本文主要研究内容
作者陶蓉,李慧,孙宇航,于晓航,朱晗,郝德君（2019）在《美国白蛾内参基因的鉴定及筛选》一文中研究指出：【目的】为筛选美国白蛾在不同温度处理、不同发育阶段、幼虫不同组织中稳定的内参基因,为美国白蛾相关的基因定量研究奠定基础。【方法】在美国白蛾转录组测序结果中筛选出8个候选内参基因GAPDH、ACT、RPL12、RPL18a、RPS16、EF1α、EF1β、18S rRNA,获得碱基序列。将以上序列进行克隆、测序、比对最终证明其为美国白蛾的基因且碱基序列正确,之后将其上传到NCBI获得登录号。设计以上8个候选内参基因的实时荧光定量PCR（qRT-PCR）引物,利用qRT-PCR技术测定8个候选内参基因在美国白蛾不同发育阶段（幼虫1～6龄）、不同温度处理下（-10、-5、0、25、35、40、45℃处理2 h）、幼虫的不同组织（头、肠道、脂肪体、马氏管、表皮）中的表达量,记录Ct值;然后通过ΔCt法、GeNorm、NormFinder和BestKeeper共4种方法对8个候选内参基因在不同条件下的Ct值进行统计分析,最后综合RelFinder选出最稳定的内参基因。通过GeNorm计算Vn/（n+1）最合适内参基因的数目。【结果】Ct分析表明,在不同发育阶段和在不同温度处理下表达最稳定的是RPL12;在幼虫不同组织中,最稳定的是RPS16。GeNorm分析结果与ΔCt分析结果相同。NormFinder分析表明,在不同的发育阶段和不同温度处理下最稳定的候选内参基因分别是RPL18a和EF1α;在幼虫组织中,最稳定的是ACT。BestKeeper分析认为,不同发育阶段,ACT、GAPDH不适合作为内参基因;不同温度处理下,ACT、RPL18a、RPL12、RPS16、EF1β不适合作为内参基因;在不同幼虫组织中,RPL18a、EF1α、EF1β、18S rRNA不适合作为内参基因。最后RelFinder综合评价显示,在不同的发育阶段最稳定的内参基因组合是RPL12和EF1β,最不稳定的是ACT;在不同的温度处理下,最稳定的内参基因组合是EF1α和GAPDH,最不稳定的是ACT;在不同组织中,最稳定的组合是ACT和RPS16,最不稳定的是RPL18a。经GeNorm软件计算,最合适的内参基因数目应该是2个。【结论】在美国白蛾不同发育阶段的基因定量研究中,建议以RPL12和EF1β作为内参基因;在不同温度处理的基因定量研究中,建议以EF1α和GAPDH作为内参基因;在幼虫不同组织的基因定量研究中,建议以ACT和RPS16作为内参基因。此外,亦初步说明了昆虫内参基因在不同试验条件下的不稳定性。
Abstract
【mu de 】wei shai shua mei guo bai e zai bu tong wen du chu li 、bu tong fa yo jie duan 、you chong bu tong zu zhi zhong wen ding de nei can ji yin ,wei mei guo bai e xiang guan de ji yin ding liang yan jiu dian ding ji chu 。【fang fa 】zai mei guo bai e zhuai lu zu ce xu jie guo zhong shai shua chu 8ge hou shua nei can ji yin GAPDH、ACT、RPL12、RPL18a、RPS16、EF1α、EF1β、18S rRNA,huo de jian ji xu lie 。jiang yi shang xu lie jin hang ke long 、ce xu 、bi dui zui zhong zheng ming ji wei mei guo bai e de ji yin ju jian ji xu lie zheng que ,zhi hou jiang ji shang chuan dao NCBIhuo de deng lu hao 。she ji yi shang 8ge hou shua nei can ji yin de shi shi ying guang ding liang PCR（qRT-PCR）yin wu ,li yong qRT-PCRji shu ce ding 8ge hou shua nei can ji yin zai mei guo bai e bu tong fa yo jie duan （you chong 1～6ling ）、bu tong wen du chu li xia （-10、-5、0、25、35、40、45℃chu li 2 h）、you chong de bu tong zu zhi （tou 、chang dao 、zhi fang ti 、ma shi guan 、biao pi ）zhong de biao da liang ,ji lu Ctzhi ;ran hou tong guo ΔCtfa 、GeNorm、NormFinderhe BestKeepergong 4chong fang fa dui 8ge hou shua nei can ji yin zai bu tong tiao jian xia de Ctzhi jin hang tong ji fen xi ,zui hou zeng ge RelFindershua chu zui wen ding de nei can ji yin 。tong guo GeNormji suan Vn/（n+1）zui ge kuo nei can ji yin de shu mu 。【jie guo 】Ctfen xi biao ming ,zai bu tong fa yo jie duan he zai bu tong wen du chu li xia biao da zui wen ding de shi RPL12;zai you chong bu tong zu zhi zhong ,zui wen ding de shi RPS16。GeNormfen xi jie guo yu ΔCtfen xi jie guo xiang tong 。NormFinderfen xi biao ming ,zai bu tong de fa yo jie duan he bu tong wen du chu li xia zui wen ding de hou shua nei can ji yin fen bie shi RPL18ahe EF1α;zai you chong zu zhi zhong ,zui wen ding de shi ACT。BestKeeperfen xi ren wei ,bu tong fa yo jie duan ,ACT、GAPDHbu kuo ge zuo wei nei can ji yin ;bu tong wen du chu li xia ,ACT、RPL18a、RPL12、RPS16、EF1βbu kuo ge zuo wei nei can ji yin ;zai bu tong you chong zu zhi zhong ,RPL18a、EF1α、EF1β、18S rRNAbu kuo ge zuo wei nei can ji yin 。zui hou RelFinderzeng ge ping jia xian shi ,zai bu tong de fa yo jie duan zui wen ding de nei can ji yin zu ge shi RPL12he EF1β,zui bu wen ding de shi ACT;zai bu tong de wen du chu li xia ,zui wen ding de nei can ji yin zu ge shi EF1αhe GAPDH,zui bu wen ding de shi ACT;zai bu tong zu zhi zhong ,zui wen ding de zu ge shi ACThe RPS16,zui bu wen ding de shi RPL18a。jing GeNormruan jian ji suan ,zui ge kuo de nei can ji yin shu mu ying gai shi 2ge 。【jie lun 】zai mei guo bai e bu tong fa yo jie duan de ji yin ding liang yan jiu zhong ,jian yi yi RPL12he EF1βzuo wei nei can ji yin ;zai bu tong wen du chu li de ji yin ding liang yan jiu zhong ,jian yi yi EF1αhe GAPDHzuo wei nei can ji yin ;zai you chong bu tong zu zhi de ji yin ding liang yan jiu zhong ,jian yi yi ACThe RPS16zuo wei nei can ji yin 。ci wai ,yi chu bu shui ming le kun chong nei can ji yin zai bu tong shi yan tiao jian xia de bu wen ding xing 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自林业科学的陶蓉,李慧,孙宇航,于晓航,朱晗,郝德君，发表于刊物林业科学2019年09期论文，是一篇关于内参基因论文,基因筛选论文,林业科学2019年09期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自林业科学2019年09期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：内参基因论文; 基因筛选论文; 林业科学2019年09期论文;