导读:本文包含了大肠杆菌肠毒素亚单位论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:不耐热肠毒素B亚单位,肠道病毒71型,免疫原性,黏膜免疫
大肠杆菌肠毒素亚单位论文文献综述
谢婷婷,胡琼文,马永平[1]（2014）在《产肠毒素大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位可有效诱导和增强对肠道病毒71型的黏膜免疫应答》一文中研究指出目的研究产肠毒素大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的免疫原性。评价肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1联合LTB的鼻腔免疫效果。方法构建重组质粒pET32a-LTB,表达的6×His-LTB融合蛋白用Ni2+-NTA树脂纯化后免疫新西兰大白兔制备抗血清,ELISA检测抗血清效价。用纯化的EV71 VP1、LTB联合EV71 VP1、生理盐水分别经鼻腔免疫BALB/c小鼠,收集血清、肺和小肠黏膜冲洗液,采用间接ELISA检测IgG和分泌性IgA(sIgA)。结果已成功构建重组质粒pET32a-LTB。表达的6×His-LTB融合蛋白主要以包涵体形式表达,相对分子质量(Mr)约为30 000,免疫兔所制备的抗血清效价为1∶125 000。EV71 VP1联合LTB组的小鼠特异性IgG和sIgA水平较EV71 VP1单独免疫组和对照组有明显增高。结论在E.coli BL21(DE3)中成功表达了6×His-LTB融合蛋白,纯化的融合蛋白具有良好的免疫活性和佐剂活性。通过滴鼻免疫,LTB可有效增强特异性血清抗体反应,诱导黏膜免疫应答。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2014年12期）
郭乐,刘昆梅,李敏,赵辉,徐广贤[2]（2013）在《产肠毒素大肠杆菌亚单位疫苗3STa~M(G)-K99和3STa~M(S)-K99的纯化及其免疫学性质的研究(英文)》一文中研究指出产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是一种导致新生犊牛和仔猪腹泻的主要病原体之一。ETEC的毒力因子主要有黏附素(CFs)、不耐热性肠毒素(LT)和耐热性肠毒素(ST)叁种。在前期研究中,利用PCR和酶切连接技术成功构建了两种ETEC亚单位疫苗3STaM(G)-K99和3STaM(S)-K99,且在大肠杆菌中获得高效表达。本研究利用阴离子交换层析纯化融合蛋白3STaM(G)-K99 and3STaM(S)-K99,辅以弗氏佐剂免疫新西兰大白兔,通过Elisa分析其免疫学性质,并利用肠毒素中和实验在昆明系乳鼠中评价其激发抗STa中和抗体的能力。实验结果表明:亚单位疫苗3STaM(G)-K99 and 3STaM(S)-K99能够激发相对较高水平、可针对天然STa、ETEC和融合蛋白STa-K99的特异性抗体。其次,亚单位疫苗中STa突变体(STaM)组分的肠毒素活性显着降低,且其所激发的特异性抗体属于中和抗体,能有效抑制天然STa的肠毒素活性。亚单位疫苗3STaM(G)-K99 and3STaM(S)-K99为研制预防ETEC感染性腹泻的多价基因工程疫苗提供了基本素材和理论指导。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2013年07期）
姜柯安,贺志良,宋方洲,马永平[3]（2012）在《产肠毒素大肠杆菌K88菌毛蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位的原核表达及其鼻腔免疫效果》一文中研究指出目的原核表达产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K88菌毛蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素(Heat-labile enterotoxin,LT)b亚单位(LTb),并评价其鼻腔免疫效果。方法采用PCR技术分别扩增不含信号肽的K88和LTb基因,克隆至表达载体pQE30中,构建重组表达质粒pQE30-K88和pQE30-LTb,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。表达的重组K88和LTb蛋白纯化、复性后,进行SDS-PAGE分析。分别用K88单独、K88联合LTb滴鼻免疫BALB/c小鼠,以生理盐水作为对照,每次间隔1周,共4次,末次免疫后10 d,分离血清,并收集鼻腔和小肠黏膜冲洗液,间接ELISA法检测各组血清特异性IgG和黏膜sIgA抗体水平。结果重组表达质粒pQE30-K88和pQE30-LTb经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组K88和LTb蛋白相对分子质量分别为28 100和12 500,表达量分别约占菌体总蛋白的35%和40%,主要以包涵体形式存在;纯化复性后的重组蛋白纯度均可达95%以上。K88联合LTb滴鼻免疫组血清特异性IgG及鼻腔、小肠黏膜冲洗液中特异性SIgA水平均较K88单独免疫组和对照组明显增高,且差异有统计学意义(P<0.01)。结论在大肠杆菌中高效表达并纯化了重组K88和LTb蛋白,K88联合LTb滴鼻免疫BALB/c小鼠后,可增强特异性血清抗体反应,且诱导了黏膜免疫应答,为将来开发新型的ETEC基因工程疫苗奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2012年09期）
贺志良,姜柯安,宋方洲,马永平[4]（2012）在《产肠毒素大肠杆菌987P菌毛蛋白FasA亚单位的原核表达及其免疫原性》一文中研究指出目的表达、纯化产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)987P菌毛蛋白FasA亚单位,并检测其免疫原性。方法将去掉5′端信号肽序列的fasA基因克隆至原核表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-fasA,转化E.coli M15,0.5 mmol/L IPTG诱导表达。表达的融合蛋白6×His-FasA经Ni-Agarose His纯化和复性后,经皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,每次100μg,共免疫3次,间隔2周,末次免疫10 d后,摘除小鼠眼球取血,分离血清,采用间接ELISA法检测抗血清效价。结果重组表达质粒pQE-30-fasA经PCR、双酶切和测序证实构建正确;表达的6×His-FasA融合蛋白相对分子质量约为18 500,主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%;纯化的蛋白纯度可达95%,浓度为0.6 mg/ml,免疫小鼠所得抗血清效价为1∶125 000。结论已成功在E.coli M15中表达了6×His-FasA融合蛋白,纯化的融合蛋白免疫原性良好,为进一步研制以双歧杆菌为表达系统的新型ETEC亚单位口服疫苗奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2012年09期）
贺志良[5]（2012）在《产肠毒素大肠杆菌987P菌毛FasA亚单位的原核表达、纯化及免疫原性分析》一文中研究指出产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia Coli, ETEC)是引发仔猪、牛犊、羔羊等农场家畜(禽)水样腹泻的最主要致病菌之一,其高发病率和致死率给畜牧养殖业造成很大经济损失。ETEC的致病机理与其两种保护性抗原密切相关：肠毒素(entero toxins)和粘附素(adhesins),肠毒素有耐热型(heat-stable)和不耐热型(heat-labile)两种,粘附素,也称为菌毛(pili),介导ETEC粘附于家畜小肠粘膜上皮细胞微绒毛上,菌毛有多种血清型,最常见的有K88、K99、987P、F41等,而987P+ETEC是仔猪腹泻的主要病原菌之一本研究将987P+ETEC菌毛FasA亚单位的基因fasA构建到原核表达载体上,表达FasA亚单位,经亲和层析获得纯化的FasA亚单位,免疫小鼠,分析其免疫原性,为研制以双歧杆菌为表达载体的新型ETEC细菌载体活疫苗做基础研究。第一部分：PCR扩增987P+ETEC的fasA基因,连接到原核表达载体pQE-30上,构建重组原核表达载体pQE-30-fasA,转化大肠杆菌表达菌E.coli M15, IPTG诱导表达FasA亚单位,SDS-PAG电泳确定蛋白的表达形式、条件和效率。用Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒分离纯化蛋白,透析复性浓缩后,于-70℃冰箱保存。第二部分：用纯化后的FasA亚单位免疫BALB/c小鼠,制备抗FasA的抗血清,用ELISA法检测抗血清效价,分析FasA亚单位免疫原性。本研究成功构建了FasA亚单位的重组表达载体pQE-30-fasA经IPTG诱导,FasA亚单位获得高效表达。免疫BALB/c(?)(?)鼠所制备的抗血清效价为1：125000,表明FasA亚单位对小鼠有很好的免疫原性,为进一步研制以双歧杆菌为表达系统的新型ETEC细菌载体活疫苗奠定了基础。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2012-05-01）
罗何峰,王劼,苟钟勇,彭健[6]（2009）在《产肠毒素大肠杆菌987P菌毛fasG亚单位的优化表达》一文中研究指出987P阳性菌是引起新生仔猪腹泻的主要肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)之一。987P菌毛对宿主小肠上皮细胞的黏附作用是ETEC 987P致病的先决条件,若能有效地抑制其黏附作用,则可以预防仔猪腹泻的发生。FasG位于987P菌毛的顶端,直接行使黏附功能,因此,阻断FasG对小肠上皮细胞的黏附,就有可能控制ETEC 987P感染性腹泻的发生。不管是制备FasG蛋白疫苗还是生产针对FasG蛋白的治疗性抗体都需要大量的抗原,但FasG在菌毛中的含量很低,直接从菌毛中提取FasG蛋白并不实际。本实验拟克隆表达987P菌毛黏附素基因fasG,实现其在大肠杆菌中的高效表达。(本文来源于《中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集（下册）》期刊2009-10-11）
罗何峰,王劫,苟钟勇,蒋思文,彭健[7]（2008）在《产肠毒素大肠杆菌987P菌毛fasG亚单位的优化表达》一文中研究指出本试验拟克隆表达987P 菌毛黏附素基因 fasG,实现其在大肠杆菌中的高效表达。通过对已报道的 fasG 基因序列(GeneBank 登录号:L29412)的密码子组成进行分析,发现 fasG 基因编码区中含有 AGA、AGG、CGG、AUA、CUA、GGA 和 CCC 等多种大肠杆菌稀有密码子,占到了编码区总密码子的(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集》期刊2008-10-01）
罗何峰,王劼,苟钟勇,彭健[8]（2008）在《产肠毒素大肠杆菌987P菌毛fasG亚单位的优化表达》一文中研究指出选用两种对稀有密码子效应不同的表达宿主菌大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)和Rossetta(DE3),和两种不同的表达载体pET28a(+)和pGEX-KG,构建出4种重组表达菌(pET-fas GBL21(DE3)、pET-fasG Rossetta(DE3)、pKG-fasGBL21 (DE3)和pKG-fasG Rossetta(DE3))来考查稀有密码子对fasG基因表达的影响。对重组表达菌进行诱导表达的结果表明,不管是pET-fasG质粒还是pKG-fasG质粒,目的蛋白在Rossetta(DE3)中的表达量都要比在BL21(DE3)中的高。使用补充了额外的稀有密码子tRNA的表达菌Rossetta(DE3),提高了目的蛋白的表达量。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2008年04期）
刘新建[9]（2007）在《大肠杆菌不耐热肠毒素亚单位的克隆、表达及A亚单位单克隆抗体的制备》一文中研究指出不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT)是产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)产生的六聚体蛋白。不耐热肠毒素除了较强的毒性外,还具有很强的免疫原性以及能够辅助其他抗原通过粘膜免疫途径使机体产生特异性抗体,因而它还是良好的粘膜免疫佐剂,在粘膜免疫研究中具有重要价值。本研究以产不耐热肠毒素44814株为材料,在产毒培养基CAYE-2培养后,收集的菌液经多粘菌素B和超声波处理,获得肠毒素粗提物。通过硫酸铵沉淀后,D-Salt Dextran Desalting Column层析脱盐获得肠毒素的初步提取物。提取物过滤除菌后,通过健康家兔回肠结扎试验和CHO细胞毒性试验,证明了所获得肠毒素的初步提取物能引起家兔回肠肠液蓄积和CHO细胞形变、死亡,符合不耐热肠毒素的生物学特性,表明提取物中含有不耐热肠毒素,从而为后续研究提供了检测抗原。为了进一步了解不耐热肠毒素的生物学特性,根据其已发表的A、B亚单位结构基因序列,各设计一对引物,经PCR从产肠毒素大肠杆菌44814株分别扩增出LT-A、LT-B结构蛋白基因片段,并分别定向克隆入pGEX-6P-1质粒载体,分别获得重组质粒pGEX-LTA和pGEX-LTB。重组菌裂解物的SDS-PAGE及Western-blot分析证明,含有重组质粒pGEX-LTA的大肠杆菌BL21能够表达分子量约为56ku的融合蛋白GST-LTA,含有重组质粒pGEX-LTB的大肠杆菌BL21能够表达分子量约为39ku的融合蛋白GST-LTB,从而为研制LT的单克隆抗体提供了抗原。单克隆抗体作为一种良好的检测试剂,具有较强的特异性。本研究利用初步提纯A亚单位的表达产物作为免疫原免疫6周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA检测,经叁次亚克隆得到了稳定分泌抗LTA单克隆抗体的杂交瘤细胞株F8和G9,制备了腹水,并利用该单抗初步建立了间接ELISA和Dot-ELISA等特异性检测LT抗原的方法。为进一步建立特异性强、敏感性高、简便快速的LT检测方法奠定了基础。(本文来源于《扬州大学》期刊2007-04-01）
云雪霞,胡静,陈清[10]（2007）在《霍乱弧菌肠毒素B亚单位基因在大肠杆菌和双歧杆菌的表达》一文中研究指出目的构建霍乱弧菌肠毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)基因的大肠杆菌表达重组质粒,并观察其在大肠杆菌和双歧杆菌中的表达。方法从pBI121质粒PCR扩增获得CTB基因片断,克隆到大肠杆菌载体pGEX-4T-1上,构建重组质粒,然后转化大肠杆菌DH5α和双歧杆菌。转化菌经IPTG诱导,然后用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达的重组蛋白。结果构建了重组质粒pGEX-4T-CTB,CTB基因片段分子量约为376bp;在大肠杆菌中表达出35kD的霍乱弧菌B亚单位融合蛋白,经SDS-PAGE分析,相对分子量与文献相符,表达的蛋白约占细菌总蛋白的10%;在双岐杆菌中也能得到正确表达,表达量较大肠杆菌低,占细菌总蛋白约5%。Western blotting结果确认了该条带为CTB基因的产物。结论构建的重组质粒pGEX-4T-CTB能够在大肠杆菌及双歧杆菌中获得表达。(本文来源于《中国人兽共患病学报》期刊2007年02期）
大肠杆菌肠毒素亚单位论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是一种导致新生犊牛和仔猪腹泻的主要病原体之一。ETEC的毒力因子主要有黏附素(CFs)、不耐热性肠毒素(LT)和耐热性肠毒素(ST)叁种。在前期研究中,利用PCR和酶切连接技术成功构建了两种ETEC亚单位疫苗3STaM(G)-K99和3STaM(S)-K99,且在大肠杆菌中获得高效表达。本研究利用阴离子交换层析纯化融合蛋白3STaM(G)-K99 and3STaM(S)-K99,辅以弗氏佐剂免疫新西兰大白兔,通过Elisa分析其免疫学性质,并利用肠毒素中和实验在昆明系乳鼠中评价其激发抗STa中和抗体的能力。实验结果表明:亚单位疫苗3STaM(G)-K99 and 3STaM(S)-K99能够激发相对较高水平、可针对天然STa、ETEC和融合蛋白STa-K99的特异性抗体。其次,亚单位疫苗中STa突变体(STaM)组分的肠毒素活性显着降低,且其所激发的特异性抗体属于中和抗体,能有效抑制天然STa的肠毒素活性。亚单位疫苗3STaM(G)-K99 and3STaM(S)-K99为研制预防ETEC感染性腹泻的多价基因工程疫苗提供了基本素材和理论指导。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
大肠杆菌肠毒素亚单位论文参考文献
[1].谢婷婷,胡琼文,马永平.产肠毒素大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位可有效诱导和增强对肠道病毒71型的黏膜免疫应答[J].细胞与分子免疫学杂志.2014
[2].郭乐,刘昆梅,李敏,赵辉,徐广贤.产肠毒素大肠杆菌亚单位疫苗3STa~M(G)-K99和3STa~M(S)-K99的纯化及其免疫学性质的研究(英文)[J].中国生物工程杂志.2013
[3].姜柯安,贺志良,宋方洲,马永平.产肠毒素大肠杆菌K88菌毛蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位的原核表达及其鼻腔免疫效果[J].中国生物制品学杂志.2012
[4].贺志良,姜柯安,宋方洲,马永平.产肠毒素大肠杆菌987P菌毛蛋白FasA亚单位的原核表达及其免疫原性[J].中国生物制品学杂志.2012
[5].贺志良.产肠毒素大肠杆菌987P菌毛FasA亚单位的原核表达、纯化及免疫原性分析[D].重庆医科大学.2012
[6].罗何峰,王劼,苟钟勇,彭健.产肠毒素大肠杆菌987P菌毛fasG亚单位的优化表达[C].中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集（下册）.2009
[7].罗何峰,王劫,苟钟勇,蒋思文,彭健.产肠毒素大肠杆菌987P菌毛fasG亚单位的优化表达[C].中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集.2008
[8].罗何峰,王劼,苟钟勇,彭健.产肠毒素大肠杆菌987P菌毛fasG亚单位的优化表达[J].农业生物技术学报.2008
[9].刘新建.大肠杆菌不耐热肠毒素亚单位的克隆、表达及A亚单位单克隆抗体的制备[D].扬州大学.2007
[10].云雪霞,胡静,陈清.霍乱弧菌肠毒素B亚单位基因在大肠杆菌和双歧杆菌的表达[J].中国人兽共患病学报.2007
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