本文主要研究内容
作者毛芸（2019）在《类弹性蛋白-表皮生长因子（ELPs-EGF）融合蛋白的制备及其对皮肤损伤修复的影响》一文中研究指出：表皮生长因子（Epidermal growth factor,EGF）是由53个氨基酸组成、分子量为6.2kD的小分子多肽,具有极好的稳定性,能与人体内的各种酶相互作用产生良好的协调效应,可以促进肝细胞上皮细胞分裂和增殖,可加快皮肤的代谢而促进上皮再生,对生殖系统、消化系统和神经系统均有明显调控作用。而类弹性蛋白（Elastin-Like Polypeptides,ELPs）是一种通过基因工程技术将弹性蛋白VPGVG基序重组形成的结构为（VPGXG）n的蛋白质（X为除了Pro外的任意一种氨基酸）。ELPs有良好的生物相容性和低免疫原性,在体内可以降解为天然氨基酸。另外,ELPs具有特定的相转变温度,可在特定温度下形成水凝胶,被认为是一种比较理想的药物释放载体。天然多功能蛋白的结构给予了研究者设计灵感,利用基因工程技术将具有不同功能的多肽编码基因重组在一起,制备出具有多功能的融合蛋白。据文献报道,将类弹性蛋白与生物活性多肽融合后,重建的蛋白兼具ELPs的活性和多肽的活性。因此,本研究利用基因重组技术将类弹性蛋白与人表皮生长因子融合,以期获得同时具有类弹性蛋白与表皮生长因子性能的融合蛋白,为新型组织工程材料的研发奠定基础。获得结果如下:1.利用定向递归连接（RDL）技术获得氨基酸序列为[（VPGVG）10VPGKG]5的ELP50,将其与EGF融合,构建出pET28a-ELP50和pET28a-ELP50-EGF表达载体。导入pET28a-ELP50和pET28a-ELP50-EGF表达载体的大肠杆菌BL21（DE3）可在IPTG诱导下过表达重组蛋白ELP50和ELP50-EGF。2.采用可逆相变循环（ITC）处理经冷热交替粗纯的ELP50可获得纯度高达90%以上的重组ELP50;采用镍柱亲和层析法纯化ELP50-EGF重组蛋白,所得蛋白纯度高达90%以上。3.小鼠成纤维细胞L929细胞增殖实验结果显示:细胞生长48 h时ELP50-EGF细胞增殖效果与CA、ELP50和EGF处理组都没有显著性差异;72h时ELP50-EGF的细胞增殖效果与PBS组（p<0.001）、与CA组（p<0.001）、与ELP50组（p<0.01）、与EGF组（p<0.05）均存在显著性差异。4.昆明小鼠皮肤缺损修复实验结果显示:12天时各组小鼠皮肤损伤基本修复,16天时完全修复,ELP50-EGF组较各对照组具有明显的促进愈合作用。组织切片染色结果显示,ELP50-EGF组的皮肤修复较快,表皮层明显且薄厚均匀,表皮细胞数目较多。统计分析结果显示,ELP50-EGF组小鼠皮肤缺损修复的组织表皮厚度与Control（未处理组）、CA、ELP50、EGF组均存在极显著性差异（p<0.001）;真皮层修复也较好,有大量胶原纤维聚集。结论:ELP50-EGF融合蛋白对L929细胞增殖具有明显的促进作用;对小鼠皮肤损伤有较好的修复效果。
Abstract
biao pi sheng chang yin zi （Epidermal growth factor,EGF）shi you 53ge an ji suan zu cheng 、fen zi liang wei 6.2kDde xiao fen zi duo tai ,ju you ji hao de wen ding xing ,neng yu ren ti nei de ge chong mei xiang hu zuo yong chan sheng liang hao de xie diao xiao ying ,ke yi cu jin gan xi bao shang pi xi bao fen lie he zeng shi ,ke jia kuai pi fu de dai xie er cu jin shang pi zai sheng ,dui sheng shi ji tong 、xiao hua ji tong he shen jing ji tong jun you ming xian diao kong zuo yong 。er lei dan xing dan bai （Elastin-Like Polypeptides,ELPs）shi yi chong tong guo ji yin gong cheng ji shu jiang dan xing dan bai VPGVGji xu chong zu xing cheng de jie gou wei （VPGXG）nde dan bai zhi （Xwei chu le Prowai de ren yi yi chong an ji suan ）。ELPsyou liang hao de sheng wu xiang rong xing he di mian yi yuan xing ,zai ti nei ke yi jiang jie wei tian ran an ji suan 。ling wai ,ELPsju you te ding de xiang zhuai bian wen du ,ke zai te ding wen du xia xing cheng shui ning jiao ,bei ren wei shi yi chong bi jiao li xiang de yao wu shi fang zai ti 。tian ran duo gong neng dan bai de jie gou gei yu le yan jiu zhe she ji ling gan ,li yong ji yin gong cheng ji shu jiang ju you bu tong gong neng de duo tai bian ma ji yin chong zu zai yi qi ,zhi bei chu ju you duo gong neng de rong ge dan bai 。ju wen suo bao dao ,jiang lei dan xing dan bai yu sheng wu huo xing duo tai rong ge hou ,chong jian de dan bai jian ju ELPsde huo xing he duo tai de huo xing 。yin ci ,ben yan jiu li yong ji yin chong zu ji shu jiang lei dan xing dan bai yu ren biao pi sheng chang yin zi rong ge ,yi ji huo de tong shi ju you lei dan xing dan bai yu biao pi sheng chang yin zi xing neng de rong ge dan bai ,wei xin xing zu zhi gong cheng cai liao de yan fa dian ding ji chu 。huo de jie guo ru xia :1.li yong ding xiang di gui lian jie （RDL）ji shu huo de an ji suan xu lie wei [（VPGVG）10VPGKG]5de ELP50,jiang ji yu EGFrong ge ,gou jian chu pET28a-ELP50he pET28a-ELP50-EGFbiao da zai ti 。dao ru pET28a-ELP50he pET28a-ELP50-EGFbiao da zai ti de da chang gan jun BL21（DE3）ke zai IPTGyou dao xia guo biao da chong zu dan bai ELP50he ELP50-EGF。2.cai yong ke ni xiang bian xun huan （ITC）chu li jing leng re jiao ti cu chun de ELP50ke huo de chun du gao da 90%yi shang de chong zu ELP50;cai yong nie zhu qin he ceng xi fa chun hua ELP50-EGFchong zu dan bai ,suo de dan bai chun du gao da 90%yi shang 。3.xiao shu cheng qian wei xi bao L929xi bao zeng shi shi yan jie guo xian shi :xi bao sheng chang 48 hshi ELP50-EGFxi bao zeng shi xiao guo yu CA、ELP50he EGFchu li zu dou mei you xian zhe xing cha yi ;72hshi ELP50-EGFde xi bao zeng shi xiao guo yu PBSzu （p<0.001）、yu CAzu （p<0.001）、yu ELP50zu （p<0.01）、yu EGFzu （p<0.05）jun cun zai xian zhe xing cha yi 。4.kun ming xiao shu pi fu que sun xiu fu shi yan jie guo xian shi :12tian shi ge zu xiao shu pi fu sun shang ji ben xiu fu ,16tian shi wan quan xiu fu ,ELP50-EGFzu jiao ge dui zhao zu ju you ming xian de cu jin yu ge zuo yong 。zu zhi qie pian ran se jie guo xian shi ,ELP50-EGFzu de pi fu xiu fu jiao kuai ,biao pi ceng ming xian ju bao hou jun yun ,biao pi xi bao shu mu jiao duo 。tong ji fen xi jie guo xian shi ,ELP50-EGFzu xiao shu pi fu que sun xiu fu de zu zhi biao pi hou du yu Control（wei chu li zu ）、CA、ELP50、EGFzu jun cun zai ji xian zhe xing cha yi （p<0.001）;zhen pi ceng xiu fu ye jiao hao ,you da liang jiao yuan qian wei ju ji 。jie lun :ELP50-EGFrong ge dan bai dui L929xi bao zeng shi ju you ming xian de cu jin zuo yong ;dui xiao shu pi fu sun shang you jiao hao de xiu fu xiao guo 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自西北大学的毛芸，发表于刊物西北大学2019-10-11论文，是一篇关于可逆相变循环论文,纯化论文,上皮细胞论文,西北大学2019-10-11论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自西北大学2019-10-11论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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