导读:本文包含了类钙调磷酸酶亚基蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:小麦,小麦条锈菌,CBL,亚细胞定位
类钙调磷酸酶亚基蛋白论文文献综述
薛庆贺,刘芃,康振生,郭军[1]（2017）在《小麦类钙调磷酸酶亚基B蛋白基因TaCBL4的功能分析》一文中研究指出类钙调磷酸酶亚基B蛋白(calcineurin B-1ike protein,CBL)作为一类钙离子结合蛋白,通过与一类蛋白激酶(CBL-interacting protein kinase,C1PK)结合,在钙信号依赖的生理生化过程中发挥作用。CBL基因在植物非生物胁迫上的重要作用已经得到广泛的证实,然而关于其在生物胁迫上的作用知之甚少。本研究通过对小麦基因组中CBL家族基因的鉴定并利用RT-:PCR,在条锈菌诱导的小麦叶片中克隆得到小麦CBL家族中的一个基因,命名为TaCBL4。并利用qRT-PCR技术、亚细胞定位技术及病毒介导的基因沉默技术(Virus-Induced Gene silence,VIGS)分析了其功能特性。结果显示,TaCBL4可编码219-姐的氨基酸序列,包含4个保守的EF手结构。与水稻、拟南芥的CBL蛋白具有高度相似性,其中与水稻OsCBL4相似性达88.28%。亚细胞定位实验表明TaCBL4的分布在整个小麦细胞中,即为细胞质、细胞膜和细胞核。定量分析表明,在小麦与条锈菌亲和与非亲和互作的过程中,TaCBL4均受到条锈菌的诱导表达。通过VIGS技术沉默TaCBL4后发现小麦的抗病性明显减弱,沉默植株接种条锈菌非亲和小种CYR23后,活性氧积累明显受到抑制。同时,病程相关蛋白基因TaPR1、TaPR2表达也受到了抑制。综上结果,TaCBL4可能通过调控活性氧积累参与了小麦对条锈菌的抗病过程。(本文来源于《中国植物病理学会2017年学术年会论文集》期刊2017-07-25）
刘亚静[2]（2017）在《苹果类钙调磷酸酶B亚基蛋白MdCBL3基因的克隆与功能鉴定》一文中研究指出植物在生长过程中经常会遇到高盐、干旱、水涝和低温等非生物逆境胁迫。植物感知到非生物胁迫后会产生一些防御机制从而避免伤害发生。植物CBL基因在植物响应逆境胁迫过程中发挥十分重要的作用。拟南芥中对CBL研究较多,CBL能够响应多种胁迫,尤其是盐胁迫,但在果树等木本植物中研究较少。本研究从‘嘎拉’苹果(Malus×domestica Borkh.‘Gala’)中克隆了一个CBL基因MdCBL3(序列号:MDP0000155124),并对其进行生物信息学分析,利用定量PCR技术检测其在不同组织和逆境条件下的表达水平。通过农杆菌介导法获得转基因苹果愈伤组织、拟南芥,并对转基因愈伤、拟南芥进行功能鉴定。旨在为进一步深入研究苹果CBL的功能奠定基础。具体研究工作和结果如下:1.克隆了苹果MdCBL3基因,其由852 bp碱基组成,编码284个氨基酸残基的多肽链。基因组结构分析表明MdCBL3基因位于1号染色体上,含有8个外显子和7个内含子。2.荧光定量PCR分析表明MdCBL3基因在苹果‘嘎拉’中的表达情况,发现MdCBL3基因在所有组织中都有表达,在根中表达量最高。3.蛋白同源比对分析显示,MdCBL3含有3个保守的EF手形结构域EF-hand calcium binding motif,与拟南芥AtCBL3蛋白序列类似,表明苹果CBL3与拟南芥CBL3具有较高的同源性。4.利用Plant Care数据库对MdCBL3进行启动子顺式作用元件的预测分析,MdCBL3启动子序列中存在低温、干旱、光、生长素、赤霉素、水杨酸、防御等响应元件。表明MdCBL3可能受低温、干旱、光、激素等多种环境的调控,通过参与复杂的的生物学过程来调控其特定的生长发育过程。5.荧光定量PCR分析MdCBL3基因在不同胁迫的响应,发现MdCBL3基因对盐、干旱、低温有一定的响应。6.构建MdCBL3表达载体并利用农杆菌介导法侵染苹果愈伤组织、野生型拟南芥。半定量和定量RT-PCR证明MdCBL3在苹果愈伤组织中过量表达,在拟南芥中得到异源表达。表型分析表明与野生型愈伤组织和拟南芥对照相比,在盐胁迫下转基因苹果愈伤和拟南芥生长更好,抗性更强。表明在苹果愈伤中过量表达MdCBL3,在拟南芥中异源表达MdCBL3能明显提高对盐胁迫的抗性。(本文来源于《山东农业大学》期刊2017-05-08）
余义和,李秀珍,郭大龙,张会灵,杨英军[3]（2016）在《葡萄类钙调磷酸酶B亚基互作蛋白激酶VvCIPK10的特性与表达》一文中研究指出【目的】在葡萄中克隆丝苏氨酸蛋白激酶Vv CIPK10,分析其激酶特性和在逆境胁迫下的表达模式,为进一步研究该基因参与逆境胁迫的分子功能,探讨葡萄抗逆分子机制提供理论依据。【方法】利用电子克隆技术获得Vv CIPK10序列,设计特异引物进行RT-PCR反应,对克隆到的序列进行开放阅读框和保守结构域分析;构建原核表达载体,转化表达菌株后用IPTG进行诱导表达,收集菌体后裂解细胞,制备蛋白上样液,SDS-PAGE电泳对表达产物进行分析,同时对融合蛋白进行可溶性分析;IPTG大量诱导表达融合蛋白,收集菌体后进行超声破碎细胞,用麦芽糖结合蛋白纯化柱纯化MBP-Vv CIPK10融合蛋白,SDS-PAGE电泳进行分析;纯化后的融合蛋白与体外自磷酸化缓冲液进行自磷酸化反应,反应后SDS-PAGE电泳,压磷屏检测体外自磷酸化反应;构建重组瞬时表达载体p BI221-GFP/Vv CIPK10;分离拟南芥原生质体,通过PEG介导的瞬时转化方法将重组表达载体p BI221-GFP/Vv CIPK10转化至原生质体;通过基因枪介导的转化方法将重组表达载体p BI221-GFP/Vv CIPK10转化至洋葱表皮细胞,培养16 h后用激光共聚焦显微镜进行荧光信号检测;选择生长相对一致且健壮的葡萄植株,于干旱、低温和盐胁迫处理后不同时间取样,同时在田间取葡萄不同组织样品,实时荧光定量PCR检测Vv CIPK10在葡萄不同组织中的表达以及在不同逆境胁迫下的表达模式。【结果】PCR克隆获得葡萄Vv CIPK10全长为1 357 bp,5′端非编码区为30 bp,3′端非编码区为156 bp,开放阅读框为1 171 bp,编码436个氨基酸,理论等电点为8.59,分子量为48.7 k Da。保守结构域预测分析显示该蛋白5′端具有一个激酶结构域,3′末端具有一个PPI结构域和一个NAF结构域。BLSATP分析表明葡萄Vv CIPK10与桃树CIPK(XP_007205151)一致性最高(74%)。重组表达载体p MAL-C5X/Vv CIPK10在大肠杆菌中经诱导表达获得与理论分子量(43 k Da+48.7 k Da)相一致的融合蛋白。MBP-Vv CIPK10融合蛋白经柱纯化后获得单一的蛋白条带,Vv CIPK10的自磷酸化活性依赖于Mn~(2+),不依赖于Mg~(2+)和Ca~(2+),EDTA可以抑制Vv CIPK10的自磷酸化活性。亚细胞定位结果显示,Vv CIPK10定位在细胞核、细胞膜和细胞质。Vv CIPK10在葡萄各个组织中均有表达,主要在葡萄根和叶片中大量表达,葡萄茎、花序、果实和卷须中的表达量较低。在干旱、低温和盐胁迫处理后,Vv CIPK10呈现受诱导表达模式。Vv CIPK10的表达在低温胁迫后6 h达到峰值,干旱和盐胁迫后2 h即达到峰值。【结论】葡萄Vv CIPK10能够响应干旱、低温和盐胁迫,推测Vv CIPK10在葡萄抗非生物逆境胁迫中具有重要作用。(本文来源于《中国农业科学》期刊2016年19期）
周颐[4]（2016）在《小麦钙调磷酸酶B亚基类蛋白（CBL）的基因克隆及TaCBL1的功能研究》一文中研究指出小麦是全球广泛种植的主要农作物之一,各种自然灾害,如旱、涝、盐碱等环境的急剧变化以及病虫害,导致小麦大量减产。因此,提高抗逆性对于保证小麦产量具有非常积极的意义。在植物中,很多外界环境的刺激都会引起细胞内钙离子浓度发生变化,从而传递外界信息进入细胞内进而引起各种细胞内和细胞间发生响应的生理生化反应,调整自身适应外界坏境以求在严苛的自然环境中生存下来。作为钙离子信号的感受器,钙离子结合蛋白家族在植物信号转导和抗逆过程中发挥重要作用。目前,植物中已发现的钙离子结合蛋白主要有叁大类:钙调素(calmodulin,CaM)类蛋白、钙依赖蛋白激酶(calcium-dependent protein kinase,CDPK)以及钙调磷酸酶B类蛋白(calcineurin B-like protein,CBL)。本文旨在获得小麦CBL基因序列,检测其表达特性及亚细胞定位,以了解小麦CBL基因在抗逆中的作用,并对烟草进行遗传转化,进一步研究CBL的功能,为最终培育高抗性小麦奠定基础。本文主要获得的主要研究结果如下:(1)利用生物信息技术,将从数据库中获取的小麦CBL相关EST序列进行拼接,得到11条CBL基因序列(unigenes);利用分子生物学手段成功获得其中叁个包含完整ORF(Open Reading Frame)的CBL基因cDNA,所获得的基因所编码的蛋白质分别与水稻的CBL1、CBL3和CBL6高度同源,因此对应的基因被命名为TaCBL1、TaCBL3和TaCBL6。对蛋白质进行结构分析也发现,小麦中的CBL蛋白与拟南芥、水稻、杨树、玉米等植物中相应的CBL蛋白结构极其相似。(2)通过实时荧光定量RT-PCR(Real-time Quantitative PCR,qRT-PCR)技术,分析小麦多个部位的多个发育阶段中TaCBL1、TaCBL3和TaCBL6的基因表达情况,并检测了小麦幼苗在模拟的低温、干旱、高盐胁迫及外源脱落酸(abscisic acid,ABA)刺激下的基因表达变化。实验结果显示,一个TaCBL基因可以响应多种逆境,而一种逆境信号可以引起多个TaCBL基因的响应。(3)分别构建了TaCBL1-GFP、TaCBL3-GFP和TaCBL6-GFP融合蛋白的表达载体并转化洋葱表皮细胞,在细胞膜上均观察到了TaCBL1、TaCBL3和TaCBL6的GFP融合蛋白。(4)构建了pBI-TaCBL1载体,利用农杆菌介导的遗传转化方法转化烟草(Nicotiana tabacum L.cv.Samsun)。通过对T2代转基因烟草进行抗逆分析发现,过表达TaCBL1可以提高烟草植株的抗旱性。转基因烟草植株的水含量提高,细胞损伤减轻,并且抗氧化能力增强。以上实验结果证明了小麦TaCBL1、TaCBL3、TaCBL6蛋白具有CBL蛋白家族的典型结构特征,参与了小麦对于逆境信号的响应;过表达TaCBL1基因可以通过增加植物抗氧化能力抵御细胞损伤,从而提高了转基因烟草对于干旱环境的适应能力。以上实验结果为研究和了解CBL基因及蛋白家族的特征、功能及其参与调控信号通路的机制奠定了基础,并为寻找培育高抗性作物的途径提供了新的思路。(本文来源于《华中科技大学》期刊2016-05-01）
余义和,李秀珍,郭大龙,杨英军,李桂荣[5]（2016）在《葡萄类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因VvCBL4的克隆与表达分析》一文中研究指出【目的】在京秀(Vitis vinifera‘Jingxiu’)葡萄中克隆类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因Vv CBL4及其启动子,分析Vv CBL4的表达特性与逆境胁迫的关系。【方法】用RACE技术克隆Vv CBL4的全长,实时荧光定量PCR检测Vv CBL4在不同逆境下的表达;用同源克隆技术获得Vv CBL4的启动子,在烟草叶片中瞬时表达分析Vv CBL4启动子的活性。【结果】Vv CBL4全长为959 bp,ORF为642 bp,编码213个氨基酸,具有3个EF手钙结合结构域。Vv CBL4在根部表达量最高,其次是果实。Vv CBL4的转录本能对干旱、低温和盐胁迫处理快速做出响应。Vv CBL4启动子富含与逆境响应相关的顺式作用元件。干旱、低温和盐胁迫处理能够增强启动子活性。【结论】获得Vv CBL4及其启动子序列,Vv CBL4的表达能对逆境胁迫做出响应,Vv CBL4启动子的活性受逆境胁迫诱导,说明Vv CBL4在葡萄逆境胁迫反应中具有重要的作用。(本文来源于《果树学报》期刊2016年04期）
李林蔚,张双喜,周永斌,裴丽丽,陈明[6]（2015）在《大豆类钙调磷酸酶B亚基GmCBL1互作候选蛋白的筛选》一文中研究指出Ca2+是非生物胁迫信号转导途径中的重要信号分子,植物类钙调磷酸酶B亚基蛋白(CBL,calcineurin B-like proteins)是一类重要的钙信号受体蛋白,主要通过与其他蛋白的特异结合传递信号,使植物形成对非生物胁迫的响应。本实验室已经获得大豆Gm CBL1基因,功能鉴定显示Gm CBL1增强了转基因拟南芥对非生物胁迫的耐性。为了进一步研究Gm CBL1的作用机理,本研究构建诱饵载体p GBKT7::Gm CBL1,利用酵母双杂交技术筛选大豆Gm CBL1的互作蛋白。通过对筛选获得的106个蛋白基因测序和Blast比对分析,并根据其可能的生理功能对这些候选蛋白归类,整理得到4类蛋白:能量代谢相关蛋白、修饰蛋白、防御蛋白、钙信号转导相关蛋白。筛选得到候选蛋白的功能预测初步表明,大豆Gm CBL1参与多条信号途径,为进一步研究探索大豆CBL介导的抗逆信号转导途径奠定了基础。(本文来源于《植物遗传资源学报》期刊2015年02期）
李慧,李刚波,丛郁,常有宏,蔺经[7]（2013）在《杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因PbCBL2的克隆和功能初探》一文中研究指出类钙调磷酸酶B亚基蛋白(Calcineurin B-like protein,CBLs)是植物中一类重要的钙离子传感器,参与调控植物生长发育及逆境胁迫响应过程。为了探明杜梨CBLs家族成员PbCBL2的序列特征和表达模式,以杜梨(Pyrus betulaefolia Bunge)幼苗为试材,运用EST搜索结合RACE技术、染色体步移法对PbCBL2的cDNA、DNA和启动子进行克隆,采用半定量RT-PCR和原核表达研究该基因在非生物胁迫下的表达模式。结果表明,PbCBL2基因cDNA序列长681bp,编码一个含有226个氨基酸残基的蛋白。基因组DNA序列长1927bp,包括8个外显子和7个内含子,启动子序列包含光反应元件、厌氧诱导必需顺式作用元件、赤霉素反应元件和水杨酸响应顺式作用元件。PbCBL2编码的多肽具有植物类钙调磷酸酶B亚基蛋白结合Ca2+所必需的4个EF手型结构和1个典型的植物钙调磷酸酶A亚基结合位点。未经处理的杜梨幼苗(对照)根和叶中未检测到PbCBL2的表达,PbCBL2的表达受NaCl、PEG6000、甘露醇和ABA诱导上调。PbCBL2转入大肠杆菌BL21(DE3)后,能够明显减轻NaCl、甘露醇和PEG6000对该菌株的生长抑制。PbCBL2基因具备植物CBLs基因家族的固有特征,对盐碱、干旱、渗透胁迫和ABA处理均存在转录响应,大肠杆菌转入该基因后能够提高对盐胁迫和渗透胁迫的耐受能力。(本文来源于《园艺学报》期刊2013年08期）
和亚男[8]（2013）在《小麦类钙调磷酸酶B亚基蛋白TaCBL4和TaCBL3的功能研究》一文中研究指出非生物逆境是作物产量的主要制约因素。现代分子生物学手段现已广泛应用于育种研究,并获得不少具有优良耐逆能力的作物新品种。类钙调磷酸酶B亚基蛋白(calcineurin B-like proteins, CBL)是一类重要的钙信号受体蛋白,在非生物胁迫应答反应中具有重要作用,主要通过与CBL相互作用蛋白激酶(CBL-interacting protein kinases, CIPK)相互作用将信号向下游传递。拟南芥中CBL和CIPK家族成员在耐逆中的作用已有较深入的研究,其中AtSOS3(CBL4)和AtCIPK24(SOS2)是SOS途径的两个关键组分,在植物盐胁迫应答中发挥重要作用。但是小麦中CBL和CIPK家族成员功能以及是否存在SOS途径还不清楚,SOS途径在植物中是否具有保守性和通用性还未见报道。本研究基于以上科学问题,利用生物信息学方法系统分析了小麦CBL和CIPK基因家族,从本室培育的小麦渐渗系耐盐品种山融3号(SR3)中克隆了一系列TaCBLs和TaCIPKs基因,并初步验证了TaCBL4、TaCBL3在非生物胁迫应答中的功能。一、小麦CBL和CIPK的生物信息学分析和新基因克隆通过生物信息学分析,电子克隆了14个小麦CBL家族成员和34个小麦CIPK家族成员。多序列比对及进化树分析显示,这些TaCBLs在大小和结构上非常保守,其中5个具有豆蔻酰化位点,2个具有跨膜疏水区,暗示这7个TaCBLs在抗逆中发挥重要作用。TaCIPKs间序列差异比较大,但结构十分保守。SR3中TaCIPKs间也存在差异,这可能与基因倍增过程相关。进化树分析显示,小麦中TaCBLs和TaCIPKs都存在许多旁系同源基因,并且它们与水稻中同源基因的相似性高于拟南芥。将这些电子克隆的TaCIPK基因与实验室定制的小麦cDNA芯片探针进行比对,以分析它们的盐胁迫应答特征。结果发现,8个TaCIPKs在芯片中有特异性匹配探针,其中4个为盐诱导表达基因,4个盐下调表达基因：另外,芯片中有3个探针分别对应多个TaCIPK序列,而且这3个探针在盐胁迫24h后表达量都显着提高。这些盐胁迫应答的TaCIPKs(?)可能都参与植物的盐胁迫应答反应,其功能需要进一步研究。根据电子克隆序列,从SR3中克隆3个TaCBL和9个TaCIPK新基因,按照与拟南芥CBLs的同源性,分别命名为TaCBL1/3/4和TaC1PK2/8/11/15/17/19/30/32/34。 TaClPKs中,TaCIPK8、TaCIPK15在盐胁迫下上调表达,TaCIPK11下调表达,其他基因的应答模式有待进一步验证,为耐盐候选基因的鉴定及TaCBL互作蛋白的筛选奠定了基础。二、小麦TaCBL4和TaCBL3功能分析1、TaCBL4结构与可能作用分析TaCBL4有7个内含子,其编码产物定位于细胞膜,与拟南芥同源基因AtSOS3(CBL4)相似,是AtSOS3同源基因。TaCBL4在小麦的根、叶、茎、幼穗、麦芒、幼胚、旗叶等组织中均能表达,NaCl(?)协迫下其表达量明显增加,表明TaCBL4在小麦生长发育和盐胁迫应答过程中均发挥重要作用。为了验证TaCBL4(?)的生物学功能及其与AtSOS3(?)的异同,将其在拟南芥Col-0野生型和sos3突变体中异源表达,观察表型变化,并用AtSOS3在拟南芥中的过表达系作为对照。TaCBL4过表达不影响拟南芥的营养和生殖生长。在1/2MS培养基中,Col-0(WT)、TaCBL4过表达野生型系(OE)、TaCBL4过表达sos3(sOE)幼苗根长和地上部分无显着性差异。NaCl胁迫下,与WT相比,sos3幼苗的主根更短、地上部分漂白程度高,与朱建康实验室结果一致；而OE系和sOE系幼苗根与WT没有显着差别,但是叶片显着变小。这显示,TaCBL4能够恢复sos3根的表型,但首次发现OE系和sOE系在胁迫下抑制叶生长。LiCl胁迫下,与WT相比,sos3幼苗的主根明显变短、地上部分变小,而OH系、sOE系及AtSOS3过表达系幼苗正好相反,主根更长、地上部分更大,首次表明TaCBL4和AtSOS3过表达可以提高幼苗期锂离子胁迫抗性。在ABA处理和渗透胁迫下不同株系无明显差异,表明TaCBL4是一个离子特异性响应基因。相比植株发育,盐胁迫对种子萌发的影响更大。为了分析TaCBL4在这阶段是否发挥重要作用,我们以绿色子叶张开率为标准,比较了不同株系在钠、锂离子胁迫下的萌发率差异。NaCl胁迫下,sos3不萌发,WT萌发率降低,而OE系和sOE萌发率受影响少,萌发率明显比WT高。LiCl处理下,WT和sos3的萌发率降低,基中sos3(?)降低更明显,而OE系和sOE萌发率无显着变化。高盐土壤一般碱性较高,我们发现与WT相比,OE系在盐碱条件下的萌发率明显提高。以上结果显示,TaCBL4和AtSOS3一样,也是钠、锂离子特异性响应基因,并且TaCBLA和AtSOS3在盐胁迫应答中发挥相似的功能,表明小麦中也存在SOS系统,而且不同植物间SOS系统存在保守性和通用性。本实验发现,TaCBL4在小麦抗钠离子育种中应该有针对性地设计在种子萌发阶段特异性表达,而在抗锉离子育种中则不受此限制。有趣的是,低钾条件下,与Col-0相比,OE系和sOE系幼苗的地上部分明显变小,而AtSOS3过表达系则无显着变化,推测TaCBL4可能还调控钾离子通道的活性。这一结果表明,TaCBL4在盐胁迫应答中的作用与钾相关,幼苗阶段TaCBL4降低对Na+的耐性是由于负调控K+的转运引起的,显示了不同物种间SOS系统的特异性。为了进一步认识TaCBL4的作用机制及其与AtSOS3功能的异同,我们利用酵母双杂交方法分离拟南芥中与TaCBL4相互作用的CIPK蛋白。结果发现,TaCBL4能与AtCIPK5/10/11/15/18/21/24这7个CIPKs互作,其中AtCIPK15/24为AtSOS3互作蛋白,而AtCIPK6/7不与TaCBL4互作。推测TaCBL4通过与AtCIPK11相互作用而抑制了后者活性,提高了植株的抗盐碱性,通过AtCIPK24(SOS2)互作而激活SOS通路促进Na+外排。TaCBL4和AtSOS3互作CIPKs种类存在相似性和特异性,而且TaCBL4和AtSOS3对与其共同互作的CIPKs的调控也可能存在差异性,那么这种特异性和差异性是否与TaCBL4过表达导致的低钾敏感型相关,需要进。步研究。2、TaCBL3功能的初步分析TaCBL3与水稻OsCBL6及拟南芥AtCBL2、AtCBL6相似性较高,其编码蛋白定位于液泡膜。离子和渗透胁迫下,TaCBL3过表达拟南芥株系与Col-0无明显差异。缺钾诱导TaCBL3的表达,而且缺钾条件下,与Col-0相比,TaCBL3过表达株系黄化更严重,植株生长抑制程度更显着。这表明,TaCBL3可能是钾离子通道的抑制因子,为植物离子转运机制研究提供了新的基因资源。总之,本论文通过生物信息学和分子生物学方法,系统分析了小麦CBL和CIPK家族成员的序列和表达特征,通过CBL4的功能分析明确了不同物种间SOS通路对高盐、低钾响应存在通用性和特异性,为进一步认识SOS通路调控机制及离子胁迫响应特征奠定了基础,并为培育耐盐、钾营养高效作物新品种提供了分子元件。(本文来源于《山东大学》期刊2013-05-30）
李慧,丛郁,常有宏,蔺经,盛宝龙[9]（2012）在《杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白PbCBL10基因的克隆和表达特性研究》一文中研究指出【目的】为了探明杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白(Calcineurin B-like protein,CBL)基因的序列特征和表达特点,【方法】以杜梨幼苗为试材,运用同源克隆和半定量RT-PCR对PbCBL10基因进行克隆和表达分析。【结果】结果表明,PbCBL10基因编码区cDNA长度为801 bp,编码的多肽由266个氨基酸组成。该多肽预测的等电点为4.56,估计的相对分子质量为30.45 ku。其对应基因组DNA序列长1 983 bp,包括9个外显子和8个内含子。通过PSORT进行亚细胞定位分析发现PbCBL10蛋白位于质膜上的几率最大。PbCBL10基因编码的多肽具有4个钙离子结合域EF手形结构和1个钙调磷酸酶A亚基结合位点。PbCBL10与番茄SlCBL10(NP_001239045)和拟南芥AtCBL10(NP_195026)蛋白间的同源性较高,分别为82%和77%,并与AtCBL10亲缘关系最近。PbCBL10基因在杜梨幼苗根、茎和叶片中均为诱导型表达,50~200 mmol.L-1CaCl2、20μmol.L-1ABA、100 mmol.L-1NaCl、10%(w/v)PEG6000或180 mmol.L-1甘露醇处理后其表达量明显上调。【结论】PbCBL10基因具备植物CBL基因家族的固有特征,能够响应胞内钙浓度变化,对ABA、盐碱、干旱和渗透胁迫均存在转录响应。(本文来源于《果树学报》期刊2012年04期）
李慧,丛郁,常有宏,蔺经,盛宝龙[10]（2011）在《杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因克隆及胁迫表达》一文中研究指出Ca~(2+)作为最基本的第二信使,几乎参与了植物生长、发育和逆境胁迫应答的所有过程。类钙调磷酸酶B亚基蛋白(Calcineurin B-like protein,CBL)是植物中一类重要的钙离子传感器,在钙信号的传递转导过程中起着重要的调控作用。杜梨原产中国,为梨生产栽培中普遍应用的砧木,具备抗寒、抗旱、耐涝、耐盐碱等综合抗性,是梨属植物重要的抗性种质资源。克隆获得CBL基因序列,并研究该基因对不同胁迫的转录响应,可为阐明Ca~(2+)介导的杜梨抗逆过程提供重要信息。(本文来源于《中国园艺学会2011年学术年会论文摘要集》期刊2011-10-19）
类钙调磷酸酶亚基蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
植物在生长过程中经常会遇到高盐、干旱、水涝和低温等非生物逆境胁迫。植物感知到非生物胁迫后会产生一些防御机制从而避免伤害发生。植物CBL基因在植物响应逆境胁迫过程中发挥十分重要的作用。拟南芥中对CBL研究较多,CBL能够响应多种胁迫,尤其是盐胁迫,但在果树等木本植物中研究较少。本研究从‘嘎拉’苹果(Malus×domestica Borkh.‘Gala’)中克隆了一个CBL基因MdCBL3(序列号:MDP0000155124),并对其进行生物信息学分析,利用定量PCR技术检测其在不同组织和逆境条件下的表达水平。通过农杆菌介导法获得转基因苹果愈伤组织、拟南芥,并对转基因愈伤、拟南芥进行功能鉴定。旨在为进一步深入研究苹果CBL的功能奠定基础。具体研究工作和结果如下:1.克隆了苹果MdCBL3基因,其由852 bp碱基组成,编码284个氨基酸残基的多肽链。基因组结构分析表明MdCBL3基因位于1号染色体上,含有8个外显子和7个内含子。2.荧光定量PCR分析表明MdCBL3基因在苹果‘嘎拉’中的表达情况,发现MdCBL3基因在所有组织中都有表达,在根中表达量最高。3.蛋白同源比对分析显示,MdCBL3含有3个保守的EF手形结构域EF-hand calcium binding motif,与拟南芥AtCBL3蛋白序列类似,表明苹果CBL3与拟南芥CBL3具有较高的同源性。4.利用Plant Care数据库对MdCBL3进行启动子顺式作用元件的预测分析,MdCBL3启动子序列中存在低温、干旱、光、生长素、赤霉素、水杨酸、防御等响应元件。表明MdCBL3可能受低温、干旱、光、激素等多种环境的调控,通过参与复杂的的生物学过程来调控其特定的生长发育过程。5.荧光定量PCR分析MdCBL3基因在不同胁迫的响应,发现MdCBL3基因对盐、干旱、低温有一定的响应。6.构建MdCBL3表达载体并利用农杆菌介导法侵染苹果愈伤组织、野生型拟南芥。半定量和定量RT-PCR证明MdCBL3在苹果愈伤组织中过量表达,在拟南芥中得到异源表达。表型分析表明与野生型愈伤组织和拟南芥对照相比,在盐胁迫下转基因苹果愈伤和拟南芥生长更好,抗性更强。表明在苹果愈伤中过量表达MdCBL3,在拟南芥中异源表达MdCBL3能明显提高对盐胁迫的抗性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
类钙调磷酸酶亚基蛋白论文参考文献
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