liang biao da de HBx mRNA。jie lun :gou jian le ju you xin mei su kang xing shai shua biao ji de RNAgan rao man bing du biao da zai ti ,yun yong gai zai ti ke you xiao shai shua chu yi zhi mu de ji yin biao da de G418kang xing de wen ding xi bao zhu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自生物技术通讯的赵思捷,朱文琦,孙杰,侯俊,王友亮,李永利,李波,鲍春梅,张浩,李伯安，发表于刊物生物技术通讯2019年04期论文，是一篇关于抗性论文,慢病毒载体论文,干扰论文,乙型肝炎病毒基因论文,生物技术通讯2019年04期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自生物技术通讯2019年04期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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