导读:本文包含了平滑肌细胞分化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:间充质干细胞,膀胱平滑肌细胞,共同培养技术,乙酰化作用
平滑肌细胞分化论文文献综述
杨婧,王延洲,梁志清[1]（2019）在《组蛋白乙酰化修饰在骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化中的作用》一文中研究指出目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)在平滑肌微环境中发生分化后平滑肌标志性基因乙酰化水平的变化,以及组蛋白乙酰化修饰在干细胞分化中的作用及机制。方法体外培养BMSCs和膀胱平滑肌细胞(BSMCs),选择同批次的第3代BMSCs,将与BSMCs共培养3d的BMSCs作为实验组,未经共培养的BMSCs作为对照组,采用RT-PCR检测两组BMSCs中平滑肌α肌动蛋白(α-SMA)、钙调节蛋白(calponin)、平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)的表达丰度。采用条件为80%、20次、0.5 s、8个循环的超声破碎实验组及对照组BMSCs的DNA,以H3K9抗体结合特定乙酰化位点,采用免疫共沉淀技术(ChIP)沉淀BMSCs组蛋白乙酰化位点基因,接头PCR扩增所获基因,Real-time PCR检测所获基因中3种目的基因(α-SMA、Calponin、SM-MHC)的表达水平。结果 RT-PCR检测结果显示,实验组BMSCs中的平滑肌标志性基因(α-SMA、Calponin、SM-MHC)的mRNA表达水平较对照组明显增高[分别为0.176±0.003 vs. 0.070±0.002,0.079±0.002vs.0.051±0.003,0.091±0.004vs.0.034±0.001],差异均有统计学意义(P<0.01)。分光光度计检测ChIP后获得的DNA,结果表明H3K9乙酰化抗体沉淀所获DNA浓度高于Ig G抗体,且实验组高于对照组(P<0.05)。RealtimePCR分析BMSCs分化前后目的基因组蛋白H3K9乙酰化水平,结果显示,BMSCs分化后,实验组的平滑肌标志性基因α-SMA、calponin、SM-MHC的mRNA转录水平明显高于对照组[分别为9.26±5.03 vs. 1.01±0.05,2.33±0.65 vs.0.99±0.05,2.63±0.37vs.1.00±0.03],差异均有统计学意义(P>0.05)。结论在平滑肌微环境中,BSMCs特定位点H3K9乙酰化程度的增加可促进BMSCs向BSMCs的分化。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2019年05期）
刘亚杰[2]（2019）在《自噬参与心外膜祖细胞向冠状动脉平滑肌细胞分化的实验研究》一文中研究指出研究冠脉血管的发育,明确冠脉血管平滑肌细胞(coronary smooth muscle cells,CoSMCs)的起源及分化机制,将为先天性心脏病的防治及心肌梗死后冠脉侧枝循环血管的形成等研究领域提供重要信息。目前研究提示,心外膜祖细胞(Epicardial progenitor cells,EPCs)是CoSMCs的主要起源,但EPCs向CoSMCs分化的具体机制尚不完全明确。自噬(autophagy)是由溶酶体介导的蛋白质及其他细胞器的分解过程,与衰老的细胞器及破坏的蛋白质的清除和维持细胞内环境稳定有密切关系。既往研究证实自噬在哺乳动物的心脏发育与重塑组织和细胞分化过程起着重要作用,但尚无证据表明自噬是否能够参与调控EPCs向CoSMCs分化。在本研究中,我们成功体外培育了小鼠原代EPCs,并通过自噬的诱导和抑制实验观察自噬对EPCs向平滑肌细胞分化的影响,同时进一步在体观察自噬对小鼠冠脉平滑肌发育的影响,以期证实自噬参与调控心外膜祖细胞向冠状动脉平滑肌细胞分化。第一部分:原代EPCs的培养与鉴定目的:探讨构建高纯度心外膜祖细胞的方法,为体外培养并揭示心外膜祖细胞的分化机制奠定基础。方法:首先分离E11.5小鼠胚胎心脏,利用组织贴壁法建立心外膜祖细胞体外培养模型。镜下观察培养细胞的自身特性,进一步通过qRT-PCR技术及免疫荧光技术检测心外膜祖细胞标志基因Tbx18及WT1基因的表达,借此来检测培养的细胞纯度。结果:成功培养出原代心外膜祖细胞群。并首先以形态学观察证实该原代细胞群具有典型上皮形态,并连续观察72小时证实该细胞群分化的形态学变化。进一步以心肌细胞为对照组,通过qPCR及免疫荧光证实该细胞能同时表达心外膜祖细胞标志性基因Tbx18及WT1。结论:通过组织贴壁法进行原代培养所得心外膜祖细胞方法相对简单且同时表达多个心外膜上皮标志基因,细胞纯度高。体外培养的原代心外膜祖细胞爬出后形成的细胞群形态和排列均呈典型上皮形态,且在形态学上观察到能够进一步分化,为后续心外膜祖细胞的分化研究打下基础。第二部分:体外实验揭示细胞自噬对心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化的影响目的:探讨细胞自噬对心外膜心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化的影响,及对EPCs分化而来的SMCs功能的影响。方法:在原代心外膜祖细胞模型店基础上,用自噬诱导剂RAPA及抑制剂3-MA分别建立了自噬诱导和抑制模型。观察自噬诱导/抑制对心外膜祖细胞分化的形态学影响,并通过qPCR测定自噬相关Akt及mTOR的mRNA水平变化。进一步通过MDC染色及LC3B蛋白荧光染色及Westernblot实验揭示心外膜祖细胞分化过程是否细胞自噬。后以qPCR及免疫荧光检测培养72h后细胞平滑肌标志蛋白a-SMA及MYH11水平,MTT实验检测各组细胞增殖能力。再收集培养96h细胞,以胶原凝胶收缩实验评价其收缩功能,划痕实验评价细胞迁移能力。结果:我们的实验观察到,RAPA在72h内显着诱导心外膜祖细胞自噬水平上调,进而导致心外膜祖细胞增殖明显减慢,但长梭形大体积异形细胞增多。免疫荧光染色见RAPA组a-SMA及MYH11峰值提前,提示自噬可能诱导心外膜祖细胞提前分化,在细胞培养48h即出现大量梭形,异形的分化细胞,结合免疫染色结果可见RAPA诱导的自噬使平滑肌细胞的分化提前,但增殖较NORMAL组及3-MA组明显减弱。而在3-MA组其自噬水平明显下调后,出现细胞增殖及迁移上调,而分化延迟的表现。提示抑制自噬可能抑制心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,而促进其增殖及迁移。结论:细胞自噬参与调控心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,自噬上调可能诱导心外膜祖细胞提前分化,而使平滑肌细胞收缩能力增强,增殖迁移能力下降,而抑制则可能抑制心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,而促进其增殖及迁移。第叁部分:体内实验揭示自噬对小鼠冠状动脉发育的影响目的:在组织水平明确心外膜祖细胞对冠脉血管平滑肌发育的影响及自噬标识信号分子与平滑肌标志基因的空间定位关系,从而在体探讨自噬对心外膜祖细胞对冠状动脉发育的影响。方法:应用羊膜腔注射给药的方式建立小鼠自噬诱导/抑制模型,通过HE染色观察自噬诱导/抑制对小鼠E12.5-E14.5冠脉发育的结构影响,通过qPCR及免疫荧光观察自噬对小鼠冠状动脉平滑肌分化过程中a-SMA的RNA及蛋白表达的影响,进而将自噬标志蛋白LC3B与平滑肌细胞标志蛋白MYH11共染,观察两者的空间定位关系。结果:自噬诱导后,心脏几乎未能形成管腔发育成熟的冠状动脉血管,但可见心内膜下逐渐出现的血窦样变化,提示小鼠心脏发育未能发育出成熟冠脉及建立有效的冠脉循环。同时亦观察到自噬诱导后出现的心室流出道发育障碍,心脏循环缺陷及心室壁变薄。qPCR及组织免疫荧光结果提示,小鼠E12.5-14.5的自噬现象可同时出现在心外膜及心肌组织中。而自噬诱导组我们可见在E12.5天时,心外膜内的心肌组织中a-SMA的表达量略高于NORMAL组,但在E14.5天时,RAPA组a-SMA表达量明显低于NORMAL组,并且未能发育为成熟冠状动脉管腔。而在E12.5-14.5天,自噬抑制组a-SMA表达量各时间段均低于NORMAL组,最终冠状动脉周围a-SMA表达量也比NORMAL组更低。荧光共染实验证实,多处心外膜及心外膜下MYH11阳性细胞能够与LC3B蛋白共表达。结论:自噬在冠脉发育中需要适宜的强度。过度激活自噬可能导致导平滑肌细胞的提前分化和迁移能力增强,有可能使内皮细胞周围平滑肌细胞的募集失调,不能形成有效的冠脉管腔。总体来说,冠状动脉发育受到抑制。而自噬抑制可能使心外膜祖细胞分化延迟,从而使冠脉形成的数量减少。心外膜祖细胞向冠脉平滑肌分化的过程需要适宜的自噬强度。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
李郁[3]（2019）在《1-磷酸神经鞘氨醇诱导心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化的实验研究》一文中研究指出冠状动脉疾病已经成为目前威胁人类健康的主要疾病,冠状动脉血管平滑肌不仅在冠状动脉的发生发育中有着重要的作用,还参与了冠状动脉血管结构的组成及功能的发挥。因此,充分了解冠状动脉血管平滑肌细胞的起源对于探索更多更有效的冠状动脉血管疾病治疗方法有着重要的意义。心外膜祖细胞(Epicardial progenitor cells,EpiCs),是一个表达Tbx18、WT1和Tcf21等转录因子的祖细胞池,是心脏发育过程中第一、第二生心区的重要补充,因此也被认为是心脏的第叁心生区。心外膜祖细胞在心脏发育及血管的生成中具有不可或缺的作用。目前的研究发现心外膜祖细胞是冠状动脉血管平滑肌细胞的来源之一。同时还发现心外膜祖细胞还可以分化为成纤维细胞、内皮细胞、窦房结细胞等。S1P是一种具有多种生物学功能的脂质,主要通过与五种G蛋白偶联受体结合发挥作用。S1P受体在体内广泛分布,其中以S1P_1、S1P_2、S1P_3叁种受体的分布最为广泛,在心血管系统的发生发育中具有重要的作用,还通过多种信号通路调节平滑肌细胞的功能,包括增殖、迁移、分化等功能。既往的研究发现S1P可以诱导脂肪来源的间质细胞及中胚层成血管细胞分化为平滑肌细胞。心外膜祖细胞具有分化为平滑肌细胞的潜能,而S1P可以诱导细胞分化为平滑肌细胞,进而我们推测S1P可能具有诱导心外膜祖细胞分化为平滑肌细胞的功能,明确S1P这一诱导分化作用对寻找新的冠状动脉血管疾病的治疗方法具有一定的临床价值。因此,在本研究中我们探索了S1P诱导心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化的作用,并检测了可能参与这一作用S1P受体。第一部分:心外膜祖细胞的提取及鉴定目的:建立体外E11.5天心外膜祖细胞的培养模型,检测培养心外膜祖细胞上S1P受体的表达情况,为探讨心外膜祖细胞的分化作用做好研究基础。方法:通过获取E11.5天胚胎心室组织进行种植,并从组织边缘爬出心外膜祖细胞的方法建立心外膜祖细胞的体外培养模型。PCR及细胞免疫荧光的方法检测心外膜祖细胞特异性标志物Tbx18及WT1转录因子的表达。通过PCR的方法检测心外膜祖细胞上各S1P受体的表达情况。结果:实验提取的细胞高表达转录因子Tbx18及WT1,低表达cTnT,细胞形态呈“铺路石”样排列生长。提取细胞主要表达S1P_1、S1P_2、S1P_3受体,几乎不表达S1P_4、S1P_5受体。结论:实验所提取的原代细胞为心外膜祖细胞,且细胞纯度高,成功建立了心外膜祖细胞的体外培养模型。明确了S1P受体在心外膜祖细胞的表达,为之后探讨S1P通过其受体发挥的诱导分化作用奠定了研究基础。第二部分:S1P诱导心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化目的:探讨S1P诱导心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化及其机制。方法:建立心外膜祖细胞的体外培养模型,用不同浓度的S1P(0.1uM、0.5uM、1uM、2uM、5uM)处理细胞,通过qRT-PCR方法检测平滑肌细胞标志物α-SMA及MYH11的表达情况,筛选出S1P药物干预的最佳刺激浓度。将培养的心外膜祖细胞进行随机分组,即对照组、S1P组(0.5uM S1P)、S1P+JTE013组(0.5uM S1P+1uM JTE013)、S1P+VPC23019组(0.5uM S1P+1uM VPC23019),通过qRT-PCR及免疫荧光的方法检测平滑肌细胞标志物α-SMA及MYH11的表达情况,探索S1P_1、S1P_2、S1P_3受体抑制后对S1P诱导分化作用的作用。再次将培养细胞随机分组为:对照组、S1P组(0.5uM S1P)、SEW2871组(30uM SEW2871)及S1P+W146组(0.5uM S1P+10uM W146),通过qRT-PCR及免疫荧光的方法检测α-SMA及MYH11的表达情况,探讨S1P_1受体在诱导分化中的作用。制备叁维胶原凝胶模型,通过凝胶收缩实验观察不同处理方法干预细胞后胶原的收缩情况。结果:S1P药物干预心外膜祖细胞6天后,当S1P干预浓度为0.5uM时,α-SMA及MYH11的表达量达到峰值,说明0.5uM浓度为S1P干预的最佳刺激浓度。S1P_2受体的抑制剂JTE013和S1P_1/S1P_3受体的抑制剂VPC23019预处理心外膜祖细胞后,qRT-PCR检测发现这两种方式干预细胞后的α-SMA及MYH11表达量较单独S1P处理的表达量明显降低,且VPC23019处理后这两种平滑肌细胞标志物的表达量降低更加明显。细胞免疫荧光也得到了同样结果。S1P_1受体的激动剂SEW2871干预心外膜祖细胞后,mRNA水平α-SMA及MYH11表达量与对照组相比较并没有增加。用S1P_1受体抑制剂W146预处理心外膜祖细胞后,α-SMA及MYH11表达量较S1P组没有明显的差异。免疫荧光也支持上述结果。S1P处理后的细胞制备胶原凝胶,再用卡巴胆碱刺激后可见凝胶明显收缩。S1P+W146组的凝胶也明显收缩,S1P+JTE013组及S1P+VPC23019组凝胶未发生明显的收缩。SEW2871组凝胶未发生收缩。结论:S1P可以诱导心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,在S1P的诱导分化中S1P_3受体起主要作用,S1P_2受体起次要作用。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
李英瑞[4]（2019）在《共培养诱导心外膜祖细胞分化为血管平滑肌细胞》一文中研究指出冠状动脉在维持心脏正常生理功能中发挥着重要作用,而冠状动脉血管平滑肌对调节冠状动脉血流和结构支持有着重要意义。因此,了解冠状动脉平滑肌细胞起源和分化过程的机制具有重要意义。心外膜祖细胞(EpiCs)是从前体心外膜细胞发育而来,是覆盖脊椎动物心脏最外层的上皮细胞。在心脏的发育中发挥重要作用,抑制心外膜生长可导致心肌和冠状动脉发育异常。EpiCs在发育过程中经历上皮细胞向间充质细胞转化(EMT),在心外膜下区域形成心外膜来源的细胞(EPDCs),并可在各种因素影响下分化为冠状动脉平滑肌细胞。有研究证实部分冠状动脉发育始于内皮细胞在心外膜下区域形成原始管道,原始管道通过内皮细胞出芽作用自心外膜下延伸至心内膜,最终连接到主动脉以获得血流,然后内皮细胞促进其周围基质细胞分化为血管平滑肌细胞,并最终形成成熟的冠状动脉。最近的研究提示EpiCs可作为心肌梗死后进行心脏细胞移植的候选细胞,因为它们具有多种特殊的特性,包括在心脏发育过程中作为祖细胞的作用。但迄今为止,很少有研究探讨EpiCs及其衍生物作为细胞移植的候选材料。这在一定程度上是由于对EpiCs体内分化机制的不了解和其特异性的分离培养技术所造成的。本研究旨在使用Transwell共培养法,探讨冠脉发育过程中,血管内皮细胞是否可以影响EpiCs的分化从而调节冠状动脉的发育,为心脏疾病的治疗提供新的思路。第一部分心外膜祖细胞的培养与鉴定目的:通过饲养C57BL/6小鼠成功培养小鼠E12.5d的胚胎EpiCs,为研究EpiCs分化为血管平滑肌细胞的机制提供研究基础。方法:将C57BL/6小鼠以1雄2雌进行合笼,在孕鼠E12.5d时提取胚胎小鼠的EpiCs,通过免疫荧光染色和qRT-PCR检测EpiCs特异标志物Wt1和Tbx18的表达。结果:提取的原代细胞高表达EpiCs特异性标志物Wt1和Tbx18,并结合其细胞生长形态,证实EpiCs被成功提取且纯度较高。结论:通过饲养C57BL/6小鼠成功提取培养出EpiCs。第二部分共培养诱导心外膜祖细胞分化为血管平滑肌细胞目的:通过共培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)与EpiCs,诱导EpiCs分化为血管平滑肌细胞。方法:将提取的EpiCs分为实验组和对照组。实验组通过Transwell共培养系统共培养HUVECs和EpiCs。通过免疫荧光染色和qRT-PCR检测血管平滑肌细胞特异性标志物α-平滑肌肌球蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、肌球蛋白重链11(Myosin heavy chain 11,Myh11)在实验组和对照组之间的差异,胶原凝胶收缩实验检测共培养后EpiCs的收缩能力,酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测共培养后碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factors,bFGFs)在条件培养基中的差异。结果:共培养干预后,实验组EpiCs的α-SMA、Myh11表达明显增多,mRNA水平显着增加。在胶原凝胶收缩实验中,实验组EpiCs的收缩能力强于对照组。同时,bFGFs的浓度在实验组条件培养基中高于对照组。结论:HUVECs可影响EpiCs向小鼠血管平滑肌细胞的分化,而bFGFs在此过程中起着重要作用。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
史丹阳,刘美玲,刘翔,张建,张同存[5]（2019）在《myocardin通过激活miR-93-5p促进人主动脉血管平滑肌细胞分化》一文中研究指出myocardin是促进平滑肌细胞分化的重要转录因子.微小RNA(microRNAs,miRNA)在近年来已经证实参与多种生物学过程,包括平滑肌的表型转化.然而在平滑肌分化过程中myocardin与哪些microRNA具有相关性仍有待于阐明.通过将外源性myocardin转入人主动脉血管平滑肌细胞(human aortal vascular smooth muscle cells,HA-VSMCs)中,利用免疫印迹(Western blot)检测分化标志基因肌动蛋白α2(actin alpha2,ACTA2)和肌动蛋白相关蛋白(smooth muscle 22 alpha,SM22α)的表达;利用实时荧光定量PCR(Real-timePCR)检测过表达或敲低myocardin对miR-93-5p水平的影响;构建miR-93-5p启动子的荧光素酶报告质粒,利用荧光素酶报告分析证实myocardin对mi R-93-5p启动子的转录激活作用.上述结果证实myocardin可能通过激活miR-93-5p的转录,上调其表达,进而促进血管平滑肌细胞的分化.(本文来源于《天津科技大学学报》期刊2019年02期）
沈凤,杨鹏,陶晓静,颜渊鸳,李丹[6]（2019）在《27nt-miRNA对间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化的影响》一文中研究指出为探讨27nt-miRNA对间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化影响,构建27nt-miRNA过表达、反义序列Anti-27nt-miRNA以及阴性对照的表达质粒,慢病毒包装后分别转染人脐带间充质干细胞(hUCMSC),加入Ⅳ型胶原诱导hUCMSC定向分化为血管平滑肌细胞。四唑盐(MTT)比色法检测分化后细胞活力,免疫细胞化学染色法检测分化后细胞SM22α(兔抗平滑肌22α,smooth muscle 22α)的表达,Western印迹法和RT-PCR检测分化后细胞内的SMA (兔抗平滑肌肌动蛋白,smooth muscle actin) mRNA、SM 22α mRNA及其蛋白质表达情况。经检测,27nt-miRNA过表达分化组与阴性对照组相比,细胞活力下降20.48%(P<0.05),SMA mRNA、SM22α mRNA及其蛋白质表达量明显升高(P<0.05);而Anti-27nt-miRNA分化组细胞活力上升了18.07%(P<0.05),SMA mRNA、SM22α mRNA及其蛋白质表达量下降(P<0.05)。综上所述,27nt-miRNA能够促进间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化,并且抑制分化后的细胞活力。(本文来源于《生物工程学报》期刊2019年02期）
周芳亮,何迎春,闫庆梓,张凯强,廖端芳[7]（2018）在《大鼠骨髓间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化过程中小窝蛋白-1表达增强》一文中研究指出目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向血管平滑肌细胞(VSMCs)分化过程中小窝蛋白-1(caveolin-1)的表达变化。方法采用全骨髓培养法,体外分离培养SD大鼠BMSCs,成骨成脂成软骨检测干细胞的分化潜能,流式细胞仪鉴定干细胞表面标志物。体外TGF-β1诱导BMSCs向VSMCs分化,Western blot检测SM-MHC、SM22α、caveolin-1和myocardin的表达。结果 BMSCs在TGF-β1诱导下可分化为VSMCs,诱导培养组细胞caveolin-1、SM-MHC及myocardin表达的水平随诱导时间的增加而增强(P<0. 05)。结论 BMSCs体外诱导可以分化为VSMCs,小窝蛋白-1与干细胞来源的VSMCs的形成有关。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2018年11期）
李莎,胡明亮[8]（2018）在《MiR-133a调控BMP-2诱导的血管平滑肌细胞向成骨样细胞分化的机制》一文中研究指出目的研究MiR-133a调控BMP-2诱导的血管平滑肌细胞向成骨样细胞分化的机制。方法采用BMP-2处理大鼠血管平滑肌细胞72h建立成骨样细胞分化模型。实验分组与细胞处理方法:1)空白对照组:采用溶媒处理血管平滑肌细胞72h;2)模型对照组:采用BMP-2处理血管平滑肌细胞72h;3)MiR-133a组:采用BMP-2处理MiR-133a转染的血管平滑肌细胞72h;4)MiR-NC组:采用BMP-2处理MiR-NC转染的血管平滑肌细胞72h。通过免疫荧光染色和细胞形态鉴定原代大鼠血管平滑肌细胞表型。检测大鼠血管平滑肌细胞内钙离子浓度、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OC)水平、骨相关蛋白(Runx2、Osterix)表达及细胞凋亡情况。结果过表达MiR-133a能显着抑制BMP-2诱导的血管平滑肌细胞钙离子浓度、ALP活性及OC水平的增加(P<0.05),能显着抑制BMP-2诱导的血管平滑肌细胞Runx2、Osterix蛋白表达(P<0.05),同时能显着抑制BMP-2诱导的血管平滑肌细胞的凋亡(P<0.05)。结论 MiR-133a可以显着抑制BMP-2诱导的血管平滑肌细胞向成骨样细胞分化,其机制可能是抑制BMP-2引起的骨相关蛋白的增加和阻碍BMP-2诱导的大鼠血管平滑肌细胞凋亡。(本文来源于《南昌大学学报(医学版)》期刊2018年05期）
汪文斌,韩悦,齐颖新[9]（2018）在《周期性张应变条件下血管平滑肌细胞对内皮祖细胞分化的影响》一文中研究指出目的血管内膜层受损后,血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)暴露。内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)被募集并黏附到受损血管处,与损伤处的VSMCs接触。研究力学条件下细胞间信息交流在EPCs参与血管损伤修复过程中的作用。方法 应用FX-5000T周期性张应变加载系统(5%、1.25 Hz)作用于VSMCs,并与EPCs进行联合培养,或RNAi技术干扰VSMCs中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF);用CTGF重组蛋白(r-CTGF)体外刺激EPCs,检测EPCs分化水平。结果 5%、1.25 Hz(本文来源于《第十二届全国生物力学学术会议暨第十四届全国生物流变学学术会议会议论文摘要汇编》期刊2018-08-17）
张晓萌[10]（2018）在《GPM6B在平滑肌细胞分化中的作用和机制研究》一文中研究指出研究背景平滑肌(SMC)广泛分布于人体的消化、呼吸、循环、泌尿和生殖等系统。平滑肌细胞是一类高度分化的细胞,可通过收缩产生张力使器官发生运动和变形,也可产生连续收缩和紧张性收缩,使器官对抗所承载负荷从而保持原有形状。平滑肌在心血管系统中主要参与血管的形成、血压的维持等生理过程,以及高血压、动脉粥样硬化等病理过程。近年来,心血管疾病患病率逐年升高,心血管疾病已经成为第一致死原因。高血压和动脉粥样硬化两种病理改变是引起心血管疾病的主要原因,而高血压和动脉粥样硬化都与平滑肌的功能、分化及增殖有密不可分的联系。因此,研究平滑肌的分化机制,对于控制心血管疾病的发生发展具有重要意义。GPM6B属于蛋白脂质蛋白(PLP)家族的跨膜蛋白,GPM6B最初在脊椎动物胚胎的神经系统中作为一种结构蛋白发现。以往研究表明GPM6B可以在中枢神经系统中发挥促进突触生成、调节血清素转运体(SERT)功能等作用。GPM6B不但在中枢神经系统发挥重要作用,在外周组织中如心脏、平滑肌、肝脏、骨骼肌、肾脏及脾脏都有所表达。GPM6B可调节肿瘤细胞的微管系统,GPM6B还会影响成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)的活性和细胞外基质的矿化作用,而且还和actin细胞骨架和基质小泡的出胞作用密切相关。在肿瘤学的研究中,发现GPM6B与肿瘤的新生血管密切相关,但GPM6B在心血管方面的作用目前还不清楚。高度分化的平滑肌细胞表达多种收缩和收缩相关蛋白,如smooth muscleα-actin(α-SMA),smooth muscle myosin heavy chain(MYH11)和calponin。多种理化因素如生长因子、炎症调控因子和剪切力等都可能调控平滑肌细胞的分化。其中,转化生长因子β超家族(TGF-βsuperfamily)中的TGF-β可诱导平滑肌标记基因在C3H10T1/2(10T1/2)细胞、神经嵴Mone-1细胞、间充质细胞和胚胎干细胞等多种多潜能干细胞中表达。TGF-β是一种多功能的细胞因子,调节包括增殖分化在内的多种细胞活动。TGF-β1通过Ⅰ型和Ⅱ型受体磷酸化Smad2和Smad3蛋白而使之激活,磷酸化的Smad2和Smad3与细胞内的Smad4蛋白结合形成复合物,转位至细胞核内与其他转录因子结合或单独调节目的基因的表达,从而影响细胞骨架和外基质。此功能与GPM6B对细胞骨架和外基质的作用高度重合,因此我们猜测,GPM6B可能通过调节TGF-β通路来调控平滑肌细胞的分化,从而影响了血管新生等病理生理过程。本课题将进一步探讨GPM6B与平滑肌细胞分化的关系。研究目的1探讨GPM6B在平滑肌细胞及组织中的表达情况。2明确GPM6B在平滑肌细胞分化过程中的作用。3阐明GPM6B调控平滑肌细胞分化的分子机制。研究方法1用TGF-β1诱导C3H10T1/2细胞向平滑肌细胞分化,并用分子生物学方法观察平滑肌细胞标记蛋白SM-MHC、α-SMA和Calponin,以及GPM6B的表达。2包装携带GPM6B shRNA的慢病毒并感染C3H10T1/2细胞,制作稳转细胞系sh-GPM6B1-5,并用包含无序质粒shRNA片段的sh-Scramble作为空白对照。用sh-GPM6B和sh-Scramble分别诱导分化C3H10T1/2细胞,观察GPM6B敲低后对C3H10T1/2细胞向平滑肌细胞分化的影响。3用TGF-β孵育稳转细胞系sh-GPM6B,观察GPM6B敲低后对TGF-β-Smad2/3通路和核转位的调控作用。4用TGF-β受体I(TβRI)的特异性激动剂SRI-011381和TGF-β共同孵育sh-GPM6B和sh-Scramble细胞系,观察敲低GPM6B对平滑肌细胞分化和TGF-β-Smad2/3通路的作用能否被TβRI特异性激动剂恢复。5在12.5天小鼠胚胎胸部和成年小鼠主动脉和小肠切片中,用免疫荧光方法标记GPM6B和p-Smad2/3,观察在体组织中发育过程中和成体组织中平滑肌细胞的GPM6B表达和Smad2/3磷酸化水平。6在诱导向平滑肌分化3天后的C3H10T1/2细胞中检测TβRI和TβRII的表达量,并通过免疫共沉淀技术检测分化细胞中与GPM6B直接结合的TGF-β-Smad2/3通路相关蛋白。研究结果1 GPM6B在平滑肌细胞分化过程中表达量逐渐升高,在小鼠胚胎平滑肌细胞分化过程中GPM6B处于高表达状态,而在成体平滑肌细胞中表达量处于较低水平。2敲低GPM6B的表达使诱导C3H10T1/2细胞向平滑肌细胞过程中平滑肌细胞特异性蛋白SM-MHC、α-SMA和CALPONIN的表达量降低,表明干涉GPM6B表达会抑制平滑肌细胞的分化。3敲低GPM6B的表达使TGF-β-Smad2/3通路中Smad2/3的磷酸化和核转位受到抑制,表明干涉GPM6B表达会抑制TGF-β-Smad2/3通路的激活。4用TGF-β1和TGF-β-Smad2/3通路的特异性激动剂SRI-011381共同处理细胞,会恢复干涉GPM6B表达后对平滑肌细胞的分化和TGF-β-Smad2/3通路激活的抑制作用,表明GPM6B通过调节TGF-β-Smad2/3通路而发挥调控平滑肌细胞分化的作用。5敲低GPM6B的表达不影响TβRI和TβRII的表达量,免疫共沉淀技术检测发现GPM6B在分化后的C3H10T1/2细胞中与TβRI直接结合,而不与TβRII或Smad2/3直接结合,表明GPM6B通过与TβRI直接作用而发挥对TGF-β-Smad2/3通路的调节作用。结论GPM6B可以与TβRI直接结合,激活TGF-β-Smad2/3通路,从而促进平滑肌细胞的分化,为调节平滑肌细胞分化和心血管再生的药物研发和治疗策略提供新的思路和靶点。(本文来源于《中国人民解放军空军军医大学》期刊2018-05-01）
平滑肌细胞分化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究冠脉血管的发育,明确冠脉血管平滑肌细胞(coronary smooth muscle cells,CoSMCs)的起源及分化机制,将为先天性心脏病的防治及心肌梗死后冠脉侧枝循环血管的形成等研究领域提供重要信息。目前研究提示,心外膜祖细胞(Epicardial progenitor cells,EPCs)是CoSMCs的主要起源,但EPCs向CoSMCs分化的具体机制尚不完全明确。自噬(autophagy)是由溶酶体介导的蛋白质及其他细胞器的分解过程,与衰老的细胞器及破坏的蛋白质的清除和维持细胞内环境稳定有密切关系。既往研究证实自噬在哺乳动物的心脏发育与重塑组织和细胞分化过程起着重要作用,但尚无证据表明自噬是否能够参与调控EPCs向CoSMCs分化。在本研究中,我们成功体外培育了小鼠原代EPCs,并通过自噬的诱导和抑制实验观察自噬对EPCs向平滑肌细胞分化的影响,同时进一步在体观察自噬对小鼠冠脉平滑肌发育的影响,以期证实自噬参与调控心外膜祖细胞向冠状动脉平滑肌细胞分化。第一部分:原代EPCs的培养与鉴定目的:探讨构建高纯度心外膜祖细胞的方法,为体外培养并揭示心外膜祖细胞的分化机制奠定基础。方法:首先分离E11.5小鼠胚胎心脏,利用组织贴壁法建立心外膜祖细胞体外培养模型。镜下观察培养细胞的自身特性,进一步通过qRT-PCR技术及免疫荧光技术检测心外膜祖细胞标志基因Tbx18及WT1基因的表达,借此来检测培养的细胞纯度。结果:成功培养出原代心外膜祖细胞群。并首先以形态学观察证实该原代细胞群具有典型上皮形态,并连续观察72小时证实该细胞群分化的形态学变化。进一步以心肌细胞为对照组,通过qPCR及免疫荧光证实该细胞能同时表达心外膜祖细胞标志性基因Tbx18及WT1。结论:通过组织贴壁法进行原代培养所得心外膜祖细胞方法相对简单且同时表达多个心外膜上皮标志基因,细胞纯度高。体外培养的原代心外膜祖细胞爬出后形成的细胞群形态和排列均呈典型上皮形态,且在形态学上观察到能够进一步分化,为后续心外膜祖细胞的分化研究打下基础。第二部分:体外实验揭示细胞自噬对心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化的影响目的:探讨细胞自噬对心外膜心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化的影响,及对EPCs分化而来的SMCs功能的影响。方法:在原代心外膜祖细胞模型店基础上,用自噬诱导剂RAPA及抑制剂3-MA分别建立了自噬诱导和抑制模型。观察自噬诱导/抑制对心外膜祖细胞分化的形态学影响,并通过qPCR测定自噬相关Akt及mTOR的mRNA水平变化。进一步通过MDC染色及LC3B蛋白荧光染色及Westernblot实验揭示心外膜祖细胞分化过程是否细胞自噬。后以qPCR及免疫荧光检测培养72h后细胞平滑肌标志蛋白a-SMA及MYH11水平,MTT实验检测各组细胞增殖能力。再收集培养96h细胞,以胶原凝胶收缩实验评价其收缩功能,划痕实验评价细胞迁移能力。结果:我们的实验观察到,RAPA在72h内显着诱导心外膜祖细胞自噬水平上调,进而导致心外膜祖细胞增殖明显减慢,但长梭形大体积异形细胞增多。免疫荧光染色见RAPA组a-SMA及MYH11峰值提前,提示自噬可能诱导心外膜祖细胞提前分化,在细胞培养48h即出现大量梭形,异形的分化细胞,结合免疫染色结果可见RAPA诱导的自噬使平滑肌细胞的分化提前,但增殖较NORMAL组及3-MA组明显减弱。而在3-MA组其自噬水平明显下调后,出现细胞增殖及迁移上调,而分化延迟的表现。提示抑制自噬可能抑制心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,而促进其增殖及迁移。结论:细胞自噬参与调控心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,自噬上调可能诱导心外膜祖细胞提前分化,而使平滑肌细胞收缩能力增强,增殖迁移能力下降,而抑制则可能抑制心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,而促进其增殖及迁移。第叁部分:体内实验揭示自噬对小鼠冠状动脉发育的影响目的:在组织水平明确心外膜祖细胞对冠脉血管平滑肌发育的影响及自噬标识信号分子与平滑肌标志基因的空间定位关系,从而在体探讨自噬对心外膜祖细胞对冠状动脉发育的影响。方法:应用羊膜腔注射给药的方式建立小鼠自噬诱导/抑制模型,通过HE染色观察自噬诱导/抑制对小鼠E12.5-E14.5冠脉发育的结构影响,通过qPCR及免疫荧光观察自噬对小鼠冠状动脉平滑肌分化过程中a-SMA的RNA及蛋白表达的影响,进而将自噬标志蛋白LC3B与平滑肌细胞标志蛋白MYH11共染,观察两者的空间定位关系。结果:自噬诱导后,心脏几乎未能形成管腔发育成熟的冠状动脉血管,但可见心内膜下逐渐出现的血窦样变化,提示小鼠心脏发育未能发育出成熟冠脉及建立有效的冠脉循环。同时亦观察到自噬诱导后出现的心室流出道发育障碍,心脏循环缺陷及心室壁变薄。qPCR及组织免疫荧光结果提示,小鼠E12.5-14.5的自噬现象可同时出现在心外膜及心肌组织中。而自噬诱导组我们可见在E12.5天时,心外膜内的心肌组织中a-SMA的表达量略高于NORMAL组,但在E14.5天时,RAPA组a-SMA表达量明显低于NORMAL组,并且未能发育为成熟冠状动脉管腔。而在E12.5-14.5天,自噬抑制组a-SMA表达量各时间段均低于NORMAL组,最终冠状动脉周围a-SMA表达量也比NORMAL组更低。荧光共染实验证实,多处心外膜及心外膜下MYH11阳性细胞能够与LC3B蛋白共表达。结论:自噬在冠脉发育中需要适宜的强度。过度激活自噬可能导致导平滑肌细胞的提前分化和迁移能力增强,有可能使内皮细胞周围平滑肌细胞的募集失调,不能形成有效的冠脉管腔。总体来说,冠状动脉发育受到抑制。而自噬抑制可能使心外膜祖细胞分化延迟,从而使冠脉形成的数量减少。心外膜祖细胞向冠脉平滑肌分化的过程需要适宜的自噬强度。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
平滑肌细胞分化论文参考文献
[1].杨婧,王延洲,梁志清.组蛋白乙酰化修饰在骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化中的作用[J].解放军医学杂志.2019
[2].刘亚杰.自噬参与心外膜祖细胞向冠状动脉平滑肌细胞分化的实验研究[D].重庆医科大学.2019
[3].李郁.1-磷酸神经鞘氨醇诱导心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化的实验研究[D].重庆医科大学.2019
[4].李英瑞.共培养诱导心外膜祖细胞分化为血管平滑肌细胞[D].重庆医科大学.2019
[5].史丹阳,刘美玲,刘翔,张建,张同存.myocardin通过激活miR-93-5p促进人主动脉血管平滑肌细胞分化[J].天津科技大学学报.2019
[6].沈凤,杨鹏,陶晓静,颜渊鸳,李丹.27nt-miRNA对间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化的影响[J].生物工程学报.2019
[7].周芳亮,何迎春,闫庆梓,张凯强,廖端芳.大鼠骨髓间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化过程中小窝蛋白-1表达增强[J].基础医学与临床.2018
[8].李莎,胡明亮.MiR-133a调控BMP-2诱导的血管平滑肌细胞向成骨样细胞分化的机制[J].南昌大学学报(医学版).2018
[9].汪文斌,韩悦,齐颖新.周期性张应变条件下血管平滑肌细胞对内皮祖细胞分化的影响[C].第十二届全国生物力学学术会议暨第十四届全国生物流变学学术会议会议论文摘要汇编.2018
[10].张晓萌.GPM6B在平滑肌细胞分化中的作用和机制研究[D].中国人民解放军空军军医大学.2018