导读:本文包含了间接检测方法论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:氯丙那林,半抗原,单克隆抗体,酶联免疫吸附实验
间接检测方法论文文献综述
刘明刚,刘睿,王战辉,沈建忠[1]（2019）在《氯丙那林单克隆抗体的制备及其间接竞争ELISA检测方法的建立》一文中研究指出[目的]氯丙那林是一种选择性β_2-受体激动剂类药物,是国家明令禁止用于所有食品动物促生长的药物之一,对其进行灵敏、快速检测是控制其非法使用的重要手段。本研究的目的是设计合成氯丙那林半抗原、全抗原,制备高亲和力氯丙那林单克隆抗体,并建立可用于检测氯丙那林残留的间接竞争ELISA检测方法。[方法]以2-氯苯甲醛为原料分别合成氯丙那林半抗原CLP-1、CLP-2和CLP-3。通过碳二亚胺法将半抗原分别与钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵白蛋白(OVA)进行偶联,将人工抗原CLP-1/2/3-KLH/BSA免疫雌性Balb/c小鼠,检测血清效价和抑制,使用杂交瘤细胞筛选技术获得细胞株,通过小鼠体内诱生法制备单抗。分别以CLP-1/2/3-BSA/OVA为包被原,优化ELISA条件,建立间接竞争ELISA检测方法。[结果]半抗原CLP-1/2/3经质谱和核磁鉴定,叁种半抗原均合成成功,全抗原CLP-1/2/3-BSA经MALDI-TOF鉴定合成成功,CLP-1/2/3-KLH/OVA全抗原经抗体检测鉴定合成成功。小鼠经免疫并筛选,获得单克隆抗体10B10,经鉴定该抗体重链亚型为IgG1,轻链亚型为kappa。ELISA优化结果显示,单克隆抗体最佳稀释倍数为1:100000,最佳包被原为CLP-3-BSA,最佳包被浓度为0.02μg/ml,最佳反应温度为25℃,最佳反应PBS缓冲液盐离子浓度为250mM,抗体对氯丙那林的半数抑制浓度(IC_(50))为0.068μg/L,R~2=0.99898,线性范围为0.026μg/L/L-0.177μg/L/L,对妥布特罗、克伦特罗、溴布特罗、奇帕特罗、莱克多巴胺、马布特罗的交叉反应率为147.8%,1.09%,0.56%,0.36%,0.26%,0.10%。[结论]成功合成了3种氯丙那林新型半抗原,制备出了高亲和力单克隆抗体,可耐受250mM缓冲溶液。建立了快速、灵敏的间接竞争ELISA检测方法,为检测动物源性食品中氯丙那林残留奠定了基础,具有一定的研究价值和应用价值。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会第十五次学术交流会论文集》期刊2019-12-12）
锡林高娃,韩甫鑫,杜长智,布日额[2]（2019）在《牛源无乳链球菌菌毛岛屿AP2蛋白抗原优势区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立》一文中研究指出目的构建牛源无乳链球菌AP2蛋白原核表达质粒,表达AP2蛋白,并以此为包被抗原建立检测无乳链球菌抗体的ELISA方法。方法取pMD18-T-AP2和pET-30a(+)分别进双酶切,酶切片段连接后转染BL21(DE3)细胞,进行AP2的诱导表达及鉴定。以重组AP2为抗原建立检测无乳链球菌抗体的ELISA方法,并用无乳链球菌、化脓性链球菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌感染兔血清进行检测。结果双酶切及PCR鉴定重组质粒构建正确。Western blot分析表明重组AP2蛋白具有反应原性,建立的间接ELISA抗原最佳包被浓度为25μg/ml,血清最佳稀释度为1∶160,酶标二抗最适稀释度为1∶70。抗体滴度检测显示重组AP2具有良好的免疫原性,3次免疫(56 d)的兔血清抗体滴度达1∶10 000。用该方法检测化脓性链球菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌感染兔血清,均未出现交叉阳性反应。结论成功表达了重组无乳链球菌菌毛岛屿AP2蛋白,建立的间接ELISA方法稳定性高,特异性良好,可用于无乳链球菌感染检测。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2019年10期）
涂光岚,奉竹,桑益旸,李思思,王恒安[3]（2019）在《猪流行性腹泻病毒血清IgG间接ELISA检测方法的建立》一文中研究指出以大肠杆菌表达系统制备的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)中和抗原S1D(1μg/mL)每孔100μL进行包被,利用HRP-兔抗猪IgG(1∶20 000)建立了检测猪血清中抗PEDV IgG的间接ELISA方法。阴性判断临界值(M+2SD)为0.632,批内和批间检测的平均变异系数分别为2.3%和3.1%,该方法与商品化的PEDV抗体间接ELISA检测试剂盒同时检测50份临床血清样品,均为阳性,上述结果表明该方法可用于PEDV血清IgG的临床检测。(本文来源于《上海交通大学学报(农业科学版)》期刊2019年05期）
范慧,曾洁,李亮,李仕海,张盼盼[4]（2019）在《塞内卡病毒A(SVA) VP1间接ELISA抗体检测方法的建立及应用》一文中研究指出为建立快速检测塞内卡病毒A (Senecavirus A,SVA)血清学方法,以纯化的重组VP1蛋白作为包被抗原,建立了SVA VP1间接ELISA抗体检测方法。结果表明,VP1蛋白以包涵体形式表达,纯化后的蛋白经Western blot鉴定具有较好的反应原性。该ELISA检测方法阴、阳性临界值为0.278,与口蹄疫病毒(FMDV)、脑心肌炎病毒(EMCV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等猪常见病原阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性。批内和批间重复性试验的变异系数均小于13%,表明该方法重复性和稳定性均较好。相比于血清中和试验(SN),该方法的相对敏感性为98.0%,两种方法的符合率为84%。用该方法对来自山东、广东省的8个猪场的276份血清进行检测,阳性率为22.1%。SVA VP1间接ELISA抗体检测法可作为一种快速、简便的血清学诊断方法,用于猪群SVA感染监测和流行病学初步调查。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年10期）
杨朋霞,闫若潜,王华俊,马震原,王淑娟[5]（2019）在《基于猪流行性腹泻病毒N蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用》一文中研究指出为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株间接ELISA抗体检测方法,本研究通过RT-PCR方法扩增PEDV变异强毒株N基因并克隆至pQE30载体后进行原核表达,对表达的蛋白进行纯化和鉴定。用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,通过矩阵法优化ELISA反应条件,建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法,并对其进行特异性、敏感性和重复性试验。对500份来源于不同猪场的临床血清样品进行检测,并将检测结果与进口商品化试剂盒比较。结果显示,表达的重组蛋白约为50.4 ku,western blot结果表明其反应原性良好。该ELISA方法的最优反应条件为:重组N蛋白最佳包被浓度为2μg/m L;血清最佳稀释度为1∶100,作用时间1 h;羊抗猪HRP-Ig G最适稀释度为1∶5 000,作用时间为30 min;TMB最佳显色时间为10 min。该方法可特异性检测PEDV抗体,而与PRV、PRRSV、CSFV、PCV、TGEV等病原的阳性血清均无交叉反应;该方法检测出阳性血清的最高稀释倍数与中和试验结果基本一致,具有较高的敏感性;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,具有较好的重复性和稳定性。对500份临床猪血清的检测结果,与进口商品化试剂盒检测结果相比符合率为99.6%。本研究为PEDV抗体检测提供了一种有效的血清学方法。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年10期）
王瑞,曹旭敏,徐军,李锐,高海侠[6]（2019）在《β_2-受体激动剂类药物多残留间接竞争ELISA检测方法的建立》一文中研究指出[目的]β_2-受体激动剂是一类人工合成的苯乙醇胺衍生物,临床上用作止喘药,常被非法用作动物饲料添加剂以提高酮体瘦肉率和蛋白质含量。人们长期食用β_2-受体激动剂残留的动物源性食品后,会使其在体内不断蓄积,严重者可导致死亡。因此,加强对β_2-受体激动剂药物多残留监测,建立快速、灵敏、可靠的检测方法显得非常必要。[方法]以沙丁胺醇多克隆抗体为基础,通过对抗原与抗体最佳工作浓度、最佳工作时间、最佳包被时间以及最佳工作温度进行研究,确定了icELISA的最佳反应条件。在最优反应条件下包被抗原,加入β_2-受体激动剂,药物与抗原可竞争性地与抗体结合,得到可与其特异性识别的12种药物,即:沙丁胺醇、卡布特罗、西布特罗、克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、克伦潘特、可尔特罗、吡布特罗、马喷特罗、比托特罗和妥布特罗。根据交叉反应实验得到OD_(450nm),利用Origin 8.0软件拟合得到IC_(50);选择可特异性识别的12种药物,通过对20份空白猪尿重复测定,得到检测限与定量限;添加药物标准溶液,测定线性范围、回收率、变异系数等指标;通过对基质效应的研究,判定所建立的酶联免疫方法的灵敏度与重现性,实现多残留检测。[结果]icELISA检测最佳反应条件为:温度37℃,包被1h,抗体作用时间40min,酶标抗体作用40min。12种β_2-受体激动剂类药物在0.1～200 ng/mL线性范围内关系良好,相关系数均大于0.952;检出限为1.5 ng/mL,定量限为5.0 ng/mL;在5.0与10 ng/mL的添加浓度下,回收率为68.4%～114.2%,批内、批间RSD分别为0.4%～10.1%和0.4%～12.5%;基质效应比为86.3%～114.0%,对结果影响不明显。[结论]所建立的icELISA方法可同时检测12种β_2-受体激动剂类药物残留,且操作简单、快速,灵敏度高。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会论文集》期刊2019-10-13）
任雪建,李秀梅,杨晓帆,李亚静,杨志[7]（2019）在《小反刍兽疫病毒间接化学发光抗体检测方法的建立与优化》一文中研究指出构建了原核表达质粒pET-28a-N,经原核表达纯化获得小反刍兽疫病毒N蛋白。将纯化的小反刍兽疫病毒N蛋白与对应的酶标二抗配对,通过对各个反应条件的优化建立了间接化学发光抗体检测方法。通过对血清样本的检测,对该方法的敏感性、特异性、重复性、符合率进行了评价。试验结果显示:N蛋白最适包被浓度为0.5μg/mL,最适包被条件为4℃24 h;酶标二抗最适工作浓度为1∶2000。特异性试验证明,该方法与羊常见病毒的抗体阳性血清没有交叉反应。通过检测大量小反刍兽疫病毒抗体阴、阳型血清,确定了科学的判定标准。(本文来源于《现代畜牧科技》期刊2019年10期）
潘明飞,李诗洁,郭丹丹,王俊平,王硕[8]（2019）在《间接竞争酶联免疫分析方法检测花生中黄曲霉毒素B_1》一文中研究指出目的:针对花生中强毒性污染物黄曲霉毒素B_1(AFB_1)建立了一种准确、灵敏的间接竞争酶联免疫分析方法(ic-ELISA)。方法:制备了AFB_1包被抗原,包被量为0.1μg/孔;抗体稀释64 000倍;选用0.1%脱脂乳粉为方法封闭液,0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4)为样品稀释液;结果:在最优的试验条件下,建立的ic-ELISA对目标物AFB1的检测线性范围为0.0097～0.088μg/L(R2=0.999);灵敏度(IC50)和检出限(IC15)分别达到0.027μg/L和0.0066μg/L。板内变异系数(n=6)为0.29%～16.9%,板间变异系数(n=6)为0.22%～21.19%。在花生样品中AFB_1的检测灵敏度(IC50)为1.04μg/kg,回收率为96.67%～106.51%。结论 :本研究建立的ic-ELISA方法操作相对简便,检测灵敏度高、准确性好,可稳定地用于花生样品中AFB_1污染物的定量分析检测。(本文来源于《中国食品学报》期刊2019年09期）
粟元文,陈俊,杨国淋,魏玲,王怀禹[9]（2019）在《猪细小病毒NS1蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及南充市猪细小病毒感染的血清学调查与分析》一文中研究指出为了建立检测猪细小病毒(PPV)野毒抗体的间接ELISA检测方法,并掌握南充市猪细小病毒的感染情况,试验以原核表达的NS1蛋白为包被抗原建立检测PPV野毒抗体的间接ELISA方法,并应用该方法对2017年采集于南充市9个区(县)的1 854份猪血清样品进行检测与分析。结果表明:建立的NS1蛋白间接ELISA方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)阳性血清和PPV疫苗免疫血清均为阴性,与HI试验的符合率达98.44%。在1 854份血清样品中共检测出PPV阳性样品349份,总阳性感染率达18.82%。其中南充市9个区县均存在PPV的感染,感染率为5.45%～36.79%;规模猪场、散养户和屠宰场的感染率分别为15.04%、26.39%和17.30%;种公猪、种母猪、后备母猪、仔猪和育肥猪的感染率分别为5.88%、24.75%、23.91%、17.38%和19.13%;自繁自养、自繁+引种、自繁+购活体、购活体4种不同繁育方式的感染率分别为13.58%、21.50%、19.77%和21.12%。说明试验成功建立了检测猪细小病毒野毒抗体的间接ELISA检测方法,且南充市养猪场普遍存在猪细小病毒的感染。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年18期）
郭东光,陈明艳,朱艳平,李鹏,岳锋[10]（2019）在《猪瘟病毒结构蛋白E0抗体间接ELISA检测方法的建立及优化》一文中研究指出为建立一种经济、可靠的猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,采用间接ELISA(E0-ELISA)方法,以在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的重组蛋白E0为包被原,优化反应条件。结果显示,优化后的E0-ELISA在包被原1.0μg/mL质量浓度下37℃包被1 h效果最佳,最佳封闭条件为5%脱脂奶粉溶液37℃作用2 h,待检血清以1∶100稀释后37℃作用60 min效果最佳,二抗以1∶5 000稀释后37℃孵育45 min效果最佳。当OD_(450)<0.370时,判断为猪血清CSFV抗体阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为1.99%～7.69%和2.16%～9.23%,表明该方法具有良好的稳定性;E0-ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)阳性血清时结果均为阴性;当CSFV阳性血清稀释至1∶640时结果仍为阳性,表明该检测方法具有良好的敏感性;与IDEXX CSFV抗体检测试剂盒相比,E0-ELISA检测符合率为92.00%,敏感性为97.86%,特异性为78.33%。综上,成功建立一种经济、稳定、特异性好和敏感性高的CSFV血清抗体间接ELISA检测方法。(本文来源于《河南农业科学》期刊2019年11期）
间接检测方法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建牛源无乳链球菌AP2蛋白原核表达质粒,表达AP2蛋白,并以此为包被抗原建立检测无乳链球菌抗体的ELISA方法。方法取pMD18-T-AP2和pET-30a(+)分别进双酶切,酶切片段连接后转染BL21(DE3)细胞,进行AP2的诱导表达及鉴定。以重组AP2为抗原建立检测无乳链球菌抗体的ELISA方法,并用无乳链球菌、化脓性链球菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌感染兔血清进行检测。结果双酶切及PCR鉴定重组质粒构建正确。Western blot分析表明重组AP2蛋白具有反应原性,建立的间接ELISA抗原最佳包被浓度为25μg/ml,血清最佳稀释度为1∶160,酶标二抗最适稀释度为1∶70。抗体滴度检测显示重组AP2具有良好的免疫原性,3次免疫(56 d)的兔血清抗体滴度达1∶10 000。用该方法检测化脓性链球菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌感染兔血清,均未出现交叉阳性反应。结论成功表达了重组无乳链球菌菌毛岛屿AP2蛋白,建立的间接ELISA方法稳定性高,特异性良好,可用于无乳链球菌感染检测。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
间接检测方法论文参考文献
[1].刘明刚,刘睿,王战辉,沈建忠.氯丙那林单克隆抗体的制备及其间接竞争ELISA检测方法的建立[C].中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会第十五次学术交流会论文集.2019
[2].锡林高娃,韩甫鑫,杜长智,布日额.牛源无乳链球菌菌毛岛屿AP2蛋白抗原优势区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立[J].中国病原生物学杂志.2019
[3].涂光岚,奉竹,桑益旸,李思思,王恒安.猪流行性腹泻病毒血清IgG间接ELISA检测方法的建立[J].上海交通大学学报(农业科学版).2019
[4].范慧,曾洁,李亮,李仕海,张盼盼.塞内卡病毒A(SVA)VP1间接ELISA抗体检测方法的建立及应用[J].中国兽医学报.2019
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[6].王瑞,曹旭敏,徐军,李锐,高海侠.β_2-受体激动剂类药物多残留间接竞争ELISA检测方法的建立[C].中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会论文集.2019
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[8].潘明飞,李诗洁,郭丹丹,王俊平,王硕.间接竞争酶联免疫分析方法检测花生中黄曲霉毒素B_1[J].中国食品学报.2019
[9].粟元文,陈俊,杨国淋,魏玲,王怀禹.猪细小病毒NS1蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及南充市猪细小病毒感染的血清学调查与分析[J].黑龙江畜牧兽医.2019
[10].郭东光,陈明艳,朱艳平,李鹏,岳锋.猪瘟病毒结构蛋白E0抗体间接ELISA检测方法的建立及优化[J].河南农业科学.2019